CC BY
49
«Дни иммунологии в СПб 2017» Immunology Days in St. Petersburg 2017
Медицинская Иммунология Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya
и IgA у детей в возрасте старше 6 месяцев до 2-6 лет. Молекулярные аномалии в основе ТГД до настоящего времени не выявлены. Возможно, что в связи со снижением экспрессии части корецепторного комплекса В-клеток (CD19) при сохранении другой части (CD21 и CD81) после распознавания антигенов через BCR первоначально нарушается активация В-клеток, а в последующем — переключение синтеза IgM на продукцию IgG (Artac et al., 2013). Однако этот процесс при ТГД является преходящим и нивелируется с возрастом. В настоящее время описаны немногочисленные данные по функционированию клеток, вовлечённых в иммунорегуляцию, а также цито-кинов и хемокинов при ТГД.
Цель. Определение содержания TNFa, IFNy, IL-4 и IL-10 в сыворотке крови у детей с транзиторной гипо-гаммаглобулинемией.
Проведено клиническое наблюдение и обследовано 14 детей в возрасте от 6 месяцев до 4 лет, страдающих рецидивирующими пиогенными инфекциями, у которых были снижены сывороточные иммуноглобулины ниже диагностических критериев: IgG < 5 г/л, IgM < 0,4 г/л, IgA < 0,2 г/л. У данных детей были исключены другие, тяжелые формы первичных иммунодефицитов. Группу сравнения составили 24 ребенка того же возраста, страдающих повторными респираторными инфекциями, без доказанного первичного иммунодефицитного состояния. Все исследования проводились в периоде ремиссии инфекций. В контрольную группу вошли 16 здоровых детей того же возраста.
В результате исследований отмечено достоверное повышение при ТГД по сравнению с группой сравнения и здоровыми детьми содержания TNFa и IL-10. Концентрации всех остальных цитокинов не менялись, включая группу сравнения по отношению к контрольной группе.
На первый взгляд полученные данные являются парадоксальными, т.к. у детей с ТГД найдено повышение одного из потенциальных провоспалительных цитокинов с системным действием (TNFa) и одновременно одного из основных иммуносупрессивных цитокинов (IL-10).
В одной из ранних работ Kowalczyk и соавт. (1997) продемонстрировали повышение TNFa, TNFß и IL-10 в крови детей с ТГД in vivo, а также снижение продукции IgG и IgA В-клетками в условиях стимуляции митоге-ном лаконоса при добавлении TNFa и TNFß in vitro. Это не исключает ингибирующего действия TNFa и TNFß на антителопродукцию при ТГД. IL-10 является одним из цитокинов nTreg, и его повышение может косвенно свидетельствовать об увеличенной активности этих клеток при ТГД. Такая интерпретация нашла подтверждение в исследованиях Rutkowska и соавт. (2013), которые определили существенное увеличение количества nTreg (CD4+CD25hiPoxP3+) в крови детей с ТГД.
МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА НАСЛЕДСТВЕННОГО АНГИОНЕВРОТИЧЕСКОГО ОТЕКА
Махарова М.А.1, 2, Останкова Ю.В.1, Чурина М.А.1, Кузнецова Р.Н.1, 3, Семенов А.В.1, 3
1ФБУН«Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени Пастера», Санкт-Петербург, Россия
2 ФГАОУ ВО «Санкт-Петербургский политехнический университет Петра Великого», Санкт-Петербург, Россия
3 ГБОУ ВПО «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова» Министерства здравоохранения РФ, Санкт-Петербург, Россия
Введение. Наследственный ангионевротический отёк (НАО) — заболевание, относящееся к группе первичных
иммунодефицитов, связанное с генетически детерминированным дефектом гена, кодирующего С1-ингибитор системы комплемента (C1-INH). Несмотря на низкую частоту, это заболевание представляет серьезную проблему в практической медицине. Этиопатогенетическая структура отечного синдрома чрезвычайно вариабельна и имеет полиморфный генез. Это приводит к постановке неправильного диагноза и назначение неадекватной для данного заболевания терапии, что и является причиной высокой смертности пациентов с НАО. Ген SERPING1 Локализован в 11 хромосоме (11q11-q13.1), имеет протяженность 17 тысяч п.о. и содержит 8 экзонов, где на данный момент (согласно базе данных ClinVar) описаны около 50 мутаций, ассоциированных с НАО. Заболевание не только приводит к существенному снижению качества жизни пациентов, но и является жизнеугрожающим. Только установленный вовремя диагноз и соответствующая терапия позволяют говорить об относительно благоприятном прогнозе. Очевидна значимость своевременного определения НАО у пациентов.
Цель и задачи. Апробация молекулярно-генетическо-го метода диагностики НАО 1 и 2 типов.
Материалы и методы. Материалом служила цельная кровь здоровых людей, а также образец крови пациента Т. предположительно больного НАО. Предварительный диагноз был поставлен на основании ряда симптомов и показаниям лабораторных исследований (концентрация С1-ингибитора в пределах нормы, активность < 60% от нормы). Геномную ДНК выделяли с помощью тест-системы «Ампли-Прайм Рибо-преп» (ФБУН ЦНИИЭ). Нуклеотидные последовательности 8-ми экзонно-про-моторных областей гена SERPING1 длиной 140-600 нт определяли с помощью прямого секвенирования фрагментов. При этом после проведения ПЦР с экзон-спец-ифичными праймерами производилось очищение продуктов реакции и определение концентрации спектрофо-тометрическим методом на Quantus fluorometer (Promega, США). Очищенные фрагменты использовали для постановки секвенирующих реакций с прямого и обратного праймеров. Для анализа продукта секвенирующей реакции очищенный осадок растворяли в формамиде и помещали в генетический анализатор ABIPRISM 3500 (AppliedBiosystems, США). Обработка и анализ последовательностей проводились в программе Contig Express пакета VectorNTI 10 Advance (Invitrogen, США).
Результаты. Полученные в результате секвенирования нуклеотидные последовательности в 2 случаях (здоровые люди) не имели особенностей, а в 1 случае была выявлена гетерозиготная точечная миссенс-мутация G- > A 57.614.516 (rs4926), приводящая к замене аминокислоты Val480Met. В базе данных ClinVar данная мутация имеет статус не патологичной, что сопровождается 3мя клиническими подтверждениями. Полученные нами результаты не противоречат этим данным, так как пациента Т. беспокоили рецидивирующие отеки конечностей и лица, однако тяжелых патологических состояний не наблюдалось. Не стоит исключать, что такая полиморфная форма белка в сочетании с другими нарушениями элементов системы комплемента может являться причиной описанных клинических проявлений и снижения активности С1-ингибитора. Этот случай только доказывает важность генетического анализа как гена С1-ингибитора, так и других ключевых белков системы комплемента при постановке диагноза.
2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue
Первичные иммунодефициты Primary immunodeficiencies
Выводы. В ходе работы была успешно отработана и внедрена в клиническую практику методика генетического анализа НАО 1 и 2 типов. Секвенирование ДНК у конкретного индивидуума и накопление данных о конкретных мутациях может существенно облегчить и ускорить постановку диагноза у больных НАО.
ПЕРСПЕКТИВЫ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОГО ПОДХОДА В ДИАГНОСТИКЕ И НАБЛЮДЕНИИ БОЛЬНЫХ С СЕЛЕКТИВНЫМ ИММУНОДЕФИЦИТОМ ИММУНОГЛОБУЛИНА А
Савин Т.В.1, Кузнецова Р.Н1 2
1 Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова, Санкт-Петербург, Россия
2 Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии
им. Пастера, Санкт-Петербург, Россия
Введение. Распространенность селективного дефицита иммуноглобулина А в мире, по данным Pereira L.F., Sapina A.M. (1997), составляет 1:163 человека. В Российской Федерации частота данного первичного иммунодефицита, по данным Российской ассоциации аллергологов и клинических иммунологов (2014), составляет 1:300-1:700 человек. Несмотря на то, что данная форма иммунодефицита является самой распространенной формой первичного иммунодефицита, стандартного лечения, позволяющего контролировать данное заболевание, в настоящий момент не предложено.
Цель. Разработка клинико-иммунологических критериев течения различных форм селективного иммунодефицита иммуноглобулина А и оценка возможности дифференцированного подхода в лечении больных.
Материалы и методы. Всего было обследовано 24 пациента в возрасте от 18 до 42 лет (женщины — 13, мужчины — 11), которые наблюдаются в Центре первичных иммунодефицитов в ФБУН НИИ ЭМ им. Пастера. Контрольную группу составили 25 условно здоровых лиц.
Оценка иммунного статуса включала определение у больных концентрации иммуноглобулинов, подклассов иммуноглобулина G в сыворотке крови и носоглоточных смывах, определение субпопуляций лимфоцитов.
В работе использованы коммерческие тест-системы «Вектор-Бест». Оценка концентрации сывороточных иммуноглобулинов проводилась методом иммунотур-бидиметрии, подклассы иммуноглобулина G — методом иммуноферментного анализа. Оценка субпопуляций лимфоцитов проводилась с использованием метода проточной цитофлюориметрии.
Результаты. Выявлены различные клинические формы течения селективного иммунодефицита иммуноглобулина А (1 группа — больные с аутоиммунной патологией, 2 группа — пациенты с рецидивирующими заболеваниями верхних и нижних дыхательных путей).
Анализ показателей гуморального иммунитета показал, что концентрация иммуноглобулина A в сыворотке крови больных была достоверно ниже уровня данного иммуноглобулина у пациентов группы практически здоровых лиц (p < 0,001), что подтверждало наличие у больных селективного иммунодефицита иммуноглобулина А.
Проведенный сравнительный анализ гуморального профиля позволил выявить, что в группе больных с преимущественно аутоиммунной патологией уровень имму-
ноглобулина А в сыворотке крови был достоверно выше, чем в группе больных с рецидивирующими заболеваниями верхних и нижних дыхательных путей (p < 0,01).
При проведении нашего исследования мы обнаружили, что концентрация иммуноглобулина А в носоглоточных смывах больных была снижена всего в 1,5 раза в сравнении с показателями практически здоровых лиц, а уровень иммуноглобулина М резко повышен. Но выявленная особенность требует дальнейшего изучения и проведения статистической обработки.
Таким образом, анализ клинического течения селективного иммунодефицита иммуноглобулина А и показателей гуморального иммунитета позволяет предположить наличие связи между особенностями течения заболевания и гуморальным профилем больных.
ЗНАЧИМОСТЬ КЛЕТОЧНЫХ ФАКТОРОВ ВРОЖДЕННОГО ИММУННОГО ОТВЕТА У БОЛЬНЫХ ОБЩЕВАРИАБЕЛЬНОЙ ИММУННОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТЬЮ
Сизякина Л.П., Андреева И.И., Кролевец Д.И.
ФГБОУ ВО «Ростовский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения РФ, Ростов-на-Дону, Россия
Патогенетически значимым принципом терапии пациентов с общевариабельной иммунной недостаточностью (ОВИН) — гипогаммаглобулинемией является замещение недостающего эффекторного звена гуморальной иммунной защиты внутривенными иммуноглобулинами (ВВИГ). Однако не у всех больных на фоне регулярной заместительной терапии происходит полное купирование признаков иммунной недостаточности (Караулов А.В., Сидоренко И.В., 2011; Сизякина Л.П., Андреева И.И., 2012). Возможно, что помимо протективной роли заместительной иммуноглобулинотерапии немаловажный вклад в обеспечение эффективности работы иммунной системы у больных с первичными иммунодефицитами по гуморальному типу вносят факторы врожденного иммунитета, в первую очередь — клеточное звено.
Целью настоящей работы является выявление роли клеточных факторов врожденного иммунитета у пациентов с первичным иммунодефицитом — ОВИН.
Под наблюдением находилось 16 пациентов в возрасте 8-59 лет (9 мужчин, 7 женщин) с диагнозом ОВИН — ги-погаммаглобулинемия, получавших в течение года заместительную терапию ВВИГ (0,4 г/кг массы ежемесячно). При этом у пяти больных на фоне регулярного приема препаратов регистрировались эпизоды воспаления придаточных пазух, обострение хронического бронхита, гнойный конъюнктивит. Комплексную оценку параметров иммунного статуса проводили методом проточной лазерной цитометрии на приборе «FC 500» и определяли экспрессию CD16 и содержание Гранзима В в CD3-CD16+ лимфоцитах, экспрессию HLA-DR на CD14+ моноцитах периферической крови с использованием соответствующих моноклональных антител (Bekcman Coulter). Кисло-родзависимую метаболическую активность нейтрофилов оценивали в НСТ-тесте. Контрольную группу составили 10 практически здоровых доноров крови в возрасте 2032 лет. Математическую обработку полученных данных проводили, используя программу Statistica 7.0.
При анализе параметров клеточных факторов врожденного иммунитета выявлено, что для всех обследован-
