CC BY
556
ЭКСПЕРТИЗА ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЙ МОНИТОРИНГ ПОМЕЩЕНИЙ ЛАБОРАТОРИИ МИКРОБИОЛОГИИ. АНАЛИЗ РИСКОВ
О.В. Гунар, Н.Г. Сахно, М.В. Рощина
Федеральное государственное бюджетное учреждение «Научный центр экспертизы средств медицинского применения»
Министерства здравоохранения Российской Федерации, Москва
Резюме: В статье показаны возможность влияния окружающих факторов на качество анализов, выполняемых в лаборатории микробиологии Испытательного центра экспертизы качества ЛС и необходимость проведения микробиологического мониторинга чистых зон и помещений в период их эксплуатации. Для оценки степени опасности каждого источника рассматриваются факторы риска и категории критичности, на основе которых делается вывод о частоте проведения текущего мониторинга в лаборатории. Оцениваются основные риски, влияющие на результаты микробиологического исследования, описываются методы управления указанными рисками. Представлены также материалы по оптимизации процесса микробиологического мониторинга всех помещений лаборатории, в том числе не относящихся к чистой зоне.
Ключевые слова: экспертиза качества лекарственных средств, микробиологический мониторинг, факторы риска.
ENVIROMENTAL MONITORING OF MICROBIOLOGY LABORATORY PREMISES. RISK ANALYSIS
O.V. Gunnar, N.G. Sakhno, M.V. Roshchina
Federal State Budgetary Institution «Scientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Products» of the Ministry of Health of the Russian Federation, Moscow
Abstract: The article shows possible influence influence of environmental factors in the quality of analyses performed in the Laboratory of microbiology of the Testing Centre for Evaluation of Medicinal Products Quality and the need for microbiological monitoring of clean areas and premises during the whole period of operational use. In order to assess the danger level of each source, the consideration of risk factors and criticality categories, which appear to be the basis for defining the frequency of routine monitoring in the laboratory is performed. Major risks affecting the results of microbiological studies are being assessed and the methods for managing these risks are described. It provides the data on optimizing the process of microbiological monitoring of the laboratory premises, including non-clean area.
Key words: drug quality evaluation, microbiological monitoring, risk factors.
В соответствии с современными требованиями [1] при выполнении асептических процессов на производстве или при контроле качества необходимо постоянно проводить микробиологический мониторинг, включающий исследование воздуха и чистоту рабочих поверхностей. Наряду с этим, в соответствии с МУК 4.2.734-99 [2] и утвержденными стандартными операционными процедурами (СОП), микробиологический мониторинг окружающей лабораторной среды охватывает: оценку качества воды очищенной; тестирование эффективности дезинфектантов; подтверждение качества стерилизации. Текущий мониторинг чистых помещений и чистых зон проводится в период их эксплуатации. Точки отбора проб выбираются на основе анализа рисков и результатов, полученных при классификации чистых помещений. Исследования, связанные с мониторингом, выполняются с такой частотой и при таком объеме отбираемых проб, чтобы можно было зафиксировать изменения уровня контаминации [1].
В соответствии с указанными положениями в лаборатории микробиологии Испытательного центра экспертизы качества ЛС (ИЦЭКЛС) проводится ми-
кробиологический мониторинг, в программу которого включают следующее:
■ определение ответственных исполнителей и контролирующего лица;
■ выбор адекватных методов анализа в соответствии с процедурой микробиологического мониторинга, описанной в рабочей инструкции;
■ использование только откалиброванного оборудования и приборов, прошедших метрологическую аттестацию;
■ установление допустимых пределов, уровней тревоги и действия;
■ регистрацию полученных результатов в утвержденных протоколах, а в случае превышения установленных верхних пределов, проведение расследования и выполнение корректирующих мероприятий.
Целью настоящей работы является определение влияния окружающих факторов на качество анализов, выполняемых в лаборатории микробиологии, для постоянной гарантии стабильности асептических условий, выявления начальных отклонений и выработки корректирующих действий до возникновения ситуаций, приводящих к появлению ложных результатов.
Таблица 1
КЛАССИФИКАЦИЯ ФАКТОРОВ РИСКА
Вероятность загрязнения ЛС (фактор А) Легкость переноса (фактор В) Близость к критическому участку (фактор С) Эффективность мер защиты (фактор D)
Баллы Характеристика Баллы Характеристика Баллы Характеристика Баллы Характеристика
0 Нет 0 Нет 0 Наружный коридор 0 Защитный барьер (изолирующая технология)
0,5 Очень низкая 0,5 Очень низкая 0,5 Воздушный шлюз, внутренний коридор 0,5 Очень хорошая защита
1 Низкая 1 Низкая 1 Периферия чистого помещения 1 Хорошая защита
1,5 Средняя 1,5 Средняя 1,5 Основная площадь чистого помещения 1,5 Частичная защита
2 Высокая 2 Высокая 2 Критический участок 2 Отсутствие защиты
Категории критичности:
1 категория — уровень риска от 4 баллов и выше (мониторинг выполняется в процессе работы)
2 категория — уровень риска от 2 до 3,5 баллов (мониторинг выполняется ежемесячно)
3 категория — уровень риска от 0 до 1,5 баллов (мониторинг выполняется 1 раз в 6 месяцев)
Для оценки степени опасности каждого источника следует рассмотреть определенные факторы риска (таблица 1). При этом необходимо учитывать их потенциальное влияние на получаемый результат. К факторам риска относятся: А—вероятность загрязнения продукта, В — легкость переноса, С — близость к критическому участку, D — эффективность мер защиты.
С учетом всех имеющихся рабочих помещений лаборатории микробиологии был проведен анализ влияния указанных факторов на выполняемые процедуры и определены уровни риска, которые представлены в таблице 2.
В помещениях лаборатории сотрудники выполняют испытания различных лекарственных средств по показателям «Микробиологическая чистота», «Стерильность», проводят исследование образцов на наличие антимикробного действия в условиях испытания препаратов по указанным показателям.
На рис. 1—3 представлены схемы проведения рассматриваемых испытаний.
На основании анализа трех блок-схем основных процедур при испытании качества ЛС по микробиологическим показателям проведена оценка приоритета возможных рисков получения ложных результатов.
Основные ошибки, приведенные в таблице 3, могут возникнуть в процессе приготовления питательных сред и используемых растворов, при отборе проб для испытания и разведении образцов, при посеве и инкубации питательных сред.
Полученные данные, представленные в таблице 3, позволяют расположить возможные риски в порядке увеличения степени их возможного влияния на результат анализа.
Таким образом, основными рисками, оказывающими влияние на результаты микробиологического Рис. 1. Блок-схема проведения анализа по показателю
«Микробиологическая чистота»
1} Схема определения антимикробного действия приведена на рисунке 3.
ЭКСПЕРТИЗА ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ
ЭКСПЕРТИЗА ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ
Ведомости НЦЭСМП
Таблица 2
ОПРЕДЕЛЕНИЕ УРОВНЯ РИСКА В РАЗЛИЧНЫХ ПОМЕЩЕНИЯХ ЛАБОРАТОРИИ МИКРОБИОЛОГИИ
Наименование и назначение помещения Факторы риска и их описание п о о § в | £ ю ее § і £ 1 Категория критичности
А В С D
1 2 3 4 5 6 7
Средоварочная, стерилизационная (Приготовление питательных сред, стерилизация материалов) 0 (Риск загрязнения отсутствует. Нет контакта с ЛС) 0,5 (Очень низкая вероятность переноса микроорганизмов) 0,5 (Воздушный шлюз) 0 (Защитный барьер - шлюз) 1 3
Моечная (Обработка посуды, стерилизация посуды) 0 (Риск загрязнения отсутствует. Нет контакта с ЛС) 0,5 (Очень низкая вероятность переноса микроорганизмов) 0,5 (Воздушный шлюз) 0 (Передаточные окна) 1 3
Автоклавная (Дезинтеграция инфицированных материалов) 0 (Риск загрязнения отсутствует. Нет контакта с ЛС) 0,5 (Очень низкая вероятность контаминации. От боксовых помещений отделяет коридор) 0,5 (Внутренний коридор) 1 (Передаточные окна, внутренний коридор) 1 3
Термостатная, учет результатов (Инкубация посевов, учет результатов, микроскопия, идентификация) 0,5 (Вероятность контаминации очень низкая.) 0 (Вероятность переноса отсутствует.) 0,5 (Внутренний коридор) 0,5 (Внутренний коридор) 1,5 3
Бокс для определения микробиологической чистоты 2 (Вероятность контаминации очень высокая. Контакт с ЛС и материалами) 2 (Высокая вероятность переноса) 2 (Критический участок) 1,5 (Ламинарный шкаф) 7,5 1
Бокс для определения стерильности ЛС (Проведение анализа стерильности ЛС) 2 (Вероятность контаминации очень высокая. Контакт с образцами.) 2 (Высокая вероятность переноса) 2 (Критический участок) 1,5 (Ламинарный шкаф, повышенное давление) 7,5 1
Бокс для работы с микроорганизмами (Определение антимикробного действия ЛС, работа тест-штаммами) 2 (Вероятность контаминации очень высокая. Работа с ЛС и микроорганизмами) 2 (Высокая вероятность переноса) 2 (Критический участок) 1,5 (Ламинарный шкаф) 7,5 1
Предбоксник бокса для определения стерильности (Перемещение ЛС и материалов, термоста-тирование посевов) 0,5 (Очень низкая вероятность контаминации. Материалы во вторичной упаковке) 1,5 (Средняя вероятность переноса) 1 (Периферия чистого помещения) 0,5 (Пониженное давление) 3,5 2
Предбоксник бокса для работы с микроорганизмами (Перемещение ЛС и материалов) 1 (Низкая вероятность контаминации. Материалы в упаковке) 1 (Низкая вероятность переноса) 0,5 (Периферия грязного помещения) 1 (Повышенное давление) 3,5 2
Внутренний коридор между боксами (Перемещение ЛС и материалов) 1 (Низкая вероятность контаминации. Материалы в упаковке) 1 (Низкая вероятность переноса) 0,5 (Внутренний коридор) 1 (От боксов отделяют Предбоксники) 3,5 2
Окончание таблицы 2
1 2 3 4 5 6 7
Шлюз (Переход персонала) 1 (Низкая вероятность контаминации). 1 (Низкая вероятность переноса) 0,5 (Воздушный шлюз) 0,5 (От боксов отделяет коридор и предбоксники) 3 3
Передаточные окна (Перемещение ЛС и материалов) 1 (Низкая вероятность контаминации. Материалы во вторичной упаковке) 0,5 (Очень низкая вероятность переноса микроорганизмов. От боксов отделяет коридор) 0,5 (Воздушный шлюз) 0,5 (От боксов отделяет коридор и предбоксники) 1,5 3
Коридор наружный (Перемещение ЛС и материалов, переход персонала) 0 (Риск контаминации отсутствует. ЛС в упаковке) 0,5 (Очень низкая вероятность переноса микроорганизмов. От грязной зоны отделяют шлюз, передаточные окна) 0 (Воздушный шлюз) 0 (От боксов отделяет шлюз и передаточные окна) 0,5 3
Офисное помещение (Размещение персона- 0 (Риск контаминации 0 (Перенос невозможен. От зоны отделяют 2 0 (Наружный 0 (От зоны отделя- 0 3
ла, прием ЛС) отсутствует. ЛС в упаковке) коридора, шлюз, передаточные окна) коридор) ют 2 коридора)
Таблица 3
ОЦЕНКА ПРИОРИТЕТА РИСКОВ В СООТВЕТСТВИИ СО СХЕМАМИ ИСПЫТАНИЯ ЛС ПО МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИМ ПОКАЗАТЕЛЯМ [3]
.ОІ „В ^ В Операция Возможная ошибка Вероятность необнаружения Степень влияния Вероятность возникновения Приоритет риска
[1] [2] [3] [4] [5] [6] [7]=[4]х[5]х[6]
Приготовление питательных сред, Отсутствие калибровки весов 1 3 1 3
1 Отсутствие калибровки рН-метра 1 3 1 3
растворов Ошибка в процессе стерилизации 1 6 5 30
2 Перемещение Неэффективность бактерицидных ламп 3 1 1 3
в чистую зону в передаточных окнах
Отсутствие калибровки весов 1 1 1 1
Нестерильность посуды 5 5 3 75
3 Отбор пробы Воздух 4 5 6 120
Рабочие поверхности 5 4 4 80
Персонал 4 5 6 120
Нестерильность посуды 5 5 3 75
4 Разведение образца Персонал 4 5 6 120
Воздух 4 5 6 120
Нестерильность разбавителя 4 6 4 96
Нестерильность посуды 5 5 3 75
5 Посев на питательные Персонал 4 5 6 120
среды Воздух 4 5 6 120
Нестерильность питательных сред 4 7 4 120
6 Инкубация Ошибки в работе термостата 3 5 3 45
7 Дезинтеграция Ошибки в работе автоклава 1 6 5 30
ЭКСПЕРТИЗА ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ
ЭКСПЕРТИЗА ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ
Ведомости НЦЭСМП
Рис. 2. Блок-схема проведения анализа по показателю Рис. 3. Блок-схема процедуры определения антимикробного
«Стерильность» действия
Таблица 4
УПРАВЛЕНИЕ ПРИОРИТЕТНЫМИ РИСКАМИ,
ВЛИЯЮЩИМИ НА РЕЗУЛЬТАТЫ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ
№ п/п Риск Выявляемое несоответствие Контроль Способы устранения
Мониторинг по контрольным точкам:
Превышенное содержа- 1. стол весовой; Фильтры НЕРА;
1 Воздух ние микроорганизмов- 2. ламинарный шкаф; бактерицидные
контаминантов 3. отбор проб воздуха аспирационным методом. лампы
Микроорганизмы- Обработка рук,
2 Персонал контаминанты на одежде, руках персонала Смывы с рук или отпечатки. перчаток антисептическим раствором
3 Поверхности Превышенное содержание микроорганизмов на рабочих поверхностях Смывы, отпечатки в контрольных точках: стол; ламинарный шкаф. Обработка раствором спирта этилового 70 %.
Правильность Ошибки при работе стери- 1. Контроль процесса стерилизации с Использование
4 работы стерилиза- лизатора: помощью индикаторов. передаточных окон
ционного оборудо- несоответствующие темпе- 2. Проверка стерильности питатель- при перемещении
вания ратура, время стерилизации ных сред и растворов. питательных сред
5 Правильность работы инкубаторов Непостоянность температуры инкубации Аттестация оборудования по утвержденному плану. Контроль температуры два раза в день. Обработка раствором спирта этилового 70 %
Таблица 5
ПРЕДЕЛЫ ДОПУСТИМОЙ МИКРОБНОЙ КОНТАМИНАЦИИ [4]
Класс чистоты Воздух, КОЕ/м3 Пластины диаметром 90 мм, КОЕ/4 часа Пластины диаметром 55 мм, КОЕ/пластина 5 пальцев, КОЕ/перчатка
А <1 <1 <1 <1
В 10 5 5 5
С 100 50 25 -
D 200 100 50 -
При управлении рисками в ходе проведения микробиологического мониторинга существенную роль играет класс чистоты помещения, определенный в ходе аттестации, проводимой в установленном порядке аккредитованной организацией. Класс чистоты согласно существующим отечественным и зарубежным требованиям определяется количеством частиц и микроорганизмов в 1 м3 воздуха. Пределы содержания частиц в оснащенном и эксплуатируемом состояниях различны, а нормы содержания микроорганизмов установлены только для эксплуатируемого состояния лаборатории. Микробиологический мониторинг в оснащенном состоянии может проводиться в рамках валидации чистых помещений [4].
Нормативные требования к качеству производственной среды в зависимости от класса чистоты приведены в таблице 5.
По результатам мониторинга микроорганизмов устанавливаются уровень тревоги и уровень действия [1]. Уровень тревоги — значение, предупре-
ЛИТЕРАТУРА
1. Правила организации производства и контроля качества лекарственных средств (утв. приказом Министерства промышленности и торговли РФ от 14 июня 2013 г № 961) [электронный ресурс] - и^: http://www.consultant.ru/document/ cons_doc_LAW_152004/
2. МУК 4.2.734-99 Микробиологический мониторинг производственной среды. Методические указания. - М: Минздрав России, 1999.
ждающее о том, что результат в данной точке хуже обычного и может достичь уровня действия. Уровень действия — значение, превышение которого должно вызвать незамедлительную ответную реакцию.
В лаборатории микробиологии ИЦЭКЛС рассматриваемые вопросы решались еще на стадии создания лаборатории. В реализованном проекте предусмотрена организация движения материальных и воздушных потоков, исключающая разнонаправленные потоки в критических зонах.
Таким образом, анализ рисков позволяет установить особенности микробиологического мониторинга для конкретных помещений лаборатории микробиологии и определить критические точки для отбора проб. На основе анализа рисков проводится оптимизация процесса мониторинга всех помещений лаборатории, в том числе не относящихся к чистой зоне. Это служит важной ступенью при разработке СОП и является частью системы менеджмента качества.
3. ГОСТ Р 51901.12-2007 (МЭК 60812:2006) Менеджмент риска.
Метод анализа видов и последствий отказов. - М.: Стандартинформ, 2008.
4. Гаклова Я. Микробиологический мониторинг [электронный ресурс] и^: http://favea.org/
ЭКСПЕРТИЗА ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ
