Молекулярно-эпидемиологический мониторинг штаммов Streptococcus pneumoniae, выделенных у пациентов пожилого возраста с внебольничными пневмониями Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

МолЕкулярно-эп1 Мониторинг штаммов

PNEUMONIAE, выделенных

пожилого возраста с внЕБольничными пневмония

УДК 616.9-036.2+616.24-002-053.9 Поступила 11.02.2014 г.

А.В. Мартынова, д.м.н., доцент кафедры эпидемиологии и военной эпидемиологии1; профессор кафедры биохимии, микробиологии и биотехнологии2; ЛА Балабанова, к.б.н., научный сотрудник лаборатории морской биохимии3; ОА Чулакова, аспирант кафедры эпидемиологии и военной эпидемиологии1; АА Шепарев, аспирант кафедры эпидемиологии и военной эпидемиологии1

Тихоокеанский государственный медицинский университет, Владивосток, 690002, пр. Острякова, 2; 2Школа естественных наук Дальневосточного федерального университета, Владивосток, 690022, ул. Октябрьская, 27;

Тихоокеанский институт биоорганической химии им. Г.Б. Елякова Дальневосточного отделения РАН, Владивосток, 690022, пр. 100 лет Владивостоку, 159

Сохраняет актуальность проблема микробиологического мониторинга и эпидемиологического надзора за штаммами S. pneumoniae как одного из убиквитарных возбудителей, вызывающих внебольничные пневмонии и другие инфекции дыхательных путей различной степени тяжести.

Мультилокусное сиквенс-типирование является перспективным методом молекулярно-эпидемиологического мониторинга, позволяющего идентифицировать эпидемически опасные клоны убиквитарных возбудителей.

Цель исследования — оценить при помощи метода мультилокусного сиквенс-типирования характер распространения эпидемически значимых штаммов Streptococcus pneumoniae у пациентов пожилого возраста с внебольничной пневмонией, бронхитами и у носителей, а также определить доминирующий генотип.

Материалы и методы. Проведено исследование 14 штаммов, выделенных у пациентов с внебольничными пневмониями (из них 7 — полирезистентных), 8 штаммов — от пациентов с хронической обструктивной болезнью легких, 4 штаммов — от носителей. Мультилокусное сиквенс-типирование выполнено согласно методике M.C. Enright and B.G. Spratt (1998).

Результаты. Штаммы, выделенные во всех трех популяциях, представляют собой родственные изоляты вида Streptococcus pneumoniae, большинство из которых (18 из 26) обладают уникальным генотипом, определяющим наличие одного сиквенс-типа для каждого штамма. Из 14 штаммов, выделенных у лиц пожилого возраста с внебольничной пневмонией, 6 относились к профилю Taiwan 19F-14. Среди штаммов, выделенных от носителей, превалировал штамм, идентичный штамму R6. Среди штаммов, выделенных от пациентов с хронической обструктивной болезнью легких, превалирования какого-либо генотипа не установлено.

Заключение. Мультилокусное сиквенс-типирование позволяет идентифицировать новые генотипы S. pneumoniae и дать прогноз относительно появления эпидемически опасных штаммов с новыми свойствами.

Ключевые слова: мультилокусное сиквенс-типирование; пневмококковые пневмонии; внебольничные пневмонии; S. pneumoniae.

English

Molecular Epidemiological Monitoring

of Streptococcus Pneumoniae Strains Isolated

in Elderly Patients with Common-Acquired Pneumoniaes

А.V. Martynova, D.Med.Sc., Associate Professor, the Department of Epidemiology and Military Epidemiology1; Professor of the Department of Biochemistry, Microbiology and Biotechnology2; LA Balabanova, PhD, Research Worker, the Marine Biochemistry Laboratory3; ОA Chulakova, Postgraduate, the Department of Epidemiology and Military Epidemiology1; АA Sheparyov, Postgraduate, the Department of Epidemiology and Military Epidemiology1

Для контактов: Мартынова Алина Викторовна, тел. моб. +7 914-701-69-08; e-mail: clinmicro@yandex.ru

1 Pacific State Medical University, Ostryakov Avenue, 2, Vladivostok, Russian Federation, 690002;

2School of Natural Sciences, Far Eastern Federal University, Oktyabr'skaya St., 27, Vladivostok, Russian Federation, 690022;

3G.B. Elyakov Pacific Institute of Bioorganic Chemistry, Far Eastern Branch of the Russian Academy of Sciences, Prospect 100 let Vladivostoku, 159, Vladivostok, Russian Federation, 690022

The problem of microbiological monitoring and epidemiological surveillance over S. pneumoniae strains as one of ubiquitous agents causing common-acquired pneumoniaes and other respiratory infections of different severity is still urgent.

Multi-locus sequence typing is a promising technique of molecular epidemiological monitoring enabling to identify epidemically dangerous clones of ubiquitous agents.

The aim of the investigation was to assess the spread of epidemically significant Streptococcus pneumoniae strains by multi-locus sequence typing in elderly patients with common-acquired pneumoniae, bronchites, and agents, and identify a dominant genotype.

Materials and Methods. We studied 14 strains isolated in patients with common-acquired pneumoniaes (among them 7 — multi-resistant), 8 strains — in patients with chronic obstructive pulmonary disease, 4 strains — in the carriers. Multi-locus sequence typing was carried out in accordance with M.C. Enright and B.G. Spratt technique (1998).

Results. All strains isolated in three populations are relative isolates of Streptococcus pneumoniae, and the majority of them (18 of 26) have a unique genotype determining the presence of one sequence type for each strain. From 14 strains isolated in elderly patients with common-acquired pneumoniae, 6 belonged to Taiwan 19F-14. Among the strains isolated in the carriers, the strain identical to R6 strain prevailed. No genotype was found to prevail among the strains isolated in patients with chronic obstructive pulmonary disease.

Conclusion. Multi-locus sequence typing enables to identify new genotypes of S. pneumoniae and prognosticate the appearance of epidemically dangerous strains with new properties.

Key words: Multi-locus sequence typing; pneumococcal pneumoniaes; community-acquired pneumoniaes; S. pneumoniae.

Внебольничные пневмонии среди лиц пожилого возраста продолжают оставаться актуальной проблемой современной медицины [1-4]. Распространенность их в Москве составляет 17,4°%о, а в США — 20-40%о [4]. У пожилых людей заболеваемость внебольничной пневмонией в 2 раза выше, чем у лиц молодого возраста; частота госпитализаций при этом заболевании с возрастом увеличивается более чем в 10 раз [5, 6]. Летальность при пневмонии среди больных старше 60 лет в 10 раз выше, чем в других возрастных группах, и достигает 10-15% при пневмококковых пневмониях [4]. Учитывая тот факт, что S. pneumoniae является одним из основных возбудителей внебольничных пневмоний в разных возрастных группах, а носительство этого возбудителя чрезвычайно распространено [4-7], представляют интерес проведение и оценка значимости эпидемиологических исследований пневмококковых пневмоний у лиц пожилого возраста.

Наиболее важной проблемой при изучении пневмококковых пневмоний у пожилых лиц является организация контроля за распространением анти-биотикорезистентных изолятов [7-9], а также молеку-лярно-эпидемиологический мониторинг выделяемых изолятов. В настоящее время такого рода мониторинг выполняется с помощью метода генотипирования, который позволяет получить стандартизованную информацию о распространении того или иного изоля-та. Информация о характере выявляемых штаммов S. pneumoniae дает возможность планировать профилактические мероприятия в отношении пневмококковой инфекции.

Одним из методов, предназначенных для молеку-лярно-эпидемиологического мониторинга, является мультилокусное сиквенс-типирование (Multilocus sequence typing — MLST), основанное на исследовании вариабельности фрагментов, что позволяет создать

фактически индивидуальный аллельный профиль каждого штамма и в том числе охарактеризовать его эпидемическую значимость [10-13].

Применение MLST в исследовании пневмококка, обладающего высокой способностью к естественной трансформации, дает возможность определить отдельные клональные группы и выявить их эпидемическую значимость [9, 12]. При этом следует учесть, что сик-венс-типы, дифференцируемые MLST, могут обладать различными серотипами (фенотипической вариабельностью), что обусловлено процессами микроэволюции, происходящими в микробиоценозе, частью которого является S. pneumoniae.

Цель исследования — оценить при помощи метода мультилокусного сиквенс-типирования характер распространения эпидемически значимых штаммов Streptococcus pneumoniae у пациентов пожилого возраста с внебольничной пневмонией, бронхитами и у носителей, а также определить доминирующий генотип.

Материалы и методы. Учитывая тот факт, что одной из наиболее значимых эпидемических характеристик является устойчивость к антибактериальным химиопрепаратам и в том числе полирезистентность, в исследование взяли равное количество полирезистентных и чувствительных к антибиотикам штаммов пневмококка: 1-я группа (n=14) — штаммы, выделенные от пациентов пожилого возраста с внебольничными пневмониями (7 — полирезистентных и 7 — чувствительных к антибиотикам); 2-я группа (n=8) — штаммы, выделенные от пожилых пациентов с хронической об-структивной болезнью легких (ХОБЛ) (по четыре чувствительных и полирезистентных штамма); 3-я группа (n=4) — штаммы от пожилых носителей. Под полирезистентностью понимали устойчивость штаммов пневмококка к пенициллину и эритромицину.

Мультилокусное сиквенс-типирование проведено

//////////////////////^^^^

92 СТМ J 2014 — ТОМ 6, №3 А.В. Мартынова, Л.А. Балабанова, О.А. Чулакова, А.А. Шепарев

5'

5'

5'

5'

согласно методике M.C. Enright and B.G. Spratt [11]. Праймеры, использованные в исследовании, могут быть представлены следующим образом:

dd/-up, 5' TGCC/TCAAGTTCCTTATGTGG и ddl-dn, 5' CACTGGGTG/ AAAACCA/ TGGCAT;

gdh-up, 5' ATGGACAAACCAGCNAGC/ TTT и gdh-dn, 5' GCTTGAGGTCCCATG/ACTNCC;

gki-up, 5' GGCATTGGAATGGGATCACC и gki-dn, TCTCCCGCAGCTGACAC;

recP-up, 5' GCCAACTCAGGTCATCCAGG и recP-dn TGCAACCGTAGCATTGTAAC;

spi-up, 5' TTATTCCTCCTGATTCTGTC и aspi-dn, GTGATTGGCCAGAAGCGGAA;

xpt-up, 5' TTATTAGAAGAGCGCATCCT и xpt-dn, AGATCTGCCTCCTTAAATAC.

В связи с общепринятым в мировой практике эпидемиологического надзора за пневмококковой инфекцией использованием метода серотипирования мы применили эту методику с целью сравнения контрольных данных с данными, полученными при MLST. Все штаммы были серотипированы согласно общепринятой методике [12] с использованием Pneumotest panel (Statens Seruminstitut, Копенгаген, Дания). Серотипы, не включенные в панель, были идентифицированы в институте Statens Seruminstitut (Дания) [12].

В процессе серотипирования брали единичные колонии суточной культуры: каплю (25 мкл) помещали в соответствующую секцию панели. В качестве контроля использовали физиологический раствор в равном объеме. Затем стерильной зубочисткой или микробиологической петлей помещали небольшое количество полученной культуры в каплю антисыворотки и аккуратно перемешивали, равномерно распределяя ее по всему объему. Далее панель, на которой ставилась реакция, покачивали до появления агглютинации (последняя происходила в случае реакции бактериальных антигенов со специфической антисывороткой в течение 1 мин при комнатной температуре) и затем изучали при фазовой контрастной микроскопии согласно рекомендациям производителя (Statens Serum Institute, Дания).

Были использованы следующие реактивы: omni-сыворотка, идентифицирующая капсулу пневмококка; группоспеци-фическая антисыворотка (группы A и I, P и T); типовая сыворотка для идентификации отдельных серотипов; групповая сыворотка, реагирующая со всеми сероти-пами пневмококков внутри одной группы; сыворотка для внутриродового типирова-ния [12].

Результаты и обсуждение. Для изучения возможности формирования госпитального полирезистентного штамма S. pneumoniae, происходящего от единого клона, мы провели MLST популяций штаммов пневмококка, выделенных в

различных биотопах и обладающих различной антибактериальной резистентностью. Сравнивали популяции штаммов, выделенных при внебольничных пневмониях (всего 14 штаммов: 7 штаммов, устойчивых к пенициллину и эритромицину, и 7 штаммов, чувствительных к антибактериальным химиопрепаратам); штаммов, выделенных у пациентов с ХОБЛ (всего 8 штаммов: 4 штамма, устойчивых к пенициллину и эритромицину, и 4 штамма, чувствительных к антибактериальным химиопрепаратам); и штаммов, выделенных у носителей (2 штамма, чувствительных к антибактериальным химиопрепаратам, и 2 штамма, не чувствительных к антибактериальным химиопрепаратам). Всего в исследовании участвовало 26 штаммов.

Анализ изучаемых популяций методом MLST выявил, что все штаммы, выделенные от разных групп больных и носителей, представляют собой родственные изо-ляты вида Streptococcus pneumoniae, большинство из которых (18 из 26) обладают уникальным генотипом, определяющим наличие одного сиквенс-типа для каждого штамма. При этом из всего множества изученных штаммов можно сформировать 6 кластерных групп, которые содержат штаммы, выделенные от разных больных, обладающие различными молекулярно-эпидемио-логическими характеристиками (серотип, устойчивость к антибактериальным химиопрепаратам), и которые являются генетически близкородственными.

Результаты MLST штаммов, выделенных у пациентов с внебольничными пневмониями (рис. 1), позво-

рис. 1. Результаты мультилокусного сиквенс-типирования штаммов S. pneumoniae, выделенных у пациентов с внебольничной пневмонией (штаммы с расширением 1 — полирезистентные, без расширения — чувствительные к антибиотикам), всего 14 штаммов

Рис. 2. Результаты мультилокусного сиквенс-типирования полирезистентных штаммов пневмококка, выделенных во всех группах пациентов (всего 13 штаммов)

Rhu I ogene"t i с "tree

У 4 STP-1

STP-4

-STP-3

-STH-10

_ _STC-12

---STC-13

-STP-7

STP-2

--STH-8

STH-11

___STP-5

___STP-6

-STH-9

ляют сделать вывод, что полирезистентные штаммы формируются при внебольничных пневмониях путем горизонтального переноса генетического материала: это подтверждается наличием двух клональных комплексов, в одном из которых присутствует один полирезистентный штамм (клональный комплекс, содержащий ST-1.1, ST-4, ST-13), а в другом — два (ST-2, ST-8.1, ST-11.1). Все это показывает возможность формирования полирезистентности у штаммов пневмококка, выделенных у пациентов с внебольничной пневмонией.

Анализ распространения близкородственных в генетическом отношении штаммов показывает, что из четырех полирезистентных выделенных нами у носителей изолятов пневмококка два являются представителями единого клонального комплекса. Это позволяет говорить о том, что и у носителей в обычных условиях протекают процессы внутригеномной перестройки штаммов, которые могут привести к формированию госпитального изолята и, соответственно, требуют профилактических мероприятий.

Сопоставив результаты MLST всех полирезистентных штаммов (рис. 2), мы пришли к выводу, что наиболее высока вероятность к осуществлению горизонтального переноса в полирезистентных штаммах, выделяющихся у лиц пожилого возраста с ХОБЛ, а также в штаммах, выделенных у пациентов с внебольнич-ной пневмонией (см. таблицу).

Таким образом, в результате анализа генетического разнообразия штаммов S. pneumoniae среди изученных нами 26 чувствительных и нечувствительных (т.е. умеренно-устойчивых и устойчивых) к пенициллину и эритромицину штаммов выделено 22 различ-

ных сиквенс-типа и 4 клональных комплекса. При этом 2 комплекса представлены более чем одним изолятом.

Необходимо отметить, что из 14 штаммов, выделенных у лиц пожилого возраста с внебольничной пневмонией, 6 относились к профилю Taiwan 19F-14, из них 4 обладали одинаковым профилем резистентности: были устойчивыми/умеренно-устойчивыми к пенициллину, эритромицину и клиндамицину. Генотипические характеристики проанализированных штаммов также показали высокую степень однородности выборки: все изоляты имели детерминанты резистентности к мак-ролидным антибиотикам — гены mefE и ermB (что согласуется с фенотипическими данными). Основная характеристика штаммов S. pneumoniae генотипа Taiwan 19F-14 — полирезистентность прежде всего по отношению к бета-лактамам и макролидам независимо от географической области выделения. Данный сиквенс-тип распространен в основном в Южной Корее, Вьетнаме и Гонконге.

Среди штаммов, вызвавших у лиц пожилого возраста ХОБЛ, методом MLST идентифицировано 2 различных сиквенс-типа, при этом каждый из них был представлен 3 изолятами (см. рис. 2).

Несмотря на небольшую выборку, штаммы, выделенные от носителей, оказались фенотипически не однородными: 2 штамма были умеренно-устойчивы к пенициллину и 2 штамма — чувствительны. Все 4 штамма были не чувствительными к эритромицину. При этом два штамма принадлежали к сиквенс-типу, идентичному штамму R6, который является авирулент-ным и может рассматриваться как условно-патогенная микрофлора.

//////////////////////^^^^

94 СТМ J 2014 — Т0М 6, №3 А.В. Мартынова, Л.А. Балабанова, О.А. Чулакова, А.А. Шепарев

ч

I I

ЙС

я

=

к

>

о х

х —

о

к —

=

х я

2

х

Я

¡а Я Я

о

3

I

I I §

^ I

О) «

о

5 У,

я к

го %

СГ

1

О)

х х

I

о .

>4 2

£

оо §

тз ^ 7ч о

со о

33 о —1 —1

—1 ь о со

33 тз ь

—1 сг сг

ГО 03 со X о

О —1 X го ^ ^ о

о со 33

Е о тз о ^ со —1 го ь

со —1 со

X тз X

со ^

о\ 33

ф о го го Е

13 со 03 —1 сг со ^ —1 03

о о

^ о ь о о го со тз -1 —1 о о го о

-1 Е —1 X

со 03 о

X X —1 го

со X сг сг

о 7ч О о X -1 о о ^

-1 О о го о го

I сг —1 о

03 X 03 ^с

13 ь о

со сг —1

о со X го

тз тз сг 03

03 о ^

^

ГО X

о ^

Ь -I а! О

со тз

ТЗ 03

§ Е

СО

о оз

X го

ш дз

^ 1 "

о ^ !»

О СО СО

ГО

X

СО

СО X 03

ж ь 5

■С

О ^ ■О"»

О ф ' X

о

го _

о со

ГО о

03

X ^

^ ^

СО 7ч

оз

о" I

о ^

-1 03

X -

о

со

н X

ф ^

тз аз

^ X

СП аз

о 33 го ^ о

аз о тз

X о о

о ш -1 ф

X о

ф

тз 0> ч

тз 0>

От |\Э ф ^

X

ф

X

О"

^

ш

я

го ГП

я

н Ш

Е 8

о о\ аз

£ ь

ф ^

Ь Н

ф ф

Н Ь

ш

тз о

о\ §

о

х ф

о

> X

I

[Г

X ^

X

ф

ГО

о ^

го С/5 |-§

11 о\ з

о э

Й 2 о сь

= § £

Ер®

^ ф '

^ со §

СО Го

нтз 2

О СО 5

ь Ё

о ь

I ® ^

тз ®

СО -1 X тз .Е 03

^ о ТЗ О О <:

го 03 со

7ч -I Т ^ "о 5

7ч

о о

2 го О?

X =1

о и

О" 5

7ч ТЗ

о

11

Ё §

= 3

^ X

О X

о ^

СО 03

£ 2 §

¥ =

СО о

о ь

Й г

го ^ ^ 5

о со г1 тз со о о го

о го

33

со 03

а>

■О А

ф у

О 5

О I

п 0>

у Й

® я

■£□ 0>

о 5

ГО 5

оз а>

со о

* 3

СО ё

«в

и 0> X

03 X

о

о 5

го *

оз л

™ ?

О I

со

ь

ф

о

тз ф

ф <

о

<

ф

тз ф

X X

о о

<

ш о

£ ^ I

Серотип агоЕ дбЬ дк1 гесР эр! хр1 с1с11 МЬБТ-тип

к пенициллину к эритромицину к клиндамицину

а|11 5 о о

о о

ъ

ш ф

I ж

I

[Г

тз

I о

1 и

ч э

ъ

ф

s

о

•3

о

-1

л

ф

о

ж

В)

я

X

ш

тз

ш

ж

ч

ф

тз

о

ч

ж

В)

э

о

тз

л>

ы

о

ч

Л)

I

ч

I

V

X

ж

ш

I

ч

СУ

о

ч

ж

В)

Е

ч

В)

о

со

(я

■О

3

(Ь

с

э

о

3

2'

со

£ К Я К Л Н п

т.

>

а

н >

к я к

я

>

оценка антибактериальных препаратов, используемых для эмпирической терапии внебольничных инфекций нижних дыхательных путей. Антибиотики и химиотерапия 2000; 10: 15-19.

3. Унгуряну Т.Н., Гржибовский А.М. Внутригодовая динамика загрязнения атмосферного воздуха и обращаемости за медицинской помощью по поводу болезней органов дыхания. Экология человека 2011; 6: 37-42.

4. Дворецкий Л.И. Пожилой больной с внебольнич-ной пневмонией. Русский медицинский журнал 2012; 6: 300-305.

5. Новиков Ю.К. Диагностика и лечение внебольничных пневмоний. Русский медицинский журнал 2001; 1: 11-16.

6. Ржаникова Н.И., Ржаникова А.Н. Внебольничная пневмония у пожилых: диагностика на амбулаторном этапе. Академический журнал Западной Сибири 2012; 3: 25-26.

7. Жильцов И.В., Семенов В.М. Бета-лактамазная активность мокроты и ее влияние на эффективность антибактериальной терапии. Туберкулез и болезни легких 2012; 4: 18-26.

8. Семенов В.М., Дмитраченко Т.И., Жильцов И.В. Микробиологические аспекты резистентности к антимикробным препаратам. Туберкулез и болезни легких 2012; 4: 18-26.

9. Zhang Y.J., Chen Y.S., Wang Z.W., et al. Serological and molecular capsular typing, antibiotic susceptibility and multilocus sequence typing of Streptococcus pneumoniae isolates from invasive and non-invasive infections. Chin Med J (Engl) 2013 Jun; 126(12): 2296-22303.

10. Enright M.C., Spratt B.G. A multilocus sequence typing scheme for Streptococcus pneumoniae identification of clones association with serious invasive disease. Microbiology 1998; 14: 5049-5060, http://dx.doi.org/10.1099/00221287-144-11-3049.

11. O'Sullivan M.V., Sintchenko V., Gilbert G.L. Software for selecting the most informative sets of genomic loci for multitarget microbial typing. BMC Bioinformatics 2013 May 1; 14: 148, http://dx.doi.org/10.1186/1471-2105-14-148.

12. Streptococcus pneumoniae. Textbook in serotyping, virulence factors and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for measuring pneumococcal antibodies. Copenhagen, Denmark: Statens Serum Institute, 2013.

J. Van Cuyck H., Pichon B., Leroy P., et al. Multiple-locus ber tandem-repeat analysis of Streptococcus comparison with multiple loci sequence 2012 Oct 22; 12: 241, http://dx.doi. 2-241.

References

1. Bachinskaya E.N. Community-acquired pneumoniae agents at the turn of a new millennium. Antibiotiki i khimioterapiya 2000; 45: 21-28.

2. Bogdanov M.B., Chernen'kaya T.V. Microbiological analysis of antibacterial drugs used for empiric treatment of community-acquired infections of low respiratory tract. Antibiotiki i khimioterapiya 2000; 10: 15-19.

3. Unguryanu T.N., Grzhibovskiy A.M. Within-year changes of atmospheric air pollution and medical aid appealability due to respiratory diseases. Ekologiya cheloveka 2011; 6: 37-42.

4. Dvoretskiy L.I. An older patients with common-acquired pneumoniae. Russkij medicinskij zurnal 2012; 6: 300-305.

5. Novikov Yu.K. Diagnostics and management of community-acquired pneumoniaes. Russkij medicinskij zurnal 2001; 1: 11-16.

6. Rzhanikova N.I., Rzhanikova A.N. Community-acquired pneumoniae in elderly: out-patient diagnostics. Akademicheskiy zhurnal Zapadnoy Sibiri 2012; 3: 25-26.

7. Zhil'tsov I.V., Semenov V.M. Beta-lactamase activity of sputum and its effect on antibacterial therapy efficiency. Tuberkulez i bolezni legkikh 2012; 4: 18-26.

8. Semenov V.M., Dmitrachenko T.I., Zhil'tsov I.V. Microbiological aspects of antimicrobial resistance. Tuberkulez i bolezni legkikh 2012; 4: 18-26.

9. Zhang Y.J., Chen Y.S., Wang Z.W., et al. Serological and molecular capsular typing, antibiotic susceptibility and multilocus sequence typing of Streptococcus pneumoniae isolates from invasive and non-invasive infections. Chin Med J (Engl) 2013 Jun; 126(12): 2296-22303.

10. Enright M.C., Spratt B.G. A multilocus sequence typing scheme for Streptococcus pneumoniae identification of clones association with serious invasive disease. Microbiology 1998; 14: 5049-5060, http://dx.doi.org/10.1099/00221287-144-11-3049.

11. O'Sullivan M.V., Sintchenko V., Gilbert G.L. Software for selecting the most informative sets of genomic loci for multitarget microbial typing. BMC Bioinformatics 2013 May 1; 14: 148, http://dx.doi.org/10.1186/1471-2105-14-148.

12. Streptococcus pneumoniae. Textbook in serotyping, virulence factors and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for measuring pneumococcal antibodies. Copenhagen, Denmark: Statens Serum Institute, 2013.

13. Van Cuyck H., Pichon B., Leroy P., et al. Multiple-locus variable-number tandem-repeat analysis of Streptococcus pneumoniae and comparison with multiple loci sequence typing. BMC Microbiol 2012 Oct 22; 12: 241, http://dx.doi. org/10.1186/1471-2180-12-241.

ymmmmm^mmmmmmmmmmmmmmmmmm

96 СТМ J 2014 — том 6, №3

А.В. Мартынова, Л.А. Балабанова, О.А. Чулакова, А.А. Шепарев