Молекулярно-генетическая диагностика хромосомных заболеваний с помощью мультиплексной лигазной цепной реакции Текст научной статьи по специальности «Прочие медицинские науки»

тектировали локусы HLA-A, HLA-B и HLA-DRB1, используя циклерплатную систему Protrans HLA-A*, -B*, -DRB1* (Protrans, Германия) и Biotest HLA SSP Kits (Biotest Medical Diagnostics, Германия). В процессе исследования были выявлены следующие наиболее часто встречающиеся генотипы: HLA-A*02 -28,1%, *03 - 14,5%, *24 - 14,0%; HLA-B*07 - 13,3%, *35 - 12,7%, , *44 - 8,2%, HLA-DRB1*15 - 15,8%, *13 - 15,0, *07 - 14,2%. Частота часто встречающихся гаплотипов составляет: HLA-A*01 - B*08 - DRB1*03 - 0.55%, HLA-A*03 - B*07 - DRB1*15 - 0.45%, HLA-A*03 - B*35 - DRB1*01 - 0.45%.

Полученные результаты распределения генетического полиморфизма HLA-A, -B, -DRB1 локусов у жителей Северо-Западного региона Российской Федерации могут дополнить имеющиеся информационные базы данных по популяционной генетики и по ассоциированным заболеваниям. Главным преимуществом наличия Общественного регистра доноров ПК в Северо-Западном регионе Российской Федерации помимо доступности и уменьшения стоимости материала для трансплантации является то, что вероятность совпадения HLA-генотипа среди одной популяции гораздо выше, чем при поиске в мировом регистре.

Ключевые слова: Главный комплекс гистосовместимости, HLA-

типирование, генетический полиморфизм, пуповинная кровь.

Котелевская Е.А, Смирнова С.А, Василишина А.А., Трофимова И.Л., Смолянинов А.Б.

МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ХРОМОСОМНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ С ПОМОЩЬЮ МУЛЬТИПЛЕКСНОЙ ЛИГАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ

Санкт-Петербургский государственный университет, Медицинский и Биологопочвенный факультеты; Кафедра медицинской генетики и НИЛ клеточных технологий Северо-Западного Государственного медицинского университета

имени И.И. Мечникова, OOO « Покровский банк стволовых клеток», Санкт-Петербург, Россия, prostoalenka@gmail.com

Хромосомные болезни - врождённые пороки развития, вызванные изменением числа или структуры хромосом. Среди новорожденных детей частота хромосомной патологии составляет до 1,0%. Наиболее часто встречается три-сомия 21 хромосомы, которая приводит к синдрому Дауна. Также отмечают по-лисомии по Х и Y хромосомам, причём аномальное число половых хромосом часто проявляет себя только в пубертантном возрасте. Изменение структуры хромосом (аберрации) встречаются реже, но вызывают глубокие нарушения развития многих систем органов. Наиболее тяжёлая клиническая картина наблюдается при делеции (потере) части хромосомы, это может быть делеция целого плеча или только локуса хромосомы. Недостаток генетического материала

приводит к тяжёлым порокам. Дупликация (удвоение) участка хромосомы может кроме всего прочего влиять на умственное и психическое развитие больного, но обычно не приводит к появлению выраженных аномалий развития.

Основным методом анализа числа и структуры хромосом является карио-типирование. Данное исследование включает несколько стадий: культивирование клеток; приготовление препаратов метафазных хромосом и интерфазных ядер, окраску препарата; микроскопический анализ. Для выявления численных и структурных изменений хромосом, достаточно провести кариотипирование с использованием методов дифференциального окрашивания. Для определения небольших делеций или дупликаций на хромосоме, как правило, необходимо применять метод флюоресцентной гибридизации in situ, достаточно сложный и экономически затратный.

Среди молекулярно-генетических методов анализа хромосомных аномалий выделяют метод мультиплексной лигазной цепной реакции (MLPA). Данная технология позволяет оценить количество копий гена, детектировать точечные мутации, продолжительные делеции или дупликации хромосом. При выполнении одного анализа возможно определить количество копий до 40 участков различных генов. Для проведения анализа необязательно использовать живые клетки, что даёт преимущество во времени и позволяет детектировать патологии после длительного хранения материала.

Целью работы являлось определение числа половых и некоторых соматических хромосом и анализ на распространённые микроделеционные синдромы у пациентов с различными патологиями и контрольной группы людей методом MLPA.

В процессе работы применяли коммерческие наборы компании MRC-Holland (Амстердам, Нидерланды). Анализ проводили с помощью автоматической системы капиллярного электрофореза CEQ8800 (Beckman Coulter, США).

Были выявлены следующие нарушения структуры хромосом: делеция 22q11.2 локуса (синдром Ди Джорджи), делеция 17p13.3 (синдром Миллера-Дикера), дисомию по X хромосоме у мужчины XXY (синдром Клайнфельтера).

Применение молекулярно-генетических методов диагностики наследственных заболеваний, имеют ряд преимуществ перед цитогенетическими методами и позволяют эффективно диагностировать хромосомные болезни как в пренатальном, так и в постнатальном периоде.

Ключевые слова: Мультиплексная лигазная цепная реакция, анеупло-дии, микроделеционные синдромы.