CC BY
16
ПРИЛОЖЕНИЕ 1
Петрова Л. М., Капорская Т. С., Лужнова Н. Н., Кустанович М. А., Лыскова В. А., Малюшкина Е. С., Киселев И. В., Ребриков А. Н.
ОПЫТ ЛЕЧЕНИЯ ПАЦИЕНТОК С ОСТРЫМ ЛЕЙКОЗОМ, ДИАГНОСТИРОВАННЫМ ВО ВРЕМЯ БЕРЕМЕННОСТИ.
ДАННЫЕ ОТДЕЛЕНИЯ ГЕМАТОЛОГИИ ГБУЗ «ИОКБ»
Иркутская ордена «Знак Почета» областная клиническая больница
Введение. Острый лейкоз (ОЛ) у беременных редкая клиническая ситуация, требующая персонифицирующего подхода, выбора химиотерапевтического лечения, дающего возможность пролонгировать беременность и достичь ремиссии ОЛ. Выбор тактики ведения зависит от срока гестации, состояния пациентки и плода.
Цель работы. Проанализировать опыт лечения больных ОЛ, диа -гноз которым установили во время беременности.
Материалы и методы. За период 2000—2019 гг. получили лечение 4 женщины с впервые выявленным ОЛ и беременностью на сроках ге-стации от 9 до 26 недель (I триместр — 1, II триместр — 3) в возрасте от 21 до 36 лет (медиана возраста 28,5 лет); у 1 пациентки диагностирован острый промиелоцитарный лейкоз (ОПЛ) на сроке 9 нед, у 2 — острый лимфобластный лейкоз (ОЛЛ) на сроке 19 и 26 нед, у 1 — острый монобластный лейкоз (ОМЛ) на сроке 21 нед. Тактика ведения пациенток проводилась согласно алгоритмам, разработанным ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России.
Результаты и обсуждение. В одном из четырех случаев диагностики ОЛ во время беременности проводилось пребывание беременности, в связи с ранним сроком гестации, вариантом ОЛ, требующего назначения ретиноидов, обладающих известным тератогенным эффектом. Троим пациенткам с дебютом ОЛ во II триместре беременности про-
водилась ХТ и к моменту родоразрешения достигнута ремиссия ОЛ. В двух случаях родоразрешение проводилось в плановом порядке (пациентки с ОЛЛ) на фоне восстановления кроветворения (1 — через естественные родовые пути, 1 — методом кесарева сечения по акушерским показаниям). В одном случае — самостоятельные срочные роды в период глубокой миелодепрессии после курса консолидации (пациентке с ОМЛ). Срок беременности на момент родоразрешения после ХТ составил в среднем 35 (34—37) нед. Все дети, родившиеся у данных пациенток живы, без отклонений в развитии. На момент написания работы у троих пациенток сохраняется ремиссия (период наблюдение от 24 до 126 мес, медиана — 72 мес). У одной пациентки (ОЛЛ) диагностирован ранний химиорезистентный костномозговой рецидив, послуживший причиной смерти больной. Следует отметить, что протокол ХТ у данной пациентки прерывался неоднократно в связи с выраженной миелодепрессией и тяжелыми инфекционными осложнениями.
Заключение. Лечение ОЛ у беременных, требует особого индивидуального, мультидисциплинарного подхода — поиска оптимального решения для матери и ребенка, выбора химиотерапевтической, с учетом значимых побочных эффектов химиопрепаратов на фоне беременности, ее возможного влияния на плод и акушерской тактик. Цель лечения пациентки — сохранение двух жизней, матери и ребенка.
Пилунов А. М., Романюк Д. С., Шмелев А. В., Шитиков С. А., Хмелевская А. А., Вагида М. С., Кирюхин Д. О., Дианов Д. В., Ефимов Г. А.
МИНОРНЫЕ АНТИГЕНЫ ГИСТОСОВМЕСТИМОСТИ КАК МИШЕНИ ДЛЯ ИММУНОТЕРАПИИ ПОСТТРАНСПЛАНТАЦИОННЫХ РЕЦИДИВОВ ОСТРЫХ ЛЕЙКОЗОВ
ФГБУ «НМИЦ гематологи
Введение. Рецидив лейкозов развивается у трети пациентов после полностью HLA-совместимой аллогенной трансплантации гемо-поэтических стволовых клеток, что приводит к высокой смертности. Терапевтический эффект трансплантации во многом зависит от иммунного ответа лимфоцитов донора на минорные антигены гистосов-местимости (МАГ) — эндогенные полиморфные пептиды, представленные на молекулах HLA. МАГ АСС-^ и НА-1 представляются частыми аллелями HLA и кодируются генами, преимущественно экспрессируемыми в гемопоэтической ткани. Таким образом, лимфоциты, специфичные к этим МАГ, представляют интерес как способ терапии лейкозов. Ранее, нами были показаны эффекторные свойства CD8+ Т-клеток модифицированных ТКР, специфичным к АСС-^ (Пилунов и др., 2019, Мол. биол.).
Цель работы. Разработка метода клеточной терапии лейкозов на основе адоптивного переноса генетически модифицированных Т-лимфоцитов, специфичных к минорным антигенам гистосовме-стимости.
Материалы и методы. Т-клеточные рецепторы, специфичные к МАГ, были получены из антиген-специфичных экспансий лимфоцитов с аутологическими дендритными клетками здоровых доноров. Восемь НА-1-специфичных Т-клеточных рецепторов (ТКР) были отобраны для дальнейшего анализа. Был разработан лентивирусный
Иррелевантный тетрамер
Тетрамер НА-1
0,23
97,1 f|
I 78,3 sШi*
^ 15,5
Тетрамер РЕ
Рисунок 1. Окраска трансдуцированной специфичным к НА-1 культуры лимфоцитов тетрамером Н1_А-А*02:01 с иррелевантным пептидом (А) и тетрамером с пептидом НА-1 (Б).
и» Минздрава России
вектор, позволяющий быстрое клонирование любого ТКР и селективного маркера, с целью дальнейшего функционального скрининга панели ТКР. Для оценки эффекторных качеств ТКР были использованы лимфоциты, не имеющие собственного ТКР и отвечающие сигналом от флуоресцентных белков при стимуляции трансгенного ТКР (Rosskopf et. al, 2018, Oncotarget). Данные клетки были транс-дуцированы 8 различными лентивирусными векторами, несущими трансгенный ТКР, специфичный к НА-1 и корецептор CD8. Трансгенные культуры окрашивали рекомбинантным тетрамеризован-ным комплексом пептид — HLA-AS02:01, несущим флуоресцентный краситель APC или PE. Также трансдуцированные клетки инкубировали с культурой моноцитов, нагруженных синтетическим пептидом HA-1. Специфический сигнал от ТКР в распознавших антиген лимфоцитах детектировали методом проточной цитофлуориметрии по сигналу от зеленого флуоресцентного белка. Чтобы предотвратить образование гетеродимеров эндогенного и трансгенного ТКР, нами была разработана стратегия нокаута эндогенного ТКР системой CRISPR/Cas. Производили нокаут генов констаных цепей ТКР (TRAC и TRBC1/2), рибонкулеопротеиновые комплексы Cas9 доставляли в клетки путем электропорации. В константные цепи трансгенного ТКР были введены синонимичные мутации, препятствующие их разрезание белком Cas9.
| ГЕМАТОЛОГИЯ И ТРАНСФУЗИОЛОГИЯ | RUSSIAN JOURNAL OF HEMATOLOGY AND TRANSFUSIOLOGY (GEMATOLOGIYA I TRANSFUSIOLOGIYA) | 2020; ТОМ 65; №1 |
Результаты и обсуждение. Из культур репортерных лимфоцитов, трансдуцированных 8 различными ТКР, потенциально специфичными к НА-1, -3 продемонстрировали специфическое связывание с рекомбинантными комплексами пептид —HLA-AS02:01 (рис. 1) и специфический ответ на презентирующие экзогенный пептид моноциты (рис. 2). Эффективность нокаута CRISPR/Cas на клетках Лигка Е6-1 составила 60% (рис. 3).
Заключение. Лимфоциты, модифицированные ТКР, специфичными к МАГ, специфически распознают презентирующие антиген клетки и представляют интерес как метод терапии лейкозов. Работа поддержана грантом РФФИ 19-29-04156.
А Контрольная трансфекция Б Нокаут TRAC
CD3
Рисунок 3. Нокаут ТКР в лимфоцитах линии Jurkat Е6-1.
Контрольная трансфекцил с PBS (А) и рибонуклеопротеиновыми комплексами (Б)
Пирогова О. В., Бондаренко С. Н., Смирнова А. Г., Моисеев И. С., Дарская Е. И., Бабенко Е. В., Морозова Е. В., [Афанасьев Б. В.
РЕЗУЛЬТАТЫ АЛЛОГЕННОИ ТРАНСПЛАНТАЦИИ КОСТНОГО МОЗГА У ВЗРОСЛЫХ ПАЦИЕНТОВ
С ОСТРЫМ ЛИМФОБЛАСТНЫМ ЛЕЙКОЗОМ
НИИ детской онкологии, гематологии и трансплантологии им. Р.М. Горбачевой, Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова
Введение. В современной практике у значительной доли взрослых пациентов с острым лимфобластным лейкозом (ОЛЛ) выполняется аллогенная трансплантация костного мозга (алло-ТКМ). Технология алло-ТКМ совершенствуется, поэтому необходимо оценить результаты и факторы, влияющие на исходы алло-ТКМ у пациентов с ОЛЛ.
Цель работы. Оценить результаты алло-ТКМ у пациентов с ОЛЛ.
Материалы и методы. В исследование включено 344 пациента с ОЛЛ в возрасте от 18 до 61 года, получивших алло-ТКМ с 1994 по 2019 г. в клинике НИИ ДОГиТ им. Р.М. Горбачевой. Алло-ТКМ в 1-й ремиссии выполнена у 35,5%, во 2-й — у 30,8%, в 3-й и более — 11%, в рецидиве — у 22,7%. Алло-ТКМ от родственного донора — 24,7%, от неродственного донора — 60,7%, от гаплодонора — 14,8%.
Результаты и обсуждение. 5-летняя общая выживаемость (ОВ) составила 47,9%, в 1-й ремиссии — 74,4%, во 2-й — 53,8%, в 3-й и более — 34,2%, в рецидиве — 6,4%, p<0,0001. В многофакторном анализе влияние оказывали: статус заболевания (ОР=1,804, 95% ДИ 1,488-2,188, p<0,0001), алло-ТКМ, выполненные до 2010 г. (ОР=0,547, 95% ДИ 0,315-0,948, p=0,03), острая реакция «трансплантат против хозяина» 2-4 ст. (РТПХ) (ОР=2,376, 95% ДИ 1,471-3,838, p=0,0004), хроническая РТПХ (ОР=0,443, 95% ДИ 0,275-0,713, p=0,0008). 5-летняя безрецидивная выживаемость (ВБР) — 38,9%, в 1-й ремиссии — 62,8%, во 2-й — 43,2%, в 3-й и более — 23,7%, в рецидиве — 3,8%,
р<0,0001. По данным на ВБВ влияли: статус заболевания (ОР=1,799, 95% ДИ 1,514-2,138, р<0,0001) и хрРТПХ (0Р=0,458, 95% ДИ 0,3040,692, р=0,0002). 5-летняя выживаемость без рецидива и РТПХ составила 29,8%. Кумулятивная частота рецидивов (ЧР) — 32,3%, в 1-й ремиссии — 24%, во 2-й — 26,9%, в 3-й и более — 34,2%, в рецидиве — 51,3%, р<0,0001, отрицательно влияли на ЧР — статус заболевания (ОР=1,695, 95% ДИ 1,173-2,434, р=0,009) и наличие минимальной остаточной болезни до ТКМ (ОР=3,116, 95% ДИ 1,734-5,532,
р=0,0002), риск рецидива был ниже при развитии острой и хронической РТПХ (0Р=0,297, 95% ДИ 0,109-0,682, р=0,01 и 0Р=0,429, 95% ДИ 0,205-0,839, р=0,02 соответственно). 5-летняя трансплантационная летальность составила 28,8%, в 1-й ремиссии — 13,2%, во 2-й — 29,1%, в 3-й и более — 42,1%, в рецидиве — 45,8%, р<0,0001. Факторы, определяющие плохой прогноз: тип донора (ОР=1,648, 95% ДИ 1,07-2,611, р=0,03), статус заболевания (ОР=1,81, 95% ДИ 1,1571,651, р=0,0004), развитие оРТПХ (ОР=2,184, 95% ДИ 1,419-3,348, р=0,0003), фактором хорошего прогноза стало использование профилактики РТПХ с посттрансплантационным циклофосфамидом
(ПЦФ) (0Р=0,595, 95% ДИ 0,35-1,008, р=0,03).
Заключение. Выполнение алло-ТКМ у пациентов с ОЛЛ наиболее эффективно в 1-2-й ремиссии. Ухудшение результатов алло-ТГСК в продвинутых стадиях в первую очередь связано с трансплантационной летальностью и кумулятивной токсичностью терапии.
Пономаренко Е. А., Игнатова А. А., Хисматуллина Р. Д., Ларин С. С., Щербина А. Ю., Масчан А. А., Новичкова Г. А., Пантелеев М. А.
СРАВНЕНИЕ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ ТРОМБОЦИТОВ ВЗРОСЛЫХ И ДЕТЕЙ РАЗНЫХ ВОЗРАСТНЫХ ГРУПП
ФГБУ «НМИЦ ДГОИ им. Дмитрия Рогачева» Минздрава России
Введение. Известно, что новорожденные имеют более низкую функциональную активность тромбоцитов, чем взрослые. Однако данные о функции тромбоцитов детей более старшего возраста немногочисленны, а их результаты противоречивы.
Цель работы. Оценить функцию тромбоцитов детей в возрасте от нескольких месяцев до 18 лет и сравнить ее с функцией тромбоцитов взрослых.
Материалы и методы. Венозную кровь собирали в пластиковые вакуумные пробирки с 3,8% цитрата натрия 20 мкл крови разводили 1:20 в буфере Тирода. Тромбоциты активировали смесью коллаген-подобного пептида (1,25 мкг/мл), пептида, активирующего рецептор тромбина (12,5 мкМ) и 2,5 мМ CaCl2. Определяли прямое светорассеяние (FSC), боковое светорассеяние (SSC), связывание CD42b-PE, CD61-PE, CD62P-Alexa Fluor 647, PAC-1-FITC, annexm V-Alexa Fluor 647 и уровень выброса мепакрина.
Результаты и обсуждение. Анализировали функциональную активность тромбоцитов здоровых детей в возрасте до 5 лет (n=9), от 6 до 10 лет (n=17), от 11 до 18 лет (n=25) и здоровых взрослых (n=34). В покое не было разницы в уровне экспрессии PAC-1 между детьми
и взрослыми. Активационный ответ у детей в возрасте от 11 до 18 лет был выше, чем у взрослых. В покое уровень экспрессии CD42b у детей в возрасте от 11 до 18 лет был выше, чем у взрослых. Однако при стимуляции разница между детьми и взрослыми отсутствовала. Про-коагулянтная активность тромбоцитов детей в возрасте от 6 до 10 лет была выше, чем у взрослых в покое и после активации. Тромбоциты детей в возрасте до 5 лет содержали меньше плотных гранул, а также имели более низкие индекс дегрануляции и степень секреции плотных гранул, чем тромбоциты взрослых. В покое уровень экспрессии CD61 у детей в возрасте до 5 лет был ниже, а у детей старшей возрастной группы — выше, чем у взрослых. Активационный ответ у детей в возрасте до 5 лет также был ниже, чем у взрослых. В покое не было разницы по уровню экспрессии CD62P. Ответ на стимуляцию у взрос -лых был выше, чем у детей в возрасте до 5 лет и от 11 до 18 лет. FSC и SSC у детей в возрасте до 5 лет были ниже, чем у взрослых, в покое и после активации.
Заключение. Тромбоциты детей имели более низкую функциональную активность, чем тромбоциты взрослых. Наибольшие отличия от взрослых наблюдали у детей в возрасте до 5 лет.
