CC BY
75
8. Минеева Н.В. Группы крови человека. Основы иммуногемато-логии. СПб.; 2004.
9. Жибурт Е.Б., Попова В.И., Иванова И.В., Рейзман П.В. Скрининг антиэритроцитарных антител и другие практические вопросы иммуносерологии. Трансфузиология. 2004; 4: 72-80.
10. Минеева Н.В., Трофимова С.А., Андреева А.В. Анализ деятельности лечебно-профилактических учреждений России по проведению иммуногематологических исследований доноров и реципиентов. Трансфузиология. 2000; 1: 77-83.
11. Фанаскова Е.В., Груздева О.В., Гончаренко М.В. и др. Лабораторное обеспечение профилактики посттрансфузионных осложнений при проведении кардиохирургических операций. Справочник заведующего КДЛ. 2013; 4: 17-20.
REFERENCES
1. PrikazMZRF ot 09.01.1998 № 2 "About the approval of instructions on an immunoserologiya". (in Russian)
2. Prikaz MZ RF ot 25.11.2002 № 363 "On approval of the instructions for use of blood components." (in Russian)
3. Prikaz MinzdravaRossii ot 02.04.2013 № 183n "About the approval of rules of clinical use of donor blood and (or) its components." (in Russian)
4. GOST 53470-2009 "Blood donor and its components. Application guide of components of donor blood". 2010. (in Russian)
5. Pashkova I.A., Kolomeytseva E.A., Ryzhanova L.G., Fedorenko T.V., Mineeva N.V. The organization of immunohematologic researches in a versatile hospital. Spravoshnik zaveduyushchego KDL. 2012; 11: 12-20. (in Russian)
6. Donskov S.I., Lipatova I.S. Alloimmunization anti-genes of erythrocytes - global population process. Vestnik slyzhby krovi Rossii. 2001; 3: 18-24.
7. Donskov S.I. Blood group system Resus. Theory and practice. Moscow: VINITI; 2005. (in Russian)
8. Mineeva N.V. Blood types of the person. Fundamentals of immunohematology. St. Petersburg; 2004. (in Russian)
9. Zhiburt E.B., Popov V.I., Ivanov I.V., Reyzman P.V. Screening antieritrosytarnykh of antibodies and other practical guestions of an immunoserologiya. Transfuziologiya. 2004; 4: 72-80. (in Russian)
10. Mineeva N.V., Trofimova S.A., Andreev A.V. The analysis of activity of treatment-and-prophylactic establishments of Russia on carrying out immunohematologic researches of donors and recipientss. Transfuziologiya. 2000; 1: 77-83. (in Russian)
11. Fanaskova E.V., Gruzdeva O.V., Goncharenko M.V. et al. Laboratory ensuring prevention of post-transfusion complications when carrying out cardiac operations. Spravoshnik zaveduyushchego KDL. 2013; 4: 17-20. (in Russian)
Поступила 30.01.14 Received 30.01.14
МИКРОБИОЛОГИЯ
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2014
УДК 616.831.9-002.155-078:577.21.083
Онищенко Г.Г., Петров А.А., Казанцев А.В., Суровяткин А.В., Коконова М.С., Лебедев В.Н., Алексеев Я.И., Варламов Д.А., Кутаев Д.А., Вахнов Е.Ю., Борисевич С.В.
МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РНК ЭНТЕРОВИРУСА ЧЕЛОВЕКА, ВЫЯВЛЕННОЙ В БИОПРОБЕ ОТ РЕБЕНКА, БОЛЬНОГО СЕРОЗНЫМ МЕНИНГИТОМ
Центр специальной лабораторной диагностики особо опасных и экзотических инфекционных заболеваний Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Роспотребнадзора) и Министерства обороны Российской Федерации, 141306, г. Сергиев Посад
Рассмотрена молекулярно-генетическая характеристика РНК энтеровируса человека, выделенной из биопробы от ребенка больного серозным менингитом. Изучена нуклеотидная последовательность геномной РНК, которая на 98% идентична соответствующим нуклеотидным последовательностям штаммов энтеровируса человека А серотипа 71, выявленным в Китае.
Ключевые слова: РНК; энтеровирус; серозный менингит; нуклеотидная последовательность; полимеразная цепная реакция; обратная транскрипция.
G.G. Onischenko, A.A. Petrov, A.V. Kazantsev, A.V Suroviatkin, M.S. Kokonova, V.N. Lebedev, Ya.I. Alekseev, D.A. Varlamov, D.A. Kutaev, E.Yu. Vakhnov, S.V Borisevitch
THE MOLECULAR GENETIC CHARACTERISTIC OF RNA OF HUMAN ENTEROVIRUS DETECTED IN BIOTEST FROM CHILD WITH SEROUS MENINGITIS
The center of special laboratory diagnostic of dangerous special and exotic infectious diseases of Rospotrebnadzor of Russia and Ministry of defense, Sergiev Posad, Russia
The article considers molecular genetic characteristic of RNA of human enterovirus detected in bio-test from child with serous meningitis. The nucleotide sequence of genome DNA is analyzed. In 98% it is identical to corresponding nucleotide sequences of strains of human enterovirus A serotype 71 detected in China.
Keywords: RNA; enterovirus; serous meningitis; nucleotide sequence; polymerase chain reaction; reverse transcription.
Для корреспонденции:
Петров Александр Анатольевич, нач. отдела
Адрес: 141306, Сергиев Посад Московской обл., ул. Октябрьская, 11 E-mail: petrov_a_a@rambler.ru
Для выявления возбудителя при подозрении на Enterovirus-ассоциированную инфекцию в практике лабораторных исследований обычно применяют серологические методы, выделение вируса в культуре клеток, молекулярную диагностику, в частности полимеразную цепную реакцию (ПЦР) [1-4] и анализ нуклеотидных последовательностей геномных нуклеиновых кислот. Если ПЦР позволяет провести своевременное и качественное выявление возбудителя в исследуемых пробах, то последующий анализ нуклеотидных последовательностей геномных нуклеиновых кислот выявленного возбудителя путем секвенирования участков генома дает возможность охарактеризовать генетические варианты и изучить филогенетические взаимосвязи [6, 8].
В Ростове-на-Дону с начала вспышки 2 июня неизвестная инфекция поразила 187 человек, у 55 детей был диагностирован менингит, один ребенок погиб. Предположительным этиологическим агентом данного заболевания был энтеровирус (семейство Picomaviridae, род Enterovirus) [7], который относится к числу наиболее нейропатогенных неполиомиелитных энтеровирусов человека. Поражения центральной нервной системы (ЦНС), вызываемые у детей штаммами энтеровируса, по клинической и патоморфологической картине очень сходны, а часто и неотличимы от поражений ЦНС, вызываемых вирулентными штаммами вируса полиомиелита [3].
Цель исследования - молекулярно-генетическая идентификация РНК энтеровируса человека, выявленной в биопробе, взятой в Ростове-на-Дону от больного ребенка с серозным менингитом.
Материалы и методы. В июне 2013 г по указанию Главного государственного санитарного врача Российской Федерации Г.Г. Онищенко в адрес Центра специальной лабораторной диагностики особо опасных и экзотических инфекционных заболеваний Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека и Министерства обороны Российской Федерации поступили биопробы, содержащие секционный и клинический материал, взятый от заболевших и погибших детей с диагнозом острого гнойного менингита. Четыре биопробы представляли собой кал, 3 - прижизненные мазки из ротоглотки и 6 - спинномозговую жидкость больных детей. Секционный материал, полученный от умершего ребенка с клиническим диагнозом
острого гнойного менингита, содержал кусочки головного и спинного мозга, оболочек головного мозга и легкого.
Для вирусологического исследования готовили 10% суспензии полученных биопроб. Пробы, содержащие кал, мазки и спинномозговую жидкость разводили буферированным физиологическим раствором (БФР) с антибиотиками в 5-10 раз в зависимости от исходного объема. Кусочки органов растирали в фарфоровых ступках со стерильным кварцевым песком с последующим добавлением БФР с анитибиотиками. Приготовленные суспензии центрифугировали при 2500 об/ мин-1 в течение 10 мин. Супернатант, отобранный из проб, содержащих кал и мазки из ротоглотки, пропускали через миллипоровые фильтры с диаметром пор 22 мкм. Полученный материал использовали для инфицирования монослоя культуры клеток GMK-AH-1 (Д) двухсуточного возраста с предварительной адсорбцией при 37oC. В течение срока наблюдения (7 сут) цитопатического действия возбудителя на монослой культуры клеток отмечено не было.
РНК из исследуемого материала выделяли с помощью комплекта реагентов "Рибосорб" ("ИнтерЛабСервис", Россия) согласно инструкции. Обратную транскрипцию осуществляли с использованием M-MLV-ревертазы и рэндом праймеров с последующим применением набора реагентов для выявления РНК энтеровирусов (Enterovirus) в объектах окружающей среды и клиническом материале методом ПЦР с электрофоретической детекцией продуктов амплификации в агарозном геле "АмплиСенс®ЕП;е1^и'ш-EPh" ("ИнтерЛабСервис", Россия).
В результате исследований РНК энтеровирусов выявлена только в пробе кала от больного ребенка М.
Полученную РНК также использовали для постановки обратнотранскриптазной ПЦР в режиме реального времени (ПЦР-РВ) c помощью праймеров и флюоресцентного зонда, специфичных в отношении геномной нуклеиновой кислоты энтеровирусов, которые были разработаны и синтезированы в ЗАО "Синтол" (Москва).
ПЦР-продукты клонировали в составе плазмидного вектора pGEM-T Easy ("Promega", США) [2].
Результаты и обсуждение. В результате исследований получены два клона 077_Amp и 077_Sint сконструированных рекомбинантных плазмид, содержащих специфические
Таблица 1
нуклеотидные последовательности клонированных ПЦР-продуктов
Клон Последовательность ПЦР-продукта Размер ПЦР-продукта, п.н.
077_Amp TCCTCCGGCCCCTGAATGCGGCTAATCCCAACTGCGGAGCACACGCCCACAAGCCAGCGGGT AGTGTGTCGTAACGGGTAACTCTGCAGCGGAACCGACTACTTTGGGTGTCCGTGTTTCCTTTT ATCTTTATATTGGCTGCTTATGGTGACAATTGAAGAATTGTTACCATATAGCTATTGGATTGGCC ATCCGGTGACAACAGA 206
077_Sint CTCCGGCCCCTGAATGCGGCTAATCCCAACTGCGGAGCACACGCCCACAAGCCAGCGGGTAG TGTGTCGTAACGGGTAACTCTGCAGCGGAACCGACTACTTTGGGTGTCCGTGTTTCCTTTTAT CTTTATATTGGCTGCTTATGGTGACAATTA 155
Таблица 2
нуклеотидная последовательность, полученная при изучении биопробы № 3
5'-3' последовательность
Размер, п.н.
TCCTCCGGCCCCTGAATGCGGCTAATCCCAACTGCGGAGCACACGCCCACAAGCCAGCGGGTAGTGTGTCGTAACGGGTAACT
CTGCAGCGGAACCGACTACTTTGGGTGTCCGTGTTTCCTTTTATCTTTATATTGGCTGCTTATGGTGACAATTGAAGAATTGTTAC
CATATAGCTATTGGATTGGCCATCCGGTGTGCAACAGAGCAATTATTTACCTATTTATTGGTTTTGTGCCATTAACCTTGAATTCTG
TGACCACCCTTAATTATATCTTGACCCTTAACACAGCCAAACATGGTTCACAAGTGTCTACACAGCGCTCCGGTTCTCACGAGA
ACTCAAACTCAGCCACTGAGGGTTCTACCATAAACTACACTACCATTAATTACTACAAAGACTCCTATGCTGCCACAGCAGGCA
AACAGAGTCTCAAGCAGGATCCAGACAAGTTTGCAAATCCTGTTAAAGATATCTTTACTGAAATGGCAGCGCCACTGAAGTCCC
CATCCGCTGAGGCATGTGGGTACAGTGATCGAGTAGCACAGTTAACTATTGGCAACTCCACCATCACTACGCAAGAAGCGGCTA
ACATCATAGTCGGTTATGGTGAGTGGCCTTCCTACTGCTCAGATTCTGACGCTACAGCAGTAGATAAACCAACGCGCCCGGATG
TTTCAGTGAACAGGTTTTATACATTGGACACTAAATTATGGGAGAAATCGTCCAAGGGATGGTACTGGAAGTTCCCAGACGTGT
TAACTGAAACTGGGGTTTTTGGGCAAAATGCACAATTCCACTACCTCTACCGATCAGGGTTCTGCATCCACGTGCAGTGCAATG
CCAGCAAATTCCACCAAGGAGCACTCCTAGTCGCTGTCCTACCAGAGTACGTCATG
900
rÎ
й
!=Е
-Coxsackievirus В2 strah Ohio AF0S14S5 (0.0869) -Human coxsackievirus В2 colateKCR 04-243 EF174468 (0.0910) .Human coxsackievirus Б4 X0S690 (0.0027) 'Hurran coxsackievirus B4 strain Tuscany DQ480420 (0.0012) Human coxsackievirus B4isolateC\e4 3X308222(0.0933)
_.-Human cox sack»; virus B3 strain M-B0 KC481610 (0.0078)
l-Hurran coxsackievirus B3 strain Beijng081 GQ141875 (0.0078) •—Human coxsacksvrus B5 strah G.6S 3Nj95051 (0.0190) Hjrran coxsackievirus 65 isolate 20CSF 3X017380(0.0106)
-Hjman coxsackievirus BS X67706 (0.1080)
-Echovirus 9 strah &arty X92886 (0.0952)
-Echovirus 9strain DM14 KC238669(0.0838)
-Echovrus 9 strain HI X8498 1 (0.0911)
-Enterovirus CASS-1988 /¥241359 (0.0929)
-Hjrran enterovirus 83 strah CA76-10392 AY843301 (0.0963)
—Hjmancoxsackievirus B3 strah 28 AY752944(0.0914)
— Hutran echovirus 29 strain 3V10 AY302552 (0.0892) —Hjmanechovrus 20strain 3V1 AV302546 (0.0856)
— Hjman echovirus33 strainToluca-3AY302556(0.0881)
-Hjrran echovirus 17 strah CH-E-29 AY302543 (0.1024)
-Hjrran coxsackievirus A9 strain Q-ijgs C00627.1(0.0970
-Hjrran echovirus IS strain OH96-51 AY302541 (0.0966)
-Hjrran enterovirus 77 strah TX97-10394AY843302 (0.1041)
-Human enterovrus 79strainCA79-10384 AY843297(0.0995)
-Hurran echovirus27 strain Bacon AY302551 (0.1124)
-Human echovirus 4 strah ALE250GF3172447 (0.0958)
— Hjrran echovirus 4 strain Ptes seek AV302557 (0.0868) -Echovrus E30 isolate E30SD 3X976773 (0.0844)
-Hjrranechovirus 30strain fcastianni^mSS(0.0812)
-Hjrran echovirus 30 strah Kor08-EC\«0 3K704615(0.0802)
-Enterovrus BS? isolate LY02 KC292019 (0.0866)
— Hurran enterovirus 87 strain Bi№ 1-10396 AY843305 (0.0847) —Hjman enterovirus 97 strain EAN99-10355 AY843307 (0.0759) —Hjrran enterovirus 97 strain DT94-0227 AE426611 (0.0755)
— Hjman enterovirus 100 isolate BAi-£000 DQ502713 (0.1048) —Hjrran enterovirus 85 strah Brt-OO AV843303 (0.0656) —Hjrran enterovrus 85strain HTPS3X898907(0.0672)
—Hjman echovirus 11 strain D207EF634316 (0.0398) —Hjman echovirus 11, isolate RN-0666 A) 577590 (0.0383)
_rHjman echovirus 3 strain CC10-44S AE647 317 (0.0034)
IHiman echovirus 3 strain CC10-798 «647326 (0.0041) —Echovirus E6 st rain №E7-0 9 3Q301739 (0.1015) -Hjrran echovirus 6 strain Echo6 I-M185055 (0.0896)
-Hjmancoxsackievirus A12 strah Texas-12 AY421768(0.0910) -Hjrran coxsackievrus A6 strain Gdula AY421764(0.0938) -Human coxsackievirus A2 strain Ffeetwjod AY421760 (0.0968) -Hjman coxsackievirus A3 strain Cison AY421761 (0.1002) -Hjrran coxsackievirus A16 strain EJOV)8 3X4S1738 (0.0126) -Hjrran coxsackievrus A16 strain YY157 KCS07895 (0.0140) -Hjman coxsackKvrus A16 strain <308 KC342228 (0.0325) -Hjrran coxsackievirus AS strain 0.«5 KJ728261 (0.0922) -Hjman coxsackievirus AS strain &A<ar« AY421763 (0.0913) -Hjman cox sac k» vrus A14 st rain G-14 AY421769 (0.1152) -Hjrran coxsackievrus A2 strain C\«2 K?282S9(0.1032) -Hjman coxsackievirus A6 strain I+W21 3(^64234(0.1080) Hjman enterovirus 71 strah FY17.08-6 3X678877(0.0105) Hjrran enterovirus 71 strah SH12-036 KCE70452 (0.0109) Hjman enterovirus 71 strah 9412-276 KC570453 (0.0106) Hjrran enterovirus 71 strah htenanl0-08 <3-666191(0.0149) Hurran enterovirus 71 strah TW-715S2 QQ231938 (0.0210) Hjrran enterovirus 71 strah Qjangdong 3F799986 (0.043<0 Hurran enterovrus 71 strain THVEV71-002 3F738000 (0.0908) Hurran enterovrus 71 strain HJ+ 1978 HQ189392 (0.0914)
Результат выравнивания нуклеотидных последовательностей, представленных в базе данных ОепВапк, с ПЦР-продуктом клона 077_Атр размером 206 п.н.
вставки ПЦР-продуктов. Данные клоны секвенированы методом Сенгера, полученные хроматограммы подвергнуты визуальной проверке пиков с помощью программы Chromas Lite и экспортированы в формате FASTA. Полученные нуклеотидные последовательности представлены в табл. 1.
Последовательность ПЦР-продукта размером 155 пар нуклеотидов (п.н.) находится внутри ПЦР-продукта размером 206 п.н., клоны гомлогичны на 100%. В дальнейшем исследовали клон 077_Amp как более информативный.
В ходе анализа данного ПЦР-продукта в программе NCBI BLAST обнаружено сходство со следующими возбудителями: вирусом ЕСНО серотипа 9, вирусом Е6, Е30; человеческим ЕСНО-вирусом серотипов 3, 4, 6, 11, 15, 17, 20, 27, 29, 30, 33; энтеровирусом B87, CA55; человеческим энтеровирусом типов 71, 77, 79, 83, 85, 87, 97, 100; человеческим вирусом Коксаки A2, A3, A5, A6, A9, A12, A14, A16, B2, B3, B4, B5. Результат выравнивания нуклеотидных последовательностей
указанных возбудителей, имеющихся в базе данных GenBank, с исследуемым ПЦР-продуктом представлен на рисунке.
В результате поиска по базе данных GenBank установлено, что ни одна депонированная последовательность не обладает 100% гомологией с последовательностью клона 077_Amp размером 206 п.н. Наибольшим сходством обладают последовательности энтеровируса человека А серотипа 71, имеющие по клону 077_Amp следующие несовпадения: позиция 157 - G/A, позиция 199 - делеция, позиция 200 - A/G. Далее количество несовпадений начинает увеличиваться, а географическое происхождение штаммов и изолятов постепенно расширяться.
После исследования ПЦР-продукта клона 077_Amp размером 206 п.н. с целью получения более представительной нуклеотидной последовательности амплифицирован участок генома изучаемого изолята длиной 780 п.н. с использованием прямого праймера (ATATTGGcTGcTTAT-GGTGAc), подобранного на основе последовательности
Таблица 3
Штаммы энтеровируса человека А серотипа 71, наиболее идентичные последовательности длиной 900 п.н. изучаемого изолята
Штамм Номер в GenBank Место выявления Дата выделения (депонирования) Гомология, %
Enterovirus A71 isolate GDV103 KC954663.1 Китай 2008 г. (14.08.2013 г.) 98
Human enterovirus A strain GZ2010-95 HQ456313.1 То же 13.07.2010 г. (03.05.2011 г.) 98
Human enterovirus A strain GZ2010-156 HQ456305.1 M 12.06.2010 г. (03.05.2011 г.) 98
Human enterovirus 71 strain EV71/Fuyang. Anhui.P.R.C/17.08/2 EU703813.1 M апрель 2008 г. (09.07.2010 г.) 98
Human enterovirus 71 strain FY17.08-5/AH/CHN/2008 JX678876.1 M апрель 2008 г. (24.03.2013 г.) 98
Human enterovirus 71 strain Fuyang200805 polyprotein gene HQ694984.1 M 15.05.2008 г. (04.07.2011 г.) 98
Human enterovirus 71 strain FY17.08-6/AH/CHN/2008 JX678877.1 M апрель 2008 г. (24.03.2013 г.) 98
Human enterovirus 71 isolate Wuhan1117/HuB/CHN/2011 Jx986738.1 M 2011 г. (21.01.2013 г.) 98
Human enterovirus 7 isolate FY08-C30-P14 GU198371.1 M май 2008 г. (23.11.2011 г.) 98
Human enterovirus 71 isolate C2/FY08-C30 GU198370.1 M май 2008 г. (23.11.2011 г.) 98
Human enterovirus 71 isolate C1/FY08-C30-P11 GU198369.1 M май 2008 г. (23.11.2011 г.) 98
Human enterovirus 71 isolate C1/FY08-C30-P9 GU198368.1 M май 2008 г. (23.11.2011 г.) 98
Human enterovirus 71 isolate FY08-C30-P2 GU198367.1 M май 2008 г. (23.11.2011 г.) 98
клона 077_Amp, ближе к 3'-концу, и обратного - (GCCA-CTGTCCCAATGACGTA), специфичного к консенсусной последовательности, полученной на основе множественного выравнивания геномов энтеровируса человека А серотипа 71 как обладающих наибольшим сходством с последовательностью клона 077_Amp. Амплификацию проводили в стандартных условиях при температуре отжига 60oC с помощью набора реагентов для ПЦР-РВ "R-412" (ЗАО "^mcrn", Москва). ПЦР-продукт секвенирован методом Cенгера, полученная хроматограмма подвергнута визуальной проверке пиков с помощью программы Chromas Lite, экспортирована в формате FASTA и объединена с последовательностью клона 077_Amp. Полученная последовательность представлена в табл. 2.
В ходе исследований получена нуклеотидная непрерывная последовательность длиной 900 п.н., что составляет около 12 % генома. В табл. 3 представлены штаммы энтеровируса человека А серотипа 71, наиболее идентичные данной последовательности по результатам проведенного выравнивания с нуклеотидными последовательностями, представленными в базе данных GenBank.
Заключение. Нуклеотидная последовательность размером 900 п.н., полученная при изучении нуклеиновой кислоты, выделенной из биопробы № 3 (проба № 472-307 от 06.06.2013 от больного ребенка М., госпитализированного в инфекционное отделение городской больницы № 16 г. Ростова-на-Дону), наиболее идентична (на 98 %) нуклеотидным последовательностям геномной РНК энтеровируса человека А серотипа 71, выявленным в Китае.
ЛИТЕРАТУРА
1. Демина А.В., Терновой В.А., Шульгина Н.И., Нетесов СВ. Эн-теровирусы. Часть 3. Лабораторная диагностика, лечение, им-мунонрофилактика и профилактические мероприятия в очаге. Бюллетень СО РАМН. 2011; 31: 115-8.
2. «ИнтерЛабСервис». Набор для выявления энтеровирусов с помощью Real-Time PCR (с гибридизационно-флуоресцентной детекцией). Available at: http://ria.ru/spravka/20130614/943360185.html.
3. Лашкевич В.А., Королева Г.А. Лукашев А.Н., Кармышева В.Я., Мустафина А.Н., Худякова Л.В. Энтеровирус тина 71: ящуропо-добное заболевание, энцефаломиелит, острый отек легких. Эпидемиология и инфекционные болезни. 2011; 6: 38-47.
4. Луковникова Л.Б., Фомина C.E, Новикова Н.А. Дифференциальная амплификация фрагментов кДНК генома полиовирусов в микстовых пробах. Микробиология и эпидемиология. Вестник
Нижегородскогоуниверситета им. Н.И. Лобачевского. 2012; 2: 70-4.
5. Патент № 2189396 РФ, МПК C12Q 1/68, (20.09.2002 г.). Набор олигонуклеотидных праймеров для ОТ-ПЦР, используемых в способе обнаружения и дифференциации РНК энтеровирусов.
6. Патент № 2459830 РФ, МПК C07H21/00, C12Q1/68 (2006.01), C12R1/93 (27.08.2012 г.). Набор олигодезоксирибонуклеотидных праймеров и флуоресцентно-меченного зонда для идентификации РНК энтеровирусов методом ОТ-ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией.
7. Эпидемическая вспышка серозного менингита в Ростове-на-Дону. Available at: http://www.itar-tass.com/c611/785661.html.
8. Oberste M., Maher K., Pallansh M. Molecular phylogeny of a human enterovirus serotypes based on comparison sequences of the 5' and of the region encoding VP2. Virus Res. 1998; 58 (1): 35-43.
REFERENCES
1. Demina A.V., Ternovoj V.A., Shul'gina N.I., Netesov S.V. Jenterovirusy. Part 3: Laboratory diagnosis, treatment, immune prophylaxis and preventive measures in the outbreak. Byulleten' SO RAMN. 2011; 31: 115-8. (in Russian)
2. "InterLabServis". The kit for detection of enteroviruses using RealTime PCR (with hybridization-fluorescence detection). Available at: http://ria.ru/spravka/20130614/943360185.html.
3. Lashkevich V.A., Koroleva G.A. Lukashev A.N., Karmysheva V.Ya., Mustafina A.N., Hudjakova L.V. Enterovirus type 71: foot-and-mouth-like disease, encephalomyelitis, acute pulmonary edema. Epidemiologiya i infektsionnye bolezni. 2011; 6: 38-47. (in Russian)
4. Lukovnikova L.B., Fomina S.G., Novikova N.A. Differential amplification of cDNA fragments of the genome of poliovirus in mix samples. Mikrobiologiya i epidemiologiya. Vestnik Nizhegorodskogo universiteta im. N.I. Lobachevskogo. 2012; 2: 70-4. (in Russian)
5. A set of oligonucleotide primers for RT-PCR method used in the detection and differentiation of enterovirus RNA. Patent RF N 2189396; 2002. (in Russian)
6. Set of oligodeoxyribonucleotide primers and fluorescently labeled probes for the identification of enterovirus RNA by RT-PCR with hybridization-fluorescence detection. Patent RF N 2459830; 2012. (in Russian)
7. Epidemic outbreak of serous meningitis in Rostov-on-Don. Available at: http://www.itar-tass.com/c611/785661.html.
8. Oberste M., Maher K., Pallansh M. Molecular phylogeny of a human enterovirus serotypes based on comparison sequences of the 5' and of the region encoding VP2. Virus Res. 1998; 58 (1): 35-43.
Поступила 15.05.14 Received 15.05.14
