CC BY
2
методике [3]. Суспензию клеток пассировали в 96-лу-ночном планшете (5х105 кл/см2), культивировали до образования монослоя, после чего подвергали воздействию лазера с помощью аппарата «Лазмик-Влок» [4] с излучающей лазерной головкой (635 нм) в дозе от 0,02 до 4,0 Дж и наносили повреждение механическим способом. С использованием микроскопии осуществляли подсчет клеток и оценивали площадь поврежденного монослоя через 0, 24 и 48 ч после облучения.
Установлена зависимость динамики восстановления монослоя от параметров НИЛИ. Показано ингиби-рующее влияние высоких доз (4 Дж) НИЛИ красного спектра на восстановление монослоя через 24 и 48 ч. При дозах облучения 0,02-3,0 Дж красным лазером через 24 ч не было выявлено значимого изменения площади повреждения; через 48 ч отмечено значительное уменьшение площади повреждения (>50%) для доз 1,0-2,0 Дж по сравнению с контролем. Таким образом, показана эффективность и установлены диапазоны доз для применения НИЛИ с целью воздействия на пролифе-ративную активность клеток СВФ ЖТ, предназначенных для последующего клинического применения.
Литература:
1. Kostnomina E., Eremin P.S., Kudryashova I.S. et. al. Bul. Rehab. Med. 2022. V. 21. P. 202-211.
2. Осипов А.Н., Владимиров Ю.А. Молекулярные, мембранные и клеточные основы функционирования биосистем: Сб. науч. трудов. Минск: БГУ. 2018. С. 5.
3. Гильмутдинова И.Р., Костромина Е.Ю., Веремеев А.В. и др. Гены и Клетки. 2021. Т. 16. № 3. С. 80-85.
4. С.В. Москвин, Т.В. Кончугова, А.А. Хадарцев. Вопр. курортол. физиотер. леч. физ. культ. 2017. Т. 94. С. 10-17.
СОЗДАНИЕ МИКРОИНКАПСУЛИРУЮЩЕЙ ТЕХНОЛОГИИ ДЛЯ ЗАЩИТЫ ЭНДОКРИННЫХ КЛЕТОК ПОДЖЕЛУДОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ ПРИ ТРАНСПЛАНТАЦИИ
П.С. Ермакова1, А.Ю. Богомолова1, Наралиев Н.У.1, Д.М. Кучин1, 2, Е.А. Васильчикова1, М.А. Батенькин3, С.А. Чесноков3, В.Е. Загайнов1, 4, Е.В. Загайнова1 5, А.В. Кашина1
1 Приволжский исследовательский медицинский университет, Нижний Новгород, Россия
2 ГБУЗ НО НОКБ им. НА. Семашко, Нижний Новгород, Россия
3 Институт металлоорганической химии
им. ГА. Разуваева, Нижний Новгород, Россия
4 ГБУЗ НО Нижегородский областной клинический онкологический диспансер, Нижний Новгород, Россия
5 Университет им. Лобачевского, Нижний Новгород, Россия
e-mail: bandina-polina@mail.nu
Ключевые слова: островок Лангерганса, инкапсуляция, микрокапсулы, альгинат, PMOTA.
Инкапсуляция островков Лангерганса (ОЛ) поджелудочной железы (ПЖ) является одним из перспективных решений для защиты ОЛ при лечении диабета первого типа. Микроинкапсулирующая система представляет собой биосовместимую матрицу, проницаемую для питательных веществ и инсулина и не проницаемую для компонентов иммунной системы. До сих пор не создано идеальной капсулы, соответствующей требованиям ци-тотоксичности, биосовместимости и проницаемости.
В данном исследовании была создана и протестирована новая инкапсулирующая система для островков Лангерганса на основе альгината и полимера (поли-[2-(метакрилоилокси)этил]триметиламмонийхлоридом (PMOTA)).
Синтез капсул производился микрофлюидным методом. Для инкапсуляции использовали ОЛ экспериментальных животных. ОЛ выделяли согласно стандартным методикам с собственными модификациями. Проницаемость капсул оценивалась путем инкубирования инкапсулированных ОЛ с FITC-мечеными лектинами различных молекулярных масс. Для анализа цитотоксичности микрокапсулы определяли жизнеспособность клеток до и после инкапсуляции с использованием окрашивания Live/Dead. Для оценки биосовместимости и скорости биодеградации микрокапсулы трансплантировали в ткани сальника крыс. Через 7 дней, оценивали количество вымытых капсул, их целостность, степень адгезии клеток и фиброзирова-ния. Оставшиеся в тканях капсулы исследовали с использованием гистологического анализа.
Выявлено, что капсулы проницаемы для низкомолекулярных лектинов (36 и 75 кДа) и не проницаемы для высокомолекулярных лектинов (120 и 150 кДа), что позволяет инсулину проникать через мембрану и ограничивает антитела. Жизнеспособность ОЛ после инкапсуляции составила более 70 %. Целостность микрокапсул на основе альгината и РМОТА после вымывания составила более 80 %. Кроме того, большая часть вымытых капсул не была покрыта окружающими тканями, а гистологический анализ выявил незначительную иммунную реакцию и отсутствие фиброза вокруг капсул. Разработанная методика инкапсуляции островков Лангерганса и полученные данные могут быть использованы как основа для дальнейшей разработки технологии иммуноизолирующей микрокапсулы для лечения диабета первого типа. Работа выполнена при поддержке Министерства здравоохранения РФ (государственное задание № АААА-А20-120022590096-6).
МЕЗЕНХИМАЛЬНЫЕ СТРОМАЛЬНЫЕ КЛЕТКИ ЖИРОВОЙ ТКАНИ В ТЕРАПИИ ПАЦИЕНТОВ С ЦИРРОЗОМ ПЕЧЕНИ РАЗЛИЧНОЙ ЭТИОЛОГИИ
Е.Д. Жекибаев, О.И. Желтова, И.В. Меледина, Е.Я. Шевеля, Е.Р. Черных
ФГБНУ НИИ фундаментальной и клинической иммунологии, Новосибирск, Россия
e-mail: evgeniy.zhekibaev@bk.ru
Ключевые слова: цирроз печени, стромально-васкулярная фракция, мезенхимальные стромальные клетки.
На сегодняшний день трансплантация печени является единственным радикальным методом лечения пациентов с циррозом печени. Однако, данный метод имеет свои недостатки (длительное ожидание донора, продолжительная иммуносупрессивная терапия, высокая стоимость). Данные обстоятельства побуждают искать альтернативные методы лечения таких пациентов. В частности, метод использования клеточных технологий представляет большой интерес в связи со способностью мезенхимальных стормальных клеток выполнять функцию микроокружения для кроветворных стволовых клеток, дифференцироваться в гепато-цитоподобные клетки, оказывать стимулирующий эффект на регенерацию гепатоцитов и, оказывая супрессорную активность воспалительного процесса, препятствовать
дальнейшей прогрессии фиброза. Нами было инициировано поисковое научное исследование, целью которого стала оценка безопасности аутологичной трансплантации мезенхимальных стромальных клеток (МСК), полученных из жировой ткани (липоаспирата), в комплексном лечении больных циррозами печени (ЦП) различного генеза. Исследуемую группу составили 20 пациентов (7 мужчин и 13 женщин, средний возраст 53,5 года). Этиологические факторы цирроза представлены: вирусной (45%, В с дельта-агентом, n=2, и С, n=7) и невирусной этиологией (55%) ЦП. У 4 пациентов ЦП был обусловлен токсическим воздействием, у 5 — первичным билиарным циррозом, у 2 — криптогенным ЦП. В соответствии с классификацией ЦП по Child-Pugh пациенты распределились поровну в классах А (5-6 баллов) и В (7-8 баллов). Средний балл по шкале MELD составил 9,8. Всем пациентам была проведена липоаспирация (объём жировой ткани в среднем 100 мл) с последующим выделением стромально-васку-лярной фракции и культивированием последней в стандартных условиях в течение 14 дней с целью получения МСК. Клинико-лабораторное обследование пациентов проводилось до начала терапии с мониторингом состояния больных через 6-12 мес. после окончания лечения. Всем пациентам однократно вводили аутологичные МСК (в среднем 12,94х10л6). Введение мСк хорошо переносилось пациентами и не сопровождалось развитием каких-либо побочных эффектов и серьезных нежелательный явлений. Из 12 пациентов, обследованных через 6-12 мес., половина пациентов (6 человек) ответили на проводимую терапию в виде уменьшения/ стабилизации балла по шкале MELD, у остальных балл по MELD увеличился. Ответившие пациенты не отличались от пациентов оппозитной группы ни по этиологии, ни по тяжести ЦП, в то же время были значимо старше (55,5 и 48 лет, p<0,05). В настоящее время мониторинг пациентов продолжается. Полученные данные согласуются с имеющимися немногочисленными сообщениями [1] и позволяют сделать предварительный вывод о том, что применение МСК, полученных из клеток жировой ткани пациентов с циррозом печени различной этиологии, является безопасным и потенциально перспективным методом для стабилизации или улучшения функции печени.
Литература:
1. Sakai Y., Fukunishi S., Takamura M. et al. Regen Ther. 2021. V.
18. P. 97-101.
ВЛИЯНИЕ МОДЕЛИРОВАНИЯ МИКРОГРАВИТАЦИИ НА МАТРИСОМ МЕЗЕНХИМАЛЬНЫХ СТРОМАЛЬНЫХ КЛЕТОК IN VITRO
И.В. Живодерников, Д.К. Матвеева, А.Ю. Ратушный, Л.Б. Буравкова
ГНЦ РФ Институт медико-биологических проблем РАН, Москва, Россия
e-mail: kordait-2213@yandex.ru
Ключевые слова: микрогравитация, внеклеточный матрикс, мезенхимальные стромальные клетки.
Мезенхимальные стромальные клетки (МСК) являются мультипотентными предшественниками клеток, участвующих в ремоделировании костной ткани и продуцирующих внеклеточный матрикс. Костная ткань претерпевает негативные изменения в условиях микрогравитации, и причиной таких изменений являются гравитационная чувствительность клеток. Целью данной
работы было изучить матрисом МСК при моделировании некоторых эффектов микрогравитации.
МСК из жировой ткани человека 3-5 пассажей после достижения монослоя разделялись на 2 группы: статический контроль и группа с моделированной микрогравитацией на random positioning machine (RPM). После 10-су-точного воздействия для анализа молекул различных групп матрисома использовали методы гистологической окраски с помощью красителей Sirius Red и Fast Green, ПЦР в реальном времени, дот-блоттинга и мультиплексного анализа секретома.
Полуколичественная оценка продукции основных структурных белков корового матрисома выявила изменения в их содержании: снижение коллагеновых и повышение неколлагеновых компонентов ВКМ после экспозиции на RPM. Также повысилась экспрессия генов тенасцита (TNC) и тромбоспондинов (THBS1, THBS2, THBS3), что может провоцировать ослабление клеточной адгезии к матриксу и приводить к ухудшению минерализации и остеогенной дифференцировки МСК.
Анализ содержания протеаз ВКМ в кондиционированной среде МСК выявил повышение секреции метал-лопротеиназ (MMP-1, -2, -3) и катепсинов A, B, D при 10-суточном моделировании эффектов микрогравитации по сравнению со статическим контролем. При этом на транскрипционном уровне было продемонстрировано снижение экспрессии генов, кодирующих молекулы ингибиторов протеаз (TIMP-1 и TIMP-3).
Исследование цитокинов и факторов роста в кондиционированной среде после 10-суточной экспозиции на RPM показало сдвиг секретома МСК в провоспали-тельный сектор: Была повышена секреция провоспа-лительных цитокинов, таких как VEGF, IL-8, IL-12, GROa (CXCL1), MIG (CXCL9) и M-CSF (CSF-1).
Таким образом, моделирование эффектов микрогравитации вызывает активацию протеолитических процессов в МСК, снижение содержания коллагеновых белков в ВКМ МСК и повышение секреции провоспалительных цитоки-нов. В совокупности данные изменения могут обуславливать некоторые механизмы негативных изменений в костной ткани космонавтов во время космического полёта.
Работа выполнена при поддержке гранта РФФИ N 19-29-04026.
ДИНАМИЧЕСКАЯ РОЛЬ FOXP3 + TREG В РАЗВИТИИ СЕПСИСА ПРИ SARS-COV-2 И ТЕРАПЕВТИЧЕСКИЕ ВОЗМОЖНОСТИ CAR-TREG В ПРОФИЛАКТИКЕ ОСЛОЖНЕНИЙ
О.А. Жукова1, М.В. Бычинин1, И.М. Калугин3, С.М. Юсубалиева4, Г.М. Юсубалиева1 2
1 ФНКЦ ФМБА России, Москва, Россия
2 Инситут молекулярной биологии РАН им. В.А. Энгельгардта, Москва, Россия
3 Первый МГМУ им. Сеченова, Москва, Россия
4 НАО Медицинский Университет «Астана», Нур-Султан, Казахстан
e-mail: oksana.saprikina82@mail.ru
Ключевые слова: коронавирусная инфекция (COVID-19), Т-регуляторные клетки, сепсис.
Коронавирусная болезнь 2019 года (COVID-19) приводит к развитию тяжелой пневмонии, острого респираторного дистресс-синдрома (ОРДС), полиорганной недостаточности, сепсиса и летального исхода. Регуляторные Т-клетки (FOXP3 +Tregs) играют важную роль в поддержании
