CC BY
96
УДК 615.3:616-022
Е. Ф. Семенова, В. Л. Мельников, Е. В. Преснякова, Н. Г. Жукова, Г. А. Осадча, Т. М. Фадеева, И. А. Вилкова, Н. А. Морозкина, Н. Н. Митрофанова, Н. А. Правосудова, Е. Е. Митина
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ СЕМЯН И ПЛОДОВ НЕКОТОРЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ КУЛЬТУР
С использованием микробиологического и фитопатологического мониторинга катрана абиссинского, рыжика обыкновенного, мака, льна культурного определены основные возбудители заболеваний в условиях Средневолжского региона. Проведена сравнительная оценка способов поверхностной стерилизации плодов и семян лекарственных культур для последующего скрининга патогенов. Исследованы макро- и микроморфологические особенности идентифицированных микроорганизмов в условиях in vitro.
Введение
Натуральные продукты лечебного действия наиболее полно отвечают требованиям современной медицины. Воздействие на организм природных веществ, участвующих в качестве естественных агентов в обмене веществ и проявляющих поливалентное действие, практически исключает риск возникновения побочных явлений, вероятность которых при использовании химического синтеза на пути изготовления препаратов резко увеличивается [1-3].
Одним из факторов, ограничивающим использование лекарств на основе растительного сырья, является возможная патогенность микроорганизмов, входящих в состав транзиторной и резидентной микрофлоры лекарственных культур. Определенную опасность могут представлять вирусы, прионы, бактерии, актиномицеты, дрожжи, грибы и продукты их жизнедеятельности (экзотоксины, органические кислоты, гидролитические ферменты и т.п.). Микробиологические воздействия способны вызвать у человека заболевания, состояния носи-тельства заболеваний, интоксикацию, сенсибилизацию организма; например, для микромицетов известны случаи бронхолегочного аспергиллеза, кандидозов слизистых оболочек, грибковой аллергии, микотоксикозов и т.д. [4-6]. Не вызывает сомнения, что регуляция экспрессии патогенности не имеет каких-либо специфических механизмов [7]. Патогенность микроорганизмов во многом реализуется через белковые молекулы (ферменты, токсины и т.д.), проявляющие функциональную активность вне микробной клетки.
В настоящее время неизмеримо возросла актуальность использования лекарственных растений и фитопрепаратов в качестве полифункциональных средств (табл. 1) [1, 8-12].
В связи с этим в последние годы значительно возрос интерес к фитопатогенным микроорганизмам - возбудителям микозов, актиномикозов и бактериозов растений - как возможным этиологическим факторам заболеваний человека. Традиционно принято считать, что фитопатогены не способны оказывать болезнетворного действия по отношению к человеку. Однако результаты зарубежных исследований ставят под сомнение данное утверждение [13, 14]. Были получены данные о возникновении заболеваний с характерными клиническими проявлениями (кератит, феогифомикоз, синусит, гепатит, перитонит) при инфицировании такими патогенами, как Alternaria alternata, Colletotrichum coc-codes, Pythium insidiosum, видами родов Aspergillus, Fusarium и др. (табл. 2).
Таблица 1
Краткая фармакогностическая характеристика изучаемых лекарственных видов
Лекарственная культура Химический состав Применение в медицине
СгатЬе abyssinica Но^1 (катран абиссинский) Плоды и семена: в масле из семян содержится стеариновая, олеиновая, линоленовая, линолевая, пальмитиновая, арахиновая, эру-ковая жирные кислоты и др. Способствует заживлению язвы двенадцатиперстной кишки, применяется при лечении гастрита, в качестве антисклеротического средства и средства от чесотки
Сате1та sativa Ь. (рыжик посевной или р. обыкновенный) Семена: в масле содержится пальмитиновая, стеариновая, олеиновая, линолевая, линоленовая, ара-хиновая, эруковая, бегеновая, ми-ристиновая жирные кислоты и др.; каротиноиды, токоферолы, фитостероиды Применяются в качестве антисклеротического и общеукрепляющего средства, способствуют улучшению аппетита и процессов пищеварения
Papaver rhoeas Ь. (мак самосейка) Семена: реадин, протопин, папа-веррубин А, В, С, Б, Е, реагенин, изореагенин, изореадин, аллокриптопин, коридин, стилопин, изокоридин, берберин и другие алкалоиды; ситостерин, высшие алифатические спирты и жирные кислоты, антоцианы, пектин, соли железа и магния, витамин Е Обладают легким снотворным, обезболивающим, смягчающим, отхаркивающим, вяжущим, потогонным и кровоостанавливающим действием. Употребляют при лечении онкологических заболеваний органов брюшной полости, саркоме, кондиломе и др.
Papaver somniferum Ь. (мак снотворный) Семена: имеют в следовых количествах алкалоиды: морфин, кодеин, папаверин, наркотин, нарцеин и др.; в масле содержатся пальмитиновая, стеариновая, олеиновая, линолевая, линоленовая и другие жирные кислоты; токоферолы, фосфолипиды, стеролы (Р-ситостерол и др.) Применяются в качестве антисклеротического средства; обладают слабым болеутоляющим, спазмолитическим, успокаивающим и противокашле-вым действием
Ьтит usitatissimum Ь. (лен культурный или л. посевной или л. обыкновенный) Семена: глицериды линолевой, линоленовой, олеиновой, пальмитиновой и стеариновой кислот, линамарин, витамин А, ферменты, белок, углеводы, слизь Обволакивающее, противовоспалительное, ранозаживляющее при ожогах и антисклеротическое средство
Таблица 2
Этиологический потенциал возбудителей микозов лекарственных культур
Лекарственная культура Патоген Заболевания человека
1 2 3
Конопля посевная, клещевина обыкновенная, кориандр посевной, левзея сафлоровидная, календула лекарственная или ноготки лекарственные АНетапа аИетай Синусит, кератомикоз, онихомикоз, феоги-фомикоз
Конопля посевная СМоБропит БрИегоБрегтит Язва роговицы, дерматиты, онихомикоз
Продолжение табл. 2
1 2 3
Валериана лекарственная, ревень дла-невидный СоПеШпсИит coccodes Кератит
Роза дамасская, р. казанлыкская, р. столистная, р. французская, шиповник собачий, ш. морщинистый СопіоШугіит Шскеііі Гепатит
Валериана лекарственная, пажитник сенной, конопля посевная, мята перечная, астрагал шерстисто-цветковый, ревень дланевидный Риєагіит єр. Кератит, перитонит
Валериана лекарственная, фенхель обыкновенный РИота єр. Феогифомикоз
Горчица сизая или г. сарептская РуШіит іп-sidiosum Талассемия, кератит
Конопля посевная, подсолнечник однолетний, клещевина обыкновенная УейісіШит єр. Кератит
Широкое распространение в природе, у животных и человека обусловливает их роль как инфекционных агентов. Ведущую роль в патогенезе заболеваний человека, вызываемых фитопатогенными грибами, в том числе и дрожжами, актиномицетами и бактериями, как правило, играют снижение иммунной защиты, наличие патологического процесса, функциональный статус человека. Он является интегральным показателем, отражающим совокупную и взаиморегулирующую деятельность всех систем и органов, обобщенным критерием адаптивных резервов организма [15].
Известно, что в качестве лекарственных средств и лекарственнотехнического сырья используются семена и плоды растений, микрофлора которых отличается морфофизиологическим разнообразием и уровнем вирулентности. При этом проблема строгой специфичности возбудителей заболеваний продолжает оставаться дискуссионной в мировой микробиологической науке. Биологическая безопасность характеризует степень защиты человеческого организма от действия микро- и макроорганизмов [16]. Она должна обеспечиваться процессом производства товаров, средствами защиты и системой профилактических мероприятий. Особенно важно это для лекарственных средств, биологически активных добавок, натуральных лечебно-косметических продуктов и т.п., и поэтому необходимо проведение комплексной микробиологической оценки различных видов лекарственного сырья.
Целью наших исследований было совершенствование методики поверхностной стерилизации семян и плодов лекарственных культур для последующего выявления патогенных микроорганизмов.
Материал и методы исследования
Объектом изучения были коллекционные образцы различного экологогеографического происхождения (Россия, Украина, Киргизия, Казахстан, Португалия, Германия, Чехословакия, Франция, Венгрия, Швеция, Канада, США, Бразилия и др.) льна культурного (Ьтит usitatissium Ь), мака (Papaver rhoeas Ь., Papaver somniferum Ь), рыжика обыкновенного (Came1ina sativa Ь.) и катрана абиссинского (Сrambe aЬyssinica Ш^1;.). Семенной материал был получен в 2002-2007 гг. в условиях опытного поля Пензенского НИИ сельского хозяйства и Ботанического сада Пензенского государственного педагогического университета им. В. Г. Белинского.
Поверхностную стерилизацию проводили в чашках Петри на основе рекомендованных методов [17, 18] с учетом упрощения, уменьшения трудоемкости процедуры и экономичности с применением 5, 10 % растворов перекиси водорода и экспозицией 10...100 мин (пять вариантов по продолжительности обработки). Образцы помещали в термостат и инкубировали при температуре 30 ± 2 °С в течение двух суток, затем при температуре 24 ± 2 °С в течение пяти-шести суток. При появлении на плодах и семенах налета готовили нативные и фиксированные препараты [19, 20] и микроскопировали с использованием микроскопа «Микмед-1». Микробиологический анализ и фитопатологическую экспертизу проводили на основе справочной литературы по идентификации патогенов [13, 14, 20-25]. Выделение в чистую культуру осуществляли на плотных питательных средах: питательном агаре (ПА), среде Эндо (СЭ), картофельном агаре (КА), агаре Сабуро (АС) - и с добавлением 1000 мг бензилпенициллина/1 л среды (АС + б/п) [19, 26]. Полученные данные статистически обрабатывали [27].
Результаты и обсуждение
Проведенный фитопатологический и микробиологический мониторинг изучаемых лекарственных культур в Среднем Поволжье (2002-2007 гг.) показал, что наиболее распространенными по сравнению с болезнями, вызываемыми другими таксономическими группами микроорганизмов, являются микозы: мучнисторосяные (класс Ascomycetes, подкласс Euascomycetidae, порядок Е^ь pha1es) и ржавчинные (класс Basidiomycetes, подкласс Te1ioЬasidiomycetidae или PhragmoЬasidiomycetidae, порядок Uredina1es) заболевания, корневые гнили (класс Ascomycetes, порядок Hypocrea1es), пятнистости (класс Oomycetes, порядок Peronospora1es; класс Ascomycetes, порядок Dothidia1es ). Например, распространенность фузариоза в среднем составила 12,4-28,1 %, степень развития 7,0-18,7 %; альтернариоза - 16,2-34,7 % и 12,5-19,1 % соответственно.
В табл. 3 отражены имеющиеся сведения по отдельным представителям микрофлоры изучаемых лекарственных культур, входящих в «Государственный реестр лекарственных средств» (2002), «Регистр лекарственных средств России» (2004).
Таблица 3
Этиологический потенциал представителей микрофлоры изучаемых эффективных лекарственных культур
Лекарственная культура Микроорганизм Заболевания человека [14]
Мак снотворный (Papaver somniferum Ь.) АІЇетагіа єр. Синусит, кератомикоз, они-хомикоз
Біроіагіє єр. Феогифомикоз
Бшагіит єр. Кератит, перитонит
Лен культурный или л. посевной или л. обыкновенный (Ьтит ш^^шт Ь.) Соі^оШсЬит єр. Кератит
Engyodontium аіЬит Кератит, абцесс мозга, пузырчатая экзема, эндокардит
РуШіит єр. Талассемия, кератит
Представленные данные не включают основных фитопатогенов указанных видов - источников лекарственного сырья. По перспективным лекарственным растениям: катрану абиссинскому Сrambe aЬyssinica Нochst., рыжику
обыкновенному СашеПпа 8айуа Ь., маку самосейке Рарауег гЬоеа8 Ь. - литературные данные, касающиеся фитопатогенов, возбудителей заболеваний человека, отсутствуют. Поэтому возникла необходимость в усовершенствовании методики поверхностной стерилизации плодов и семян применительно к изучаемым лекарственным культурам с целью получения чистых культур и идентификации патогенных микроорганизмов.
Результаты оценки эффективности поверхностной обработки плодов и семян различных лекарственных культур (табл. 4, рис. 1) свидетельствуют, что в отдельных случаях 5 % раствор перекиси водорода в условиях эксперимента стимулировал рост микроорганизмов. 10 % раствор перекиси водорода значительно снижал инфицированность семян, что позволило в последующем упростить выделение и дифференциацию культур основных патогенов. При этом следует отметить, что исходная зараженность микромицетами образцов семян изучаемых лекарственных культур достигала 54,5 %, а образцов плодов катрана была существенно выше и достигала 93,3 % (в среднем по коллекции). Уровень инфицированности колебался в широких пределах: семян рыжика - от 0 до 30 %, плодов катрана - от 3,5 до 53,6 %, что свидетельствует о разной степени устойчивости к патогенам коллекционных образцов (генотипов различного происхождения) и возможности прямого отбора иммунных форм. Кроме того, проведенная сравнительная оценка изученных вариантов поверхностной обработки семян и плодов позволила определить оптимальную продолжительность экспозиции растворами перекиси водорода, равную не менее 10, 20, 30 мин соответственно для мака, рыжика, льна и катрана; оптимальный предел инфицированности семенного материала для изоляции основных возбудителей заболеваний - до 10 %.
Таблица 4
Эффективность поверхностной стерилизации плодов и семян лекарственных культур
Название культуры Количество изученных образцов (плодов*, семян, тыс. шт.) Инфицированность, %
Исходных образцов (генотипов), среднее значение Плодов*, семян в образце, пределы варьирования после обработки (к контролю)
5 % раствором Н2О2 10 % раствором Н2О2
Пределы варьирования (по образцам) е о, н *, ьл м Л <и й -о * 1 § і се н и £ к й ааом нпе Пределы варьирования (по образцам) е о, н *, ьл м Л <и й -о * 1 § і се н и £ с щ ааом нпе
СгашЬе аЬуєєі-піса НосИє! 87* (8,7*) 3 (0,3) 91,3* 3,5...53,0* 1,0 0,0...2,0 11,0.34,0* 64,1* 0,0...7,0 350,0 0,0.20,0* 37,7* 0,0...0,0 0,0
Саше-Ііпа єаіїуа Ь. 66 (4,2) 54,5 0,0.30,0 0,0.20,0 66,7 0,0.10,0 33,3
Рарауег Лоеає Ь. 3 (1,5) 0,0 0,0...0,0 0,0...0,0 0,0 0,0...0,0 0,0
Рарауег 8отпі-1етш Ь. 18 (9,0) 50,0 0,0...0,2 0,0...0,2 100,0 0,0...0,2 100,0
Ьіпиш иєіїаіієєітит Ь. 15 (1,5) 0,0 0,0...0,0 0,0...0,0 0,0 0,0...0,0 0,0
30
25
20
15
10
к-7 к-8 к-10 к-14 к-21 к-25 к-34 к-35 к-39 к-41
а)
110
100
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
::
::
-
::
::
::
::
::
і м* Г-™ Г- нИ—.=.— г-™ я
□ 5% пероксид водорода
П 10% пероксид водорода
□ 5% пероксид водорода
□ 10% пероксид водорода
.<с? .(о3 Л?
Р / / / / / / / /
б)
Рис. 1 Инфицированность (в %%) коллекционных образцов плодов: а - катрана абиссинского; б - семян рыжика обыкновенного
5
0
С учетом выявленных оптимальных параметров обработки семян и плодов с применением микроскопического и культурального метода были изучены представители микрофлоры изучаемых лекарственных растений в ассоциативных и чистых культурах на агаризованных средах, а также на естественных субстратах (семенах и плодах). Результаты исследований представлены в табл. 5 и на рис. 2-4.
Таблица 5
Характеристика некоторых представителей микрофлоры изучаемых лекарственных культур
Микро- организм Источник выделения Микроморфология Макроморфология на
естественном субстрате агаризованной среде
1 2 3 4 5
ЛИетапа яр. Плоды катрана, семена мака Гифы септированные, от светло- до темнокоричневых. Конидии золотистокоричневые, разнообразные по форме (яйцевидные, обратно-булаво- или грушевидные с апикальным носиком или без него, с 3-8 поперечными и 1-2 продольными перегородками Пушистый или шерстистый налет от серого до светло-оливкового цвета Колонии от зеленого до черного цвета (АС); от бело-серого до оливковокоричневого цвета (КА)
НеІтіпШояро-гіит яр. (син. ВіроІагія яр.) Плоды катрана Гифы септированные, коричневые. Конидии булавовидные с 3-5 поперечными перегородками, прорастают биполярно Бархатистый налет от бурого до черного цвета Пушистые или шерстистые колонии, вначале белые, впоследствии приобретающие окраску от серой до черной (КА)
Егуяірїю яр. Плоды катрана Белые мелкие конидии эллипсоидальной формы Белый мучнистый налет Не определяли
Регопоярога яр. Плоды катрана Желтоватый дихотомически разветвленный мицелий с жировыми включениями, впоследствии приобретающий коричневый цвет. Конидии овальные Желтовато -бурые пятна, серо-фиолетовый налет Не определяли
КЬкория яр. Семена мака Мицелий дихотомически разветвлен, с утолщениями Белый паутинистый налет Не определяли
Гияагшт яр. Семена мака Гифы септированные. Споры бесцветные с несколькими поперечными перегородками Белый налет впоследствии с розоватым оттенком Колонии ватообразные, вначале белые, впоследствии слабо пигментированные кремовые или с розоватым оттенком (КА)
БсІегоІшіа яр. Семена мака Беловатый мицелий с многочисленными скле-роциями Ватообразный налет Не определяли
РепісіІІіит яр. Семена рыжика Мицелий многоклеточный, конидиеносцы имеют вид кисточек Белый налет, приобретающий сизовато-зеленую окраску Колонии вначале белые, впоследствии приобретающие серо-зеленую окраску (АС)
Окончание табл. 5
1 2 3 4 5
АярещіІІия яр. Семена мака, семена рыжика Гифы септированные, бесцветные. Конидии шарообразные от коричневого до черного цвета Пушистый или ватообразный темнеющий налет Колонии пушистые или ватообразные, вначале белые, затем становящиеся черными (КА)
РИота яр. Плоды катрана, семена рыжика Гифы септированные, от почти бесцветных до коричневых. Пикниды от шаровидных до грушевидных, тонкостенные, одиночные Светло-серый или кремовый налет Колонии шерстистые или бархатистые бежевые, оливковые или серые (АС)
СапсМа яр. Плоды катрана Псевдогифы немногочисленны, конидии округлой или овальной формы Белый или светлокремовый налет Колонии белые или кремовые, гладкие или порошащие (АС)
ХапШотопая яр. Плоды катрана Прямые грамотрицатель-ные палочки, преимущественно одиночные Желтый маслянистый налет Колонии желтого цвета, гладкие (ПА)
Рис. 2 Характер роста различных микроорганизмов на плодах и семенах в условиях влажной камеры: а - паутинистый на семенах мака; б - ватообразный и пушистый на семенах рыжика; в - белый мучнистый на плодах катрана; г - черный бархатистый на плодах катрана
ШЧР m^w m h W ' .Л1 i V: *.. **'* *** ’ 1 j* у**''" * • • |; * % • * •
ШШш ■ ibVv:- ' щ ■ ■ . Я3шр \ . , lifty -fjk* . */»' £28 - -Р J •л. \ У •Vvf* ■ *?. -
, *» уЛ ^ ti ж
1 Oft %© Л© ,Ъ Q - ¥> " Ь- и
Рис. 3 Макроморфология выделенных культур микроорганизмов на агаризованных средах: а - Alternaria sp. на КА; б - Alternaria sp. на АС+б/п; в - Bipolaris sp. на АС+б/п; г - Phoma sp. на АС+б/п; д - Аspergillus sp. на АС+б/п; е - Аspergillus sp. на ПА; ж - Candida sp. на АС; з - Xanthomonas sp. на ПА
Рис. 4 Микроморфологические особенности идентифицированных микроорганизмов в условиях in vitro: а - септированные гифы и конидии с перегородками Alternaria sp.; б - гифы Phoma sp.; в - мицелий и спорангии Rhizopus sp.; г - спорулирующий мицелий Fusarium sp.
Таким образом, основными фитопатогенами, которые могут передаваться с семенами и плодами изучаемых лекарственных культур, являются микроорганизмы родов Alternaria, Helminthosporium (Bipolaris), Erysiphe, Per-onospora. Возможна также передача Rhizopus sp., Fusarium sp., Sclerotinia sp., Phoma sp., Xanthomonas sp. Представителями транзиторной микрофлоры, обнаруженными в единичных случаях, являются плесневые грибы родов Peni-cillium, Аspergillus и дрожжеподобные грибы рода Candida.
Заключение
Проведенная комплексная микробиологическая оценка с учетом фитопатологического мониторинга выявила следующих возбудителей микозов: Peronospora sp. (класс Oomycetes, порядок Peronosporales); Rhizopus sp. (класс Zygomycetes, порядок Mucorales); Alternaria sp. (класс Ascomycetes, порядок Dothidiales); Helminthosporium sp. (класс Ascomycetes, порядок Dothidiales); Phoma sp. (класс Ascomycetes, порядок Dothidiales); Fusarium sp. (класс Ascomycetes, порядок Hypocreales); Sclerotinia sp. (класс Ascomycetes, порядок Helotiales); Erysiphe sp. (класс Ascomycetes, порядок Erysiphales); возбудителя бактериоза Xanthomonas sp. (класс Gracilicutes, группа 4. Грамотрицательные, аэробные / микроаэрофильные палочки и кокки по «Определителю бактерий» Берджи (1997)).
На основании рассматриваемых данных наибольшую биологическую опасность для человека могут представлять патогены, относящиеся к родам Fusarium, Bipolaris, Alternaria, Candida и др., которые могут вызывать кератиты, феогифомикозы, хронические заболевания мочеполовой системы, сепсис и т.д. При наличии этих нозологических форм определенное значение имеет повышение качества дифференциальной лабораторной диагно-
стики и рациональный выбор антибиотиков, в частности антимикотиков по спектру действия.
Особую актуальность приобретает роль фитопатогенов как одного из возможных факторов ятрогенных (синоним - внутрибольничных, госпитальных, нозокомиальных) инфекций при использовании лекарственного растительного сырья, пищевых биологически активных добавок, натуральных лечебно-косметических продуктов и др., не прошедших должного микробиологического контроля, при отсутствии системы профилактических мероприятий.
Список литературы
1. Соколов, С. Я. Фитотерапия и фитофармакология: Руководство для врачей / С. Я. Соколов. - М. : Медицинское информационное агенство, 2000. - 976 с.
2. Кокосов, А. Н. Феномен РДТ / А. Н. Кокосов // Медицинская наука & образование Урала. - 2007. - № 2. - С. 20-21.
3. Бондаренко, В. М. Классификация пробиотических лекарственных препаратов, биологически активных добавок к пище и продуктов функционального питания / В. М. Бондаренко // Клиническое питание. - 2007. - № 3. - С. 9-11.
4. Козина, А. И. Диагностика аллергических заболеваний у детей, обусловленных грибковой сенсибилизацией с использованием чешских аллергенов 8еуар1шгта (Чехия) / А. И. Козина // ХУ Научные чтения памяти академика Н. Н. Бурденко «Актуальные вопросы современной клинической медицины» (материалы областной научно-практической конференции). - Пенза : ИИЦ ПГУ, 2006. - С. 135-136.
5. Косагиза, Т. В. Эпидемиологические аспекты грибковой аллергии / Т. В. Ко-сагиза, П. А. Прокаева // ХУ Научные чтения памяти академика Н. Н. Бурденко «Актуальные вопросы современной клинической медицины» (материалы областной научно-практической конференции). - Пенза : ИИЦ ПГУ, 2006. - С. 145
6. Сергеев, А. Ю. Кандидоз / А. Ю. Сергеев, Ю. В. Сергеев. - М. : Триада-Х, 2001.
7. Бондаренко, В. М. Типы секреции и регуляции функциональной активности молекул, ассоциированных с патогенностью энтеробактерий / В. М. Бондаренко,
А. Р. Мавзютов // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. -2002. - № 5. - С. 86-91.
8. Илиева, С. Лекарственные культуры / С. Илиева. - София : Земиздат, 1971. -261 с.
9. Лавренов, В. К. Полная энциклопедия лекарственных растений / В. К. Лавре-нов, Г. В. Лавренова. - СПб. : Нева ; М. : ОЛМА-ПРЕСС, 1999. - Т. 1. - 736 с.
10. Лавренов, В. К. Полная энциклопедия лекарственных растений / В. К. Лавренов, Г. В. Лавренова. - СПб. : Нева ; М. : ОЛМА-ПРЕСС, 1999. - Т. 2. - 816 с.
11. Семенова, Е. Ф. Ценность нетрадиционных масличных культур / Е. Ф. Семенова // Актуальные проблемы инноваций с нетрадиционными природными ресурсами и создания функциональных продуктов : материалы III Российской научнопрактической конференции (6-7 июня 2005 года). - М., 2005. - С. 38.
12. Лекарственное сырье растительного и животного происхождения. Фармакогнозия : учеб. пособие / под ред. Г. П. Яковлева. - СПб. : Спецлит, 2006. - 845 с.
13. Вейант, Р. Определитель нетривиальных патогенных грамотрицательных бактерий (аэробных и факультативно анаэробных) / Р. Вейант, У. Мосс, Р. Уивер [и др.]. - М. : Мир, 1999. - 791 с.
14. Саттон, Д. Определитель патогенных и условно патогенных грибов / Д. Саттон, А. Фотергилл, М. Ринальди. - М. : Мир, 2001. - 486 с.
15. Мартусевич, А. К. «Поведение» биологических жидкостей и функциональный статус организма человека / А. К. Мартусевич // Известия высших учебных заведений. Поволжский регион. Медицинские науки. - 2007. - № 2. - С. 24-30.
16. Васнецова, О. А. Медицинское и фармацевтическое товароведение / О. А. Васнецова. - М. : ГЭОТАР-Медиа, 2005. - 608 с.
17. Билай, В. И. Методы экспериментальной микологии / В. И. Билай. - Киев : Наукова думка, 1973. - 242 с.
18. Наумова, Н. А. Анализ семян на грибную и бактериальную инфекцию / Н. А. Наумова. - Л. : Колос, 1970. - 208 с.
19. Практикум по микробиологии / под ред. А. И. Нетрусова. - М. : Академия, 2005. - 608 с.
20. Практикум по систематике растений и грибов / А. Г. Еленевский, М. П. Соловьева, Н. М. Ключникова [и др.]. - М. : Академия, 2004. - 160 с.
21. Билай, В. И. Микроорганизмы - возбудители болезней растений : справочник /
В. И. Билай. - Киев : Наукова думка, 1988. - 550 с.
22. Князева, Т. П. Болезни лекарственных и эфиромасличных культур / Т. П. Князева, Ю. М. Стройков. - М. : Издательство МСХА, 1991. - С. 57-64.
23. Атлас болезней и вредителей масличных культур. - Прага, 1968. - С. 36-176.
24. Определитель бактерий Берджи : в 2-х т. / под ред. Дж. Хоулта, Н. Крига, П. Сни-та [и др.]. - М. : Мир, 1997. - 800 с.
25. Красильников, А. П. Микробиологический словарь-справочник / А. П. Красильников, Т. Р. Романовская. - Минск : Асар, 1999. - 400 с.
26. Микробиология: Руководство к лабораторным занятиям : учебное пособие для студентов фармацевтических ВУЗов и фармацевтических факультетов медицинских институтов / И. Л. Дикий, И. И. Сидорчук, И. Ю. Холупяк [и др.]. - К. : Профессионал, 2004. - 594 с.
27. Платонов, А. Е. Статистический анализ в медицине и биологии / А. Е. Платонов. - М. : РАМН, 2000. - 52 с.
