CC BY
29with the controls, according to the method Dyakonov L.P. cytotoxicity index exceeded the reference value for 2.38; 4.76; 9.52 and 35.71%, respectively. The cytotoxicity indexes of zearalenone at 50 ng/ml did not differ from the control. According to the studies the maximum tolerated dose for zearalenone in fetal calf lung epithelium cells was 50 ng/ml.
KEYWORDS: zearalenone, fetal calf lung epithelium cells, morphology, cytometry, survival, proliferation, mitotic activity, cytotoxicity, maximum tolerated dose.
References
1. Diagnostika, profilaktika i lechenie sochetannih otravleniy zhivotnih vtorichnimi metabolitami microscopicheskih gribov roda Fusarium: Metodicheskoe posobie [Detection, prevention, and treatment of associated poizonings with secondary metabolites of Fusarium fungi: guideline] / A.V.Ivanov [et al.]. - Kazan: FTSRB-VNIVI, 2012. - 56 p.
2. Bennet, J.W. Mycotoxins / J.W. Bennet, M. Klich // Clin. Microbiol. Rev. 2003; 16(3): 497-516.
3. Shephard, G.S. Human health impacts and risk assessment of mycotoxins. / G.S.Shephard // Proceedings international workshop. Reduction of Mycotoxins in Production Chains of EU and Russia: Modern investigations and Practical Features. Moscow. - 2011. - P. 12-14.
4. GOST R 53093-2008 Zerno i produkty yego pererabotki, kombikorma. Opredelenie soderzhaniya zearalenona metodom vysokoeffektivnoy zhidkostnoy khromatografii [Crops and the processed products from crops. Assessment of zearalenon level using highly efficient method of fluid chromatography]. - Moscow: Standartinform, 2010. - 11 p.
5. O nakoplenii zearalenona v travyanih kormah i toksinobrazyushei aktivnosti gribov roda Fusarium [On deposition of zearalenon in herbal fodders and toxin-formation activity of Fusarium fungi] / A.A.Byrkin, G.P.Kononenko, O.P.Gavrilova, T.U.Gagkaeva // Agrobiology. - 2015. - Vol. 50. - P.255-262.
6. Bouaziz, C. The in vitro effects of zearalenone and T-2 toxins on Vero cells / C.Bouaziz, A.Bouslimi, R.Kadri, C.Zaied, H.Bacha, S.Abid-Essefi // Exp. Toxicol. Pathol. - 2013. - P. 497-501.
7. Mazat, J.P. Mitochondrial energetic metabolism-some general principles / J.P.Mazat, S.Ransac, M. Heiske et al. // IUBMB Life. 2013; 65: 171-179.
8. Obremski, K. Zearalenone induces apoptosis and inhibits proliferation in porcine ilealPeyer's patch lymphocytes / K.Obremski, G.Poniatowska-Broniek // MC Genomics. - 2016 Aug 17;17: 646. doi: 10.1186/s12864-016-2984-8.
9. Behm, C. Cytotoxic potency of mycotoxins in cultures of V79 lung fibroblast cells / C.Behm, W.Follmann, G.H.Degen // J.Toxicol. Environ. Health. - 2012; 75(19-20): 1226-31.
10. Bouaziz, C. The in vitro effects of zearalenone and T-2 toxins on Vero cells / C.Bouaziz, A.Bouslimi, R.Kadri et al. // Exp. Toxicol. Pathol. 2013 Jul.; 65(5): 497-501.
11. Combes, R.D. Ethical investment - what is it, and what are the implications for industry funding of research into alternatives / R.D. Combes, M. Balls // Altern. Lab. Anim. 2001 Jan-Feb; 29(1): 55-62.
12. Eskov, A.P. Mehanizm povregdauhego deistviya bacterialnogo endotoksina [Destroying mechanism of bacterial endotoxin] / A.P. Eskov, R.I.Kaumov, A.E.Sokolov // Efferentnaya terapiya. - 2003. - Vol.1 № 2. - P. 71-74.
13. Dyakonov, L.P. Zhivotnaya kletka v kulture (Metody i primememie v biotehnologii) [Using an animal cell for cultivation (Methods and implementation in Biotechnology) / L.P.Dyakonov. - Moscow: «Sputnik+», 2009. - 656 p.
14. Tsititoksicheskoe deistvie himicheskih vechestv, sodergachihsya v vide primesei v nekotoryh meditsinskih immunobiologicheskih preparatah [Cytotoxic effect of chemical substances present as in some medical immunobiological drugs] / G.P.Chervonskaya [et al.] // Microbiol., epidemiol. i immynobiol., - 1988. - Vol.12. - P. 85-90.
УДК 633.4.003: 619:615.9 (470.343)
МИКОЛОГИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ КОРМОВ КУЖЕНЕРСКОГО РАЙОНА РЕСПУБЛИКИ МАРИЙ ЭЛ
'С.Ю.Смоленцев - доктор биологических наук, профессор; 2Э.К.Папуниди - доктор биологических наук, профессор; 1И.Н.Поликарпов - студент.
ФГБОУ ВО«Марийский государственный университет», г.Йошкар-Ола (424000, г.Йошкар-Ола,
пл.Ленина 1, тел. +7(8362) 68-79-32, е-шэИ: rector@marsu.ru). 2ФГБОУ ВО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины им. Н.Э.Баумана», г.Казань
(420073, г.Казань, Сибирский тракт, 35, тел. (843) 273-96-17).
По данным исследователей, распространение микроскопических грибов, продуцирующих микотоксины в различных регионах России, недостаточно изучено, поэтому затрудняется прогнозирование возникновения того или иного микотоксикоза. Целью исследований явилось изучение степени поражения кормов плесневыми грибами в Куженерском районе республики Марий Эл. Санитарно-микологическая оценка кормов Куженерского
района Республики Марий Эл проводилась на базе химико-токсикологической лаборатории Республиканской ветеринарной лаборатории. Общую токсичность образцов определяли согласно ГОСТ Р 52337-2005. Количественное определение содержания микотоксинов в кормах проводили методом биоавтографии, проявление хроматограммы осуществляли с использованием тест-культуры Candida pseudotropicalis, штамм 44. Микологические исследования показали, что корма одновременно были контаминированы патогенными грибками нескольких родов. По степени распространения микромицеты кормов располагались в следующем порядке по степени убывания их доли в общем количестве идентифицированных: грибки рода Aspergillus flavus и Asptrgillus niger высевались в 27,3%, Mucor - в 27%, Pénicillium - в 11,9%, Risopus - в 11,9% Althernarium - в 6,1%, Cladosporium - в 2,9%, Trichoderma viride в 0,4% пробах кормов. Наиболее токсикогенные грибы рода Fusarium в процессе исследования не идентифицировались. При анализе общей токсичности кормов, было выявлено, что 17,5% кормов являлись токсичными, 24,9% - слаботоксичными, а 57,6% - нетоксичными.
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: мониторинг, корма, микологическая оценка, пораженность, патогенные грибки, Марий Эл, качество.
Здоровье сельскохозяйственных животных и птицы, их воспроизводительные качества, продуктивность, биологическая ценность получаемых продуктов в значительной степени зависят от санитарного качества кормов, которое определяется степенью контаминации патогенными микроорганизмами и токсическими веществами естественного и антропогенного происхождения [1;3;6;10].
В мире около 70% (данные ООН) всех кормов поражены грибками и их них 25% - зерновые. Доказано, что присутствие микотоксинов в кормах приводит к серьезным последствиям, вызывая отравления и целый спектр заболеваний смешанной этиологии у сельскохозяйственных животных. В связи со сложностью диагностики таких болезней хозяйства несут большие убытки [4].
Распространение микроскопических грибов, продуцирующих микотоксины в различных регионах России, мало изучено, поэтому затруднено прогнозирование возникновения того или иного микотоксикоза [7;9].
Сведения о зональном распространении грибов -продуцентов микотоксинов, знание условий, необходимых для образования их в различных видах кормов, позволяют составлять долгосрочный прогноз, обосновать объем исследований образцов корма на содержание микотоксинов [8].
В более ранних исследованиях отмечается, что наиболее часто в кормах Республики Марий Эл встречаются грибы родов Fusarium (85-100%), Mucor (88-97%), Althernarium (83-95%), Risopus (74-96%), Aspergillus (70-80%), Pénicillium (67-80%). В центральной зоне республики идентифицировались токсикогенные грибки F. sporotrichiella, F. graminearum, A. flavus, Peniccilium и обнаруживались микотоксины: афлатоксины, зеарале-нон, Т-2 токсин, НТ-2 токсин, патулин [5].
Материалы и методы. Санитарно-микологиче-ская оценка кормов Куженерского района Республики Марий Эл проводилась на базе химико-токсикологической лаборатории Республиканской ветеринарной лаборатории. Общую токсичность образцов определяли согласно ГОСТ Р 52337-2005. Количественное определение содержания микотоксинов в кормах проводили методом биоавтографии, проявление хроматограммы осуществляли с использованием тест-культуры Candida pseudotropicalis, штамм 44. Микологический анализ и токсичность культур грибов проводили в соответствии с Методическими указаниями по санитарно-микологической оценке и улучшению качества кормов, идентификацию микроскопических грибов проводили по Билай В.И.
Результаты исследований. Данные исследования кормов по общей токсичности представлены в таблице 1.
Таблица 1
Результаты исследования кормов на общую токсичность
Корма Всего проб Слаботоксичные корма Токсичные корма
абс.число % абс. число % абс.число %
Комбикорма 69 38,8 31 44,9 38 55,1
Зерновые корма 70 39,3 38 54,3 32 45,7
Жмыхи подсолнечн. 9 5,1 - - 9 100
Премиксы, БВМД 7 3,9 3 42,9 4 57,1
Мясокостная мука 6 3,4 3 50 3 50
ВТМ 3 1,7 1 33,3 - -
Грубые корма 14 7,8 5 35,7 9 64,3
Итого 178 100 79 44,4 95 53,4
При токсико-биологическом исследовании в опытах на кроликах и белых мышах было установлено, что 44,4% всех кормов были отнесены к слаботоксичным, а 53,4% - токсичным. Из общего количества проб комбинированных кормов 44,9% были слаботоксичными, а 55,1% - токсичными. Качество комбикормов в динамике по годам ухудшалось, доля токсичных из общего количества исследованных проб возросла с 42,3% в 2010 году до 55-71,4% в 2012-2014 гг. По нашему мнению, данный факт объясняется ухудшением качества как основных ингредиентов (зерновые корма), так и добавок (жмых подсолнечный, БВМД, премиксы, мясо-костная мука). В птицеводческих хозяйствах, где содержание микотоксинов имеет более важное биологическое значение в отношении птицы, больше используется полнорационных комбикормов, за последние годы доля токсичных кормов увеличилась до 80%.
Качество зерновых кормов за период исследования было следующее: от общего количества исследованных проб (70) 54,3% (36 проб) оказались слаботоксичными, а 45,7% (32 пробы) - токсичными. Отмечается также тенденция к ухудшению качества этих кормов, доля токсичных увеличилась с 30% в 2002 году до 54-64% в последующий исследуемый период.
Известно, что такие корма, как жмыхи, мясо-костная мука, витаминно-травяная мука, белково-вита-минно-минеральная добавка и другие премиксы ис-
Степень распространения микромицетов в разных группах кормов, кроме кормов из масличных культур, в целом имела такую же закономерность: больше всего было идентифицировано грибков рода Aspergillus, Mucor, Pénicillium, в меньшей степени - грибков рода Risopus, Althernarium, Cladosporium, Trichoderma. Жмых подсолнечный поражался в равных долях грибками рода Mucor, Althernarium, Cladosporium. Следует отметить, что из 16 проб этой группы кормов удалось высеять грибки только в 6 случаях. Наиболее токсикогенные
пользуются как ингредиенты комбикормов и влияют на их качество. Из 9 исследованных проб жмыха подсолнечника все 100%, из 7 проб премиксов 57,1% , из 6 проб мясокостной муки 50% оказались токсичными.
Из 14 исследованных проб грубых кормов 5 проб (35,7%) оказались слаботоксичными, 9 проб (64,3%) -токсичными.
Кожная биопроба характеризует дерматоцидные свойства трихотеценовых микотоксинов - Т-2, дезок-синиваленона, диацетоксисцирпенола, инваленола и других миктоксинов грибов рода Stachyobotris alternas, Dendrodochium toxicum; Cephalosporium, Trichoderma, Microtecium; микотоксинов с кислотными свойствами (цитринин - продуцент Aspergillus candida et parasiticus, патулин - некоторые виды рода Penicillium. Поэтому по токсичности кормов можно судить о степени загрязненности кормов микотоксинами.
Микологические исследования показали, что корма были одновременно контаминированы патогенными грибками нескольких родов. По степени распространения микромицеты кормов располагались в следующем порядке по степени убывания их доли в общем количестве идентифицированных: грибки рода Aspergillus flavus и Asptrgillus niger высевались в 27,3%, Mucor - в 27%, Penicillium - в 11,9%, Risopus - в 11,9% Althernarium - в 6,1%, Cladosporium - в 2,9%, Trichoderma viride в 0,4% пробах кормов (табл.2).
грибы рода Fusarium в процессе исследования не идентифицировались.
Заключение. Полученные данные свидетельствуют о высокой степени контаминации кормов Ку-женерского района Республики Марий Эл микроми-цетами, которые в благоприятных агроэкологических и климатических условиях могут быть источниками загрязнения пищевых продуктов и сырья их вторичными метаболитами - микотоксинами. Установлено, что 17,5% кормов являлись токсичными, 24,9% - слаботоксичными, а 57,6% - нетоксичными.
Таблица 2
Результаты микологического исследования кормов
Е Е го
Вид корма Всего проб сл ^ ГО CD CT C= О О ZD E ID и сл ^ Œ О =3 го £= =3 О Œ сл ЕЕ CD о; -О 3 о .hi
<t <t ф СС -!= "О о >
< Ô 1—
Комбикорма 69 29 2 1 5 7 5 4 -
Зерновые 70 27 3 9 5 1 6 1 1
Жмыхи, шроты 15 - - 2 - - 2 2 -
Мясо-костная мука 2 1 - 1 1 - - - -
Сено, солома 14 4 2 2 4 2 2 - -
ВТМ 3 1 - 1 1 - - - -
Литература
1. Санитарно-микологическая оценка кормов и улучшение их качеств / А.В.Иванов, М.Я.Тремасов, К.Х.Папу-ниди и [др.]. - М.: Росинформагротех, 2006. - 32 с.
2. Микотоксикозы (биологические и ветеринарные аспекты) / А.В.Иванов, В.И.Фисинин, М.Я.Тремасов, К.Х.Папуниди. - М.: Колос,2010. - 392 с.
3. Микотоксикозы животных (этиология, диагностика, лечение, профилактика) / А.В.Иванов, М.Я.Тремасов, К.Х.Папуниди, А.К.Чулков. - М.: Колос, 2008. - 140 с.
4. Буряк, В.Н. Микотоксикозы свиней и их профилактика / В.Н.Буряк // Зоотехния. - 2007. - № 9. - С. 14-16.
5. Гогин, А.Е. Микотоксины: значение и контроль / А.Е.Гогин // Ветеринария сельскохозяйственных животных. - 2007. - № 10. - С. 8-10.
6. Гуркина, Л.В. Загрязнение окружающей среды - как фактор ослабления иммунной защиты крупного рогатого скота / Л.В.Гуркина, Н.И.Журавлева // Токсикозы животных и актуальные проблемы болезней молодняка: материалы Междунар. науч. конф., г. Казань, 25-27 окт 2006 г. - Казань, 2006. - С. 76-80.
7. Даминов, Р.Р. Хронические микотоксикозы в птицеводстве / Р.Р.Даминов // Комбикорма. - 2007. - № 1. - С. 85-86.
8. Донник, И.М. Методологические подходы оценки влияния окружающей среды на состояние здоровья животных / И.М.Донник, И.А.Шкуратова, Н.А.Верещак // Аграрная наука Евро-Северо-востока. - 2006. - № 8. - С. 169-173.
9. Кузнецов, А.Ф. Ветеринарная микология / А.Ф.Кузнецов. - СПб.: Изд-во «Лань», 2001. - 416 с.
10. Коваленко, А.В. Микотоксины в кормах: растет их пагубное влияние на свиноматок / А.В.Коваленко // Животноводство России. - 2008. - № 5. - С. 27-30.
MYCOLOGICAL ANALYSIS OF FODDERS FROM KUZHENERSKY REWGION, THE REPUBLIC OF MARI EL
1Smolentsev S.Yu. - Doctor of Biological Sciences, professor;
2Papunidi E.K. - Doctor of Biological Sciences, professor; 1Polikarpov I.N. - student.
1Mari State University, Yoshkar-Ola (tel. +7(8362) 68-79-32, e-mail: rector@marsu.ru).
2Bauman N.E. Kazan State Academy of Veterinary Medicine, Kazan (tel.+7(843) 273-96-17).
The references show that spread of microscopic fungi that produce mycotoxins in various regions of Russia is poorly understood; therefore it is difficult to predict the emergence of mycotoxicoses. The aim of this research was to study the level of fodder contamination with fungi in Kuzhenersky region, the republic of Mari El. Sanitation and mycological assessment of fodders from Kuzhenersky region was carried out in chemical and toxicological laboratory of the Republican veterinary laboratory. The general toxicity of the samples was determined according to the State Standard No.R52337-2005. The mycotoxic content was calculated using bioautographic method and chromatography was carried out using Candida pseudotropicalis strain 44 strain culture. The mycological studies showed that the contaminated fodders were simultaneously contaminated with several species of the pathogenic fungi. The following species were identified in descending order: Aspergillus flavus and Asptrgillus niger gerera species were isolated in 27.3% of fodder samples, Mucor - 27%, Penicillium - in 11.9%, Risopus - in 11.9% Althernarium - to 6.1%, Cladosporium - to 2.9%, Trichoderma viride in 0.4% accordingly. The most toxigenic Fusarium species were not isolated in the study. The general toxicity studies showed that 17.5% of fodders were found as toxic, 24.9% - slightly toxic, and 57.6% - non-toxic.
KEYWORDS: monitoring, feed, mycological evaluation, prevalence, pathogenic fungi, Mari El, quality.
References
1. Sanitarno-mikologicheskaya otsenka kormov i uluchsheniye ih kachestv [Sanitation and mycological evaluation and quality improvement of fodders] / A.V.Ivanov [te al.]. - Moscow: Rosinformagrotekh, 2006. - 32 p.
2. Mikotoksikozy (biologicheskiye i veterinarniye aspekty) [Mycotoxicoses (the biological and veterinary aspects)] / A.V.Ivanov, V.I.Fisinin, M.Ya.Tremasov, K.H.Papunidi. - Moscow: Kolos, 2010. - 392 p.
3. Mikotoksikozy zhivotnyh (etiologiya, diagnostika, lecheniye, profilaktika) [Animal mycotoxicoses (etiology, detection, treatment, prevention) / A.V.Ivanov, M.Ya.Tremasov, K.H.Papunidi, A.K.Chulkov. - Moscow: Kolos, 2008. - 140 p.
4. Buryak, V.N. Mikotoksikozy sviney i ih profilaktika [Swine mycotoxicoses and their prevention] / V.N. Buryak // Zootehniya. - 2007. - Vol. 9. - P. 14-16.
5. Gogin, А.Е. Mikotoksiny: znacheniye i kontrol [Mycotoxicoses: effect and control] / A.E.Gogin // Veterinariya selskohozyaystvennyh zhivotnyh. - 2007. - Vol. 10. - P. 8-10.
6. Gurkina, L.V. Zagryazneniye okruzhayuschey sredy - kak factor oslableniya immunnoy zaschity krupnogo rogatogo skota [Environment pollution as a factor of weakening of cattle immunity defense] / L.V.Gurkina, N.I.Zhuravleva // Toksikozy zhivotnyh i aktualniye problemy bolezney molodnyaka - Animal toxicoses and current health problems of young animals: proceedings from the Int. sci. conf., kazan, 26-27 Oct., 2006. - Kazan, 2006. - P. 76-80.
7. Daminov, R.R. Hronicheskiye mikotoksikozy v ptitsevodstve [Chronic mycotoxicoses in poultry breeding] / R.R. Daminov // Kombikorma. - 2007. - Vol. 1. - P. 85-86.
8. Donnik, I.M. Metodologicheskiye podhody otsenki vliyaniya okruzhayuschey sredy na sostoyaniye zdorovya zhivotnyh [Methodical approaches on evaluation of environment effect on animal health] / I.M. Donnik, I.A. Shkuratova, N.A.Vereschak // Agrarnaya nauka Evro-Severo-vostoka. - 2006. - Vol. 8. - P. 169-173.
9. Kuznetsov, A.F. Veterinarnaya mikologiya [Veterinary mycology] / A.F.Kuznetsov. - Saint Petersburg: Lan, 2001. - 416 p.
10. Kovalenko, A.V. Mikotoksiny v kormah: rastet ih pagubnoye vliyaniye na svinomatok [Presence of mycotoxins in fodders: their bad influence on sows increases] / A.V.Kovalenko // Zhivotnovodstvo Rossii - 2008. - Vol. 5. - P. 27-30.
ПОДПИСКА
Уважаемые читатели, руководители и специалисты хозяйств!
С 1 сентября по 15 декабря и с 1 апреля по 15 июня
каждого года Вы можете оформить подписку на журнал «Ветеринарный врач» и тем самым получить интересную и полезную профессиональную информацию.
Подписку можно оформить в любом почтовом отделении Вашего населенного пункта по каталогу РФ «Объединенный каталог. Пресса России. Газеты и журналы». Подписной индекс - 43596.
НАШ АДРЕС:
г.Казань, Научный городок-2. ФГБНУ «ФЦТРБ-ВНИВИ», E-mail: vetvrach-vnivi@mail.ru.
