CC BY
162
УДК 619:616-002.828:6S6.4
МИКОПЛАЗМЕННАЯ ИНФЕКЦИЯ У СВИНЕЙ
Л.И. ЕФАНОВА, кандидат ветеринарных наук, зав. лабораторией
А.В. СТЕПАНОВ, кандидат биологических наук, старший научный сотрудник
М.М. СВИРИДОВ, кандидат биологических наук, старший научный сотрудник
О.А. МАНЖУРИНА, кандидат ветеринарных наук, ведущий научный сотрудник
ВНИВИ патологии, фармакологии и терапии Рос-сельхозакадемии
E-mail: [email protected]
Резюме. Представлены результаты ретроспективного мониторинга циркуляции патогенных микоплазм у свиней, проведенного методами иммуноферментного анализа и полимеразноцепной реакции, в 26 свиноводческих хозяйствах Белгородской, Воронежской, Курской, Липецкой, Мурманской, Орловской, Ростовской, Рязанской, Тамбовской и Ярославской областей. Исследованы биологические пробы (сыворотка крови, сперма и влагалищные смывы) и патматериал (мертворожденные, павшие и вынужденно убитые животные), полученные от свиней различных технологических групп и возраста (хряки, свиноматки, поросята до 1, 2-х, 3-х и старше 3-х месячного возраста, ремонтные свинки). Установлена широкая циркуляция патогенных микоплазм (96, 2 %), в том числе Mycoplasma hyopneumoniae (88,5 %) в обследованных свиноводческих хозяйствах. ДНК патогенных микоплазм выделяли из патматериала от поросят 2...3-х месячного возраста (60...85 %), реже от поросят до 1-го и старше 3-х месячного возраста, ремонтных свинок - 30.47 %, а также из влагалищных смывов свиноматок с репродуктивной патологией (9,1 %) и спермы хряков (2 %). Антитела к Mycoplasma hyopneumoniae обнаружены в сыворотках крови 43,2 % хряков, 56 % свиноматок, 27,7 % ремонтных свинок; 43,8 % поросят до 1 месяца, 66 % молодняка от 2-х до 3-х месяцев и 33,2 % животных старше 3-хмесяцев. Патогенные микоплазмы среди свиней передаются вертикальным и горизонтальным путем, участвуют в репродуктивной патологии, а также в пренатальной (54,1 %) и постнатальной (55,8 %) гибели животных.
Ключевые слова: свиньи, микоплазменная инфекция, иммуно-ферментный анализ, полимеразная цепная реакция.
Микоплазменная инфекция у свиней широко распространена в странах с развитым свиноводством и служит одной из причин экономических потерь при производстве мяса этого вида животных. Ущерб от заболевания связан с затратами на лечение, снижением производственных показателей у поросят на доращивании и откорме, более низкой рыночной ценой туши при реализации. Занос патогенных микоплазм в благополучные хозяйства происходит преимущественно с инфицированным поголовьем и спермой при нарушении карантинных мероприятий и требований к хозяйствам поставщикам [4,5,7].
В этиологии микоплазмоза свиней принимают участие M.suis, M.hyopneumoniae, M.hyosynoviae, M.hyorhinis, M.granularum, M.fermentas и M.pneumoniae, вызывающие поражение эпителиальных клеток у животных с развитием респираторной патологии, артритов, серозитов и оказывающие иммуносупресивное действие. Тяжесть заболевания и спектр его клинических проявлений в большей степени обусловлены не только вирулентностью самих микоплазм, но и ассоциативным характером инфекции, а также иммунологическим потенциалом организма [4,6].
Микоплазмы в ассоциации с вирусами (ЦВС-2, РРСС, ПВИС и др.), условнопатогенными микроорганизмами (E.coli, Citrobacter freundi, Pasterella aeruginosa, Entero-coccus faecalis), Actinobacillus pleuropneumonia, Pasterella multocida и др., вызывают тяжелое течение «факторных» инфекций, особенно молодняка [1,3].
Достижения науки и техники АПК, №1-2012 __
Основная форма взаимодействия микоплазм и макрор-ганизма - длительная персистенция патогена, что приводит к развитию хронических рецидивирующих инфекций. Микоплазмы идеально приспособлены к персистенции, благодаря своим биологическим свойствам. Отсутствие клеточной стенки, адсорбция на эпителиальных клетках и клетках крови, способствует их дессиминации и сохранению в наиболее благоприятных нишах. С другой стороны, внутриклеточное сосредоточение делает микоплазмы менее доступными для антител и комплемента [8].
В последние годы в связи интенсивным развитием промышленного свиноводства в нашей стране, ввозом большого количества животных и их биологического материала, борьба со смешанными вирусно-бактериальными инфекциями с участием микоплазм приобретает все большее значение для отрасли. В медицине и ветеринарии достаточно широко используют современные методы молекулярной биологии, в частности ПЦР-диагностику, которая позволяет получать результаты в течение одного рабочего дня, отличается высокой чувствительностью (30.. .100 копий генома микоплазм в исследуемой пробе) и максимальной специфичностью анализа [2].
Цель наших исследований - изучить широтуциркуляции патогенных микоплазм у свиней разных технологических групп с использованием современныхметодов диагностики
- полимеразной цепной реакции (ПЦР) и иммуноферментного анализа (ИФА).
Условия, материалы и методы. В ходе исследований мы провели ретроспективное обследование на микоплаз-менную инфекцию 26 свиноводческих хозяйств Белгородской, Воронежской, Курской, Липецкой, Мурманской, Орловской, Ростовской, Рязанской, Тамбовской и Ярославской областей. Материалами служили биологические пробы (сыворотка крови, сперма и влагалищные смывы) и патматериал (мертворожденные, павшие и вынужденно убитые животные) полученные от свиней различных технологических групп и возраста (хряки, свиноматки, поросята до 1, 2-х, 3-х и старше 3-х месячного возраста, ремонтные свинки). Всего было изучено 519 проб.
Для определения патогенных микоплазм использовали ПЦР, а специфических антител к Mycoplasma hyopneumoniae - ИФА. Выявление ДНК возбудителей микоплазмоза проводили с помощью тест-системы «Мик-Ком», производства ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора; определение антител к M.hyopneumoniae (M.hyo) - методом непрямого иммуноферментного анализа с использованием диагностической тест-системы HerdChek M.hyo производства IDEXX Laboratories.
Полученные количественные показатели обрабатывали методами вариационной статистики с использованием стандартного пакета статистических программ Windows (StatSoft).
Результаты и обсуждение. Мы установили, что во всех обследованных хозяйствах циркулируют патогенные микоплазмы. В 25 (96,2 %) предприятиях был выделен геном патогенных микоплазм и в 23 (88,5 %) - специфические антитела к M.hyo. Это свидетельствует не только о широкой циркуляции патогенных микоплазм в свиноводческих хозяйствах, но и о значительной роли в развитии инфекции M.hyopneumoniae.
Анализ выделения ДНК патогенных микоплазм из биологических образцов от свиней, отобранных в разных технологических группах, показал (см. рисунок), что наиболее часто они определяются в патматериале от поросят
---------------------------------------------- 35
иммунологической недостаточности у этой части поросят (уровень серопозитивности свиноматок - 56,1 %). Наличие ДНК патогенных микоплазм во влагалищных смывах, абортированных плодах и патматериале от поросят до месячного возраста указывает на их участие в репродуктивной патологии свиней и вертикальной передаче.
Исследование методом ПЦР образцов патматериала от абортированных плодов (пренатальная смертность, n=45) и от погибших свиней разных возрастных групп (постнатальная смертность, n=138) показало наличие ДНК патогенных микоплазм соответственно в 54,1 % и 55,8 % случаев, что дает возможность предполагать широкое участие патогенных микоплазм, как в пренатальной, так и постнатальной смертности свиней.
Выводы. Таким образом, результаты молекулярногенетического и серологического исследований, эпи-зоотологического анализа ситуации в свиноводческих хозяйствах, указывают на широкую циркуляцию патогенных микоплазм среди свиней и их участие в пре- и постнатальной смертности. Основные пути передачи
- вертикальный и горизонтальный. Главный источник микоплазменной инфекции в хозяйствах - свиноматки, у которых патогенные микоплазмы участвуют в развитии репродуктивных нарушений , что приводит к инфициро-ванности поросят-сосунов и дальнейшему распространению микоплазменной инфекции среди них на фоне угасания колострального иммунитета. Наиболее подвержены инфицированию поросята от рождения до 3-х месяцев, заражение которых происходит внутриутробно, во время родов и в подсосный период.
В связи с широкой циркуляцией патогенных микоплазм в свиноводческих хозяйствах необходима организация плановых комплексных лабораторных исследований на микоплазмоз, включающих молекулярно-генетический и серологический мониторинг всех технологических групп животных для определения стратегии проведения лечебно-профилактиких и санитарных мероприятий.
Литература.
1. Ефанова Л.И., Манжурина О.А., Давыдова В.В., Рубцова Ю.А., Адодина М.И., Фролова Т.А. Характер инфекционной патологии у поросят и безопасность использования для них кормов. //Труды МНПК ВИЭВ г.Москва, 2011. - С. 175-179.
2. Малкова Е.М., Гришаева О.Н. Диагностика внутриутробных инфекций у новорожденных детей методом полимеразной цепной реакции. // Методические рекомендации для врачей (Под ред. Помогаевой А.П.). Томск, Кольцово, 2004. - С. 38.
3. Ефанова Л.И., Давыдова В.В., Рубцова Ю.А., Рубцова Ю.А., Пасько Н.В., Адодина М.И. Характер контаминации спермы хряков, половых путей больных эндометритом свиноматок и абортированных плодов. //Труды МНПК посвященной 100-летию
В.А. Акатова. Воронеж, 2009. - С. 157-164.
4. Микоплазмы в патологии животных //Под ред. Г.Ф.Коромыслова, Я.Месарома, Л.Штипковича. - М.Агропромиздат. -1987. - С. 255.
5. Fano E., Pijoan C., Dee S. Effect of Mycoplasma hyopneumoniae colonization at weaning on disease severity in growing pigs. // Canadian Journal of Veterinary Research. - 2007. - V. 71. - P. 195-200.
6. Meyns T., Maes D., Dewulf J., Vicca J., Haesebrouck F., De Kruif A. Quantification of the spread of Mycoplasma hyopneumoniae in nursery pigs using transmission experiments. //Preventive Veterinary Medicine. - 2004. - V. 66. - P. 265-275.
7. Sibila M., Nofrarias M., Lopez-Soria S. Exploratory field study on Mycoplasma hyopneumoniae infection in suckling pigs. //Veterinary Microbiology. - 2007. - V. 121. - P. 352-356.
8. Baseman J., Tully J. (1997): Colonization of humans by Mycoplasma canis. // Emer.Infect.Dis. - 1997. - V. 3. - P. 21-32.
MYCOPLASMA INFECTION IN PIGS L.I. Efanova, A.V. Stepanov, M.M. Sviridov, О.А. Manzhurina
Summary. All-Russian Veterinary Pathology Pharmacology and Therapy Research Institute Results of retrospective monitoring of circulation of pathogenic mycoplasmas at the pigs, spent by methods enzyme immunoassay and polimerazno chain reaction, in 26 pig-breeding economy of the Belgorod, Voronezh, Kursk, Lipetsk, Murmansk, Oryol, Rostov, Ryazan, Tambov and Yaroslavl areas are presented. Biological tests (blood whey, sperm and vaginal washouts) and рathological material (deadborn, fallen and forcedly killed animals) received from pigs of various technological groups and age (male pigs, sows, pigs to 1, 2, 3 and are more senior 3 monthly age, repair pigs) are investigated. Wide circulation of pathogenic mycoplasmas (96,2%), including Mycoplasma hyopneumoniae (88,5%) in the surveyed pig-breeding economy is established. DNA of pathogenic mycoplasmas was allocated from рathological material from pigs 2 - 3 monthly age (60-85%), is more rare from pigs to 1st and is more senior 3 monthly age and repair pigs - 30-47%, and also from vaginal washouts of sows with a reproductive pathology (9,1%) and sperms of male pigs (2%). Antibodies to Mycoplasma hyopneumoniae were found out in whey of blood in male pigs - 43,2%, sows - 56%, repair pigs - 27,7%; pigs till 1 month - 43,8%, from 1 about 2 months - 0%, from 2 about 3 months - 66% also are more senior 3 months - 33,2%. Vertical and horizontal transfer of pathogenic mycoplasmas among pigs, their participation in a reproductive pathology, and also in the pre-natal 54,1%) and postnatal (55,8%) is shown their destruction.
Key words: pigs, mycoplasma infection, enzyme immunoassay, polymerase chain reaction.
Рисунок. Выявление генома микоплазм (ПЦР) и специфических антител к М.Ьіуо (ИФА) у разных технологических групп свиней: □ - ПЦР - патматериал, сперма, влагалищные смывы; ■ - ИФА - сыворотка крови
2...3-месячного возраста (60...85 %), реже от поросят до 1-го и старше 3-х месячного возраста, ремонтных свинок -30.47 %. Высок уровень выявления патогенных микоплазм из абортированных плодов (44,6 %, против 9,1 % - во влагалищных смывах от свиноматок с признаками репродуктивной патологии). В наименьшей степени контаминирована микоплазмами сперма хряков (2 %), причем их ДНК выделена только у производителей из одного хозяйства.
С другой стороны, при выявлении антител к М.ґіуо в сыворотках крови методом ИФА, уровень серопозитивности у хряков составил 43,2 %, свиноматок - 56, ремонтных свинок - 27,7, поросят до 1 месяца - 43,8, 1.2 месяцев - 0, 2.3 месяцев - 66, старше 3 месяцев - 33,2 %.
Полученные результаты указывают на интенсивную циркуляцию возбудителя микоплазменной инфекции в хозяйствах среди свиней от рождения до 3-х месячного возраста. Наличие антител у поросят до 1 месяца и их отсутствие у животных 1...2 месяцев указывает на коло-стральное происхождение антител у новорожденных поросят. Рост в этот же период выделения ДНК патогенных микоплазм из патматериала, на наш взгляд, свидетельствует об активизации инфекционного процесса на фоне
ІІІЛ flfl III
З6
Достижения науки и техники АПК, №1-2012
