CC BY
3УДК 577.175.632
Молекулярная биология прогестерона
А. Н. Смирнов
АЛЕКСАНДР НИКОЛАЕВИЧ СМИРНОВ — доктор биологических наук, профессор, заведующий лабораторией эндокринологии Биологического факультета Московского государственного университета им. М.В. Ломоносова. Область научных интересов: физиология и биохимия гормонов и рецепторов, гормональная регуляция экспрессии генов, половая дифференцировка.
119992, Москва, Ленинские горы 1/12, МГУ им. М.В. Ломоносова, Биологический факультет, лаборатория эндокринологии, тел. (095)939-36-78, факс (095)939-43-09, E-mail smirnov_an@mail.ru
Стероидный гормон яичников и плаценты прогестерон (см. схему) получил свое название благодаря способности поддерживать беременность (гестацию) после удаления у животных яичников. Помимо геста-генной функции, прогестерон оказывает множество других эффектов на организм, включая индукцию развития лобуло-альвеолярного аппарата молочной железы, прямую и опосредованную гипоталамо-гипо-физарной системой регуляцию функции яичников и созревания яйцеклетки, стимуляцию полового поведения, а также ряд эффектов на системы, не имеющие прямого отношения к репродукции, например, сердечно-сосудистую, желчевыделительную и терморегуляции. Синтетические аналоги (агонисты и антагонисты) прогестерона (см. схему) находят широкое применение в заместительной терапии при недостаточности секреции прогестерона, а также в составе контрацептивных препаратов. Подобное применение нередко сопровождается нежелательными побочными эффектами, например, вирилизацией или увеличением риска сердечно-сосудистых заболеваний, что диктует необходимость создания аналогов прогестерона избирательного действия. Одним из прототипов селективных аналогов прогестерона могут служить 16а,17а-циклоалканопрогестероны (см. схему) [1]. Подходы к
О
Прогестерон
Промегестон (R5020)
Н-.Ст-
ОН
'С»5-С=СН
Мифепристон (RU486)
Схема
решению этой задачи кроются в особенностях проведения разных сигналов прогестерона, чему, преимущественно, и посвящен предлагаемый обзор. Механизмы действия прогестерона имеют много общего с действием других стероидных гормонов, причем некоторые стороны проведения гормонального сигнала лучше исследованы в отношении других стероидов (прежде всего глюкокортикоидов и эстрогенов). Соответствующие данные с большой степенью вероятности могут быть аппроксимированы к действию прогестерона и поэтому также включены в обзор.
Ядерные рецепторы прогестерона
Общие сведения
Подавляющая часть эффектов прогестерона в организме млекопитающих опосредуется его рецепторами, относящимися к семейству ядерных рецепторов. Это семейство включает рецепторы других стероидных гормонов (глюко- и минералокортикоидов, андроге-нов, эстрогенов), рецепторы гормонов щитовидной железы, гормональной формы витамина Г>; и рети-ноевых кислот, а также сенсоры негормональных соединений, таких как желчные и жирные кислоты, гидроксипроизводные холестерина, поллютанты. Некоторые ядерные рецепторы, по-видимому, не способны взаимодействовать с низкомолекулярными соединениями, и их активность регулируется другими механизмами. Ядерные рецепторы имеют сходную структурно-функциональную организацию и действуют преимущественно как транскрипционные факторы, хотя известны и другие формы проявления их активности [2].
Ядерные рецепторы обнаружены как у позвоночных, так и у беспозвоночных животных, однако рецепторы стероидных гормонов, включая рецепторы прогестерона, являются эволюционным завоеванием хордовых. Предполагается, что наи-
О
,и(СН2)л
16а, 17а-Циклоалканопрогестероны
АФ-3
1
более древним из рецепторов стероидов является рецептор эстрогенов (ЕЯ), причем исходно его лигандами могли служить не сами эстрогены, а их биосинтетические предшественники — 3-гидрок-си-Д5-стероиды. Лишь после появления Зр-гидроксистероиддегидрогеназы/Л5^4-изомеразы (ЕС 1.1.1.145/ЕС 5.3.3.1)
(фермента, катализирующего окисление р
ску двойной связи из кольца В в кольцо А стероидной молекулы) возникла возможность биосинтеза эстрогенов из анд-ростендиона или тестостерона, и эстрогены стали предпочтительными лигандами ЕЯ. Последующая эволюция рецепторов стероидных гормонов включала серию дупликаций и расхождений гена ЕЯ и его наследников. В результате дупликации гена ЕЯ появился прототипичный рецептор 3-кетостероидов, близкий к рецептору прогестерона (РЯ). Двойная дупликация гена Р Я. в свою очередь дала, с одной стороны, рецептор андрогенов (ЛЯ), а с другой — рецептор глюкокортикоидов (вЯ). Позднее дупликация гена вЯ обеспечила появление рецептора минералокорти-коидов. Предполагается, что движущей силой эволюции рецепторов служили сами стероиды [3, 4].
У человека рецепторы прогестерона РЯ кодируются одним геном, транскрипция которого может давать несколько изоформ белка. Наиболее распространенными изоформами РЯ являются РЯ-А и РЯ-В, возникающие в результате действия разных промоторов (областей, определяющих инициацию транскрипции) гена РЯ и различающиеся между собой наличием на ГМ-конце РЯ-В фрагмента из 164 аминокислотных остатков, отсутствующего в РЯ-А Использование того или иного промотора гена РЯ тканеспецифично и дополнительно контролируется эндокринными и па-ракринными факторами [5—7]. Эксперименты с раздельным нокаутом двух промоторов гена РЯ у мыши показали, что для подготовки к беременности и ее поддержания прогестероном необходим РЯ-А, а для развития молочной железы требуется экспрессия РЯ-В [8, 9]. Две изоформы РЯ различаются по спектру индуцируемых прогестероном ответов одной и той же клетки, и РЯ-А может даже ингибировать действие прогестерона через РЯ-В [10]. Для понимания причин отмеченных различий в биологической активности двух изоформ РЯ следует рассмотреть их структуру в связи с другими участниками системы проведения сигнала прогестерона (рис. 1).
Активационные функции 1 и 3 (АФ-1 и -3) модуляторного домена А/В включают поверхности взаимодействия с коактиваторными белками и способны действовать независимо от связывания рецептором лиганда [11, 12]. Отсутствие АФ-3 в изоформе РЯ-А обеспечивает проявление активности ингибиторного домена (ИД), способного взаимодействовать с коре-прессорными белками [13]. Домен А/В участвует также в димеризации РЯ [14]. Данный домен активно фосфорилируется рядом протеинкиназ (ферментов, переносящих у-фосфат аденозинтрифосфата (АТФ) на остатки серина, треонина или тирозина белковых субстратов), что может оказывать дифференцированное
-1
АФ-2
535
634 688
933
ИД
1бТ
-1
АФ-2
535
634 688
933
РЯ-Б
РЯ-Л
Рис. 1. Доменная организация изоформ В и А рецептора прогестерона человека:
ДСД — ДНК-связывающий домен (= домен С); Ш — шарнирный домен (= домен Б); ЛСД — лигандсвязывающий домен (= домен Е). Модуляторный домен = домен А/В. Небольшой домен Р на С-конце молекулы подавляет агонистическую активность антагонистов. АФ-1, АФ-2 и АФ-3 — активационные функции 1, 2 и 3. ИД — ингибиторный домен. Цифрами обозначены номера аминокислотных остатков
влияние на активность изоформ РЯ [15]. ДНК-связывающий домен включает два цинковых «пальца» и С-концевое расширение, аминокислотные остатки которых взаимодействуют с нуклеотидами или саха-рофосфатным остовом ДНК в составе гормончувстви-тельных элементов регуляторных областей компетентных генов [16]. Шарнирный домен обеспечивает двустороннюю передачу сигнала о конформационных изменениях в Ы- и С-концевых областях молекулы и участвует в димеризации РЯ [14]. ДНК-связывающий и шарнирный домены формируют сигнал ядерной локализации РЯ, участвующий также и в экспорте рецептора из клеточного ядра [17]. Лигандсвязывающий домен (ЛСД) выполняет одновременно несколько функций. Помимо лиганда, этот домен взаимодействует с шаперонными белками («белками-няньками»), регулирующими внутриклеточный транспорт рецептора и его готовность к проведению гормонального сигнала (см. ниже). ЛСД (совместно с шарнирным доменом) содержит также поверхность гомодимеризации рецептора, необходимой для высокоаффинного связывания рецепторной молекулы с палиндромной (построенной из комплементарных друг другу фрагментов) структурой гормончувствительного элемента ДНК [14]. На С-конце ЛСД расположена активационная функция 2, представляющая собой поверхность, формируемую в присутствии прогестерона и обеспечивающую взаимодействие рецептора с коактиваторами. При сходном плане строения разные ядерные рецепторы могут несколько различаться по локализации отдельных функциональных элементов [18].
Регуляция рецепторов прогестерона шаперонными белками
В отличие от других ядерных рецепторов, зрелые формы рецепторов стероидов в отсутствие лиганда находятся в составе олигомерных белковых комплексов, включающих помимо рецепторной молекулы белок теплового шока 90 (Шр90), кошаперонный белок р23 и один из белков, содержащих так называемый 34-членный повтор (ТРЯ). В последнюю группу белков входят иммунофилины: циклофилин 40 (Сур40), связывающий имуносупрессорный агент циклоспорин А, белки ЕКВР51 и ЕКВР52, связывающие продуцируемый стрептомицетами иммуносупрессорный агент
PR + Hsp40 Hsp40
Pi
Hsp70
АДФ
PR У Hsp40
АТФ
Hsp70
АТФ
Г'
I hop L|Hsp9Ö
Р23 Mhsp90 Н
^Üö] <4
FKBP51
II II
Hsp70 = PR = Hsp40
АДФ
Ahal
АТФ \
1
Hsp90
—k PR^= FKBP52
динеин FKBP52 FKBP51
динеин
цитоплазма
Л-^эффе
кты
ядро
Рис. 2. Модель созревания рецепторов прогестерона с участием шаперонных белков. Сокращения — см. в тексте
FK506, а также протеинфосфатаза 5 (РР5) (фермент, гидролизующий связь фосфата с аминокислотными остатками белковых субстратов). В составе комплексов белки находятся в стехиометрическом отношении 1(PR) : 2(Hsp90) : 1(р23) : 1^Р-содержащий белок) [19—21]. В соответствии с количеством упомянутых выше TRP-содержащих белков возможно формирование четырех дискретных олигомерных комплексов PR. Эти комплексы могут различаться функционально, и соотношение в клетке разных TRP-содержащих белков может оказывать существенное влияние на гормональную чувствительность данной клетки.
Указанные олигомерные комплексы рецепторов формируются не в результате простой ассоциации входящих в их состав белков, а в ходе сложного динамичного процесса межбелковых взаимодействий с участием, по меньшей мере, еще 4-х белков: Hsp40, Hsp70, hip и hop. Предполагаемая последовательность событий представлена на рис. 2 [22—24]. Необходимо отметить, что данная схема не является окончательной или универсальной. В частности, в случае рецептора глюкокортикоидов, Hsp40, по-видимому, входит в состав рецепторных комплексов уже после взаимодействия рецептора с Hsp70 [25].
Смысл столь сложной системы, по-видимому, заключается в последовательной пространственной укладке полипептидной цепи рецептора с образованием способной к связыванию гормона конформации рецептора. Комплексы рецептора с Hsp90 при физиологических условиях сравнительно нестабильны (tj/2 ~5 мин), и высвобождающийся рецепторный белок входит в новый цикл созревания [26]. При связывании
рецептором лиганда может происходить взаимообмен TRP-coдepжaщиx белков в составе олигомерных комплексов, способствующий транслокации рецепторов из цитоплазмы в клеточное ядро. Элементы данной системы способны взаимодействовать с низкомолекулярными соединениями (нуклеотидами и их мимети-ками, иммуносупрессорными агентами), что позволяет ожидать возможность фармакологического манипулирования чувствительностью клетки к гормону уже на уровне подготовки рецептора к проведению гормонального сигнала, и попытки такого вмешательства уже предпринимаются [27—28]. Для того, чтобы оценить перспективы данного типа терапии, следует более подробно рассмотреть структуру и функции отдельных белков, участвующих в «шаперонинге» рецепторов стероидных гормонов.
Центральное место в поддержании рецептора в состоянии готовности к связыванию лиганда занимает Шр90, экспрессируемый практически во всех клетках в виде двух структурно и функционально близких изоформ, а и р. Две изоформы различаются, однако, по регуляции их содержания в клетках. Кроме того, в выделенных олигомерных комплексах рецепторов
а
Шр90 выявлено несколько функциональных доменов. В N1-кон ценой части молекулы содержится сайт связывания пуриновых нуклеотидов в составе каталитического АТФазного центра (гидролизующего связь между у- и Р-остатками фосфата в АТФ). В этой области расположены также поверхности связывания кошаперона р23 и некоторых белков-«клиентов». В С-концевой области Шр90 локализованы взаимонеис-
ключающие поверхности гомодимеризации и связывания TPR-содержащих белков и белковых «клиентов». В центральной части молекулы Hsp90 содержится сайт связывания кошаперонов Ahal и Hehl, которые стимулируют АТФазную активность Hsp90 за счет экспозиции расположенной здесь каталитической петли и ее сближения с сайтом связывания АТФ N-концевой области молекулы [30].
Связывание АТФ и АТФазная функция играют важную роль в функционировании Hsp90. Присоединение АТФ стимулирует связывание кошаперона р23 и ослабляет взаимодействие Hsp90 с белками-«клиентами» [31]. Гидролиз АТФ обеспечивает возвращение Hsp90 к состоянию готовности к новому циклу шаперонинга. Антибиотики группы ансамицина (продуцируемые актиномицетами гельданамицин, гер-бимицин А, макбецин) включают структуру, имитирующую пуриновые нуклеотиды, за счет чего указанные антибиотики прочно связываются сайтом связывания АТФ/АДФ и тем самым блокируют функцию Hsp90. Одним из последствий является снижение уровня рецепторов стероидных гормонов в клетках [32-33].
Кошаперон р23 повышает взаимодействие Hsp90 с рецептором прогестерона и увеличивает лигандсвязы-вающую активность рецептора, возможно, за счет стабилизации комплекса Hsp90/PR. В отношении ряда белков-«клиентов» р23 может выполнять и самостоятельную шаперонную функцию [21].
TPR-содержащие белки взаимоисключающе взаимодействуют с С-концевой областью Hsp90 [34]. Помимо иммунофилинов и РР5, входящих в состав зрелого олигомерного рецепторного комплекса, мотивы TPR выявлены в кошаперонных белках hip и hop. Последний белок за счет TPR, расположенных на N- и С-концах его молекулы, взаимодействует одновременно с АДФ-связанными формами Hsp70 и Hsp90, оказывая влияние на конформацию и функцию обоих белков, что способствует замене Hsp70 на Hsp90 в олигомерных комплексах рецепторов [22, 35].
Области взаимодействия рецептора и с Hsp70, и с Hsp90 расположены в N-концевой части лигандсвязы-вающего домена, но не перекрываются полностью. Важно отметить, что мишенью действия Hsp90 служит граница между гидрофобным лигандсвязывающим карманом и окружающей гидрофильной поверхностью белка. В результате взаимодействия Hsp90 с этой областью рецептора происходит открытие входа в лиган-дсвязывающий карман [25]. Разные рецепторы стероидных гормонов могут различаться по стабильности данной активной конформации: при низкой температуре рецепторы прогестерона сохраняют лигандсвязы-вающую активность и после удаления Hsp90, тогда как вход в лигандсвязывающий карман рецептора глюкокортикоидов сразу захлопывается после удаления Hsp90.
Иммунофилины, входящие в состав зрелых олигомерных комплексов рецепторов, помимо способности взаимодействовать с иммуносупрессорными агентами, обладают еще несколькими видами активности. Все они (Сур40, FKBP51 и FKBP52) обладают пептидил-пролилизомеразной активностью (то есть способностью катализировать цис-транс-изомеризацию имид-ных пептидных связей пролина). FKBP51, по-видимому, участвует в системе отрицательной обратной
связи в функционировании рецепторов. Этот белок способен одновременно взаимодействовать и с Hsp90, и с рецепторной молекулой, снижая ее сродство к гормональному лиганду [36]. Экспрессия данного им-мунофилина стимулируется стероидными гормонами, включая прогестерон [37]. Интересно, что известная гипочувствительность приматов нового света к стероидным гормонам связана, по-видимому, с повышенной экспрессией FKBP51 и его повышенной ингиби-рующей активностью в отношении рецепторов стероидов [38—39].
Вплоть до последнего времени считалось, что гормональный лиганд индуцирует изменение конформации рецептора, обеспечивающее отделение шаперон-ных белков и последующую транслокацию апорецеп-тора в клеточное ядро. Оказалось, однако, что лиганд сначала стимулирует замещение FKBP51 другим им-мунофилином, FKBP52, который способен рекрутировать в олигомерный рецепторный комплекс динеин — белок, участвующий в транспорте белков из цитоплазмы в клеточное ядро с участием микротрубочек. Диссоциация олигомерных рецепторных комплексов, по-видимому, происходит уже в клеточном ядре [24, 40]. Помимо стимуляции внутриклеточного транспорта рецептора, FKBP52 увеличивает сродство рецептора к лиганду, и для этого требуется пептидил-пролилизомеразная активность FKBP52 [41]. Как и FKBP51, FKBP52, наряду со связыванием Hsp90, взаимодействует непосредственно с рецепторами (шарнирная область). На С-конце молекулы FKBP52 локализована область взаимодействия с кальмодули-ном (небольшим белком, взаимодействие которого с белками-«клиентами» стимулируется кальцием) [20]. Различия в сродстве FKBP51 и FKBP52 к Hsp90 определяются С-концевыми последовательностями двух белков: в FKBP51 эта последовательность повышает, а в FKBP52 снижает сродство [42].
Часть олигомерных комплексов рецепторов включает РР5. Этот фермент имеет область гомологии с пептидилпролилизомеразным доменом иммунофилинов и, по-видимому, также может регулироваться иммуносупрессорными агентами. За счет указанной области РР5 способна взаимодействовать с динеином, что позволяет предполагать ее участие во внутриклеточном транспорте рецепторов [43]. Сур40 обладает низким сродством к Hsp90 и входит в состав лишь небольшой части рецепторных комплексов. Вместе с тем чувствительность системы проведения гормонального сигнала в некоторых клетках к лиганду Сур40 — циклоспорину А позволяет предполагать реальное участие Сур40 в шаперонинге рецепторов [44].
Перекрывание областей взаимодействия иммунофилинов и РР5 с динеином и центров связывания иммуносупрессорных агентов FK506 или рапамицина обеспечивает ингибиторное действие указанных агентов на проведение гормонального сигнала [27], хотя имеются и прямо противоположные данные [44]. Противоречия, возможно, отчасти связаны с различиями в функциях разных иммунофилинов, взаимодействующих с одним и тем же кругом низкомолекулярных регуляторов [20, 33, 45—46]. С учетом тканевых различий в экспрессии и расхождения функций разных иммунофилинов, а также предпочтительности во взаимодействии иммунофилинов с разными рецепторами, можно ожидать появление новых подходов в манипу-
лировании чувствительностью клеток к воздействию гормональных стероидов с применением негормональных низкомолекулярных регуляторов шаперонинга.
Генотронное действие
В рамках общепринятой парадигмы действие прогестерона на экспрессию компетентных генов включает несколько ключевых моментов. Связывание агони-ста рецептором сопровождается таким изменением конформации рецепторной молекулы, которое обеспечивает:
а) способность рецепторной молекулы узнавать и специфически связывать фрагменты ДНК, называемые гормончувствительными элементами;
б) отделение от рецепторной молекулы белков, ингибирующих транскрипционную активность рецептора, называемых корепрессорами;
в) рекрутирование в комплекс белков, повышающих транскрипционную активность рецептора, называемых коактиваторами;
г) создание пермиссивной (разрешающей) среды для транскрипции за счет прямой или опосредованной дополнительными привлеченными белками модификации (релаксации) хроматина;
д) прямое или опосредованное активирующее взаимодействие коактиваторов с компонентами ба-зального комплекса транскрипции;
е)запуск систем аутоингибирования проведения гормонального сигнала.
Данные кристаллографического анализа лигандсвя-зывающего домена разных ядерных рецепторов, включая рецепторы прогестерона, подтвержденные экспериментами с мутагенезом рецепторов, показали, что ведущую роль в инициации указанных событий в действии гормона играет изменение ориентации 12-й а-сп:ирали, входящей в состав активационной функции 2 (АФ-2) рецептора. Непосредственными следствиями данного изменения конформации рецепторной молекулы являются: захлопывание входа в лигандсвя-зывающий карман рецептора, отражающееся в повышении стабильности лиганд-рецепторных комплексов; возникновение стерического препятствия для взаимодействия рецептора с корепрессорами; появление поверхности взаимодействия рецептора с коактиваторами; создание возможности связывания рецептора с белками, обеспечивающими инактивацию рецепторов, в частности, убиквитинлигазами (ферментами, катализирующими присоединение к белкам-«клиентам» небольшого белка убиквитина). Необходимо подчеркнуть, что конформационные изменения при связывании лиганда затрагивают всю рецептор-ную молекулу, однако отсутствие кристаллографических данных для полноразмерного рецептора не позволяют пока построить обоснованную модель таких изменений. Феноменологически индуцированные ли-гандом изменения конформации рецептора за пределами лигандсвязывающего домена выражаются, в частности, в увеличении доли молекул рецептора, способных связываться с ДНК, в увеличении прочности связи рецептора с ДНК [47], в возникновении кооперативное™ в действии активационных функций 1(3) и 2 [48], в стимуляции гомодимеризации рецепторов, в изменении доступности ряда участков полипептидной цепи рецептора для фосфорилирования различными
протеинкиназами, в изменении чувствительности рецепторов к действию протеолитических ферментов.
Конформационная пластичность рецепторов обеспечивает и другие разнообразные взаимодействия партнеров рецепторов (гормональных лигандов, ДНК, корегуляторов) между собой без вступления в непосредственный контакт, т.е. рецептор выступает в качестве адапторной молекулы. Примерами подобных опосредованных рецептором взаимодействий служит влияние гормончувствительного элемента ДНК и на лигандсвязывающие свойства рецептора [49], и на взаимодействие его с коактиватором [50]. Это особенно важно учитывать при создании селективных аналогов гормонов. Конформационная пластичность обеспечивает также возможность имитации действия гормонального лиганда ковалентной модификацией рецептора, чаще всего фосфорилированием. Например, эстрогеноподобное действие эпидермального фактора роста в значительной мере обусловлено фосфорилированием рецептора эстрогенов при активации ростовым фактором рецепторной тирозинкиназы [51].
Данные рентгеноструктурного анализа лигандсвязывающего домена рецептора прогестерона и некоторых других ядерных рецепторов показывают, что, несмотря на относительно невысокую гомологию, общий план укладки полипептидной цепи разных рецепторов сходен и напоминает трехслойный сэндвич из антипараллельных а-спиралей (рис. 3). В формировании гидрофобного лигандсвязывающего кармана принимают участие аминокислотные остатки из различных участков цепи рецепторной молекулы. В частности, с лигандом непосредственно контактируют оса
а
цифичность рецептора определяется не только этими остатками. Например, в дискриминации глюкокорти-коидов и прогестинов важную роль играют отдаленные от лиганда остатки спиралей Н6 и Н7 [52]. Такие остатки могут определять общий размер и форму лигандсвязывающего кармана, а также степень индуцированного лигандом изменения ориентации спирали
Рис. 3. Схематическое изображение пространственной укладки лигандсвязывающего домена рецептора прогестерона:
а-спиральн:ые участки (Н1 —Н12) изображены в виде цилиндров
m909
Рис. 4. Взаимодействия прогестерона с рецептором.
Водородные связи обозначены стрелками, контакты Ван-дер- Ваальса — пунктиром. Аминокислотные остатки представлены в однобуквенном коде: М — Met, F — Phe, L - Leu, С - Cys, N - Asp, T - Thr, Y - Tyr, R - Arg, Q — Gin, W — Trp. Цифрами обозначены номера аминокислотных остатков
Н12, которая связана с направленностью биологического действия лиганда в ряду: полный агонист— частичный агонист/антагонист—полный антагонист.
Важнейшей общей структурной детерминантой прогестинов, кортикостероидов и андрогенов является 3-кетогруппа кольца А стероидной молекулы. Данная группа узнается инвариантными остатками глутамина и аргинина а-спиралей НЗ и Н5 соответствующих рецепторов (С1п725 и Аг§766 в РЯ) с образованием водородных связей. Остатки, расположенные рядом с кольцом Г) прогестинов и кортикостероидов и локали-а
консервативны. Непосредственное окружение молекулы прогестерона в лигандсвязывающем кармане РЯ показано на рис. 4 [53].
Основанные на данных кристаллографического анализа модели лигандсвязывающих доменов ядерных рецепторов создают основу для дизайна новых гормонально активных соединений с заданными биологическими свойствами [54]. Самым простым является так называемый докинг или примерка предполагаемого лиганда в лигандсвязывающий карман. При этом учитываются геометрия партнеров и возможность формирования между ними водородных и гидрофобных взаимодействий. Примером данного подхода может служить дизайн 17-галогенметиленовых аналогов прогестерона [55]. На следующем этапе в расчет принимаются изменения координат атомов аминокислотных остатков полипептидной цепи рецептора, индуцируемые заместителями в молекуле лиганда. Такие изменения могут оказывать существенное влияние на геометрию лигандсвязывающего кармана [56]. Поскольку один и тот же заместитель в сочетании с разными модификациями молекулы лиганда может оказывать прямо противоположное влияние на лиганд-ре-цепторное взаимодействие [57], подгонка может быть продолжена с учетом и этого обстоятельства. С помощью данного подхода можно весьма продуктивно прогнозировать прочность лиганд-рецепторного взаимодействия. На основании расчетных изменений ориен-а
можно сделать и в отношении направленности биологической активности лиганда, поскольку эти изменения различны в присутствии агониста и антагониста [56]. Разумеется, возможности данного способа дизайна новых лигандов ограничены, поскольку пока отсут-
ствует возможность учета отдаленных взаимодействий в рецепторной молекуле. Например, при данном подходе невозможно предсказать степень влияния того или иного гормончувствительного элемента ДНК на лиганд-рецепторное взаимодействие. Такое влияние установлено экспериментально и оно различно для разных лигандов [49]. Кроме того, взаимодействие рецептора с различающимися гормончувствительными элементами может приводить к различным изменениям в ориентации 12-й а-спирали и, следовательно, к индивидуальной для каждого компетентного гена и типа клетки направленности биологической активности лиганда [50].
Корегуляторы (коактиваторы и корепрессоры) ядерных рецепторов представляют собой большую и постоянно пополняемую группу белков с различным механизмом действия [58]. Считается, что специфичность гормонального действия формируется в значительной мере именно на уровне корегуляторов. Действительно, рецепторы прогестерона, глюкокортикоидов, минерало-кортикоидов и андрогенов узнают одну и ту же консен-сусную последовательность гормончувствительных элементов ДНК, GGTACAnnnTGTTCC (где п — любой нуклеотид). В одной клетке часто экспрессируется не менее двух из указанных рецепторов. Однако спектры эффектов разных гормонов перекрываются редко. Одним из механизмов канализации разных гормональных стимулов служит предпочтительность взаимодействия разных рецепторов с теми или иными корегуля-торами. Так, в экспериментах с интегрированным в геном вирусным промотором было показано, что взаимодействующий с ним рецептор прогестерона рекрутирует коактиватор SRC-1, а рецептор глюкокортикоидов — родственный коактиватор SRC-2. Эта предпочтительность отражается на вовлечении в комплекс (через разные SRC) различающихся корегуляторов: СВР и pCAF, соответственно. Одним из следствий служат различия в характере индуцируемых прогестероном и глюкокортикоидом модификаций гистонов (в частности, ацетилирования Lys5 в гистоне Н4 и ацетилирования Lysl4 и фосфорилирования SerlO в гистоне НЗ, соответственно) [59]. Как было показано для рецептора эстрогенов, предпочтительность взаимодействия рецептора с тем или иным коактиватором может также зависеть от особенностей конкретного гормончувствительного элемента ДНК [60]. Ряд корегуляторов экспрессируется тканеспецифично, что также может служить основой для возникновения уникального для каждого гормона спектра действия. Активность корегуляторов ядерных рецепторов может индивидуально контролироваться рядом факторов, в частности, путем фосфорилирования [61]. Специфичность гормонального действия может также зависеть от локализации гормончувствительного элемента относительно сайта инициации транскрипции: в разных клетках характер зависимости транскрипционной эффективности действия гормона от положения элемента различен, что, по-видимому, отражает участие разных корегуляторов во взаимодействии рецептора с базальным комплексом транскрипции [62].
Выявлены корегуляторы, взаимодействующие с С-концевой областью рецепторов, включающей актива-ционную функцию 2, и это взаимодействие является гормонзависимым. Некоторые коактиваторы независимо от гормона связываются с N-концевой областью
рецепторов, включающей активационную функцию 1 (и АФ-3 в РЯ-В). Известны коактиваторы, взаимодействующие одновременно с Ы- и С-концевыми областями рецепторов. Часть корегуляторов узнает структуры ДНК-связывающего или шарнирного доменов рецепторов. Области контакта коактиватора с рецептором обычно включают мотив ЬХХЬЬ (где Ь — лейцил, X — любая аминокислота). В корепрессорах этот мотив изменен до 1_/1ХХП (I — изолейцил). Некоторые корегуляторы могут служить и коактиваторами, и ко-репрессорами, в зависимости, в частности, от типа рецептора. Так, взаимодействие корегулятора РКП Я. как и коактиваторов, с рецептором эстрогенов стимулируется агонистом, но это приводит не к повышению, а к снижению транскрипционной активности рецептора. В то же время транскрипционная активность рецепторов тиреоидных гормонов и ретиноевой кислоты стимулируется данным корегулятором [63].
Возвращаясь к основной цели настоящего обзора, можно сделать заключение, что существование известных и возможность создания новых селективных аналогов стероидных гормонов в значительной мере определяется комбинаторикой коактиваторов и коре-прессоров в клетках того или иного типа, а также локализацией и окружением гормончувствительных элементов в компетентных генах. Иллюстрацией первой части этого вывода могут служить данные работы [64]. Оказалось, что агонистическая активность частичных агонистов/антагонистов эстрогенов и прогести-нов/глюкокортикоидов (тамоксифена и Я11486. соответственно) может быть существенно увеличена экспрессией коактиватора Ь7/8РА, взаимодействующего с шарнирным доменом рецепторов. В то же время Ь7/8РА не оказывал влияния на эффекты полных аго-нистов и антагонистов этих гормонов. Механизм такого избирательного действия Ь7/8РА, по-видимому, включает конкуренцию данного коактиватора с коре-прессорами Ы-СоЛ или 8М ЯТ за рецепторы, находящиеся в конформации, являющейся промежуточной между полностью активной и полностью неактивной. Аналогично Ь7/БРА могут действовать и другие коактиваторы [65].
Комбинаторика корегуляторов, возможно, определяет и различия в действии аналогов прогестерона через изоформы рецептора прогестерона А и В. В частности, в зависимости от клеточного и промоторного контекста агонист 115020 и антагонист Я11486 могут действовать однонаправленно (в случае РИ-А) или разнонаправленно (в случае РИ-В) на транскрипционную активность рецептора эстрогенов [66]. В экспериментах /я р/Уго РЯ-А. как правило, проявляет слабую транскрипционную активность и может служить негативным регулятором трансактивации под действием РИ-В. Это связано, как полагают, с экспозицией в РЯ-А ингибиторной функции, скрытой в молекуле РИ-В. В результате РЯ-А прочнее связывает корепрес-соры и слабее взаимодействует с коактиваторами по сравнению с РЯ-В [67].
Генотропное действие прогестерона, по-видимому, не всегда связано с индукцией гормоном взаимодействия димерного РЯ с палиндромным гормончувстви-тельным элементом ДНК. Так, индукция прогестероном экспрессии пролактина в децидуальных клетках эндометрия происходит с участием фрагмента ре гуля-торной области гена, содержащего лишь полусайт
гормончувствительного элемента. Для индукции, однако, необходимо взаимодействие рецептора прогестерона с транскрипционным фактором С/ЕВРр, сдвоенный сайт посадки которого на ДНК расположен рядом с полусайтом для рецептора прогестерона. В данном случае рецептор прогестерона может, вероятно, выступать в качестве адаптера для взаимодействия С/ЕВР с корегуляторами. Интересно отметить, что в описанном примере изоформа РЯ-А проявляла большую транскрипционную активность, чем изоформа РИ-В. Обратная ситуация имела место при применении репортерных конструкций, включавших палин-дромный гормончувствительный элемент [68]. Использование полусайтов гомончувствительных элементов при одновременном взаимодействии с локализованными рядом транскрипционными факторами описано и для других рецепторов стероидных гормонов, например, в случае стимуляции глюкокортикоидами экспрессии Р-казеина в молочной железе [69].
Продукты транскрипции более половины экспрес-сируемых у человека генов подвергаются альтернативному сплайсингу (вырезанию из новосинтезированной РНК отдельных фрагментов), в результате которого могут синтезироваться белки с разными, а в ряде случаев, и противоположными биологическими свойствами [70]. Примером тканеспецифичного сплайсинга может служить образование гормона кальцитонина в С-клетках щитовидной железы и нейромедиатора, пептида, связанного с геном кальцитонина (СвЯР), — в нервных клетках [71]. Стероидные гормоны, включая прогестерон, помимо действия на интенсивность транскрипции компетентных генов могут оказывать существенное влияние на характер сплайсинга ново-синтезированной пре-мРНК. Данный эффект связан с рекрутированием рецепторами стероидов корегуляторов, взаимодействующих с белками, которые участвуют в узнавании последовательностей РНК, определяющих границы экзонов (фрагментов, остающихся в составе матричной РНК) и интронов (удаляемых фрагментов). В экспериментах с экспрессией мини генов, находящихся под контролем промоторов, содержащих гормончувствительные элементы, было показано, что влияние стероидов на характер сплайсинга зависит от типа промотора, самого гена и клетки, и оно специфично для индивидуального рецептора [72— 74]. Эта специфичность может быть объяснена следующим образом. Посредством рецептор- и тканеспецифичного коактиватора 1 гормон рекрутирует в пре-инициативный транскрипционный комплекс РНК-связывающий коактиватор 2, способный распознавать определенные мотивы нуклеотидных последовательностей, связанные со сплайсингом. Данный коактиватор может быть специфичным в отношении коактиватора 1 и тканеспецифичным. В зависимости от соотношения сродства к белкам преинициативного транскрипционного комплекса и новоеинтезируемой РНК коактиватор 2 может либо оставаться в ассоциации с промотором гена и стимулировать интенсивность транскрипции, либо перемещаться вдоль новосинтезированной РНК вслед за РНК-полимеразой и сканировать потенциальные сайты сплайсинга пре-мРНК. Соответственно, в первом случае гормон будет влиять преимущественно на скорость биосинтеза РНК, а во втором — на процессинг РНК [75]. Действие того же гормона на процессинг транскрипта того же гена в
клетках другого типа может оказаться прямо противоположным из-за рекрутирования коактиваторов Г и 2' с иной специфичностью. То же самое может иметь место в отношении двух генов в одной и той же клетке. Дополнительными факторами специфичности гормонального действия на процессинг РНК могут служить процессы ковалентной модификации (метилирования, фосфорилирования и т.д.), влияющие на активность соответствующих белков [76].
Поскольку комбинаторика корегуляторов рецепторов стероидных гормонов в значительной мере определяет генную и тканевую специфичность гормонального действия, можно предположить, что эффекты стероидных соединений и их аналогов могут быть скорректированы в необходимом направлении путем модуляции активности или экспрессии отдельных корегуляторов.
Мембранные рецепторы прогестерона
Помимо медленно (на протяжении часов) развивающихся эффектов прогестерон, как и другие стероидные гормоны, может индуцировать быстрые (в течение секунд—минут) ответы клеток. Эти ответы не блокируются ингибиторами биосинтеза белка и РНК и, следовательно, реализуются на посттрансляционном уровне. Многие из этих эффектов инициируются на поверхности клеток, поскольку могут быть воспроизведены конъюгатами прогестерона или его аналогов с белками, которые не проникают в клетку (см., например, обзоры [77—80]). В соответствии с этими данными на плазматической мембране многих типов клеток выявлены белки, которые специфически связывают прогестерон и могут служить его рецепторами. Некоторые из этих белков к настоящему времени идентифицированы.
Рецепторы, идентичные ядерным рецепторам
В случае рецепторов эстрогенов однозначно показано их заякоривание на плазматической мембране за счет присоединения пальмитата [81—82]. Что касается рецепторов прогестерона, то вопрос о возможности их связывания с мембраной остается открытым. Действительно, антитело против ядерных рецепторов прогестерона узнает эпитоп (узнаваемый антителом фрагмент поверхности антигена), локализованный на плазматической мембране [83]. Однако носителями этого эпитопа, по-видимому, являются белки, отличные от ядерных рецепторов [84]. Лишь в одном случае — индукции прогестероном созревания ооцита шпорцевой лягушки — получены доказательства участия ядерных рецепторов прогестерона в проведении сигнала не в качестве транскрипционных факторов, а в качестве пускателя протеинкиназных каскадов [85— 87]. Интересно отметить, что данное негеномное действие прогестерона воспроизводится антипрогестином 1111486. Это позволяет предполагать, что эффекторные структуры, участвующие в проведении негеномного сигнала узнают элементы конформации рецептора, отличные от таковых, узнаваемых коактиваторами и корепрессорами. Негеномное действие классического ядерного РЯ может включать взаимодействие его богатой пролином области с 8I I3 доменами ряда белков, включая тирозинкиназу с-8гс [87]. В комплекс с рецептором могут также рекрутироваться фосфатидили-нозитол-3-киназа (Р13К) и активируемая митогенами
протеинкиназа р42 (МАРК р42) [88]. Способность прогестинов активировать c-Src значительно увеличивается в присутствии рецептора эстрогенов, который, видимо, служит мостиком между PR и c-Src [89].
Белок RDA288
Один из мембранных белков, узнаваемых антителом С-262 против ядерного рецептора прогестерона, был выделен из гранулезных клеток яичников крысы (которые не экспрессируют классический ядерный рецептор прогестерона) и оказался идентичным RDA288 — белковому продукту, возможно участвующему в регуляции стабильности мРНК Экспрессия RDA288 в клетках повышала связывание прогестерона мембранами клеток и усиливала антиапоптическое (препятствующее запрограммированной гибели клеток) действие гормона. Связывание прогестерона данным белком происходит, по-видимому, с участием сайтов, взаимодействующих с гиалуроновой кислотой: гиалуроновая кислота воспроизводит эффект прогестерона и ингибирует его связывание мембранами клеток [90].
Мембранный рецептор прогестинов альфа
Из яичников морской форели клонирован интегральный (то есть, конститутивно связанный с мембраной) мембранный белок с 7 трансмембранными доменами, сопряженный с Gj белком. Данный белок с высоким сродством и избирательностью связывает прогестины и обеспечивает их стимулирующее действие на созревание ооцитов, опосредуя ингибирующий эффект на аденилатциклазу (фермент, катализирующий превращение АТФ в циклический аденозинмо-нофосфат, цАМФ) и активирующий эффект на активируемую митогенами протеинкиназу (МАРК) [91]. Гомологичные белки были клонированы из других видов животных, включая человека. Для взаимодействия этих белков с лигандом характерна быстрая кинетика, типичная для мембранных рецепторов [92].
Ассоциированные с мембранами компоненты 1 и 2 рецептора прогестерона
Из гладкомышечных клеток и печени свиньи, а затем и из других источников разных видов, включая человека, клонировано два гомологичных прогесте-ронсвязывающих белка с гомологией гемсвязывающе-му домену цитохрома Ь5. Эти белки включают один трансмембранный домен и локализуются в микросо-мальной фракции клеток. У человека компонент 1 экспрессируется преимущественно в печени и почках, а компонент 2 — в плаценте [93—95]. Связывание прогестерона данными белками ингибируется рядом лигандов рецепторов опиоидов сигма, что позволило предположить определенную общность двух типов белков [96], тем более, что рецепторы сигма также включают лишь один трансмембранный домен и локализуются в эндоплазматическом ретикулуме.
Рецепторы опиоидов сигма-1
Прогестерон может служить антагонистом рецепторов опиоидов сигма-1, ингибируя, в частности, болевую чувствительность [97]. Рецепторы сигма служат физиологическими антагонистами анальгетического действия опиоидов через мю-, дельта- и каппа-рецепторы [98]. Полагают, что механизм действия рецепторов сигма включает регуляцию компартментали-
зации липидов в клетке [99] и амплификацию внутриклеточных систем проведения внеклеточных сигналов [100]. Выявленное действие прогестерона, по-видимому, является физиологически значимым, поскольку беременность снижает стимулируемое сигма-1 возбуждающее действие аналога глутамата Ы-метил-/)-аспартата (ЫКША) [101].
Рецепторы глицина
Рецепторы глицина представляют собой пентамер-ные мембранные структуры, служащие каналами для С1. Их активация приводит к гиперполяризации клетки и торможению ее возбудимости. Прогестерон служит избирательным ингибитором рецепторов, включающих альфа(2) субъединицы [102].
Рецепторы ацетилхолина
Никотиновые рецепторы ацетилхолина представляют собой пентамерные мембранные структуры, служащие каналами для Ыа+. Открытие каналов обеспечивает деполяризацию клетки и повышение ее возбудимости. Прогестерон, его гидроксилированные производные и синтетический аналог промегестон могут служить неконкурентными ингибиторами данных рецепторов [103—104].
Рецепторы А гамма-аминомасляной кислоты
Рецепторы типа А гамма-аминомасляной кислоты (САВАд) являются пентамерными структурами, состоящими из трех типов субъединиц, формирующих канал для С1 . Эти рецепторы обеспечивают мощное тормозное синаптическое действие. Сходные рецепторы обнаружены и в невозбудимых клетках. Прогестерон, его метаболиты и особенно его За,5а/Р-тет-рагидропроизводные являются аллостерическими регуляторами рецептора САВАд, стимулирующими активность канала. Одним из объектов данного пути действия прогестинов служат сперматозоиды, где про-гестины вызывают акросомную реакцию [105—106].
Заключение
Результаты исследований механизмов проведения сигналов прогестерона и других стероидных гормонов показывают, что эти механизмы множественны, тка-неспецифичны и включают широкий спектр регуля-торных белков и низкомолекулярных посредников. Это обстоятельство наряду с конформационной пластичностью и множественностью рецепторов может послужить основой для разработки новых, высокоселективных гормональных аналогов и модуляторов гормонального действия, функционирующих на разных уровнях проведения сигнала. Вместе с тем, следует понимать, что на современном этапе удается очертить лишь самые общие контуры сложнейшего образования, каким является организм высших животных, включая человека. Несмотря на очевидные достижения в области молекулярной биологии стероидных гормонов, мы пока не можем предсказать все последствия введения в организм нового гормонального аналога. Примером непредвиденных обстоятельств такого рода может служить обнаружение высокоаффинного взаимодействия селективных аналогов прогестерона аа
торными белками отдельных тканей и сыворотки крови [107—108]. Вполне очевидно, что потребуются ог-
ромные совместные усилия химиков, молекулярных биологов и физиологов для создания «фабрики» гормонов, выпускающей продукцию, приемлемую не только для Фармкомитета, но и для организма.
Словарь терминов
Агонист (антагонист) — аналог, действующий однона-правлено (противоположно) с природным гормоном
Акросомная реакция — экзоцитоз специализированной лизосомы (акросомы) головной части сперматозоида
«Белки-клиенты» — белки, являющиеся объектами шаперонинга
Вирилизация — маскулинизация, приобретение мужских признаков
Гранулезные клетки — зернистые клетки, формирующие внутреннюю выстилку фолликулов яичников и окружающие яйцеклетку
Децидуальные клетки — морфологически и биохимически измененные стромальные клетки эндометрия матки
Лобуло-альвеолярный аппарат — система железистых полостей (альвеол) и протоков в пределах дольки молочной железы
Паракринные факторы — сигнальные соединения, действующие местно, недалеко от места их образования
Пермиссивная среда — среда, позволяющая осуществление транскрипции
Шаперонные белки — «белки-няньки»
Шаперонинг — действие «белков-нянек» на процессы функционального созревания белка, включая пространственную укладку полипептидной цепи и доставку белка к месту его назначения в клетке
Убиквитин — небольшой белок (у человека 76 аминокислотных остатков), ковалентно присоединяемый к белкам-мишеням и направляющий их на путь протео-литической деградации
Энхансеры — последовательности ДНК, усиливающие транскрипционную активность промоторов генов
Список сокращений
С/ЕВР (CCAAT/enhancer-binding protein) — белок, связывающий ССААТ/энхансер
СВР (CREB-binding protein) — белок, связывающий CREB
CREB (cAMP response element-binding protein) — белок, связывающий цАМФ-чувствительный элемент
Gj-белок (gunine nucleotide-binding protein, inhibitory) — белок, связывающий гуаниновые нуклеотиды, инги-бирующий (аденилатциклазу)
L7/SPA (switch protein for antagonists) — белок-переключатель для антагонистов
N-CoR (nuclear receptor corepressor) — корепрессор ядерных рецепторов
pCAF (рЗОО/CREB-binding protein-associated factor ) I: Ii к I op. ассоциированный с белком, связывающим рЗОО/CREB; рЗОО - белок с М = 300 кДа
RDA288 — белок не имеет названия
SMRT (silencing mediator for retinoid and thyroid-hormone receptors) — медиатор молчания рецепторов ретиноидных и тиреоидных гормонов
SRC (steroid receptor coactivator) — коактиватор рецепторов стероидов
TPR-содержащие белки (tetratricopeptide repeat) — тридцатичетырехчленный повтор
ЛИТЕРАТУРА
1. Камерницкий A.B., Левина И.С. Хим.-фармацевт, ж., 1991, № 10, с. 4-16.
2. Смирнов А. Н. Биохимия, 2002, т. 67, № 9, с. 1157-1181.
3. Baker М.Е. Mol. Cell Endocrinol., 2004, v. 215, № 1-2, p. 55-62.
4. Baker М.Е. J. Mol. Endocrinol., 2002, v. 28, № 3, p. 149-152.
5. Flototto Т., Niederacher D., Hohmann D. e. a. J. Steroid Bio-chem. Mol. Biol., 2004, v. 88, № 2, p. 131-142.
6. Petz L.N., Ziegler Y.S., Schultz J-R- e. a. Ibid., 2004, v. 88, № 2, p. 113-122.
7. Machen G., Zakar Т., Ku C. Y. e. a. J. Clin. Endocrinol. Me-tab., 2004, v. 89, № 2, p. 1010-1013.
8. Mulac-Jericevic В., Conneely O.M. Reproduction, 2004, v. 128, № 2, p. 139-146.
9. Conneely O.M., Mulac-Jericevic В., Lydon J.P. Steroids, 2003, v. 68, № 10-13, p. 771-778.
10. Vegeto E., Shahbaz. M.M., Wen D.X. e. a. Mol. Endocrinol.,
1993, v. 7, № 10, p. 1244-1255. 11 .Sartorius C.A., Melville M.Y., Hovland A. R. e. a. Ibid., 1994, v. 8, № 10, p. 1347-1360.
12. Takimoto G.S., Tung L., Abdel-Haflz H. e. a. J. Steroid Bio-chem. Mol. Biol., 2003, v. 85, № 2-5, p. 209-219.
13. Hovland A.R., Powell R.L., Takimoto G.S. e. a. J. Biol. Chem., 1998, v. 273, № 10, p. 5455-5460.
14. Tetel M.J., Jung S., Carbajo P. e. a. Mol. Endocrinol., 1997, v. 11, № 8, p. 1114-1128.
15. Takimoto G.S., Hovland A.R., Tasset D.M. e. a. J. Biol. Chem., 1996, v. 271, № 23, p. 13308-13316.
16. Giguere V. Endocr. Rev., 1999, v. 20, № 5, p. 689-725.
17. Tyagi R.K., Amazit L., Lescop P. e. a. Mol. Endocrinol., 1998, v. 12, № 11, p. 1684-1695.
18. Tanenbaum D.M., Wang Y, Williams S.P., Sigler P.B. Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 1998, v. 95, № 11, p. 5998-6003.
19. Rehberger P., Rexin M., Gehring U. Ibid., 1992, v. 89, № 17, p. 8001-8005.
20. Silverstein A.M., Galigniana M.D., KanelakLs K.C. e. a. J. Biol. Chem., 1999, v. 274, № 52, p. 36980-36986.
21. Weaver A.J., Sullivan W.P., Felts S.J. e. a. Ibid., 2000, v. 275, № 30, p. 23045-23052.
22. Hernandez M.P., Sullivan W.P., Toft D.O. Ibid., 2002, v. 277, № 41, p. 38294-38304.
23. Hernandez M.P., Chadli A., Toft D.O. Ibid., 2002, v. 277, № 14, p. 11873-11881.
24. Davies Т.Н., Ning Y.M., Sanchez E.R. Ibid., 2002, v. 277, № 7, p. 4597-4600.
25. Murphy P.J., Morishima Y, Chen H. e. a. Ibid., 2003, v. 278, № 37, p. 34764-34773.
26. Smith D.E. Mol. Endocrinol., 1993, v. 7, № 11, p. 1418-1429.
27. Le Bihan S., Marsaud V, Mercier-Bodard C. e. a. Ibid., 1998, v. 12, № 7, p. 986-1001.
28. Miyata Y. Nippon Yakurigaku Zasshi., 2003, v. 121, № 1, p. 33-42.
29. Binart N., Chambraud В., Dumas B. e. a. Biochem. Biophys. Res. Commun., 1989, v. 159, № 1, p. 140-147.
30 .Meyer P., Prodromou C., Liao С. е. a. EM BO J., 2004, v. 23, № 3, p. 511-519.
31. Obermann W.M., Sondermann H., Russo A.A. e. a. J. Cell Biol., 1998, v. 143, № 4, p. 901-910.
32. Vanaja D.K., Mitchell S.H., Toft D.O. e. a. Cell Stress Chaper-ones, 2002, v. 7, № 1, p. 55-64.
33. Prima V., Depoix C., Masselot В. e. a. J. Steroid Biochem. Mol. Biol., 2000, v. 72, № 1-2, p. 1-12.
34. Carrello A., Ingley E., Minchin R.F. e. a. J. Biol. Chem., 1999, v. 274, № 5, p. 2682-2689.
35. Lassie M., Blatch G.L., Kundra V. e. a. Ibid., 1997, v. 272, № 3, p. 1876-1884.
36. Sinars C.R., Cheung-Flynn J., Rimerman R.A. e. a. Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 2003, v. 100, № 3, p. 868-873.
37. Kester H.A., van der Leede B.M., van der Saag P.Т., van der Burg B. J. Biol. Chem., 1997, v. 272, № 26, p. 16637-16643.
38. Scammell J.G., Denny W.B., Valentine D.L., Smith D.F. Gen. Comp. Endocrinol., 2001, v. 124, № 2, p. 152-165.
39. Hubler T.R., Denny W.B., Valentine D.L. e. a. Endocrinology, 2003, v. 144, № 6, p. 2380-2387.
40. Galigniana M.D., Radanyi C., Renoir J.M. e. a J. Biol. Chem.,
2001, v. 276, № 18, p. 14884-14889.
41 .Riggs D.L., Roberts P.J., Chirillo S.C. е. a. EM BO J., 2003, v. 22, № 5, p. 1158-1167.
42. Cheung-Flynn J., Roberts P.J., Riggs D.L., Smith D.F. J. Biol. Chem., 2003, v. 278, № 19, p. 17388-17394.
43. Galigniana M.D., Harreil J.M., Murphy P.J. e. a Biochemistry,
2002, v. 41, № 46, p. 13602-13610.
44. Renoir J.M., Mercier-Bodard C., Hoffmann K. e. a. Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 1995, v. 92, № 11, p. 4977-4981.
45. Zuo /.. Urban G., Scammell J.G. e. a. Biochemistry, 1999, v. 38, № 28, p. 8849-8857.
46. Dean D.A., Urban G., Aragon I.V. e. a. BMC Cell Biol., 2001, v. 2, № 1, p. 6.
47. Shchelkunova T.A., Rubtsov P.M., Levina I.S. e. a. Steroids,
2002, v. 67, № 5, p. 323-332.
48. Tetel M.J., Giangrande P.H., Leonhardt S.A. e. a. Mol. Endocrinol., 1999, v. 13, № 6, p. 910-924.
49. Pokrovskaya E. V, Levina LS., Kamernitsky A. V. e. a. Steroids,
2003, v. 68, № 4, p. 351-359.
50. Hall J.M., McDonnell D.P., Korach KS. Mol. Endocrinol., 2002, v. 16, № 3, p. 469-486.
51. Marquez D.C., Lee J., Lin Т., Pietras R.J. Endocrine, 2001, v. 16, № 2, p. 73-81.
52. Robin-Jagerschmidt C., Wurtz J.M., Guillot B. e. a. Mol. Endocrinol., 2000, v. 14, № 7, p. 1028-1037.
53. Williams S.P., Sigler P.B. Nature, 1998, v. 393, № 6683, p. 392.
54. Bursi R., Groen M.B. Eur. J. Med. Chem., 2000, v. 35, № 9, p. 787-796.
55. HillLsch A., von Langen J., Menzenbach B. e. a. Steroids, 2003, v. 68, № 10-13, p. 869-878.
56. Madauss K.P., Deng S.J., Austin R.J. e. a. J. Med. Chem.,
2004, v. 47, № 13, p. 3381-3387.
57. Покровская E.B., Левина И.С., Куликова Л.Е., Камерницкий A.B., Смирнов А.Н. Биоорг. химия, 2004, т. 30, № 3, с. 301—307.
58. Li X., OMalley B.W. J. Biol. Chem., 2003, v. 278, № 41, p. 39261-39264.
59. Li X., Wong J., Tsai S. Y. e. a. Mol. Cell Biol., 2003, v. 23, № 11, p. 3763-3773.
60. Loven M.A., Likhite VS., Choi /., Nardulli A.M. J. Biol. Chem.,
2001, v. 276, № 48, p. 45282-45288.
61. Ко L., Cardona G.R., Henrion-Caude A., Chin W.W. Mol. Cell Biol., 2002, v. 22, № 1, p. 357-369.
62. Nordeen S.K., Ogden C.A., Taraseviciene L., Lieberman B.A. Mol. Endocrinol., 1998, v. 12, № 6, p. 891-898.
63.Zhao H.H., Herrera R.E., Coronado-Heinsohn E. e. a. J. Biol. Chem., 2001, v. 276, № 30, p. 27907-27912.
M.Jackson T.A., Richer J.K., Bain D.L. e. a. Mol. Endocrinol., 1997, v. 11, № 6, p. 693-705.
65. Liu /.. Auboeuf D., Wong J. e. a. Proc. Natl. Acad. Sei. USA,
2002, v. 99, № 12, p. 7940-7944.
66. Kraus W.L., Weis K.E., Katzenellenbogen B.S. Mol. Cell Biol., 1995, v. 15, № 4, p. 1847-1857.
67. Giangrande P.H., Kimbrel E.A., Edwards D.P., McDonnell D.P. Ibid., 2000, v. 20, № 9, p. 3102-3115.
68. Christian M., Pohnke Y., Kempf R. e. a. Mol. Endocrinol., 2002, v. 16, № 1, p. 141-154.
69. Wyszomierski S.L., Rosen J.M. Ibid., 2001, v. 15, № 2, p. 228240.
70. Lander E.S., Linton L.M., Birren B. e. a. Nature, 2001, v. 409, № 6822, p. 860-921.
71. Lou II., Gagel R.F. Alternative ribonucleic acid processing in endocrine systems. In: Endocrine Reviews, 2001, v. 22, p. 205-225.
72. Auboeuf D., Dowhan D.H., Li X. e. a. Mol. Cell Biol., 2004, v. 24, № 1, p. 442-453.
73. Auboeuf D., Dowhan D.H., Kang Y.K. e. a. Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 2004, v. 101, № 8, p. 2270-2274.
74.Auboeuf D., Honig A., Berget S.M., O'Malley B.W. Science,
2002, v. 298, № 5592, p. 416-419.
75. Nogues G., Kadener S., Cramer P. J. Biol. Chem., 2002, v. 277, № 45, p. 43110-43114.
76. Kim S., Park G.H., Paik W.K Amino Acids, 1998, v. 15, № 4, p. 291-306.
77. Bramley T. Reproduction, 2003, v. 125, № 1, p. 3-15.
78. Shah C., Modi D., Gadkar S. e. a. Indian J. Exp. Biol., 2003, v. 41, № 7, p. 773-780.
79. Rupprecht R. Psychoneuroendocrinology, 2003, v. 28, № 2, p. 139-168.
80. Sutter-Dub M.T. Steroids, 2002, v. 67, № 2, p. 77-93.
81. Li L., Haynes M.P., Bender J.R. Proc. Natl. Acad. Sei. USA.
2003, v. 100, № 8, p. 4807-4812.
82. Acconcia F., Ascenzi P., Fabozzi G. e. a. Biochem. Biophys. Res. Commun., 2004, v. 316, № 3, p. 878-883.
83. Welter B.H., Hansen E.L., Saner K.J. e. a. J. Histochem. Cyto-chem., 2003, v. 51, № 8, p. 1049-1055.
84. Peluso J.J. Steroids, 2004, v. 69, № 8-9, p. 579-583.
85. Bayaa M., Booth R.A., Sheng Y., Liu X.J. Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 2000, v. 97, № 23, p. 12607-12612.
86. Tian J., Kim S., Heilig F., Ruderman J. V. Ibid., 2000, v. 97, № 26, p. 14358-14363.
87. Boonyaratanakornkit V., Scott M.P., Ribon V. e. a. Mol. Cell., 2001, v. 8, № 2, p. 269-280.
88. Bagowski C.P., Myers J.W., Ferrell J.E. J. Biol. Chem., 2001, v. 276, № 40, p. 37708-37714.
89. Ballare C., Uhrig M., Bechtold T. e. a. Mol. Cell Biol., 2003, v. 23, № 6, p. 1994-2008.
90. Peluso J. J., Pappalardo A., Fernandez G., Wu C.A. Endocrinology, 2004, v. 145, № 6, p. 3014-3022.
91. Zhu Y, Rice C.D., Pang Y. e. a. Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 2003, v. 100, № 5, p. 2231-2236.
92. Zhu Y, Bond J., Thomas P. Ibid., 2003, v. 100, № 5, p. 22372242.
93. Meyer C., Schmid R., Scriba P.C., Wehling M. Eur. J. Biochem., 1996, v. 239, № 3, p. 726-731.
94. Falkenstein E., Meyer C., Eisen С. e. a. Biochem. Biophys. Res. Commun., 1996, v. 229, № 1, p. 86-89.
95. Gerdes D., Wehling M., Leube В., Falkenstein E. Biol. Chem.,
1998, v. 379, № 7, p. 907-911.
96. Meyer C., Schmieding К., Falkenstein E., Wehling M. Eur. J. Pharmacol., 1998, v. 347, № 2-3, p. 293-299.
97. Veda //., Inoue M., Yoshida A. e. a. J. Pharmacol. Exp. Ther., 2001, v. 298, № 2, p. 703-710.
98. Mei J., Pasternak G.W. Ibid., 2002, v. 300, № 3, p. 10701074.
99. Hayashi Т., Su T.P. Ibid., 2003, v. 306, № 2, p. 718-725. 100. Su T.P., Hayashi T. Curr. Med. Chem., 2003, v. 10, № 20,
p. 2073-2080.
101 .Bergeron R., de Montigny C., Debonnel G. Br. J. Pharmacol.,
1999, v. 127, № 8, p. 1769-1776.
102. Maksay G., Laube В., Betz H. Neuropharmacology, 2001, v. 41, № 3, p. 369-376.
103. Blanton M.P., Xie Y, Dangott L.J., Cohen J.B. Mol. Pharmacol., 1999, v. 55, № 2, p. 269-278.
104. Garbus L, Bouzat C., Barrantes F.J. Neuroreport., 2001, v. 12, № 2, p. 227-231.
105. Somanath P.R., Gandhi K.K. Anim. Reprod. Sei., 2002, v. 74, № 3-4, p. 195-205.
106. Hawkinson J.E., Kimbrough C.L., McCauley L.D. e. a. Eur. J. Pharmacol., 1994, v. 269, № 2, p. 157-163.
107. Smirnov A.N., Pokrovskaya E.V., Kogteva G.S. e. a. Steroids,
2000, v. 65, № 3, p. 163-170.
108. Смирнов A.H., Покровская E.B., Левина И. С., Куликова Л.Е., Камерницкий A.B., Шевченко В. П. Биохимия, 2001, т. 66, № 6, с. 846-852.
