CC BY
34
МИКРОБНЫЙ ФАКТОР ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ПРЕДРАСПОЛОЖЕННОСТЬ И НОВАЯ КЛАССИФИКАЦИЯ ЗАБОЛЕВАНИЙ ПЕРИОДОНТА
Юдина Наталья Александровна, доктор медицинских наук, профессор, заведующая кафедрой общей стоматологии Белорусской медицинской академии последипломного образования, Минск Яковлева-Малых Маргарита Олеговна, ассистент кафедры общей стоматологии Белорусской медицинской академии последипломного образования, Минск
Костюк Светлана Андреевна, доктор медицинских наук, профессор кафедры эпидемиологии и микробиологии Белорусской медицинской академии последипломного образования, Минск
Руденкова Татьяна Владимировна, кандидат биологических наук, ведущий научный сотрудник научно-исследовательской лаборатории Белорусской медицинской академии последипломного образования, Минск
Natalia Yudina, MD, Professor, Head of the Department of General Dentistry of the Belarusian Medical Academy of Post-Graduate Education, Minsk Margarita Iakovleva-Malykh, Assistant of the Department of General Dentistry, Belarusian Medical Academy of Post-Graduate Education, Minsk Svetlana Kostiuk, MD, Professor of the Department of Epidemiology and Microbiology of the Belarusian Medical Academy of Post-Graduate Education, Minsk Tatyana Rudenkova, PhD, Leading Researcher of the Research Laboratory of the Belarusian Medical Academy of Post-Graduate Education, Minsk
Microbial factor, genetic predisposition and a new classification of periodontal diseases
Цель. Обследовали 325 пациентов с заболеваниями периодонта, 85 из них выполнены микробиологические и генетические исследования. В зависимости от нозологической формы пациентов относили к 4-м группам заболеваний периодонта в соответствии с новой классификацией (EFPAAP2017), раздел«периодонтит».
Материалы и методы. Количественный метод определения периодонтопатогенов позволил выявить большую концентрацию P. gingivalis - 3,4x 104 ГЭ/мл, по сравнению с T. forsythensis - 0,9x 104 ГЭ/мл и T Denticola - 0,6x 104 ГЭ/мл. Представители красного комплекса (P. gingivalis, T. forsythensis, Т. denticola) статистически значимо в больших количествах выявлялись у пациентов с тяжелыми формами заболеваний периодонта (III-IV стадии).
Заключение. С использованием метода секвенирования изучены нуклеотидные последовательности генетических детерминант, контролирующих синтез цитокинов (1-1$), коллагена (COL2A1), металлопротеиназ (MMP-8), в эпителиальных клетках полости рта пациентов. Для гена ИЛ-1$ выявлена замена А521С, C3954T; для гена COL2A1 - замены C245A, G2907A и C271A; для гена MMP- 8 -замена G137T и G1101T
Ключевые слова: периодонтит, микробные биопленки, генетические маркеры, цитокины, коллаген, металлопротеиназы.
Современная стоматология. — 2021. — №1. — С. 43—50.
Objective. The objects of the study were 325 patients with periodontal diseases, 85 of them were performed microbiological and genetic studies. The following nosological forms patients were also attributed to 4 groups of periodontal diseases in accordance wtth the new classification (EFP AAP2017), section«periodontitis».
Materials and methods. A quantitative method for the determination of periodontal pathogens made it possible to identify a high concentration of P. gingivalis - 3,4x 104 GE/ml, compared to T. forsythensis - 0,9x104 GE/ml and T. denticola - 0,6x О GE/ml. Representatives of the red complex (P. gingivalis, T. forsythensis, T. denticola) are statistically significant in large amounts were detected in patients wtth severe forms of periodontal disease (stages III-IV).
Conclusion. Using the sequencing method, the nucleotide sequences of genetic determinants that control the synthesis of cytokines (1-1$), collagen (COL2A1), metailoproteinases (MMP-8) in the epithelial cells of the oral cavity of patients were studied. For the IL 1p gene, the substitution A521C, C3954T was identified; for the COL2A1 gene - substitutions C245A, G2907A and C271A; for gene MMP-8 - replacement of G137T and G1101T.
Keywords: periodontitis, microbial biofilms, genetic markers, cytokines, collagen, metailoproteinases. Sovremennaya stomatologiya. — 2021. — N1. — P. 43—50.
Актуальным вопросом современной периодонтологии является поиск достоверных маркеров для ранней диагностики и прогнозирования течения заболеваний периодонта. Хронический периодонтит - это мультифактори-альная воспалительная патология тканей периодонта, которая развивается при активации периодонтопатогенов и/или нарушении локальной иммунологической реактивности и сопровождается комплексом патологических изменений. Распространенность заболеваний периодонта среди взрослого населения Республики Беларусь, по данным эпидемиологического обследования 2017 года, в целом превышает уровень более 90% [1, 4].
Среди главных факторов развития хронического периодонтита выделяют микробный, однако выраженность воспалительной реакции в значительной мере определяется возможностями макроорганизма противостоять воздействию на него патогенной микрофлоры. В настоящее время из периодонтального кармана изолировано около 500 видов бактерий, но только 12 из них связаны с этиологией заболеваний периодонта. Эти возбудители (генотипы бактерий) получили название маркерных микроорганизмов. Обнаружение и анализ их на диагностическом приеме являются одним из наиболее сложных инструментов в оценке не только клинического состояния заболеваний периодонта, но и их прогноза. В современной стоматологии есть разные мнения по выбору методов диагностики болезней периодонта, но большинство ученых сходятся на необходимости проведения микробиологических исследований [1].
Не менее актуальным является определение генетического статуса человека, который ассоциирован с тяжелым течением воспалительного процесса. Данные по изучению генетических маркеров предрасположенности весьма противоречивы. Разработка таких критериев позволит осуществлять раннюю диагностику и назначать обоснованное лечение пациентам с хроническим периодонтитом. Наиболее перспективным направлением в поиске маркеров предрасположенности
и прогноза является идентификация генетических факторов, ассоциированных с риском развития, вариантом течения и исходом периодонтита [2, 3].
Гены, кодирующие цитокины (интер-лейкины, факторы роста, интерфероны, хемокины и др.), стали первыми генами-кандидатами, изменения в которых попытались связать с патогенезом воспалительных заболеваний, в том числе и воспалительных заболеваний периодонта, так как продукты этих генов - цитокины -являются ключевым звеном иммунного ответа при любых воспалительных реакциях.
ИЛ-1 р - провоспалительный цито-кин, которому принадлежит ведущая роль в процессах острого и хронического воспаления как местного, так и системного характера. Секретируется преимущественно макрофагами, а также Т-лимфоцитами, фибробластами и клетками эпителия [6].
Повышенные уровни ИЛ-1 р в десневой жидкости и слюне пациентов с хроническим периодонтитом напрямую взаимосвязаны с тяжестью поражений, а также клиническими симптомами заболевания [7]. По мнению ряда авторов, наличие корреляции между концентрацией ИЛ-1 р и степенью тяжести воспалительных и деструктивных процессов в периодонте
делает данный цитокин ценным диагностическим маркером патологии [8].
Еще одним направлением поиска генетических маркеров предрасположенности к заболеваниям периодонта стало изучение генов медиаторов воспаления, которые оказывают непосредственное влияние на течение воспалительного процесса. В последнее время было установлено, что повышенный уровень ММП-8, особенно в активной форме (аММП-8), в жидкостях полости рта связан с воспалением при заболеваниях периодонта и периимплантитах, особенно в клинически активных фазах. Периодонтальная дегенерация костной ткани вызвана интерстициальной коллагеназой ММП-8, а не бактериальными ферментами, ММП-8 высвобождается из нейтрофилов селективной дегрануляцией, запускаемой мощными периодонтопатогенными бактериями и их факторами вирулентности вместе с провоспалительными медиаторами хозяина [9-13].
Тканевые ингибиторы матриксных ме-таллопротеиназ регулируют деятельность таких компонентов межклеточного матрикса, как коллаген, эластин, про-теогликаны, фибронектин и др. Таким образом, все ключевые физиологические и патофизиологические процессы, проис-
Таблица 1 Частота встречаемости отдельных родов микроорганизмов одновременно у пациентов по данным молекулярно-генетического исследования (ICD-DA, WHO, 1995), P±m
Вид микроорганизма Частота встречаемости Статистическая значимость различий
Хронический простой маргинальный гингивит (1), n=15 Хронический простой периодонтит (2), n=25 Хронический сложный периодонтит (3), n=45
A. actinomy-cetemcomitans - 10,0±9,5 20,5±6,1 -
Fnucleatum 60,0±12,6 90,0±9,5 93,2±3,8 Pi-3<0,05*
P. gingivalis 6,67±6,44 20,0±12,6 40,9±7,4 Pi-3<0,05*
P. intermedia - - 11,4±4,8 -
T. denticola - 30,0±14,5 56,8±7,5 -
T. forsythensis 20,0±10,3 90,0±9,5 68,2±7,0 Pi-2<0,05* Pi-3<0,05*
Примечание: * - здесь и в таблице 2-5 достоверность различий статистических показателей.
Таблица 2 Частота встречаемости отдельных родов микроорганизмов одновременно у пациентов по данным молекулярно-генетического исследования ^Р АЛИ? 2017), Р±т
Вид микроорганизма Частота встречаемости Статистическая значимость различий
Хронический гингивит (1), n=15 Начальный периодонтит (2), n=15 Умеренный периодонтит (3), n=15 Риск потери одного зуба (4), n=24 Риск потери всех зубов (5), n=16
A. actinomy-cetemcomitans - - 13,3±8,8 17,4±7,9 25,0±10,9 -
Fnucleatum 60,0±12,6 86,7±8,8 86,7±8,8 91,3±5,9 100,0 PI-4<0,05* PI-5<0,05*
P. gingivalis 6,67±6,44 6,67±6,44 13,3±8,8 34,8±9,9 62,5±12,1 PI-4<0,05* PI-5<0,05* PM<0,05* РЗ-Б<0,05*
P. intermedia - 6,67±6,44 - 13,0±7,0 12,5±8,3 -
T denticola - 6,67±6,44 46,7±12,9 39,1±10,2 75,0±10,8 Р2-З<0,05* PM<0,05* P2-5<0,05* P«<0,05*
T forsythensis 20,0±10,3 33,3±12,2 73,3±11,4 69,6±9,6 75,0±10,8 PI-3<0,05* PI-4<0,05* PI-5<0,05* Р2-З<0,05* PM<0,05* P2-5<0,05*
ходящие в организме, такие как развитие, морфогенез, воспаление и регенерация, протекают под контролем протеинов из данного семейства [14, 15].
Коллагены составляют основу соединительной ткани и обеспечивают ее прочность и эластичность. Последние работы указывают на возможную взаимосвязь по-
лиморфизма генов коллагена с развитием болезней соединительной ткани, таких как остеопороз, остеоартрит и др. [13].
На современном этапе представляет интерес изучение микробного и генетического факторов в привязке к новой классификации заболеваний периодонта (классификация заболеваний и состояний
периодонта и периимплантных тканей ^1?М1?2017)) с обсуждением возможностей ее клинического использования [5].
Цель исследования - определить микробный пейзаж содержимого пе-риодонтального кармана и варианты генетических детерминант - генов, контролирующих синтез цитокинов, колла-
Таблица 3 Концентрация отдельных родов микроорганизмов в содержимом периодонтальных карманов по данным молекулярно-генетического исследования (ICD-DA, WHO, 1995), Me (Q25-Q75)
Вид микроорганизма Концентрация, x104 ГЭ/мл Статистическая значимость различий
Хронический простой маргинальный гингивит (1), n=15 Хронический простой периодонтит (2), n=25 Хронический сложный периодонтит (3), n=45
A. actinomy-cetemcomitans - 1,5 10,2 (1,0-45,1) Р2-З>0,05
Fnucleatum 2,5 (1,3-25,4) 66,1 (22,3-89,8) 54,2 (8,5-103,5) Р1-2<0,05* Р1-З<0,05* Р 2-З>0,05
P. gingivalis 3,4 0,2 (0,0-1,1) 3,7 (0,5-26,4) Р1-2<0,05* Р1-З<0,05* Р2-З>0,05
P. intermedia - 0,1 0,5 (0,1-1,1) Р2-З>0,05
T. denticola 0,6 (0,5-0,7) 7,2 (6,0-12,7) 12,0 (1,4-29,4) Р1-2>0,05 Р1-З<0,05* Р2-З<0,05*
T. forsythensis 0,9 (0,3-2,0) 11,7 (3,0-18,9) 11,1 (1,7-19,5) Р1-2<0,05* Р1-З<0,05* Р2-З>0,05
Таблица 4 Концентрация отдельных родов микроорганизмов в содержимом периодонтальных карманов по данным молекулярно-генетического исследования (ЕЁ? ААИ? 2017), Ме Ю25^75)
Вид
микроорганизма
Концентрация, х104 ГЭ/мл
Хронический гингивит (1), n=15
Начальный периодонтит (2), n=15
Умеренный периодонтит (3), n=15
Риск потери одного зуба (4), n=24
Риск потери всех зубов (5), n=16
Статистическая значимость различий
A. actinomy-cetemcomitans
26,0 (13,7-38,3)
31,8 (14,4-53,2)
5,6 (0,4-12,1)
Р4-5<0,05*
Fnucleatum
2,5 (1,3-25,4)
7,0 (1,2-51)
43,1 (17,2-76,0)
57,7 (13,0-242,6)
67,7 (6,6-94,3)
Р1-3<0,05* Р1-4<0,05* Р1-5<0,05* Р2-3<0,05* Р2-4<0,05* Р2-5<0,05*
P. gingivaiis
3,4
4,5 (2,3-6,8)
0,1 (0,0-0,9)
7,3 (3,5-223,3)
9,0 (1,1-128,0)
Р1-2<0,05* Р1-3<0,05* Р1-4<0,05* Р1-5<0,05* Р2-4<0,05* Р2-5<0,05* РЭ-4<0,05* Рэ-5<0,05* Р4-5<0,05*
P. intermedia
2,5
0,2 (0,1-0,5)
3,7 (2,4-4,7)
0,2 (0,0-0,8)
Р2-5<0,05* (>0,01)
T denticola
0,6 (0,5-0,7)
0,3 (0,2-34,2)
4,8 (1,5-12,7)
13,8 (11,8-23,2)
18,9 (6,5-39,1)
Р1-2<0,05* Р1-3<0,05* Р1-4<0,05* Р1-5<0,05* Р2-3<0,05* Р2-4<0,05* Р2-5<0,05* РЭ-5<0,05* Р4-5<0,05*
T forsythensis
0,9 (0,3-2,0)
0,6 (0,4-3,1)
4,3 (2,0-18,1)
14,7 (5,1-56,3)
15,7 (2,0-19,5)
Р1-3<0,05* Р1-4<0,05* Р1-5<0,05* Р2-3<0,05* Р2-4<0,05* Р2-5<0,05* РЭ-4<0,05* РЭ-4<0,05* Р4-5<0,05*
гена, металлопротеиназ в эпителиальных клетках полости рта, сравнить данные при различных стадиях заболевания в соответствии с новой классификацией заболеваний периодонта.
Материалы и методы
Исследования проводились на базе кафедры общей стоматологии Белорусской медицинской академии последипломного образования (БелМАПО), научно-исследовательской лаборатории (НИЛ) БелМАПО (группа ПЦР-диагностики, отдел метаболической диагностики) в рамках темы НИР «Разработать критерии диф-
ференциальной диагностики и прогноза течения воспалительно-деструктивных заболеваний пародонта», утвержденной Министерством здравоохранения Республики Беларусь, № гос. регистрации: 20190266.
Объектами исследования явились 325 пациентов с заболеваниями периодонта, 85 из них выполнены микробиологические и генетические исследования. Рандомизация по группам осуществлялась в соответствии с классификацией стоматологических болезней МКБ-С-3 на основе МКБ-10 (ВОЗ, 1995). Также
пациентов разделили на 4 группы заболеваний периодонта в соответствии с новой классификацией (EFP ДАН? 2017), раздел «периодонтит».
Выделение ДНК проводили с использованием набора реагентов для выделения ДНК из биологического материала «ДНК-СОРБЕНТ» (НПФ «Литех», РФ), согласно инструкции производителя. Выявление и количественное определение концентраций ДНК периодонтопатогенных микроорганизмов A. actinomycetemcomitans, P. gingivalis, T forsythensis, Fnucleatum, P. intermedia, T. denticola проводили ме-
Таблица 5 Частота встречаемости нуклеотидных замен в последовательностях 11=1 в, СОЬ2А1, ММР-8
1ен Частота встречаемости Статистическая значимость различий
Хронический гингивит (1) п=15 Начальный периодонтит (2) п=15 Умеренный периодонтит (3) п=15 Риск потери одного зуба (4) п=25 Риск потери всех зубов (5) п=15
ИЛ-1 р Замены: А521С, С3954Т 20,0±10,3 53,3±12,9 13,3±8,8 47,8±10,4 45,5±15,0 Р2-3<0,05* РЭ-4<0,05*
COL2A1 Замены: С245А, G2907A и С271А 13,3±8,8 13,3±8,8 13,3±8,8 47,8±10,4 45,5±15,0 Р1-4<0,05* Р2-4<0,05* Ря-4<0,05*
ММР-8 Замены: G137T и G1101T 20,0±10,3 40,0±12,7 40,0±12,7 43,5±10,3 45,5±15,0 Р2-3<0,05* Р3-4<0,05*
Т1МР-2 Замена: G418C 13,3±8,8 6,67±6,44 33,3±12,2 17,4±7,9 18,2±11,6 Р2-3<0,05* Р3-4<0,05*
тодом ПЦР в режиме реального времени с использованием тест-системы для количественного анализа «Дентоскрин» (ООО НПФ «Литех», РФ) в соответствии с инструкцией производителя.
Для определения генетических маркеров в качестве биологического материала у пациентов забирали соскобы эпителиальных клеток полости рта. Для получения соскобного материала использовали стерильные бумажные штифты №40, полученный материал помещали в пробирку типа эппендорф объемом 1,5 мл, содержащую 200 мкл транспортной среды («ВекторБест», РФ). Пробирки замораживали и оставляли для хранения при температуре -18 °С.
Статистическая обработка полученных результатов проводилась при помощи компьютерной программы STATISTICA 10. При этом вид распределения переменных определяли с использованием критерия Колмогорова - Смирнова. Так как распределение значений переменных было отличным от нормального, для их описания применяли медиану и квартили (Ме (025/75)). Сравнение количественных показателей в исследуемых группах осуществляли с помощью критерия Манна - Уитни. При уровне значимости р<0,05 различия считались статистически достоверными.
Результаты и обсуждение
Во всех образцах пациентов с заболеваниями периодонта был идентифицирован хотя бы один микроорганизм «красного» комплекса: Р. gingivalis, Т forsythensis и Т <СепИсо1а, исключение составили пациенты, страдающие
хроническим простым маргинальным гингивитом.
Бактерии Р. дпдт^ и Т forsythensis были выявлены у пациентов с хроническим простым периодонтитом (20,0±12,6; 90,0±9,5) и с хроническим сложным периодонтитом (40,9±7,4; 68,2±7,0). В ходе исследований Т. сСеШЫа определена у пациентов с хроническим простым периодонтитом (п=25; 30,0±14,5) и с хроническим сложным периодонтитом (п=45; 56,8±7,5). Бактерии Р. дпдма^ и Т forsythensis были выявлены у пациентов с начальным периодонтитом (6,67±6,44; 6,67±6,44), с умеренным периодонтитом (13,3±8,8; 73,3±11,4), с риском потери одного зуба (34,8±9,9; 69,6±9,6), с риском потери всех зубов (75,0±10,8). ДНК А. actmmycetemcom¡tans не была идентифицирована у пациентов с гингивитом и начальными формами патологии и определялась у лиц с умеренными и тяжелыми формами (табл. 1-4).
Статистически значимые более высокие показатели по количественному значению ЕписШит наблюдались в группе с хроническим простым периодонтитом -66,1 х 104; между группами с хроническим простым маргинальным гингивитом и хроническим простым периодонтитом, а также между хроническим гингивитом и хроническим сложным периодонтитом установлены статистически значимые различия. ЕписШит в больших количествах выявляется у пациентов с более легкими формами заболеваний периодонта (66,1 х104 ГЭ/мл).
Более высокие количественные показатели Р. дтд^а^ наблюдались в группе
с хроническим сложным периодонтитом -3,7х104; между группами с хроническим простым маргинальным гингивитом и хроническим простым периодонтитом, а также между хроническим гингивитом и хроническим сложным периодонтитом установлены статистически значимые различия.
Статистически значимые более высокие показатели наблюдались по количественному значению Т сСепШ1а в группе с хроническим сложным периодонтитом -12,0х104; между группами с хроническим простым маргинальным гингивитом и хроническим сложным периодонтитом, а также между хроническим простым периодонтитом и хроническим сложным периодонтитом были статистически значимые различия.
Статистически значимые более высокие показатели наблюдались по количественному значению Т forsythensis в группе с хроническим простым периодонтитом и хроническим сложным периодонтитом - 11,7х104 и 11,1 х 104; между группами с хроническим простым маргинальным гингивитом и хроническим простым периодонтитом, а также между хроническим простым маргинальным гингивитом и хроническим сложным периодонтитом были статистически значимые различия. Т forsythensis в больших количествах выявляется у пациентов с более тяжелыми формами заболеваний периодонта (15,7х104 ГЭ/мл) по сравнению с легкими (0,9х104 ГЭ/мл).
Представители красного комплекса Р. gingivalis, Т сСепЫа, Т forsythensis в статистически значимо более высоких
Таблица 6
Клинические примеры пациентов с заболеваниями периодонта разных стадий
Стадия периодонтита
Клиническая картина
Микробный фактор
Начальный (I)
1_А 1-2 тт
Потеря костной ткани до 15% Нет потери зубов Горизонтальная резорбция Глубина зондирования до 4 мм
Нуклеотидные замены не выявлены
Умеренный (II)
1_А 3-4 тт
Потеря костной ткани до 33% Нет потери зубов Горизонтальная резорбция Глубина зондирования <5 мм
Нуклеотидные замены не выявлены
Тяжелый с риском потери одного зуба (III)
1_А >5 тт
Потеря костной ткани средняя треть Потеря зубов до 4 Горизонтальная и вертикальная резорбция
Глубина зондирования 6-7 мм
Нуклеотидные замены: ген -8 - G1101T
Тяжелый с риском потери всех зубов (IV)
1-А более 8 тт Потеря костной ткани Потеря зубов от 5 Горизонтальная и вертикальная резорбция
Глубина зондирования >8 мм Вторичная травматическая окклюзия Подвижность зубов >2
Нуклеотидные замены: ген ИЛ-1 р - С3954Т ген COL2A1 - С2854А; ген ММР-8 - G1101T
показателях обнаруживались в группе с риском потери всех зубов - 9,0х104 ГЭ/мл, 18,9х104 ГЭ/мл, 15,7х104 ГЭ/мл; между всеми группами были получены статистически значимые различия.
При количественном определении A. actinomycetemcomitans более высокий показатель был установлен в группе с тяжелым течением с риском потери одного зуба - 31,8х 104; между группами с риском потери одного зуба и риском потери всех зубов были статистически значимые различия.
В ходе изучения нуклеотидных последовательностей генов IL1 р, COL2A1, MMP-8, TIMP-2 у обследованных пациентов были выявлены замены одного, двух и трех нуклеотидов (табл. 5).
Для гена ИЛ-1 р были выявлены замены А521С, C3954T для гена COL2A1 - замены C36245A и C36271A, для гена MMP-8 - замены G137T и G1101T для гена TIMP-2 - замена G418C.
Таким образом, если сравнивать группу пациентов с гингивитом (контроль) и с периодонтитом (основная группа), то в последней статистически значимо чаще наблюдаются нуклеотидные замены в последовательности ИЛ-1 р, MMP-8, COL2A1.
При сравнении групп пациентов с легкими формами (стадия I-II) и тяжелыми формами (III-IV) статистически значимые различия выявлены по одному показателю: при определении нуклеотидных замен в последовательности COL2A1 между группами (начальный и умеренный периодонтит и тяжелые формы с риском потери зуба/зубов).
У пациентов III и IV группы обнаружены замены в гене ИЛ-1 р - C3954T в гене COL2A1 - C2854A; в гене MMP-8 - G1101T (табл. 6).
При начальном периодонтите с потерей зубодесневого прикрепления 1-2 мм с превалирующим горизонтальным типом резорбции костной ткани и периодонталь-ными карманами не более 4 мм микроорганизмы встречаются в небольших количествах. При умеренном периодонтите с потерей зубодесневого прикрепления 3-4 мм с превалирующим горизонтальным типом резорбции костной ткани и периодонтальными карманами 5 мм также встречаются единичные микроорганизмы в количествах, не превышающих 103-5. Пациентов с тяжелыми формами патологии периодонта с потерей зубодесневого прикрепления и зубов отличают более высокие показатели микробной обсе-мененности периодонтальных карманов (микроорганизмы в количествах, превышающих 105"6"7, характерны для тяжелых форм патологии).
Заключение
Количественный метод определения периодонтопатогенов позволяет выявить различия периодонтопатогенной флоры в содержимом периодонтальных карманов у пациентов с легкими и тяжелыми формами патологии. На первом месте по выявляемости у пациентов с заболеваниями периодонта стоит P. gingivalis (концентрация P. gingivalis - 3,4х104 ГЭ/ мл). Представители красного комплекса (P. gingivalis, T forsythensis, T. denticola) статистически значимо в больших количествах P. gingivalis - 7,3х104 ГЭ/мл и 9,0х104 ГЭ/мл, T forsythensis - 14,7х104 ГЭ/мл и 15,7х104 ГЭ/мл, T denticola -13,8х104 ГЭ/мл и 18,9х104 ГЭ/мл регистрируются у пациентов с тяжелыми формами заболеваний периодонта (III-IV стадии).
С использованием метода секвениро-вания изучены нуклеотидные последо-
вательности генетических детерминант, контролирующих синтез цитокинов (И=1 р), коллагена (ОО1.2А1), металлопроте-иназ (ММР-8), тканевых ингибиторов матриксных металлопротеиназ (ТМР-2) в эпителиальных клетках полости рта пациентов. Для гена ИЛ-1 р выявлена замена А521О, О3954Т для гена ОО1.2А1 -замены О245А, 02907А и О271А; для гена ММР- 8 - замена Э137Т и 011011; для гена ТМР-2 - 0418О.
На основании анализа данных, полученных в ходе генетического исследования, установлено, что частота выявления ну-клеотидных замен в генах Н=1 р, ОО1.2А1, ММР-8 достоверно выше у пациентов с периодонтитом, в сравнении с представителями группы с хроническим гингивитом. Присутствие нуклеотидных замен было ассоциировано с тяжестью течения заболеваний периодонта. При сравнении групп пациентов с легкими формами (стадия МО и тяжелыми формами (УМУ) статистически значимые различия выявлены при определении нуклеотидных замен в последовательности ОО1-2А1 между группами.
Дифференцированный персонифицированный подход к назначению лечебных мероприятий пациентам с заболеваниями периодонта невозможен без комплексной клинико-лабораторной диагностики. При использовании новой классификации заболеваний периодонта дополнительные исследования (ПЦР-диагностика периодонтопатогенной флоры в содержимом периодонтальных карманов и определение генетических детерминант в эпителиальных клетках) обоснованы для пациентов с тяжелыми формами (УМУ стадии) патологии пе-риодонта.
ЛИТЕРАТУРА
1. Леус П.А., Юдина Н.А. Заболевания периодонта. Диагностика. Профилактика. Лечение. Современные методы. - Минск: Энергопресс, 2015. - С.386.
2. Руденкова Т.В., Костюк С.А., Юдина Н.А., Яковлева-Малых М.О., Полуян О.С., Глинкина Т.В. Генетические маркеры предрасположенности к воспалительным заболеваниям периодонта (пародонта) // Стоматологический журнал 2019. - №2. - С.85-90.
3. Руденкова Т.В., Костюк С.А., Полуян О.С., Юдина Н.А., Яковлева-Малых М.О. Оптимизация молекулярно-биологического анализа для идентификации нуклеотидных последовательностей генетических детерминант ИЛ-Iß, COL2A1, MMP-8, у пациентов с воспалительно-деструктивными заболеваниями периодонта // Современная стоматология. - 2020. - Т.3. - С.46-51.
4. Юдина Н.А., Долин В.И., Юрис О.В. Эпидемиологическое исследование стоматологических заболеваний в мире и Республике Беларусь // Lambert. Academic Publishing. - Германия, 2017. - 155 с.
5. Юдина Н.А., Яковлева-Малых М.О. Клинические возможности применения новой классификации заболеваний периодонта // Стоматологический журнал. - 2020. - №4. - С.212-220.
6. Hengartner N., et al. IL1ß inhibits human osteoblast migration // Mol. Med. -2013. - Vol.19. - P.36-42.
7. Huang R., Yuan Y, Tu J., et al. Opposing TNF-a/IL1ß- and BMP-2-activated MAPK signaling pathways converge on Runx2 to regulate BMP-2-induced osteoblastic differentiation // Cell Death Dis. - 2014. - Vol.5.
8. Toyman U., Tüter G., Kurtis B., et al. Evaluation of gingival crevicular fluid levels
of tissue plasminogen activator, plasminogen activator inhibitor 2, matrix metal-loproteinase-3 and interleukin 1-p in patients with different periodontal diseases // J. Periodontal. Res. - 2014. - N2.
9. Hernández P., et al. Oral-fluid MMP analysis in the complementary diagnosis of periodontal diseases // Rev. Clin. Periodoncia Implantol. Rehabil. Oral. - 2012. -Vol.5, N3. - P.150-153
10. Marcaccini A.M., Meschiari C.A., Zuardi L.R., et al. Gingival crevicular fluid levels of MMP-8, MMP-9, TIMP-2, and MPO decrease after periodontal therapy // J. Clin. Periodontol. - 2010. - Vol.37, N2. - P.180-190.
11. Leppilahti J.M., Hernández-Ríos P.A., Gamonal J.A., et al. Matrix metallo-proteinases and myeloperoxidase in gingival crevicular fluid provide site-specific diagnostic value for chronic periodontitis // J. Clin. Periodontol. - 2014. - Vol.41, N4. - P.348-356.
12. Cavalla F, Osorio C., Paredes R., et al. Matrix metalloproteinases regulate extracellular levels of SDF1/CXCL12, IL-6 and VEGF in hydrogen peroxide-stimulated human periodontal ligament fibroblasts // Cytokine. - 2015. - Vol.73, N1. - P.114-121.
13. Castellani C., Malerba G., Sangalli A., Delmarco A., Petrelli E., Rossini M., Assael B.M., Mottes M. The genetic background of osteoporosis in cystic fibrosis: association an alysis with polymorphic markers in four candidate genes // J. Cyst. Fibros. - 2006. - Vol.5, N4. - P.229-235.
14. Nagase H., Visse R., Murphy G. Structure and function of matrix metalloproteinases and TIMPs // Cardiovascular Research. - 2006. - Vol.69, N3. - P.562-573.
15. Klever da Silva M., Goncalves de Carvalho A.C., Pereira Alves E.H., Pereira da Silva FR., dos Santos Pessoa L., Pereira Vasconcelos D.F Genetic factors and the risk of periodontitis development: findings from a systematic review composed of 13 studies of meta-analysis with 71,531 participants // International Journal of Dentistry. - 2017. - doi: 10.1155/2017/1914073.
REFERENCES
1. Leus P.A., Yudina N.A. Zabolevaniya periodonta. Diagnostika. Profilaktika. Lecheniye. Sovremennyye metody[Periodontal diseases. Diagnostics. Prevention. Treatment. Modern methods]. Minsk: Energopress, 2015, 386 p. (in Russian)
2. Rudenkova TV., Kostyuk S.A., Yudina N.A., Yakovleva-Malykh M.O., Poluyan O.S., Glinkina T.V Geneticheskiye markery predraspolozhennosti k vospalitel'nym zabolevaniyam periodonta (parodonta) [Genetic markers of predisposition to inflammatory diseases of the periodontal]. Stomatologicheskiyzhurnal, 2019, no.2, pp.85-90. (in Russian)
3. Rudenkova TV., Kostyuk S.A., Poluyan O.S., Yudina N.A., Yakovleva-Malykh M.O. Optimizatsiya molekulyarno-biologicheskogo analiza dlya identifikatsii nukleotidnykh posledovatel'nostey geneticheskikh determinant IL-1b, COL2A1, MMP-8, u patsiyentov s vospalitel'no-destruktivnymi zabolevaniyami periodontal [Optimization of molecular biological analysis for identification of nucleotide sequences of genetic determinants IL-1 p, COL2A1, MMP-8 in patients with inflammatory and destructive periodontal diseases]. Sovremennaya stomatologiya, 2020, vol.3, pp.46-51. (in Russian)
4. Yudina N.A., Dolin VI., Yuris O.V. Epidemiologicheskoye issledovaniye stomatologicheskikh zabolevaniy v mire i Respublike Belarus' [Epidemiological study of dental diseases in the world and the Republic of Belarus]. Lambert. Academic Publishing, Germaniya, 2017, 155 p. (in Russian)
5. Yudina N.A., Yakovleva-Malykh M.O. Klinicheskiye vozmozhnosti primeneniya novoy klassifikatsii zabolevaniy periodonta [Clinical possibilities of using a new classification of periodontal diseases]. Stomatologicheskiy zhurnal, 2020, vol.4, pp.212-220. (in Russian)
6. Hengartner N., et al. IL-1p inhibits human osteoblast migration. Mol Med, 2013, vol.19, pp.36-42.
7. Huang R., Yuan Y, Tu J., et al. Opposing TNF-a/IL-1 p- and BMP-2-activated MAPK signaling pathways converge on Runx2 to regulate BMP-2-induced osteoblastic differentiation. Cell Death Dis, 2014, vol.5.
8. Toyman U., Tüter G., Kurtis B., et al. Evaluation of gingival crevicular fluid levels of tissue plasminogen activator, plasminogen activator inhibitor 2, matrix metal-loproteinase-3 and interleukin 1-p in patients with different periodontal diseases. J Periodontal Res, 2014, no.2.
9. Hernández P., et al. Oral-fluid MMP analysis in the complementary diagnosis of periodontal diseases. Rev Clin Periodoncia Implantol Rehabil Oral, 2012, vol.5, no.3, pp.150-153.
10. Marcaccini A.M., Meschiari C.A., Zuardi L.R., et al. Gingival crevicular fluid levels of MMP-8, MMP-9, TIMP-2, and MPO decrease after periodontal therapy. J Clin Periodontol, 2010, vol.37, no.2, pp.180-190.
11. Leppilahti J.M., Hernández-Ríos P.A., Gamonal J.A., et al. Matrix metalloproteinases and myeloperoxidase in gingival crevicular fluid provide site-specific diagnostic value for chronic periodontitis. J Clin Periodontol, 2014, vol.41, no.4, pp.348-356.
12. Cavalla F, Osorio C., Paredes R., et al. Matrix metalloproteinases regulate extracellular levels of SDF1/CXCL12, IL-6 and VEGF in hydrogen peroxide-stimulated human periodontal ligament fibroblasts. Cytokine, 2015, vol.73, no.1, pp.114—121.
13. Castellani C., Malerba G., Sangalli A., Delmarco A., Petrelli E., Rossini M., Assael B.M., Mottes M. The genetic background of osteoporosis in cystic fibrosis: association an alysis with polymorphic markers in four candidate genes. J Cyst Fibros, 2006, vol.5, no.4, pp.229-235.
14. Nagase H., Visse R., Murphy G. Structure and function of matrix metalloproteinases and TIMPs. Cardiovascular Research, 2006, vol.69, no.3, pp.562-573.
15. Klever da Silva M., Goncalves de Carvalho A.C., Pereira Alves E.H., Pereira da Silva FR., dos Santos Pessoa L., Pereira Vasconcelos D.F Genetic factors and the risk of periodontitis development: findings from a systematic review composed of 13 studies of meta-analysis with 71,531 participants. International Journal of Dentistry, 2017, doi: 10.1155/2017/1914073.
Конфликт интересов
Согласно заявлению авторов, конфликт интересов отсутствует.
Поступила 12.08.2020 Принята в печать 15.01.20211
Адрес для корреспонденции Address for correspondence
Кафедра общей стоматологии Department of General Dentistry
Белорусская медицинская академия последипломного образования Belarusian Medical Academy of Post-Graduate Education
г. Минск, Кедышко, 28 28, Kedyshko street, Minsk
220114, Республика Беларусь, 220114, Republic of Belarus
тел.: +375 17 268-84-82 phone: +375 17 268-84-82
Юдина Наталья Александровна, e-mail: [email protected] Natalia Yudina, e-mail: [email protected]
Не забудьте подписаться на I полугодие 2021 г.
Подписные индексы в каталоге РУП «Белпочта»,«БелСоюзПечать»: 75038 и 750382, дополнительно для студентов стоматологических факультетов медицинских вузов - 75055 В странах СНГ и Балтии: 75038.
Внимание! Теперь можно, не выходя из дома, подписаться на бумажную версию журнала «Современная стоматология» на сайте БелПочты https://belpost.by/onlinesubscription/items
Подписка на электронную версию журнала «Современная стоматология» на сайте www.mednovosti.by
| fckp
ЬЛШШМ СТОМАТОЛОГИЯ
VcTOI
