Микробиологический контроль течения экспериментального перитонита Текст научной статьи по специальности «Клиническая медицина»

eases. // Am. Ophthalmol. Soc. — 2005. — Vol. 103. — P. 592-613.

9. Dreyer E.B. Greater sensitivity of larger retinal ganglion cells to NMDA —medical cell death // J. Glaucoma. — 1998. — Vol. 7(1). — P. 62-67.

10. Harris A., Shoemaker J.A., et al. The practical clinical appraisal of the optic disk in glaucoma // J. Glaucoma. — 1995. — Vol. 4. — P. 36-40.

11. Neufeld A. Nitric Oxide: a potentional mediator of reti-

nal ganglion cell damage in glaucoma // Surv. of Ophthalmol. — 1999. — Vol.43 (Suppl.). — P. 129-137.

12. Osborn N., Wood J., Chidlow G. Ganglion cell death in glaucoma: what we really know?// British J. Ophthalmol. — 1999. — Vol.83, №8. — P. 980-986.

13. Yorio T., Krishnamoorthy R., Prasanna G. Characterization of transformed rat retinal ganglion cell line. // Journal of Glaucoma. — 2002. — Vol.11. — P. 259-270.

Информация об авторах: Цыбиков Намжил Нанзатович — заведующий кафедрой, профессор, д.м.н., 672090, г. Чита, ул. Горького, 39а, ЧГМА, e-mail: [email protected], Юдина Надежда Александровна — аспирант, e-mail: [email protected]

© КОВАЛЬ Е.В., ЛЕПЕХОВА С.А., ГОЛЬДБЕРГ О.А., ПРОКОПЬЕВ М.В., АХМЕДОВ А.Е., КОЛМАКОВ С.А. — 2012 УДК 616.381-002-092.4

МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЙ КОНТРОЛЬ ТЕЧЕНИЯ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО ПЕРИТОНИТА

Елена Владимировна Коваль1, Светлана Александровна Лепехова1,2,3, Сергей Александрович Колмаков4, Олег Аронович Гольдберг1, Максим Владимирович Прокопьев1, Артур Евгеньевич Ахмедов1 ('Научный центр реконструктивной и восстановительной хирургии СО РАМН, директор — член-корр. РАМН,

д.м.н., проф. Е.Г. Григорьев; 2Иркутский государственный медицинский университет, ректор — д.м.н., проф.

И.В. Малов; 3 ИНЦ РАН, председатель президиума — акад. РАН И.В. Бычков;

4Клиническая больница №1 г. Иркутска, гл. врач — Л.А. Павлюк)

Резюме. Работа посвящена оценке бактериальной обсемененности живота при моделировании у крыс распространенного гнойного перитонита введением микста Ps. aeruginosae и E. coli (О151) в количестве 109 микробных частиц. В исследование включены результаты, полученные от выживших животных, проанализированы бактериологические исследования экссудата, брюшины, печени, лёгких. Установлено, что у всех выживших животных количество микроорганизмов снижалось в динамике исследования, в перитонеальном экссудате преобладал рост Ps. aeruginosa, в печени степень роста микробов была одинаковой с тенденцией к доминированию E. coli к шестым суткам исследования, в лёгких доминирующим видом на протяжении всего эксперимента была E. coli.

Ключевые слова: распространенный перитонит, эксперимент, микробиология.

MICROBIOLOGICAL CONTROL OF EXPERIMENTAL PERITONITIS

Elena Vladimirovna Koval1, Svetlana Aleksandrovna Lepekhova1,2,3, Sergey Aleksandrovich Kolmakov4, Oleg Aronovich Goldberg1, Maksim Vladimirovich Prokopiev1, Artur Yevgenievich Akhmedov1 (' Scientific Center of Reconstructive and Restorative Surgery SB RAMS Irkutsk State Medical University, Irkutsk Scientific Center of RAS, Irkutsk Clinical Hospital N 1)

Resume. The work is devoted to evaluation of bacterial contamination of abdomen in rats with disseminated purulent peritonitis experimentally modelled by introduction of bacterial mixture Ps. aeruginosae and E. coli (О151) in amount of 109 microbial units. The research included the results of examination of survived animals. We analysed the bacterial study of exudate, abdomen, liver, and lungs. It has been established that in all survived animals the quantity of microorganisms reduced in dynamics of the research. In peritoneal exudate growth of Ps. aeruginosa prevailed, in liver the degree of microbial growth remained the same with tendency to E. coli's domination by the 6th day of the study, and during all experiment the dominant species in lungs was E. coli.

Key words: disseminated peritonitis, experiment, microbiology.

Проблема эффективного лечения распространенного гнойного перитонита остается актуальной и в XXI веке. Только в России ежегодно оперируют более 300 000 больных с острыми хирургическими заболеваниями органов брюшной полости. В 15-25% течение ургентных хирургических заболеваний живота осложняется перитонитом [2, 3, 4, 6].

Несмотря на определенный прогресс в лечении гнойных заболеваний живота, частота послеоперационных осложнений при распространенном гнойном перитоните по-прежнему достаточно высока. Летальность при распространенном гнойном перитоните колеблется от 10 до 60%, а при госпитальном перитоните может достигать 90% [1, 2, 3].

Для проверки новых способов лечения распространенного гнойного перитонита используют экспериментальные модели. Важную роль в оценке тяжести течения моделированного распространенного гнойного перитонита играет микробиологический контроль.

Целью нашего исследования явилась оценка бактериальной обсемененности живота при моделировании

распространенного гнойного перитонита введением микста микробных тел.

Материалы и методы

Работа выполнена на базе научного отдела экспериментальной хирургии с виварием и лаборатории микробиологии и гемостаза ФГБУ «НЦРВХ» СО РАМН (вет. удостоверение 238 №0000023 от 28.11.2011 г., служба ветеринарии Иркутской области) с использованием лабораторных животных крыс-самцов породы Wistar, массой 200-250 г, в возрасте не менее 6 месяцев.

Опыты на животных выполнялись в соответствии с правилами лабораторной практики (GLP), приказ №708н от 23.08.2010 г. «Об утверждении правил лабораторной практики»; правилами гуманного обращения с животными, которые регламентированы «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных», утвержденных Приказом МЗ СССР №742 от 13.11.1984 г. «Об утверждении правил про-

Таблица 1

Количество микроорганизмов в тканях экспериментальных животных (медиана, квартили)

Результаты и обсуждение

Сутки исследования Количество микроорганизмов, Lg (КОЕ/г ткани)

Экссудат Брюшина Печень Легкое

2 7,0 (7,0-7,0) 6,0 (6,0-6,0) 6,0 (5,0-6,0) 5,0 (4,0-6,0)

4 6,0 (6,0-7,0) 5,0 (5,0-6,0) 4,0 (4,0-5,0) p<0,05 4,0 (3,0-5,0)

6 4,0 (3,0-4,0) p<0,01 4,0 (3,0-4,0) p<0,01 3,0 (0-3,0) p<0,01 p<0,01

Примечание: p — статистическая значимость различий по сравнению со вторыми сутками.

ведения работ с использованием экспериментальных животных» и №48 от 23.01.1985 г. «О контроле за проведением работ с использованием экспериментальных животных», а также основывались на положениях Хельсинской Декларации Всемирной Медицинской Ассоциации. Все оперативные вмешательства проводили в стерильных условиях под наркозом.

У экспериментальных крыс моделировали распространенный гнойный перитонит. Моделирование распространенного гнойного перитонита выполняли путем внутрибрюшинного заражения микстом штаммов Ps. aeruginosae 1,0 мл и E. coli (О151) 1,0 мл в количестве 109 микробных частиц, посредством внесения взвеси микробов через срединную лапаротомию с равномерным распределением инфекта по всем отделам брюшной полости путем пальцевой ревизии (1994) [7]. Рану живота закрывали брюшинно-апоневротическими и кожными швами.

Штаммы Ps. aeruginosae и E. coli (О151), полученные от больных центра хирургической инфекции Областной клинической больницы г. Иркутска, сохранялись на твердых питательных средах с периодическим пассированием на средах обогащения. Требуемую дозу микробов готовили путем смыва суточной культуры возбудителей с твердой питательной среды. Методом титрования полученной взвеси по стандарту мутности (институт стандартизации и контроля биологических препаратов им. Л.А. Тарасевича, г. Москва), получали 109 микробных тел в 1 мл взвеси. Взвесь обеих культур смешивали непосредственно перед введением в брюшную полость. Животным вводили 109 микробных единиц каждой культуры в смеси (1 мл E. coli + 1 мл Ps. aeruginosae).

Для качественной и количественной оценки вводимого инфекта, у всех экспериментальных крыс выполняли забор 1 мл экссудата из брюшной полости, 1 г брюшины передней брюшной стенки, 1 г печени, 1 г легкого на 2, 4, 6 сутки опыта. Образцы помещались в пробирки с виноградно-сахарным бульоном. Пересев на твердые среды (среда Эндо, 5% кровяной агар, жел-точно-солевой агар) осуществляли стандартной петлей методом секторных посевов (метод Gould в модификации Рябинского-Родомана) [5], не позднее 3 ч с момента забора. Чашки инкубировались при температуре 37° С в течение 18-24 ч, после чего подсчитывали число колоний, выросших в разных секторах.

Все полученные данные анализировались методами математической статистики. Оценка характера распределения производилась по тестам на нормальность Shapiro-Wilk, Комогорова-Смирнова и Lilliefors. Ненормальным считали распределение, при котором по одному из указанных тестов имелись статистически значимые отличия (р<0,05) от нормального распределения. При ненормальном распределении показатели приведены в значении медианы и квартилей. Относительные величины приводили с указанием величины процента Sp. Для установления значимости различий между показателями применяли критерий Mann-Whitney.

В исследование включены результаты, полученные от выживших животных, проанализированы бактериологические исследования экссудата, брюшины, печени, лёгких. Оценка количественного характера вегетиру-ющих микроорганизмов представлена в таблице 1.

У всех животных выявлено наличие распространенного гнойного процесса в брюшной полости. На 2-е сутки максимальное количество микробов выявляли в экссудате, минимальное в легких. К четвертым суткам выявляли тенденцию к снижению количества вегетиру-ющих микроорганизмов в экссудате, брюшине и легких, а в печени показано существенное снижение по сравнению со 2-ми сутками ^=0,0420). К 6-му дню минимальное количество микробов за весь период исследования выявляли в перитонеальном экссудате, брюшине, печени, отметим, что в легких роста не выявлено.

Далее рассмотрим закономерности качественного характера микроорганизмов. Результаты оценки качественного характера вегетирующих микроорганизмов (вид ведущего микроорганизма) представлены в таблицах 2-5.

Таблица 2

Видовой состав микроорганизмов в экссудате

Сутки исследования Преобладание Ps. aeruginosa Преобладание E.coli Поровну

2 6 (85,7±13,2%) p < 0,01 1 (14,3±13,2%) 0

4 4 (66,7±19,2%) p < 0,01 2 (33,3±19,2%) 0

6 3 (80,0±8,4%) p < 0,01 1 (13,3±8,4%) 1 (7,7±1,2%)

Примечание: p — статистическая значимость различий по сравнению с показателем роста E.coli.

На вторые сутки исследования вид доминирующего микроорганизма перитонеального экссудата был представлен существенным доминированием Ps. aeruginosa в большинстве случаев, в течение всего исследования, однако следует отметить увеличение степени роста E. coli (p<0,05) на 4-е сутки исследования. Выявленная тенденция преобладания Ps. aeruginosa сохранялась до 6-х суток исследования, однако у одного животного было выявлено равное количество степени роста микроорганизмов.

В брюшине вид доминирующего микроорганизма является также Ps. aeruginosa (p<0,01), высокий показатель роста отмечали в динамике всего исследования, к шестым суткам в брюшине отмечали рост только Ps. aeruginosa.

Таблица 3

Видовой состав микроорганизмов в брюшине

Сутки исследования Преобладание Ps. aeruginosa Преобладание E.coli Поровну

2 5 (71,4±11,1 %) p < 0,01 1 (28,6±11,1 %) 0

4 4 (83,3±10,2 %) p < 0,01 1 (16,7±10,2 %) 0

6 4 (100 %) p=0,0001 0

Примечание: р — статистическая значимость различий по сравнению с показателем роста E.coli.

На вторые сутки исследования, степень роста микроорганизмов в печени существенно не отличается, подобная тенденция была выявлена и на четвертые сутки. К шестым суткам отмечали существенное преобладание в печени роста E. coli (p = 0,0015).

Примечание: p — статистическая значимость различий по сравнению с показателем роста E.coli.

В тканях легких на 2-е сутки E. coli доминирует (p=0,002), на четвертые сутки роста Ps. aeruginosa не выявлено. К шестым суткам выявляли рост E. coli у одного животного менее 103 .

Таблица 5

Видовой состав микроорганизмов в ткани легкого

Полученные результаты показали, что у всех выживших животных количество микроорганизмов снижалось в динамике исследования, в перитонеальном экссудате преобладал рост Ps. aeruginosa, в печени степень роста микробов была одинаковой с тенденцией к доминированию E. coli к шестым суткам исследования,

в лёгких доминирующим видом на протяжении всего эксперимента была E. coli.

ЛИТЕРАТУРА

1. Будашеев В.П. К вопросу о моделировании острого экспериментального перитонита // Бюллетень ВСНЦ СО РАМН. — 2003. — № 5. — С. 138-139.

2. Гельфанд Б.Р., Ерюхин И.А., Шляпников С.А. Хирургические инфекции. — СПб.: Питер, 2003. — 117 с.

3. Григорьев Е.Г., Коган А.С. Хирургия тяжелых гнойных процессов. — Новосибирск: Наука, 2000. — 313 с.

4. Иванов И.В., Лепехова С.А., Зарицкая Л.В. и др. Липидтранспортная система у больных с гнойной висцеральной патологией // Сибирский медицинский журнал (Иркутск). — 2009. — №7. — С. 95-97.

5. Медицинская микробиология / Под ред.

B.И. Покровского. — М.: ГЭОТАР Медицина, 1998. — 1200 с.

6. Тарасенко В.С., Кретинин С.В., Фадеев С.Б. и др. Применение комбинации окситоцина и цефотаксима в лечении экспериментального сепсиса // Хирург. — 2008. — № 8. —

C. 11-15.

7. Хирургия перитонита, панкреонекроза, несформи-рованных кишечных свищей: Сб. науч. статей. — Иркутск, 1994. — 237 с.

Информация об авторах: Лепехова Светлана Александровна — д.б.н., заведующая научным отделом, главный научный сотрудник, ассистент кафедры, 664079 г. Иркутск, м/р Юбилейный, 100, тел. (3952) 409767; Коваль Елена Владимировна — младший научный сотрудник; Гольдберг Олег Аронович — к.м.н.,

ведущий научный сотрудник; Прокопьев Максим Владимирович — к.м.н., старший научный сотрудник; Колмаков Сергей Александрович — к.м.н., заведующий отделением; Ахмедов Артур Евгеньевич — младший научный сотрудник.

Таблица 4

Видовой состав микроорганизмов в печени

Сутки исследования Преобладание Ps. aeruginosa Преобладание E. coli Поровну

2 3 (42,9±8,7%) 3 (42,9±8,7%) 1 (14,3±3,2%)

4 2 (33,3±19,2%) 2 (33,3±19,2%) 2 (33,3±9,2%)

6 1 (16,7±15,2%) p = 0,0015 2 (66,7±15,2%) 1 (16,7±5,2%)

Сутки исследования Преобладание Ps. aeruginosa Преобладание E.coli Поровну

2 1 (14,3±13,2%) p=0,002 5 (71,4±17,1%) 1 (14,3±13,2%)

4 0 p=0,0001 4 (100%) 0

6 0 0

Примечание: р — статистическая значимость различий по сравнению с показателем роста Б.соН.

© ЕГОРОВА Е.В., ЦЫБИКОВ Н.Н., ПЕРЕСТОРОНИН В.И. — 2012 УДК: 616.211 — 002.2 : 616.216.1 — 002

СОДЕРЖАНИЕ А — ДЕФЕНЗИНОВ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ И НАЗАЛЬНОМ СЕКРЕТЕ У ЗДОРОВЫХ И БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМ ГНОЙНЫМ РИНОСИНУСИТОМ

Елена Владимировна Егорова, Намжил Нанзатович Цыбиков, Владимир Игоревич Пересторонин (Читинская государственная медицинская академия, ректор — д.м.н., проф. А.В. Говорин)

Резюме. У здоровых и больных хроническим гнойным риносинуситом (ХГРС) исследовали концентрацию а-дефензинов (HNP1-3) в сыворотке крови и назальном секрете. Показано, что у больных ХГРС нарастает уровень HNP1-3 в сыворотке крови и носовом секрете. Концентрация а-дефензинов в сыворотке крови повышается в 2 раза, а в назальном секрете — в 2,3 раза по сравнению со здоровыми.

Ключевые слова: хронический гнойный риносинусит, а-дефензины.

THE CONTENT OF A-DEFENSINS IN BLOOD SERUM AND NASAL SECRETION IN HEALTHY PEOPLE AND IN PATIENTS WITH CHRONIC PURULENT RHINOSINUSITIS

E.V. Egorova, N.N. Tsibikov, V.I. Perestoronin (Chita State Medical Academy)

Summary. The concentration of а-defensins (HNP1-3) in blood serum and nasal secretion has been investigated in healthy people and patients with chronic purulent rhinosinusitis (CPRS). It has been shown that in patients with CPRS the level of HNP1-3 increases in blood serum and nasal secretion. The concentration of а-defensins in blood serum two times increases and in nasal secretion — 2,3 times, as compared with healthy people.

Key words: chronic purulent rhinosinusitis, a-defensins.

Хронический гнойный риносинусит (ХГРС) в настоящее время является неразрешенной проблемой оториноларингологии. Несмотря на максимальное врачебное вмешательство, это заболевание имеет персистирующее и рецидивирующее течение [4, 10]. Одной из причин такого состояния может быть повышение резистентности микроорганизмов при бесконтрольном и длительном применении антибиотиков [7, 9].

Известно, что а-дефензины (НЫР1-3) выделяются из азурофильных гранул нейтрофилов при инфекции и определяют в основном развитие системного воспалительного ответа. Показано, что эти катионные пептиды активируют миграцию и фагоцитоз нейтрофилов и макрофагов, а так же увеличивают проницаемость сосудов [5]. НЫР1-3 проявляют также хемотаксическую, иммуномодулирующую и цитотоксическую активность