CC BY
28
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2016 УДК 577.21:598].083
Осипов Ф.А.1,2, Вергун А.А.1,2, Гирнык А.Е.1, Кутузова Н.М.2, Рысков А.П.1
МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА АЛЛЕЛЬНЫХ ВАРИАНТОВ МИКРОСАТЕЛЛИТНЫХ ЛОКУСОВ DU281, DU215 И DU323 У ПАРТЕНОГЕНЕТИЧЕ-СКИХ ЯЩЕРИЦ DAREVSKIA ROSTOMBEKOVI (СЕМ. LACERTIDAE)
'Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт биологии гена Российской академии наук, 119334, Москва, Россия; 2Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Московский педагогический государственный университет» Минобрнауки РФ, 119991, Москва, Россия
Одним из главных вопросов в исследовании однополых (парте-ногенетических) видов позвоночных является определение их генетического разнообразия. Для этого могут быть использованы различные маркеры ядерного и митохондриального генома. К наиболее эффективным генетическим маркерам относятся микросателлитные ДНК, обладающие высокой скоростью изменчивости. Разработка и характеристика таких маркеров являются необходимым этапом в генетических исследованиях парте-новидов. В настоящей работе с помощью локусспецифической ПЦР впервые проведен анализ аллельного полиморфизма трех микросателлитных локусов в популяциях партеновида Darevskia rostombekovi (п = 42) и двуполых родительских видов D. raddei (п = 6) и D. portschinskii (п = 6). Все исследованные особи партеновида D. rostombekovi оказались гетерозиготами. В изученных популяциях обнаружено от 2 до 5 аллелей в зависимости от локуса. Определена нуклеотидная последовательность выявленных аллельных вариантов этих локусов. Показано, что отличия аллелей связаны с вариациями в структуре микросателлитных кластеров и с однонуклеотидными заменами на фиксированных расстояниях в прилежащих к кластеру участках ДНК. Структурные вариации аллелей формируют гаплотипические маркеры, специфические для каждого аллеля и наследуемые ими от родительских двуполых видов. Установлено, какие аллели партеновида наследуются от материнского, а какие - от отцовского вида. Получены характеристики по распределению, частоте встречаемости и сочетанию аллелей микросателлитных локусов в популяциях D. rostombekovi, определяющие отличительные особенности каждой популяции. Данные могут быть использованы в дальнейшем для определения клонального разнообразия и возможного сценария его формирования в популяциях партеновида D. rostombekovi.
Ключевые слова: партеногенез; однополые и двуполые ящерицы рода Darevskia; микросателлитные локусы; аллельный полиморфизм; гаплотипические маркеры.
DOI 10.18821/0208-0613-2016-34-2-58-62
Открытие однополых (партеногенетических) видов ящериц И.С. Даревским в 1958 г. поставило ряд общебиологических вопросов по механизмам клонального воспроизводства, формирования генетического и клонального разнообразия, а также по происхождению и эволюции этих форм позвоночных. Ранее с помощью анализа аллозимов и митохондриальной ДНК (мтДНК) было установлено, что партеновиды рода Бат^Ма, как и абсолютное большинство однополых позвоночных, возникли в результате межвидовой гибридизации особей двуполых видов [1, 2].
Род БаггузМа включает 7 партеногенетических видов, в том числе D. rostombekovi. Установлено, что D. rostombekovi произошел в результате гибридизации мужских особей D. portschinskii и женских особей D. raddei [3—5]. При этом родительские двуполые виды относятся к различным филогенетическим кладам в роде БатеузМа [3, 5], — материнские принадлежат к кладе саиса-sica, а отцовские относятся к кладе rudis. Следует отметить, что филогенетические факторы, ограничивающие формирование партеновидов, описаны и у других ящериц [6, 7].
Биогеографические исследования показали, что ящерицы D. rostombekovi занимают сравнительно ограниченный ареал,
состоящий из изолированных популяций в Северной Армении и прилежашдх районах Азербайджана и изолированной высокогорной популяции на юго-восточном побережье озера Севан (окрестности селения Загалу). Аллозимный анализ различных популяций D. rostombekovi (за исключением популяции Загалу) не выявил у них аллозимной изменчивости и было предположено, что этот вид имеет моноклональную генетическую структуру [8] в отличие от партеновидов D. dahli, D. armeniaca и D. unisexualis, у которых обнаружено от 2 до 5 аллозимных клонов [9]. Генетическая гомогенность популяций D. rostombekovi, обнаруженная по данным аллозимного анализа, не соответствует данным морфологических исследований, согласно которым они имеют значительные различия [3]. Модель генетического и морфологического разнообразия гибридных партеногенетических видов предполагает, что морфологически различающиеся клоны должны быть и генетически различны [10].
Согласно данным анализа мтДНК, северные популяции D. rostombekovi (окрестности населенных пунктов Спитак, Гош и Папанино) имеют единое происхождение по материнской линии от одной из южных армянских популяций D. raddei — популяции Егегнадзора [11]. Анализ мтДНК севанской популяции (Загалу) D. rostombekovi также показал ее происхождение от популяции Егегнадзор D. raddei [12, 13]. В то же время у всех исследованных особей этой популяции по гену цитохрома b этими авторами была выявлена единичная нуклеотидная замена (транзиция С ^ Т в положении 535 п.н.), что свидетельствовало о существовании второго митотипа у D. rostombekovi, специфичного для популяции Загалу. Более того, по данным анализа фингерпринтных и RAPD-маркеров исследованные особи D. rostombekovi разделялись на 2 группы: в 1-ю попадали особи популяции Загалу, а во 2-ю — все особи популяций Северной Армении (Спитак, Гош, Папанино) [12, 13]. Осталось неясным, отражают ли эти результаты события, связанные с начальными этапами внутривидовой дифференциации D. rostombekovi, или сценариями гибридного происхождения партеновида. Новая информация для разрешения этих вопросов может быть получена при использовании более эффективных маркеров, таких как ми-кросателлитные ДНК. И первым шагом в этом направлении является выявление и молекулярно-генетическая характеристика аллельных вариантов локусов, содержащих микросателлитные ДНК, у партеновида D. rostombekovi.
В настоящей работе приведены данные по клонированию, секвенированию и генетической характеристике аллелей микро-сателлитных локусов Du215, Du281 и Du323 у партеновида D. rostombekovi.
Материалы и методы
В работе использованы коллекционные образцы ДНК ящериц D. rostombekovi (42 особи); D. raddei (6 особей) и D. portschinskii (6 особей). Образцы партеновида D. rostombekovi представлены тремя популяциями из Северной Армении (Папанино, n = 21; Спитак, n = 9; Гош, n = 4) и Севанской популяцией (Загалу, n = 8). Для монолокусного анализа полимеразной цепной реакции (ПЦР) использованы праймеры, ранее подобранные для локусов Du215, Du281, Du323 партеновида D. unisexualis [14]. ПЦР проводили в объеме 20 мкл на 50 нг ДНК матрицы с использованием набора для ПЦР GenePak® PCR Core («IsogeneLab. Ltd», Россия). Амплификацию проводили на 4-канальном ДНК-амплификаторе «Терцик ТП4-ПЦР-01» («ДНК-технология», Россия) при температурных режимах, указанных в [14]. Продукты амплификации
Для корреспонденции: Вергун Андрей Александрович, E-mail: [email protected]
For correspondence: Vergun Andrey, E-mail: [email protected]
фракционировали в 8% нейтральном полиакриламидном геле (ПААГ), выделяли из геля и клонировали с использованием плазмидного вектора pGEM®-T Easy Vector System I («Promega», США) по методике производителя. Секвенирование ДНК проводили по методу Сэнгера с помощью набора реактивов ABI PRISM® BigDye™ Terminator V.3.1 («GE Healthcare», США) на автоматическом секвенаторе ДНК Applied Biosystems 3730 DNA Analyzer («Applied Biosystems», США). Последовательности ДНК выравнивали с использованием алгоритма Clustal W программы MEGA 6.0.6 [15].
Результаты и обсуждение
Молекулярная природа аллельного полиморфизма микроса-теллитных локусову партеновида D. rostombekovi.
Локусспецифический ПЦР-анализ показал, что все исследованные особи D. rostombekovi являются гетерозиготами по ми-кросателлитным локусам Du215, Du281 и Du323. В изученных популяциях партеновида выявлено от 2 до 5 аллелей в зависимости от выбранного локуса. В табл. 1 показаны структурные особенности этих аллелей, по которым они различаются. Видно, что отличия связаны со структурой микросателлитного кластера и (за исключением аллелей Du215) однонуклеотидными вариациями в прилежащих участках ДНК. Ранее при анализе полиморфизма различных микросателлитных локусов у партенови-дов D. dahli и D. unisexualis обнаружен сходный тип межаллель-ных вариаций [16, 17]. Следует подчеркнуть, что эти аллельные вариации в структуре ДНК отражают гибридное происхождение партеновидов и уровень гетерозиготности его генома. Очевидно, что чем более дивергированы геномы особей, участвовавших в межвидовой гибридизации, тем более высокий уровень гетерозиготности будет у генома гибридной особи — основателя партеновида, что может отражаться в количестве однонуклео-тидных аллельных вариаций и структурной изменчивости ассоциированных с ними микросателлитных ДНК.
При этом, согласно «балансовой» гипотезе [18, 19], появление у гибридных особей — основателей партеновида ооцитов с нередуцированным числом хромосом и переход к клональному воспроизводству зависят от уровня общей гетерозиготности, не превышающей определенных пределов. В исследованной выборке D. rostombekovi выявлено 5 аллелей локуса Du215, 4 алле-ля локуса Du281 и 2 аллеля локуса Du323. Как и в других случаях [20], аллели микросателлитных локусов D. rostombekovi можно разделить на 2 группы по структурным особенностям ДНК в соответствии с их происхождением от двух родительских видов.
Из данных табл. 1 видно, что все 5 аллелей локуса Du215 имеют сложно организованные микросателлиты, содержащие GATA -повторы, GCAA-повторы и GAT-повторы. Ни один из аллелей не содержал однонуклеотидные вариации вне микросателлита. Однако у аллеля 3 в прилежащей к микросателлиту зоне обнаружена динуклеотидная вставка ТТ. Формально по наличию этой вставки аллели локуса Du215 можно разделить на 2 группы.
Аллели локуса Du281 различаются как по структуре микро-
сателлитного кластера, так и однонуклеотидными вариациями на фиксированных позициях вне кластера, согласно которым их можно разделить на 2 группы. В одну группу входят 3 аллеля с одинаковым набором однонуклеотидных вариаций, сочетание которых образует гаплотип Т-А-Т-А. Эти аллели различаются по структуре ассоциированных сложно устроенных (GATA)n -микросателлитов. Вторую группу образует 4-й аллель локуса Du281, который имеет другой набор однонуклеотидных вариаций (гаплотип C-G-C-G) и ассоциированный простой (GATA)n -микросателлит.
Аллели локуса Du323 различаются по двум независимым микросателлитным кластерам (AC)n и (GATA)n, а также сочетанием однонуклеотидных вариаций на фиксированных позициях вне микросателлитов, образующих 2 группы гаплотипов (С-Т и А-С).
В целом можно заключить, что сочетание определенных микросателлитов и однонуклеотидных вариаций на фиксированных расстояниях в прилежащей ДНК можно рассматривать как единый гаплотип, специфический для каждого аллеля и зависящий от его происхождения, либо материнского, либо отцовского двуполого вида.
В большинстве микросателлитных ДНК обнаружены несовершенные вставки, такие как GAT, GGT, GAGAT, TA. Они могли появиться в результате сдвига рамки считывания на неполное мономерное звено, рекомбинационных событий, мутаций типа транзиций и трансверсий [21—23]. Аллельные различия, связанные с изменением числа повторов в микросателлитном кластере, могут объясняться эффектом проскальзывания ДНК-полимеразы в процессе репликации ДНК [24—28]. Большинство таких изменений у D. rostombekovi соответствует одноступенчатой модели мутационной изменчивости микросателлитных ДНК [29] или ее модифицированному варианту [26]. Например, в аллелях Du215 1-4 изменения в GATA-кластере происходили со сдвигом на 1 звено. Очевидно, при анализе межаллельных различий микро-сателлитных ДНК у партеновидов следует учитывать не только их наследование от разных двуполых видов, но и возможные мутации при клональном воспроизводстве. Ранее микросател-литные мутации были выявлены нами у партеногенетических потомков первого поколения ящериц D. unisexualis [30]. Эти мутации происходили на ранней стадии эмбриогенеза как делеции или инсерции микросателлитного повтора и обнаруживались в одном или обоих аллелях локуса. При этом однонуклеотидные мутации вне микросателлита обнаружены не были.
Определение отцовских и материнских аллелей в микросателлитных локусах генома D. rostombekovi.
Как отмечалось выше, партеновид D. rostombekovi возник в результате межвидовой гибридизации особей двуполых видов D. raddei (материнский вид) и D. portschinskii (отцовский вид) [4]. Следовательно, аллельные варианты изученных локусов у D. rostombekovi наследованы от соответствующих родительских видов. Чтобы определить, какие из этих аллелей имеют отцовское, а какие материнское происхождение, нами были получены
Таблица 1
Структурные различия аллелей микросателлитных локусов Du215, Du281 и Du323 партеногенетического вида D. rostombekovi
Аллель Длина, н.п. Последовательность микросателлитного кластера Фиксированные нуклеотидные замены на флангах* Gene Bank ac. №
Du215(rost)1 256 5' (GATA)w(GCAA)u 3' — GU972528
Du215(rost)2 252 5' (GATA)9(GCAA)11 3' — GU972529
Du215(rost)3 250 5' (GATA)9(GCAA)10 3' TT (-98/99) GU972530
Du215(rost)4 248 5' (GATA)8(GCAA)n 3' — GU972531
Du215(rost)5 227 5' (GATA)4(GAT)(GATA)7(GCAA)2 3' — GU972532
Du281(rost)1 265 5' (GATA )2(GAGAT)(GATA )11(GAT)(GATA )12 3' T (-84), A (-19), T (+15), A (+25) HM114225
Du281(rost)2 261 5' (GATA)2(GAGAT)(GATA)10(GAT)(GATA)12 3' T (-84), A (-19), T (+15), A (+25) HM070256
Du281(rost)3 253 5' (GATA)2(GAGAT)(GATA)U(GAT)(GATA)9 3' T (-84), A (-19), T (+15), A (+25) HM070257
Du281(rost)4 191 5' (GATA)к 3' C (-84), G (-19), C (+15), G (+25) HM070258
Du323(rost)1 195 5' (AC)6...(GATA)6(GAT)(GATA)2 3' C (-23), T (+39) HM013995
Du323(rost)2 184 5' (AC)4...(GATA) (GGT)(GATA)3(GAT)(GATA) 3' A (-23), C (+39) HM013996
Примечание. Здесь и в табл. 2: * — расстояния в нуклеотидных парах (н.п.) до (-) и после (+) микросателлитного кластера.
Таблица 2
Структурные различия аллелей микросателлитных локусов Du215, Du281 и Du323 двуполых видов D. raddei и D. portschinskii
Аллель Длина, н.п. Последовательность микросателлитного кластера Фиксированные нуклеотидные замены на флангах*
Du215(rad)1 231 5' (GATA\GAT(GATA\(GCAA\3' —
Du215(rad)2 223 5' (GATA)4GAT(GATA)6(GCAA)2 3' —
Du215(rad)3 219 5' (GATA)4GAT(GATA)5(GCAA)2 3' —
Du215(rad)4 215 5' (GATA)4GAT(GATA)4(GCAA)2 3' —
Du215(port)1 268 5' (GATA)12(GC4A)12 3' ' —
Du215(port)2 264 5' (GATA)n(GCAA)i2 3' —
Du215(port)3 256 5' (GATA)9(GCAA)12 3' —
Du215(port)4 256 5' (GATA)ii(GCAA)io 3' —
Du281(rad)1 220 5' (GATA)7(GAT)(GATA)8 3' Т (-84), A (-19), Т (+15), A (+25)
Du281(rad)2 214 5' (GATA)2(GAGAT)(GATA)4(GACA)3(GATA)4 3' Т (-84), A (-19), Т (+15), A (+25)
Du281(rad)3 208 5' (GATA)11(GAT)(GATA) 3' Т (-84), A (-19), Т (+15), A (+25)
Du281(rad)4 196 5' (GATA)8(GAT)(GATA) 3' Т (-84), A (-19), Т (+15), A (+25)
Du281(port)1 195 5' (GATA)11 3' C (-84), G (-19), C (+15), G (+25)
Du281(port)2 191 5' (GATA)io 3' C (-84), G (-19), C (+15), G (+25)
Du281(port)3 187 5' (GATA)9 3' C (-84), G (-19), C (+15), G (+25)
Du281(port)4 183 5' (GATA)8 3' C (-84), G (-19), C (+15), G (+25)
Du323(rad)1 184 5' (AC)4GC...(GATA)(GGT)(GATA)3(GAT)(GATA) 3' A (-23), C (+39)
Du323(rad)2 180 5' (AC)4GC...(GATA)(GGT)(GATA)2(GAT)(GATA) 3' A (-23), Т (+39)
Du323(port)1 215 5' (AC)6...(GATA)11GAT(GATA)2 3' C (-23), Т (+39)
Du323(port)2 211 5' (AC)6...(GATA)10GAT(GATA)2 3' C (-23), Т (+39)
Du323(port)3 203 5' (AC)6...(GATA)8GAT(GATA)2 3' C (-23), Т (+39)
и секвенированы аллели гомологичных локусов ряда особей родительских видов.
В табл. 2 представлены нуклеотидные последовательности различающихся участков аллелей трех микросателлитных локусов особей родительских видов. Видно, что аллели двуполых видов весьма разнообразны по структуре микросателлитов и также в случае локусов Du281 и Du323, содержат однонуклеотидные вариации вне микросателлитов. По сочетанию этих вариаций и специфической структуре микросателлита можно определить, от какого родительского вида унаследован тот или иной аллель каждого локуса у партено-вида. Так, в локусе Du323 партеновида аллели с гаплотипом С-Т наследованы от отцовского вида D. portschinskii, а аллели с гаплотипом А-С — от материнского вида D. raddei. В локусе Du281 партеновида аллели с гаплотипом C-G-C-G наследованы от отцовского, а аллели с гаплотипом Т-А-Т-А — от материнского вида. В случае локуса Du215 не было выявлено родительских аллелей с дупликацией ТТ вне микросателлита. В связи с отсутствием однонуклеотидных маркеров по этому локусу определить наследование аллелей затруднительно. Исходя из специфической структуры микросателлитных кластеров, можно предположить, что аллели Du215 1—4-го партеновида, имеющие простой тип микросателлита, наследованы от D. portschinskii, а аллель Du215/5, обладающий более сложной структурой микросателлитного кластера,— от D. raddei. Таким образом, большинство аллелей партеновида (за исключением Du215/3) выявлено у родительских видов и установлено их происхождение.
Характер распределения аллельных вариантов микросателлитных локусов Du215, Du281 и Du323 в популяциях партеновида D. rostombekovi.
В табл. 3 представлены данные по распределению аллелей трех микросателлитных локусов в популяциях D. rostombekovi. Видно, что популяции отличаются между собой по частоте встречаемости и сочетанию некоторых аллелей. Аллель Du215/5 равномерно распределен во всех 4 популяциях и обнаружен у всех особей. Аллель Du215/2 обнаружен в трех популяциях, причем в одной из популяций (Гош) — только у половины особей. Остальные аллели (Du215/l, 3, 4) оказались редкими и встречались только в двух популяциях — у поло-
вины особей наиболее полиморфной популяции Гош и у всех особей наименее полиморфной популяции Загалу.
Среди аллелей локуса Du281 три широко представлены во всех или большинстве популяций фи281/1, 2, 4) и обнаружены у всех или части особей. Один аллель фи281/3) оказался редким и обнаружен у всех особей популяции Загалу.
Мономорфный локус Du323 во всех популяциях представлен двумя аллелями у всех особей. Проведенный анализ показал, что наибольшее количество аллелей и их сочетаний, несмотря на небольшую выборку, встречается у особей популяции Гош. Однако наиболее интересное распределение аллелей и уникальное их сочетание, таких как Du281/3 + Du281/4 и Du215/4 + Du215/5, обнаружено в высокогорной популяции Загалу. Такие характе-
Таблица 3
Встречаемость аллельных вариантов локусов Du215, Du281 и Du323 в популяциях партеновида D. rostombekovi
Популяция
Аллель Гош, Загалу, Папанино, Спитак,
n = 4 n = 8 n = 21 n = 9
Du215(rost)1 1 — — —
Du215(rost)2 2 — 21 9
Du215(rost)3 1 — — —
Du215(rost)4 — 8 — —
Du215(rost)5 4 8 21 9
Du281(rost)1 3 — 14 8
Du281(rost)2 1 — 7 1
Du281(rost)3 — 8 — —
Du281(rost)4 4 8 21 9
Du323(rost)1 4 8 21 9
Du323(rost)2 4 8 21 9
Число аллельных вариантов 9 6 7 7
ристики популяции Загалу могут объясняться ее изолированностью от остальных популяций.
Таким образом, в настоящей работе впервые были выявлены, клонированы и секвенированы аллельные варианты трех микро-сателлитных локусов генома партеновида D. rostombekovi; определена молекулярная природа аллельного полиморфизма изученных локусов; установлено, какие аллели партеновида наследованы от материнского, а какие - от отцовского двуполого вида; даны оценки популяционного распределения аллелей у D. rostombekovi. Полученные данные могут быть использованы для определения клональной структуры D. rostombekovi, изучения филогенетических связей между партеновидами и остальными представителями рода Darevskia, оценки дивергенции этих видов.
Благодарности. Эксперименты были проведены с использованием оборудования ЦКП ИБГ РАН. Авторы благодарны Ф.Д. Даниеляну и его сотрудникам за помощь в получении биологических образцов, которые были использованы для создания коллекции ДНК ящериц рода Darevskia.
Финансирование. Работа финансировалась грантом РНФ № 14-14-00832.
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
ЛИТЕРАТУРА
1. Даревский И.С. Эволюция и экология партеногенетическо-го размножения у пресмыкающихся. В кн.: Даревский И.С. Современные проблемы теории эволюции. М.: Наука; 1993: 89—109.
12. Мартиросян И.А., Рысков А.П., Петросян В.Г., Аракелян М.С., Асланян А.В., Даниелян Ф.Д. и др. Изменчивость мини- и ми-кросателлитных маркеров в популяциях партеногенетической скальной ящерицы Darevskia rostombekovi. Генетика. 2002; 38: 828—35.
13. Малышева Д.Н., Токарская О.Н., Петросян В.Г., Даниелян Ф.Д., Даревский И.С., Рысков А.П. Генетическая дифференциация партеногенетических ящериц Darevskia rostombekowi (сем. Lacertidae) по данным ядерных и митохондриальных маркеров ДНК. Доклады РАН. 2006; 410 (4): 560—3.
20. Рысков А.П., Мартиросян И.А., Вергун А.А., Малышева Д.Н., Бадаева Т.Н., Токарская О.Н. и др. Молекулярная структура ал-лельных вариантов микросателлитных локусов Du281 и Du47 у представителей однополых и двуполых видов ящериц рода Darevskia. Известия РАН. Серия биологическая. 2009; (2): 201—8.
Поступила 02.02.15
REFERENCES
1. Darevskiy I.S. Evolution and ecology of parthenogenetic reproduction in reptiles. In: Darevskiy I.S. Recent Problems of the Theory of Evolution. Moscow: Nauka; 1993: 89—109. (in Russian)
2. Darevsky I.S. Evolution and Ecology of parthenogenesis in reptiles. In: Current Research of Biology of Amphibians and Reptiles. Oxford, Ohio; 1993: 209—57.
3. Darevsky I.S., Kupriyanova L.A., Uzzel T. Parthenogenesis in rep-tieles. Biol. Reptilia. 1985; 15: 412—526.
4. Moritz C., Uzzel Т., Spolsky C., Hotz H., Darevsky I.S., Kupriyanova L.A. et al. The maternal ancestry and approximate age of parthenogenetic species of Caucasian rock lizards (Lacerta: Lacertidae). Genetica. 1992; 87: 53—62.
5. Murphy R.W., Fu J., MacCulloch R.D., Darevsky I.S., Kupriyanova L.A. A fine line between sex and unisexuality: the phylogenetic constraints on parthenogenesis in lacertid lizards. Zool. J. Linnean Soc. 2000; 130: 527—49.
6. Kearney M., Blacket M., Strasburg J., Moritz C. Waves of parthenogenesis in the desert: evidence for the parallel loss of sex in a grasshopper and a gecko from Australia. Mol. Ecol. 2006; 15: 1743—8.
7. Manrquez-Moran N.L., Mttndez-de la Cruz F.R., Murphy R.W. Genetic variation and origin of parthenogenesis in the Aspidoscelis cozumela complex: evidence from mitochondrial genes. Zool. Sci. 2014; 31: 14—9.
8. MacCulloch R.D., Murphy R.W., Kupriyanova L.A., Darevsky I.S. The Caucasian rock lizard Lacerta rostombekovi: a monoclonal parthenogenetic vertebrate. Biochem. Syst. Ecol. 1997; 25 (1): 33—7.
9. Murphy R.W., Darevsky I.S., MacCulloch R.D. Old age, multiple
formations or genetic plasticity? Clonal diversity in the uniparental Caucasian rock lizard, Lacerta dahli. Genetica. 1997; 101: 125— 30.
10. Parker E.D., Walker J.M., Paulissen M.A. Clonal diversity in Cnemidophorus: ecological and morphological consequences. In: Dawley R.M., Bogart J.P., Eds. Evolution andEcology ofUnisecexual Vertebrates. (Bull. N. Y. St. Museum.). N. 466. New York; 1989; 1—8.
11. Fu J., MacCulloch R.D., Murphy R.W., Darevsky I.S. Divergence of the cytohrome b gene in the Lacerta raddei complex and its parthenogenetic daughter species: Evidence for recent multiple origins. Copeia. 2000; 2: 432—40.
12. Martirosyan I.A., Ryskov A.P., Petrosyan V.G., Arakelyan M.S., Aslanyan A.V., Danielyan F.D. et al. Variability of mini- and microsatellite markers in populations of parthenogenetic rock lizard Darevskia rostombekovi. Genetika. 2002; 38: 828—35. (in Russian)
13. Malysheva D.N., Tokarskaya O.N., Petrosyan V.G., Danielyan F.D., Darevskiy I.S., Ryskov A.P. Genetic differentiation of parthenogenetic lizards Darevskia rostombekowi (Fam. Lacertidae) according to nuclear and mitochondrial DNA markers. Proceedings of the Russian Academy of Sciences. 2006; 410 (4): 560—3 (in Russian).
14. Korchagin V.I., Badaeva T.N., Tokarskaya O.N., Martirosyan I.A., Darevsky I.S., Ryskov A.P. Molecular characterization of allelic variants of (GATA)n microsatellite loci in parthenogenetic lizards Darevskia unisexualis (Lacertidae). Gene. 2007; 392: 126—33.
15. Tamura K., Stecher G., Peterson D., Filipski A., Kumar S. MEGA6: Molecular evolutionary genetics analysis version 6.0. Mol. Biol. Evol. 2013; 30: 2725—9.
16. Ryskov A.P. Genetically unstable microsatellite-containing loci and genome diversity in clonally reproduced unisexual vertebrates. Int. Rev. Cell Mol. Biol. 2008; 270: 319—49.
17. Vergun A.A., Martirosyan I.A., Semyenova S.K., Omelchenko A.V., Petrosyan V.G., Lazebny O.E. et al. Clonal diversity and clone formation in the parthenogenetic caucasian rock lizard Darevskia dahli. PLoS One. 2014; 9 (3): e91674. doi:10.1371/jour-nal.pone.0091674.
18. Moritz C., Brown W.M., Densmore L.D., Wright J., Vyas D., Don-nellan S. et al. Genetic diversity and the dynamics of hybrid parthenogenesis in Cnemidophorus (Teiidae) and Heteronotia, (Gekkoni-dae). Bull. N. Y. S. Museum. 1989; 466: 87—112.
19. Moritz C., Wright J.W., Brown C.M. Mitochondrial DNA analysis and the origin and relative age of parthenogenetic Cnemidophorus: phylogenetic constraints on hybrid origins. Evolution. 1992; 46: 184—92.
20. Ryskov A.P., Martirosyan I.A., Vergun A.A., Malysheva D.N., Badaeva T.N., Tokarskaya O.N. et al. The molecular structure of allelic variants of microsatellite loci Du281 and Du47 representatives of unisexual and bisexual species of lizards of the genus Darevskia. Izvestiya RAN. Seriya biologicheskaya. 2009; (2): 201—8. (in Russian)
21. Strand M., Prolla T.A., Liskay R.M., Petes T.D. Destabilization of tracts of simple repetitive DNA in yeast by mutations affecting DNA mismatch repair. Nature. 1993; 365: 274—6.
22. Pearson C.E., Sinden R.R. Alternative structures in duplex DNA formed within the trinucleotide repeats of the myotonic dystrophy and fragile X loci. Biochemistry. 1996; 35: 5041—53.
23. Gordenin D.A., Kunkel T.A., Resnick M.A. Repeat expansion — all in a flap? Nat. Gen. 1997; 16: 24—33.
24. Schlotterer C., Tautz D. Slippage synthesis of simple sequence DNA. Nucleic Acids Res. 1992; 20: 211—5.
25. Weber J.L., Wong C. Mutation of human short tandem repeats. Hum. Mol. Genet. 1993; 2: 1123—8.
26. Di Rienzo A., Peterson A.C., Garza J.C., Valdes A.M., Slatkin M. Mutational processes of simple sequence repeat loci in human populations. Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1994; 91: 3166—70.
27. Wells R.D. Molecular basis of genetic instability of triplet repeats. J. Biol. Chem. 1996; 271 (6): 2875—8.
28. Bzymek M., Lovett S.T. Instsbility of repetitive DNA sequences: The role of replication in multiple mechanisms. Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 2001; 98: 8319—25.
29. Ohta T., Kimura M. The model of mutation appropriate to calculate the number of electrophoretically detectable alleles in a genetic population. Genet. Res. 1973; 22: 201—4.
30. Badaeva T.N., Malysheva D.N., Korchagin V.I., Ryskov A.P. Genetic variation and de novo mutations in the parthenogenetic Caucasian rock lizard Darevskia unisexualis. PLoS One. 2008; 3 (7): e2730. doi:10.1371/journal.pone.0002730.
