CC BY
49
УДК 619:616.995.122
МИКРОСТРУКТУРА ТОНКОЙ КИШКИ ОВЕЦ ПРИ ПАРАМФИСТОМОЗЕ ПОСЛЕ ВОЗДЕЙСТВИЯ АНТИТРЕМА
О.И. БИБИК кандидат биологических наук Л.В. НАЧЕВА доктор биологических наук
Кемеровская государственная медицинская академия,
650029, г. Кемерово, ул. Ворошилова, д. 22а, e-mail: ok.bibik@yandex.ru И.А. АРХИПОВ доктор ветеринарных наук Всероссийский научно-исследовательский институт гельминтологии им. К.И. Скрябина, 117218, г. Москва, ул. Б. Черемушкинская, д. 28, e-mail: vigis@ncport.ru
При дегельминтизации овец антитремом в дозе 200 мг/кг при парамфистомозе установлены пролифе-ративно-гиперпластические явления в клетках слизистой оболочки тонкой кишки, отек тканей, гиперемия. Гистохимически выявлена углеводная и белковая дистрофия эндостации паразита.
Ключевые слова: антитрем, парамфистомоз, тонкая кишка, овцы, пролиферация, дистрофия, гиперплазия, гистохимия, патоморфология.
Парамфистомоз широко распространен во многих странах мира, в том числе в России и наносит значительный экономический ущерб животноводству [3-6].
Основной метод борьбы с парамфистомозом - дегельминтизация химическими препаратами, всестороннее изучение которых имеет большое значение для теоретической и практической паразитологии [1, 2].
Исходя из этого, мы поставили цель изучить микроморфофункциональ-ные особенности тонкой кишки овец при парамфистомозе после воздействия антитрема.
Материалы и методы Материал для исследований получали при вскрытии спонтанно инвази-рованных Paramphistomum cervi овец через 7 сут после дачи антитрема в дозе 200 мг/кг по ДВ однократно перорально, фиксировали в 70%-ном спирте и обрабатывали по общепринятым гистологическим методикам. Парафиновые срезы толщиной 5-6 мкм окрашивали гематоксилином и эозином, по Маллори. Гистохимически препараты окрашивали толуидиновым синим (ТС), аль-циановым синим (АС), бромфеноловым синим по Бонхагу (БФС) и Шик-реакцией по Мак-Манусу с соответствующими контролями [7].
Результаты и обсуждение После воздействия антитрема в кишечнике животных отмечали деструкцию ворсинок и крипт. Происходило нарушение структуры подслизистой, мышечной, серозной оболочек и кровеносных сосудов. Наблюдали дегенера-
цию эпителия слизистой оболочки, которая выражалась отечностью, разрушением формы и разрыхлением компонентов ее слоев (рис. 1 А). Выявляли очаги клеточной пролиферации в эпителии слизистой оболочки; усиливалась вакуолизация цитоплазмы эпителиальных клеток.
Эпителий ворсинок и крипт выглядел высоким, имел интенсивно окрашенные базофильные ядра и оксифильную цитоплазму с крупными и многочисленными секреторными включениями в апикальных частях клеток. Бокаловидные клетки были увеличены в размерах, их базальная часть представлена в виде удлиненных мешочков, погруженных в строму ворсинки. После воздействия антитрема усиливалась активность слизеобразующих экзокрино-цитов. В некоторых участках кишечника обнаруживали десквамацию его эпителия. Базальная мембрана эпителия имела извилистые волокна набухшего коллоидного вида. В связи с этим, граница слизистого и подслизистого слоя выглядела неровной - зигзагообразной. Под мембраной выявляли сильную вакуолизацию ткани. Происходило разволокнение соединительной ткани стромы ворсинок. Выражена клеточная инфильтрация слизистой оболочки.
А Б
Рис. 1. Фрагменты тонкого кишечника овцы:
В - кишечная ворсинка; Э - эпителий; СП - собственная пластинка слизистой оболочки; П - паразит (увел. ок. 10 х об. 8 (А), 20 (Б). Окраска гематоксилином и эозином (А), бромфеноловым синим (Б)
Преобладали пролиферативно-гиперпластические явления в виде увеличения и пролиферации клеток эпителия ворсинок и крипт слизистой оболочки. В эпителии ряда либеркюновых желез имела место многорядность ядер, которые были крупнее и базофильнее, что служит доказательством наличия дисплазии в кишечном эпителии.
В ворсинах наблюдали скопление эозинофилов, оболочка клеток которых была сохранена, ядра некротизированы (пикнотичны), зернистые включения клеток были лизированы под влиянием антитрема и цитоплазма клеток окрашивалась тотально в оранжевый цвет по Маллори. Этот феномен ранее никто не описывал. Поэтому можно считать, что гибель эозинофилов представляет интерес дальнейших исследований. В данном случае следует констатировать, что влияние антигельминтика блокирует эозинофильный эффект воздействия на окружающие ткани хозяина, то есть вызывает их гибель.
Установлено резкое увеличение популяции клеток крипт, а между криптами наличие диффузной инфильтрации лейкоцитами слизистой оболочки кишечника. В строме подслизистой основы отмечали расширение и полнокровие сосудов, границы их были не четкие, размыты за счет лизиса тканей, выявляли скопление эритроцитов. В клетках соединительной ткани подслизистой основы наблюдали некротизацию ядер и их кариорексис. Некоторые
клетки находились на стадии некробиоза. Соединительнотканные и мышечные волокна подслизистой основы были разволокнены, местами разорваны. Их деструкцию можно объяснить пролонгированным отеком межтканевого пространства. Это так называемая викарная гипертрофия (один из вариантов дистрофии).
Гистохимический анализ тканей слизистой оболочки кишечника показал, что после введения антитрема в пищеварительной системе овец происходило нарушение углеводного и белкового обменов, о чем свидетельствовало изменение ее тканевых структур и нарушение их тинкториальных свойств при окрашивании БФС, ТС и АС. При Шик-реакции интенсивность окраски эпителиального слоя слизистой оболочки уменьшалась и резко видоизменялась по сравнению с нормой. Эпителий либеркюновых желез при гистохимическом исследовании обладал большей восприимчивостью к реактиву Шиффа в сравнении с эпителием, покрывающим ворсины. Шик-реакция выявила интенсивное окрашивание апикальной части эпителия крипт, что свидетельствует о скоплении мукоидного секрета в связи с морфофункциональными нарушениями в данных участках слизистой оболочки.
Наличие суммарных белков выявить не удалось при окрашивании БФС, о чем свидетельствовало отрицательное окрашивание. В строме ворсинок белковый компонент полностью отсутствовал, в то время как в эпителиальном слое слизистой оболочки белки представлены веществами кислой природы. На изменение химической структуры белков указывало извращенное окрашивание эпителиальной ткани в зеленый цвет БФС (рис. 1 Б). Возможно, после дегельминтизации происходит накопление и прекращение выброса ферментов, реализующих кислотный гидролиз.
При окрашивании АС в апикальных отделах клеток выявляли альциано-фильные вакуольные включения. В основном веществе стромы собственной пластинки слизистой оболочки происходило накопление гексозаминоглика-нов (ГАГ), о чем свидетельствовало повышение интенсивности сине-зеленого цвета при окрашивании АС. ГАГ, обладая гидрофильными свойствами, при накоплении обусловливали повышение тканевой и сосудистой проницаемости ткани хозяина и паразита. Развивалась гидратация, которая приводила к выраженному мукоидному набуханию основного межуточного вещества собственной пластинки слизистой оболочки. Местами мукоидное набухание переходило в фибриноидное. Деструкция основного вещества соединительной ткани и волокон после воздействия антитрема приводила к образованию фибриноида - сложного вещества из белков и полисахаридов распавшихся коллагеновых волокон и основного вещества. При окрашивании ТС эпителий кишечника давал толуидинофилию с метахроматическим эффектом. Мета-хромазия свидетельствует о наличии в этом месте гиалуроновой кислоты, что обеспечивает явление клеточной проницаемости. Метахромазия соединительной ткани при этом была не выражена, что указывает на деполимеризацию гексозаминогликанов основного вещества; она выражалась на гистологическом препарате выпадением нитей фибрина в виде фрагментов. Результаты гистохимических реакций указывают на увеличение содержания ГАГ, исчезновение гликогена в кишечном эпителии и функциональные механизмы патоморфологии после лечения антитремом.
После лечения антитремом метахроматический эффект в зоне взаимодействия паразита и хозяина не наблюдали. Это связано с тем, что в хромо-тропных структурах происходило замещение сольватной оболочки и соединение антигельминтного препарата с анионными группами, что блокирует взаимодействие субстрата с молекулами красителя. Метахроматический эффект проявлялся слабо или наблюдали атипичное окрашивание ткани хозяина без метахромазии. В углевод-белковом полимере межтканевого пространства происходило увеличение кислотных групп, имеющих сродство к основному красителю. На препаратах отмечали застудневание содержимого интерстициальных пространств, разволокнение и фрагментацию волокнистой части со-
единительной ткани, проявляющих положительное окрашивание АС на гек-созаминогликаны. Желатинирование белково-полисахаридных структур понижает скорость движения веществ, поэтому на препаратах наблюдали набухание межуточного вещества, что приводило к незначительному обезвоживанию тканевых волокон, которые сжимались, теряли свою форму.
Таким образом, микроморфологические, гистохимические и патоморфологические исследования слизистой оболочки тонкого кишечника овец подтверждают то, что антитрем вызывает отек и пролиферативно-гиперпласти-ческие проявления в тканях органа, дистрофические изменения в эндостации хозяина при парамфистомозе овец, нарушая углеводный и белковый обмены.
Литература
1. Архипов И.А. Этапы создания антигельминтиков и перспективы развития экспериментальной терапии гельминтозов животных в России // Рос. па-разитол. журнал. - М., 2007. - № 1. - С. 67-73.
2. Гузоев А.Х., Беккиев С.А. Эффективность новых лекарственных форм авертекса, ивермакса и аверсекта при нематодозах овец // Тр. Всерос. ин-та гельминтол. - М., 2007. - Т. 45. - С. 83-85.
3. Кармалиев Р.С. Гельминтозы крупного рогатого скота Западного Казахстана и меры борьбы с ними (эпизоотология, терапия, резистентность к антигельминтикам): Автореф. дис. ... д-ра вет. наук. - М., 2011. - 51 с.
4. Кошеваров Н.И. Эпизоотология парамфистомоза крупного рогатого скота в Центральной части Нечерноземной зоны России и меры борьбы с ним: Автореф дис. ... канд. вет. наук. - М., 1997. - 22 с.
5. Кошеваров Н.И. Эколого-эпизоотологические особенности трематодо-зов жвачных в Нечерноземье РФ и влияние антигельминтиков в системе «паразит-хозяин»: Автореф дис. ... д-ра вет. наук. - М., 2012. - 49 с.
6. Кряжев А.Л., Бирюков С.А., Лемехов П.А. Об эколого-эпизоотической ситуации распространения фасциолеза и парамфистомоза крупного рогатого скота в Вологодской области // Матер. докл. науч. конф. Всерос. о-ва гельминтол. РАН «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями». - М., 2010. - Вып. 11. - С. 124-131.
7. Пирс Э. Гистохимия. - М., 1962. - 962 с.
Microstructure of the small intestine of sheep at paramphistomosis after antitrem treatment
O.I. Bibik, L.V. Nacheva, I.A. Arkhipov
At paramphistomosis of sheep after antitrem treatment in a dose of 200 mg/kg the proliferativno-hyperplastic phenomen of cages a mucous membrane of a gut of sheep, a hypostasis of tissues, hemorrhage are established. The carbohydrate and albuminous dystrophies endostatii of the parasite is revealed.
Keywords: antitrem, paramphistomosis, small intestine, proliferativno, dystrophies, hyperplastic, histochemical, pathomorphology.
