CC BY
144
Микробиоценозы полости носа у детей с различными вариантами аллергического ринита и подходы к терапии
А. А. ШАРИФУЛЛИНА, Л. Т. БАЯЗИТОВА, Е. В. АГАФОНОВА. ФГУН Казанский НИИЭМ Роспотребнадзора
Аллергический ринит (АР) у детей занимает одно из ведущих мест в структуре аллергических заболеваний, а его частота непрерывно увеличивается и составляет более 15% [1, 2]. У 45-60% пациентов с АР в последующем формируется бронхиальная астма [3]. В современных условиях АР отличает раннее начало, значительное снижение качества жизни ребенка, развитие осложнений и определенные трудности в лечении.
Недооценка причин и механизмов развития заболевания, наличие сопутствующей патологии и неадекватность лечения нередко приводят к утяжелению АР, прогрессированию болезни и ухудшению прогноза. Это требует углубленного изучения причинных факторов, оказывающих влияние на течение аллергического ринита.
В настоящее время, в условиях экологического неблагополучия и широкого использования антибиотиков, одним из факторов, приводящих к утяжелению течения АР, является нарушение назального микробиоценоза с активацией условно-патогенной микрофлоры [4, 5]. В частности, можно считать доказанной роль Staphylococcus aureus при атопическом дерматите [6], а утяжеление течения заболевания обусловлено способностью антигенов бактерий проявлять свойства суперантигенов [7]. Известно, что суперантигены, в отличие от классических антигенов, способны не только запускать IgE-опосредованный механизм атопической реакции, но и стимулировать массивную активацию Т-клеток и макрофагов [8]. При атопических дерматитах в 90% случаев Staphylococcus aureus обнаруживают на пораженной коже. Анализ отечественных и зарубежных источников показывает, что при АР качественный и количественный состав микробиоценоза слизистой оболочки полости носа у детей, а также роль Staphylococcus aureus в развитии местного хронического аллергического воспаления изучены недостаточно.
В связи с этим целью исследования явилось изучение особенностей микробиоценоза слизистой оболочки полости носа у детей с различными вариантами течения аллергических ринитов для оптимизации методов диагностики и лечения.
Материалы и методы исследований
Обследовано 144 детей в возрасте от 5 до 17 лет с АР Легкое течение заболевания отмечалось у 49 (34,0%) больных, среднетяжелое — у 86 (59,7%), а тяжелое — у 9 (6,3%). У 64 больных диагностирован круглогодичный (34) или сезонный (30) аллергический ринит, у 58 детей — круглогодичный (44) или сезонный (14) аллергический ринит в сочетании с атопической бронхиальной астмой, у 22 больных — круглогодичный аллергический ринит в сочетании с атопическим дерматитом. Критериями включения в обследуемые группы явились: длительность заболевания у детей более 12 месяцев, отсутствие острых респираторных заболеваний и антибактериальной, кортикостероидной терапии на протяжении 4 недель до начала проведения обследования.
Контрольную группу составили 36 практически здоровых ребенка, репрезентативных по возрасту и полу. Критерии отбора детей в контрольную группу из числа практически здоровых: отсутствие клинических данных, характерных для патологии ЛОР-органов, органов дыхания и указаний на аллергические проявления в анамнезе.
Диагностику АР проводили в соответствии с рекомендациями Европейской академии аллергологии и клинической иммунологии и ВОЗ. В работе использован комплекс методов: клинические, лабораторно-инструментальные, специфические аллергологические, микробиологические, цитологические и статистические.
Углубленное клиническое обследование включало в себя детальное изучение жалоб больного, анамнеза заболевания и жизни, объективный осмотр с оценкой клинических симптомов болезни, характера и тяжести течения.
Специфическая диагностика включала в себя оценку данных аллергологического анамнеза, кожного тестирования (скарифи-кационные, prik-test) и определение общего IgE (метод иммуно-ферментного анализа — тест системы ЗАО «Вектор-Бест», РФ) и аллергенспецифических IgE (метод иммуно-блотинга в поли-аллергенном варианте фирм «R- Biofarm», Германия; «Labo Biomedical Product», Нидерланды) с использованием ингаляционной и пищевой панелей.
Для изучения состояния местного воспалительного процесса в слизистой носовой полости осуществляли цитологическое исследование носового секрета. Брали мазки-отпечатки со слизистой оболочки полости носа, препараты окрашивали по Романовскому-Гимза и микроскопировали под иммерсией. Изучали риноцитограмму — процентное соотношение клеточных элементов и цитологический статус, характеризующий морфологию клеточных элементов.
Для изучения роли микрофлоры в развитии и поддержании аллергического ринита проводилось бактериологическое исследование посевов из полости носа. Микробиологическое исследование включало в себя посевы на стандартные питательные среды, изучение морфологии бактерий по культуральным свойствам и идентификацию микроорганизмов. Определяли значение показателя микробной обсемененности (ПМО) для каждого представителя биоценоза, выделяемого в чистой культуре. Для удобства представления показатель микробной обсемененности переводился в десятичный логарифм (lg ПМО).
Доля участия симбионтов в структуре биоценоза определялась по частоте встречаемости таксонов (показатель постоянства «С»), с выявлением представителей основной, дополнительной и случайной микрофлоры. Показатель постоянства С выражался в процентах: C = p х 100/P, где р — число выборок, содержащих изучаемый вид, Р- общее число взятых выборок. К основной микрофлоре отнесены таксоны, характеризующиеся высокой частотой встречаемости (С>50%), к дополнительной микрофлоре — при значениях С от 25% до 49%, а к случайной микрофлоре — <25%.
Результаты исследований и их обсуждение
На основании изучения микробиоценоза носовой полости у 144 детей в возрасте от 5 до 17 лет в сравнении с 36 практически здоровыми детьми выявлены существенные различия качественного и количественного состава микрофлоры в зависимости от этиологического варианта и сочетанных форм аллергии.
У практически здоровых детей к основной микрофлоре полости носа отнесены коагулазоотрицательные стафилококки (КОС) — Staph. epidermidis (С = 61%) и Staph. haemolyticus (С = 52,7%), к дополнительной микрофлоре — Staph. aureus (С = 30,5%), Corynebacterium spp. (С = 25%), а к случайной ми-
крофлоре — Strept. viridans (С = 5,5%), Strept. spp. (С = 2,7%) и Neisseria (С = 2,7%). Показатель микробной обсемененности для КОС — Staph. epydermidis (lg ПМО = 2,6) и Staph. haemolyti-cus (lg ПМО = 2,5) в среднем на 30% выше, чем для Staph. aureus (lg ПМО = 2,0).
К основной микрофлоре полости носа у детей с сезонным АР (САР) относятся Staph. haemolyticus (С = 73,3%) и Staph. epider-midis (С = 50,0%), к дополнительной микрофлоре — Staph. aureus (С = 36,7%) и Corynebacterium spp. (С = 30%), а к случайной — Strept. spp. (С = 23,3%), Strept. viridans (С = 16,7%), Strept. haemolyticus (С = 3,3%) и Е. coli (С = 3,3%). Несмотря на то, что качественный состав микрофлоры у детей с САР приближался к качественному составу микрофлоры у практически здоровых детей, количественные характеристики существенно различались. Так, уровень микробной обсемененности для Staph. aureus у детей с САР по сравнению с контролем увеличился на 40% (lg ПМО = 2,8).
Представителем основной микрофлоры при круглогодичном аллергическом рините (КАР) являлся Staph. aureus (С = 58,8%); дополнительную микрофлору составили Staph. haemolyticus (С = 44,1%), Staph. epidermidis (С = 35,2%), Corynebacterium spp. (С = 35,2%), Strept. spp. (С = 26,5%), а случайную микрофлору — Strept. viridans (С = 14,7%), Strept. haemolyticus (С = 5,9%), Е. coli (С = 5,9%), Enterococcus (С = 5,9%), Klebsiella spp. (С = 5,9%), Neisseria (С = 2,9%). Показатель микробной обсемененности для Staph. aureus у детей с КАР по сравнению с САР повысился на 21,4% (lg ПМО = 3,4 против 2,8), тогда как для Staph. haemolyticus снизился на 19,2%.
Рис. 1. Частота встречаемости StaphyIococcus aureus у практически здоровых и больных детей с различными вариантами аллергического ринита.
У детей с АР в сочетании с атопической бронхиальной астмой (АБА) в целом по выборке к основной микрофлоре отнесены Staph. aureus (показатель С = 63,8%), к дополнительной — Staph. haemoIyticus (С = 36,2%), Staph. epidermidis (С = 29,3%), Corynebacterium spp. (С = 24,1%), а к случайной — Strept. viridans (С = 15,5%), Strept. spp. (С = 13,8%), Strept. haemoIyticus (С = 12,1%), Neisseria (С = 1,7%) и KIebsieIIa spp. (С = 3,4%).
При сезонном характере АР в сочетании с АБА к основной микрофлоре отнесен Staph. haemoIyticus (С = 57,1%), к дополнительной — Staph. aureus (С = 42,9%), Staph. epidermidis (С = 35,7%), Corynebacterium spp. (С = 28,6%), а к случайной — Strept. viridans (С = 21,4%), Strept. spp. (С = 14, 3%), Strept. HaemoIyticus (С = 14,3%) и Neisseria (С = 7,1%). В биоценозе в данной группе определялось высокое количество Staph. haemoIyticus (Ig ПМО = 4,5), повышенный рост Staph. aureus (Ig ПМО = 3,7), количественная характеристика дополнительной и случайной микрофлор оставалась неизменной.
У детей с КАР в сочетании с атопической бронхиальной астмой к основной микрофлоре отнесены Staph. aureus (С = 70,4%), к дополнительной — Staph. haemoIyticus (С = 29,5%), Staph. epidermidis (С = 27,2%), а к случайной — Corynebacterium spp. (С = 22,7%), Strept. viridans (С = 13,6%), Strep. spp. (С = 13,6%), Strept. haemoIyticus (С = 6,8%), Е. ra!i (С = 2,2%), Enterococcus spp.
(С = 2,2%), Klebsiella spp. (С = 4,5%). В данной группе отмечался высев высокого количества Staph. aureus (lg ПМО = 4,26) и Staph. haemolyticus (lg ПМО = 4,1), нарастание обнаружения представителей грамотрицательной флоры — Klebsiella (lg ПМО = 2,1), E. rali (lg ПМО = 2,0).
К основной микрофлоре слизистой носовой полости у детей с АР в сочетании с атопическим дерматитом (АД) отнесен Staph. aureus (С = 63,6%), к дополнительной — Staph. haemolyticus (С = 45,5%), Staph. epidermidis (С = 36,4%), Corynebacterium spp. (С = 31,8%), а все виды стрептококков — Strept. viridans (С = 22,7%), Strept. spp. (С = 18,2%), Strept. haemolyticus (С = 13,6%), а также Neisseria (С =13,6%) отнесены к случайной микрофлоре. У детей с аллергическим ринитом в сочетании с атопическим дерматитом наблюдалось повышение в 2 раза количества Staph. aureus по сравнению с их количеством у здоровых (lg ПМО = 4,0 против 2,0); незначительное повышение количества Staph. haem-olyticus (lg ПМО = 3,2 против 2,5) и Staph. epidermidis (lg ПМО = 3,1 против 2,6).
Таким образом, у детей с аллергическим ринитом выявлен различный количественный и качественный состав микробиоценоза слизистой оболочки полости носа в зависимости от этиологических вариантов и сочетанных форм. Так, при САР, протекающих как в изолированном виде, так и в сочетании с АБА, Staph. aureus относится к дополнительной микрофлоре, хотя частота встречаемости таксона на 20,3-40,6% выше, чем у практически здоровых детей, а показатель микробной обсемененности в 1,4-1,8 раза превосходит значения контрольной группы. При КАР, протекающих как в изолированной форме, так и в сочетании с АБА и АД, Staph. aureus относится к основной микрофлоре, а показатель микробной обсемененности в 1,7-2,1 раза выше, чем у практически здоровых детей. Необходимо отметить, что наибольшая частота встречаемости и более высокое количество Staph. aureus выявлены у детей с сочетанными формами АР: КАР и АБА (С = 70,4%, lg ПМО = 4,3), а также АР и АД (С = 63,6%, lg ПМО = 4,0). Учитывая преобладание в составе микрофлоры слизистой оболочки полости носа Staph. aureus у детей с КАР и его достоверный рост по сравнению со здоровыми детьми, представляет интерес изучение особенностей течения АР, протекающего на фоне колонизации слизистой оболочки золотистым стафилококком. С этой целью обследовано 82 ребенка с аллергическим ринитом, ассоциированным со Staph. аureus, которые составили основную группу, и 62 ребенка, не имеющих колонизации слизистой оболочки полости носа Staph. аureus, вошедшие в группу сравнения.
Выявлены особенности течения и особенности клинической картины при АР, ассоциированном со Staph. aureus, у детей. Изучение тяжести течения заболевания показало, что у детей основной группы чаще, чем в группе сравнения встречалось тяжелое течение болезни (соответственно 8,0% и 1,6%, р<0,05), тогда как в группе сравнения, наоборот, выше доля детей с легким течением (р<0,05). Изучение сроков от начала болезни у детей с АР, имеющих колонизацию слизистой оболочки Staph. aureus, выявило, что пациенты имеют более продолжительное течение болезни. Дети основной группы имели срок заболевания более 5 лет в 39,0% случаев, тогда как в группе сравнения — только в 19,4% (р<0,05) случаев. Итак, чем тяжелее течение АР и больше длительность от начала заболевания, тем выше вероятность колонизации слизистой оболочки полости носа Staph. aureus.
У детей с АР, ассоциированном со Staph. aureus, отмечалась выраженная заложенность носа (соответственно 47,6% и 25,8%, р<0,05). Ринорея носила преимущественно слизистый характер (80,1%), тогда как в группе сравнения, наоборот, чаще встречались водянистые выделения из носа (80,7%, р<0,01). У пациентов основной группы статистически значимо чаще отмечалась задняя ринорея (35,4%), что сопровождалось кашлем за счет стекания назального секрета по задней стенки глотки. Чихание, зуд в носу, наоборот, с большей выраженностью имели место у пациентов с АР без колонизации слизистой оболочки полости носа Staph. aureus. В основной группе чаще, чем в группе сравнения, отмечалось снижение качества жизни ребенка (соответственно у 81,7% и у 66,2% больных, р<0,05).
Анализ результатов риноскопии показал, что у пациентов с АР, ассоциированном со Staph. aureus, чаще встречался цианотичный
цвет слизистой оболочки полости носа (76,9%), тогда как в группе сравнения — бледно-розовый (64,5%, р<0,05). Бледный матовый оттенок слизистой встречался в единичных случаях. У детей основной группы отмечается преобладание отека носовых раковин над отделяемым (у 68,8% обследованных), а в группе сравнения — гиперсекреции над отеком (у 62,6%).
Таким образом, колонизация Staph. aureus слизистой оболочки полости носа у детей с аллергическим ринитом утяжеляет течение заболевания и делает симптомы более выраженными (усиление заложенности носа, обильные слизистые выделения, кашель), что снижает качество жизни пациента. Это связано с тем, что Staph. aureus продуцирует суперантиген, который оказывает повреждающее действие, — является триггером высвобождения медиаторов аллергии и цитокинов из тучных клеток и макрофагов, выступает как аллерген — усиливает выработку аллергенспецифических IgE и усиливает хроническое воспаление за счет массивной активации Т-лимфоцитов и макрофагов. Исходя из вышеизложенного, требуется изучение уровня и характера сенсибилизации при аллергическом рините в условиях колонизации слизистой оболочки полости носа Staph. aureus и коррекция нарушенного назального микробиоценоза.
Для подтверждения атопического характера заболевания АР у всех пациентов проведено определение количества эозинофи-лов в периферической крови и определение уровня общего IgE в сыворотке крови. Так в периферической крови в основной группе пациентов количество эозинофилов статистически значимо превышало их количество у детей группы сравнения, что составило соответственно (6,9±0,6)% и (5,9±0,6)% (р<0,05).
У 97% пациентов с аллергическим ринитом установлен повышенный уровень общего IgE в сыворотке крови, значения которого колебались от 80 до 750 МЕ/мл, в среднем — 344,5 МЕ/мл. При этом количество сывороточного IgE у пациентов основной группы в 1,3 раза превышало его количество у детей группы сравнения (соответственно (378,5±39,4) МЕ/мл и (299,7±25,6) МЕ/мл, р<0,01). Таким образом, у детей с аллергическим ринитом, имеющих колонизацию слизистой оболочки полости носа Staph. aureus, отмечается более высокий уровень сенсибилизации по сравнению с детьми с АР, ее не имеющих.
Данные специфического аллергологического обследования показали, что у детей с АР, имеющих колонизацию слизистой оболочки полости носа Staph. aureus, чаще, чем в группе сравнения, отмечалась сенсибилизация к бытовым аллергенам (соответственно 79,3% и 53,2%, р<0,05) и реже имела место пыльцевая аллергия (37,8% и 58,1%, р<0,01). По остальным видам сенсибилизации различий между сравниваемыми группами не выявлено.
Для лечения аллергических ринитов, ассоциированных со Staph. aureus нами применен комплексный этапный подход. На I этапе назначалась топическая комбинированная терапия, включающая в себя антибактериальный компонент и кортикостероид. С этой целью использовался препарат Полидекса с фенилэфри-ном, в состав которого входят 2 антибиотика (неомицин сульфат и полимиксин В) и противовоспалительный компонент — дек-саметазон. Неомицин имеет высокую активность в отношении золотистого стафилококка. Кроме этого, в составе Полидексы содержится фенилэфрин, оказывающий сосудосуживающее действие и уменьшающий ощущение заложенности носа. Таким образом, Полидекса имеет прямое показание к применению у детей с аллергическим ринитом, протекающим в условиях колонизации слизистой оболочки полости носа Staph. aureus. На II этапе пациенты получали традиционную противоаллергическую терапию АР, согласно тяжести течения.
Для оценки эффективности проводимой терапии больные АР, протекающим с колонизацией слизистой оболочки полости носа Staphylococcus aureus, разделены на 2 группы. В 1-ю (основную) группу вошло 55 детей, получающих этапную терапию (табл. 1).
Во 2-ю (контрольную) группу вошли 30 детей с АР, ассоциированном со Staph. aureus, получавших только традиционную противоаллергическую терапию согласно степени тяжести, которая существенно не различалась между сравниваемыми группами.
Клиническую эффективность этапной комбинированной антибактериальной терапии в комплексном лечении АР оценивали на основе индивидуального терапевтического эффекта (ИТЭ),
общего терапевтического эффекта (ОТЭ), а также средней продолжительности периода обострения и длительности стадии ремиссии. При этом снижение степени тяжести АР от исходного уровня более 40% и выше расценивали как высокий ИТЭ, на 20-40% — как средний, а ниже 10% — как его отсутствие. Общий терапевтический эффект оценивали по проценту больных, продемонстрировавших положительный ИТЭ от лечения.
Анализ клинической эффективности показал, что у больных основной группы ОТЭ составил 76,9%, тогда как в контрольной группе — 36,7% (р<0,05) (табл. 2). Снижение степени тяжести АР от исходного уровня у детей, получавших комбинированную антибактериальную терапию составило в среднем 42%, а у детей, ее не получавших, — 18%. Причем, высокий ИТЭ в обследуемой группе отмечался в 50% случаев, а в группе сравнения — в 13,4% (р<0,001), тогда как средний ИТЭ соответственно — в 26,4% и в 23,6% случаев.
Клиническая эффективность проводимого лечения АР у детей с колонизацией слизистой оболочки полости носа Staph. aureus проявилась и в сокращении длительности периода обострения в 1,8 раза. Значительное улучшение носового дыхания отмечалось на 14-18-е сутки лечения, тогда как в контрольной группе — только на 26-34-е сутки лечения.
Изучение долгосрочных результатов использования этапной комбинированной терапии по данным наблюдения за детьми в течение 1-2 лет показало, что средняя длительность ремиссии в основной группе составила 10,4 мес., тогда как в группе сравнения — 5,2 мес. (р<0,001), то есть увеличилась в 2 раза.
После проведенного лечения в основной группе детей с АР результаты микробиологического исследования секрета слизистой оболочки полости носа на наличие Staph. aureus были отрицательными в 86,5% случаев, тогда как в контрольной группе — только в 16,6% случаев.
Таким образом, проведенные исследования позволили выявить изменения назального микробиоценоза при различных вариантах АР у детей, а также установить клинические особенности АР, ассоциированного со Staph. aureus, и совершенствовать методы диагностики и лечения данной патологии.
Таблица 1. Этапная схема комбинированной терапии у детей с аллергическим ринитом, ассоциированном со Staph. aureus
Этапы Характеристика терапии Длительность
I Полидекса — по 1 впрыскиванию 3 раза в день; Аква-марис — по 1-2 впрыскиваниям 3 раза в день 5-7 дней
II Легкое течение: топические антигистаминные (Аллергодил), кромоны (Кромогексал). Среднетяжелое/тяжелое течение: системные антигистаминные препараты нового поколения (Парлазин, Эриус), топические кортикостероиды (Назонекс, Фликсоназе) До полного контроля симптомов АР
Таблица 2. Оценка клинической эффективности этапной комбинированной антибактериальной терапии у больных с аллергическим ринитом, ассоциированном со Staph. aureus
Группы ИТЭ ОТЭ Средняя длительность обострения, сут. Средняя длительность ремиссии, мес.
Основная (52) 42% 76,9% 16,2±1,7 10,4±1,5
Контрольная (30) 18% 36,7% 29,4±2,8 5,2±1,2
Примечание. В скобках указано число наблюдений.
ЛИТЕРАТуРА:
1. Ильина Н. И. Аллергический ринит / Н. И. Ильина // Consilium medic-um. — 2000. — Т. 2, № 8. — С. 338-343.
2. Bousquet J., Van Cauvenberge P., Khaltaev N., WHO. Allergic rhinitis and its Impact on Asthma ARIA (in collaboration wits the World Health Organisation). Allergy, 2002, 57: 841-855.
3. Емельянов А. В. Взаимосвязь аллергического ринита и бронхиальной астмы / А. В. Емельянов, Т. Е. Тренделева // Вестник оториноларингологии. — 2002. — № 1. — С. 59-62.
4. Елисютина О. Г. Роль Staphylococcus aureus в патогенезе атопического дерматита / О. Г. Елисютина, Е. С. Феденко // Российский аллергологический журнал. — 2004. — № 1. — С. 17-20.
5. Микрофлора слизистой носа при аллергическом круглогодичном и инфекционном ринитах / Э. Е. Романенко, А. П. Батуро, А. М. Мокроносо-ва [и др.] // Журнал микробиологии и эпидемиологии. — 2003. — № 3. —
С. 66-71.
6. Leung, D. Y. M. Role of Staphylococcus aureus in atopic dermatitis /
D. Y. M. Leung // Atopic dermatitis edited by T Bieber, D. Y. M. Leung, Marcel-Dekker, Inc. New-York-Basil, 2002, № 7. — P. 410-418.
7. Prevalence of producers of enterotoxins and toxic schock syndrome toxin-1 among Staphylococcus aureus strains isolated from atopic dermatitis lesions / H. Akiyama, Y. Toi, H. Kansaki [et al.] // Arch. Dermatol. Res. — 1996. — Vol. 288, № 7. — P. 418-420.
8. Коротяев А. И. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология / А. И. Коротяев, С. А. Бабичев. — СПб.: Спецлит., 1998. — 580 с.
Патогенные свойства штаммов грибов рода Candida при инфекциях верхних дыхательных путей
С. А. ЛИСОВСКАЯ, Н. И. ГЛУШКО, Е. В. ХАЛДЕЕВА, ФГУН Казанский НИИЭМ Роспотребнадзора, Казань
Инфекции верхних дыхательных путей и слизистых зева обычно возникают и развиваются в условиях микробных ассоциаций, связанных с наличием у больных носительства условно-патогенных микроорганизмов, в том числе и грибов рода Candida. В процессе обычных схем лечения широко применяются антибиотики избирательного или широкого спектра действия. Их вмешательство в отношения микробов — ассоциантов может привести к подавлению роста бактерий и размножению грибов рода Candida, которое способствует развитию микозов. В последнее время во всех странах мира отмечается неуклонный рост числа заболеваний, вызванных грибами рода Candida. Принято считать, что в патогенезе кандидозной инфекции решающую роль играет состояние макроорганизма. Однако в связи с широким распространением грибов и способностью их в определенных условиях проявлять свой патогенный потенциал возникает необходимость в изучение факторов грибковой агрессии; что поможет правильно оценить значимость грибов в этиологии заболеваний зева и верхних дыхательных путей [1].
Существуют два основных аспекта взаимодействия дрожжеподобных грибов с макроорганизмом: адгезия к клеткам и тканям и иммуномодуляция иммунного ответа.
Адгезивность является одним из основных факторов, определяющих поведение микроорганизмов в биоценозах, и она же определяет способность их перехода к паразитическому образу существования. Известно, что колонизация организма грибами рода Candida, в отличие от кандиданосительства, обусловлена адгезией клеток гриба к эпителию, где основную роль выполняют адгезины клеточной стенки, представленные в частности, маннопротеинами клеточной стенки, осуществляющих как специфическое, так и неспецифическое связывание. Антигенами у грибов рода Candida, на долю которых приходится основная роль в формировании иммунного ответа, также являются высокомолекулярные комплексы маннопротеинов, равномерно распределенные по всей поверхности клеточной стенки [2].
В связи с вышеизложенным, интерес представляет изучение частоты распространения грибов рода Candida на слизистой оболочке миндалин и зева, а также определение степени патогенности данных грибов на основании исследования двух основных факторов вирулентности (уровень адгезии и количество манно-протеидных антигенов).
Материалы и методы
Обследовано 214 человек, в том числе 187 больных с хроническим течением заболеваний и в период обострения и 27 клинически здоровых лиц — контрольная группа.
Материал для исследования брали с помощью стерильного ватного тампона с последующим смывом дистиллированной водой по периметру наиболее свежих поражений. Затем тампон помещали в стерильную пробирку с 2 мл дистиллированной воды. Посев смыва проводился на агаризованную среду Сабуро в две чашки Петри, причем в одну чашку добавлялся стрептомицин в количестве 70 ед./мл среды. Расчет численности клеток Candida spp. в смыве производили с 1 тампона на 1 мл дистиллированной воды. Идентификацию грибов проводили микроскопическими и биохимическими методами, проводили тесты на трубки прорастания и хламидоспоры, ферментацию углеводов [3].
Исследовали 48-часовые культуры C. albicans, выращенные на среде Сабуро при температуре 30 °С. Определение адгезивных свойств выделенных штаммов C. albicans проводилось по ранее разработанной авторами модели адгезии клеток гриба на нитро-целлюлозную пленку с иммобилизированным гемоглобином [4]. Полученную пленку площадью 7 см2 инкубировали при температуре 30 °С с 3 мл суспензии клеток гриба в 0,1 М фосфатном буфере в течение двух часов. Определение уровня адгезии проводили по разнице начальной и конечной оптической плотности суспензии клеток, а также прямым подсчетом клеток в суспензии с помощью микроскопа Биолам Р-11 при увеличении 10 х 20, подсчитывали не менее 10 полей зрения.
Определение количества антигена (АГ) проводили с помощью амперометрического иммуноферментного сенсора [5], в состав биочувствительной части которого входят антитела к антигену С. albicans и фермент бутирилхолинэстераза.
Результаты и их обсуждения
Микологическое исследование показало доминирующее положение четырех основных видов рода Candida: C. albicans (82%), C. parapsilosis (9%), C. tropicalis (6%), C. krusei (3%) (рис. 1.). На слизистой оболочке зева у больных с хроническими воспалительными процессами, грибы рода Candida в ассоциациях с гемолитическими или зеленящими стрептококками и стафилококками определялись в 44,2% случаев. В период обострения хронического заболевания количество грибов в этих ассоциациях возрастало до 73,2%. В контрольной группе грибы высевались лишь в 12,3% случаев, причем всегда в незначительном количестве.
Обсемененность дрожжеподобными грибами слизистых зева у больных в период обострения заболевания составила 1х105 КОЕ/мл, у больных с хроническим течением заболевания — 1х103 КОЕ/мл. По видимому, значительное число клеток Candida spp. в зеве объясняется хроническим течением заболевания при котором на фоне сниженного иммунологического реагирования имеет
