CC BY
21
УДК 597.317: 639.32
А.В. Виноградская, А.А. Матвеев, Т.В. Рязанова, Д.А. Терентьев, Ю.К. Курбанов
МЕТОДЫ ВИЗУАЛИЗАЦИИ ГОДОВЫХ КОЛЕЦ НА ПОЗВОНКАХ НЕКОТОРЫХ ВИДОВ РОМБОВЫХ СКАТОВ (RAJIDAE BLAINVILLE, 1816)
Для определения возраста трех видов скатов - щитоносного Bathyraja parmifera Bean, фиолетового Bathyraja violacea Suvorov и алеутского Bathyraja aleutica Gilbert - опробовано несколько методов визуализации годовых колец, расположенных на вогнутой верхней поверхности (калькареумах) позвонков. Кроме описанных в литературе методик и их модификаций, а также стандартных гистологических методов использовали разработанную нами методику окрашивания целого позвонка в 1%-ном спиртовом растворе бриллиантового зеленого (Viride nitens) с последующей термической обработкой. Наилучшим образом годовые кольца просматриваются на гистологических срезах и после окрашивания бриллиантовым зеленым. В отличие от трудоемкой гистологической обработки предложенный нами метод является достаточно быстрым и эффективным для определения количества годовых колец на позвонках скатов. Он простой в использовании, не требует специальных реактивов, дорогостоящего оборудования и может применяться даже в полевых условиях.
Ключевые слова: ромбовые скаты, годовые кольца, окрашивание позвонков, гистологический срез, декальцинация, бриллиантовый зеленый.
A.V. Vinogradskaya, A.A. Matveev, T.V. Ryazanova, D.A. Terentiev, U.K. Kurbanov
VISUALIZATION METHODS OF ANNUAL RINGS ON THE CALLBOARDS OF SOME TYPES OF ROMBIAN SKATES (RAJIDAE BLAINVILLE, 1816)
To determine the age of three species of rombian skates, including shield-bearing Bathyraja parmifera Bean, purple Bathyraja violacea Suvorov, and Aleutian Bathyraja aleutica Gilbert, several methods of visualization of annual rings located on the concave upper surface (calareums) of the vertebrae were tested. Besides applying methods described in the scientific references, their modifications and standard histological protocols, we also used our personally developed method to stain the whole vertebra in 1% alcohol solution of brilliant green (Viride nitens) followed by heat treatment. The annual rings were best observed in histological sections and after staining with brilliant green. In contrast to the time-consuming histological processing, our newly designed method was fast enough and effective for determining the number of annual rings on the vertebrae of rombian skates. It does not require complex and time-consuming processing, special reagents and expensive equipment and can be applied even in the field.
Key words: rombian skates, annual rings, vertebral staining, histological section, decalcification, brilliant green.
DOI: 10.17217/2079-0333-2019-49-89-97
Введение
У берегов Камчатки встречаются 16 видов скатов, относящихся к семейству обыкновенных или ромбовых Rajidae [1]. Из них наиболее массовыми и крупными скатами, представляющими промысловый интерес, являются пять видов: скат Мацубары Bathyraja matsubarai, пятнистый скат Bathyraja maculata, алеутский Bathyraja aleutica, фиолетовый скат Bathyraja violacea и щитоносный Bathyraja parmifera [2-7].
Представители этого рода обладают специфическими особенностями биологии. Им присущи медленный темп роста [8], позднее половое созревание [9], низкие темпы воспроизводства [10] и некоторые специфические особенности эмбрионального развития яиц, что делает их запасы уязвимыми в отношении промысла [11-17]. В настоящее время существует значительный пробел в представлениях о биологии развития скатов. Так еще до сих пор точно не установлена продолжительность их жизни. В одних случаях имеющиеся в литературе оценки возраста заметно разнятся, в других - такие сведения отсутствуют.
Материалом для определения возраста пластиножаберных рыб, к которым относятся и скаты, служат позвонки, спинные хребты, невральные (мозговые) арки и хвостовые шипы [18]. Позвонки используются для определения возраста скатов чаще, чем хвостовые шипы, поскольку сбор и подготовка препаратов из них гораздо проще, чем из шипов. Однако, по свидетельству многих авторов, они неприемлемы для его точного определения, так как размер шипа не всегда коррелирует с линейным размером рыбы [19-22]. Тем не менее российские исследователи определяют возраст скатов в основном по количеству колец на наиболее крупных шипах, расположенных на дорзальной поверхности их тела [23].
В настоящее время существуют разные методы определения возраста хрящевых рыб. Все они основаны на подсчете количества годовых колец на позвонках. Для их точной идентификации позвонки подвергают обработке - окрашивают, получают гистологические препараты или прошлифовку поверхности. Перечисленные методы визуализации годовых колец дают хорошие результаты. Их общим недостатком является большая трудоемкость и необходимость использования специального оборудования [24]. Менее затратны по усилиям различные модификации стандартных методов окраски целых позвонков или их сагиттальных (продольных) срезов [20, 25-26], но и они требуют значительных затрат времени.
В ходе проведенного нами исследования были апробированы известные методы визуализации годовых колец у представителей рода Bathyraja и разработан собственный метод обработки и окрашивания их позвонков. Ниже представлены сравнительные результаты апробации всех упомянутых выше методов визуализации годовых колец у скатов.
Материалы и методы
Материалом для исследований послужили позвонки B. parmifera, B. violacea и B. aleutica, собранные сотрудниками лаборатории морских промысловых рыб Камчатского филиала ФГБНУ «ВНИРО» («КамчатНИРО») во время донного тралового промысла у юго-западного побережья Камчатки донным тралом в 2017 г. Их отбирали у свежевыловленных особей скатов. Для этого на дорсальной стороне рыб делали продольный разрез и отсекали участки позвоночника, расположенные ближе к началу хвостовой части. Отбор материала был проведен у 8 особей разных видов скатов.
От сопутствующих тканей позвонок частично очищали механическим способом. Далее образцы подвергали заморозке или фиксировали в 70%-ном спирте. В лаборатории замороженные позвонки дефростировали и подвергали тщательной механической очистке от хрящевой и мышечной ткани. Зафиксированные в спирте участки позвоночника промывали проточной водой. Подготовленный таким образом материал использовали для экспериментальных исследований. Для подсчета колец использовали стереомикроскоп Olympus CZX10. Гистологические срезы фотографировали под микроскопом Olympus ВХ43.
Результаты и обсуждение
В первом случае годовые кольца на поверхности целых позвонков скатов определяли без окрашивания. Для этого вогнутую поверхность позвонка вручную шлифовали мелкозернистой наждачной бумагой (P1500), а затем просматривали под стереомикроскопом на темном фоне в отраженном свете. На поверхности позвонка очень слабо определялись кольца, при этом было трудно отличить годовое кольцо от царапины, появившейся в ходе механической обработки позвонка.
Окрашивание позвонков без предварительной декальцинации
Для сравнимости результатов окрашивания позвонков разных способами использовали позвонки от одной особи. Окрашивали как целые позвонки, так и разрезанные сагиттально. Позвонки, хранившиеся в 70%-ном спирте, перед окрашиванием промывали в проточной воде в течение 15 мин.
Азотнокислое серебро. Для апробации этого красителя использовали позвонки ската B. parmifera, длина которого достигала 90 см. Окрашивание 1%-ным азотнокислым серебром проводили в точном соответствии с методами, предложенными А.В. Деревщиковым [25] и A.C. Хендерсеном с соавторами [26], и их модифицированными вариациями, касающимися
изменения времени экспозиции позвонков в красителе и под ультрафиолетовым излучением. Отметим, что в последней статье точное время экспозиции позвонков в ультрафиолетовом свете не указано. Ее авторы предлагают облучать их ультрафиолетом до появления очертаний годовых колец.
Результаты визуализации колец на позвонках, окрашенных азотнокислым серебром, представлены в табл. 1.
Таблица 1
Результаты окрашивания изучаемого материала азотнокислым серебром разными методами
Изученный материал Время экспозиции Результат окрашивания
Окрашивание Ультрафиолетовое воздействие Промывка в проточной воде Тиосульфат натрия
Целый позвонок 1 мин 10 с 5 мин Нет Кольца не видны
1 мин 5 с нет 10 мин Очень слабо угадываются 5-6 колец
Сагиттальный срез позвонка 45 мин 10 с нет 10 мин Поверхность черная, колец не видно
45 мин 5 с нет 10 мин Очень слабо угадываются 5 колец
Примечание. В первой строке приведены результаты окрашивания материала по методу А.В. Деревщикова [25], в третьей - А.С. Хендерсена с соавторами [26], во 2 и 4-й - по их методам, модифицированным авторами.
Кристаллический фиолетовый. Использовали позвонки ската B. parmifera, длина которого достигала 76 см. Целые позвонки и их половины окрашивали в 0,01%-ном растворе кристаллического фиолетового по методике, предложенной А.В. Деревщиковым [25]. Для достижения лучшего результата пробовали менять время экспозиции образцов в красителе. Процесс окрашивания останавливали путем ополаскивания в 50%-ном изопропиловом спирте или водой. Результаты эксперимента представлены в табл. 2.
Таблица 2
Результаты окрашивания изучаемого материала кристаллическим фиолетовым разными методами
Изученный материал Время экспозиции
Окрашивание Ополаскивание водой Обработка 50%-ным изо-пропиловым спиртом Результат окрашивания
Целый позвонок 15 мин Да Да Кольца не видны
2 ч Нет Да 3 кольца
Сагиттальный срез позвонка 15 мин Да Нет Очень слабо 7-9 колец
12 ч Да Да Очень слабо 7-9 колец
Примечание. В первой строке приведены результаты окрашивания материала по методу А.В. Деревщикова [25], в третьей - А.С. Хендерсена с соавторами [26], во 2 и 4-й - по их методам, модифицированным авторами.
Гематоксилин Эрлиха. Позвонок от образца того же вида ската, имевшего длину 76 см, был окрашен гематоксилином Эрлиха (водный раствор в соотношении 1 : 10). Этот краситель обычно применяется для окрашивания костной ткани с целью визуализации линий склеивания, так как с его помощью хорошо выявляются хрящевые элементы, контрастирующие с коллагено-вой тканью [27]. Предварительно промытый в проточной воде в течение 12 ч позвонок разрезали на 2 части сагиттально по центру. Результаты окрашивания изученного материала представлены в табл. 3.
Таблица 3
Методы обработки сагиттальных срезов позвонков с использованием гематоксилина Эрлиха
Изученный материал Время экспозиции
Окрашивание Промывка в проточной воде Результат
Сагиттальный срез 15 мин 15 мин Очень слабо различаются 6 колец
Сагиттальный срез 12 ч 15 мин Очень слабо различаются 6 колец
Окрашивание позвонков после декальцинации
Стандартная гистологическая обработка и окрашивание. Позвонки от скатов B. parmifera длиной 79,0 см и B. parmifera длиной 85,0 см обработали обычными гистологическими методами. Целые позвонки фиксировали в растворе Девидсона в течение 48 ч [28]. За счет присутствия в составе этого фиксатора ледяной уксусной кислоты при обработке материала происходит декальцинация костных тканей. Обезвоживание и заливку образцов в парафин, приготовление гистологических срезов проводили по стандартной гистологической методике. Полученные препараты окрашивали гематоксилин-эозином по Эрлиху [27]. На гистологических препаратах позвонков обоих скатов линии роста видны достаточно четко. Однако в обоих случаях в срез не попала или краевая, или центральная область поверхности позвонка, и подсчет количества полос не дал однозначного результата (рис. 1).
Рис. 1. Микрофотографии срезов позвонков скатов, окрашенных гематоксилин-эозином. 1 - позвонок с четырьмя годовыми кольцами (указаны стрелками); 2 - центральная часть калькареума
Таким образом, обычная гистологическая обработка дает хорошие результаты в плане визуализации линий роста. Однако даже изготовление большого количества серийных срезов не гарантирует адекватного подсчета всех линий роста. Кроме того, этот метод требует много времени, специального оборудования и не применим для массовых исследований.
Окрашивание декальцинированного материала по методу А.В. Деревщикова [25]
Окрашивали позвонки скатов, принадлежащих к видам B. violacea и B. parmifera, длина их тела составляла 69 и 91 см соответственно. Декальцинацию проводили в 5%- и 70%-ном растворах азотной кислоты, в растворе азотная кислота - формалин, растворе EDTA [27, 29].
Позвонки B. violacea декальцинировали в 5%-ном растворе азотной кислоты. Для этого целый позвонок помещали в раствор азотной кислоты и каждые 15 мин проверяли степень декальцинации. Спустя 7 ч образец стал эластичным. Для прерывания декальцинации образцы помещали в 5%-ный раствор сульфата натрия на 12 ч. Затем целый позвонок разрезали по центру. Одну из половин позвонка окрашивали в 0,01%-ном растворе кристаллического фиолетового, вторую - 1%-ным азотнокислым серебром по методу А.В. Деревщикова [25]. В обоих случаях линии на вогнутой стороне позвонков и на сагиттальных срезах не были обнаружены.
Позвонки ската B. violacea (длиной 69,0 см) декальцинировали также в растворе азотная кислота - формалин. Целый позвонок поместили в декальцинирующий раствор и проверяли степень декальцинации каждые 15 мин. Он стал эластичным по прошествии 5 ч. Далее его промывали в проточной воде 12 ч, затем разрезали на две половины. Окрашивание в 0,01%-ном растворе кристаллического фиолетового и 1%-ном азотным серебром, как и в первом случае, не дало результатов.
Позвонки В. ратт!/ета (длина 91 см) декальцинировали в растворе ББТЛ (5,5 г ББТЛ, 10 мл 40%-ного формалина, 90 мл дистиллированной воды) в течение недели. Затем для удаления де-кальцинирующего раствора образец перенесли в физраствор на 2 ч и далее окрашивали раствором гематоксилина по Эрлиху тем же способом, что и позвонки, не подвергавшиеся декальцинации. При микроскопировании окрашенного материала кольца не просматривались.
Окрашивание декальцинированного материала методами, разработанными авторами Целые позвонки выдерживали в 70%-ном растворе уксусной кислоты. Время их экспозиции 2-14 дней, в зависимости от размера позвонков. Окончание выдержки определяли по степени размягчения хрящевой ткани на поверхности позвонка и считали его завершенным, когда край калькареума с легкостью отделялся. Декальцинированные позвонки промывали в воде около 3 с и очищали от хрящевой ткани и далее использовали для окрашивания.
Целый позвонок ската В. уго!асеа длиной 59,5 см окрашивали в растворе кристаллического фиолетового в течение 10 мин, далее промывали его в 96%-ном этиловом спирте. При изучении позвонка под микроскопом были хорошо видимы 8 колец (рис. 2).
Рис. 2. Целый позвонок В. violacea, окрашенный кристаллическим фиолетовым.
Черными точками в выделенном квадрате указаны восемь годовых колец
Тот же окрашенный позвонок разделили сагиттально на две части и подвергли повторному окрашиванию. При этом первую половину позвонка в течение 10 мин окрашивали раствором кристаллического фиолетового и промывали 96%-ным этиловым спиртом. При его микрокопировании были хорошо различимы 8 колец (рис. 3).
Рис. 3. Половина позвонка В. violacea, окрашенного кристаллическим фиолетовым. Черными точками в выделенном квадрате указаны восемь годовых колец
Эту же половину позвонка по месту среза шлифовали наждачной мелкозернистой бумагой (зернистость P 1500). При просмотре под бинокуляром годовые кольца были видны нечетко. При обработке фотографии половинки позвонка в графическом редакторе после применения черно-белого фильтра, увеличения резкости, повышения контраста они проявились отчетливее (рис. 4).
Рис. 4. Срез позвонка B. violacea после обработки наждачной мелкозернистой бумагой.
Точками в выделенном квадрате указаны восемь годовых колец
Окрашивание позвонков ската B. aleutica с длиной тела 94,6 см проводили в 1%-ном спиртовом растворе бриллиантового зеленого в течение 10 мин, затем их промывали в чистой воде. После окрашивания кольца были различимы, но подсчитать их количество было трудно, поскольку невозможно было определить, какие из колец являются годовыми, а какие добавочными. Этот же позвонок осушили бумажной салфеткой и обожгли над пламенем горелки до тех пор, пока его вогнутая поверхность не поменяла цвет с зеленого на светло-коричневый. Многократные повторы данного способа окрашивания показали, что годовые кольца на вогнутой поверхности позвонка просматриваются четко и хорошо отличаются от добавочных колец (рис. 5).
Рис. 5. Позвонок Б. aleutica. 1 - позвонок, окрашенный в 1%-ном спиртовом растворе бриллиантового зеленого; 2 - этот же позвонок, подвергнутый термической обработке (точками в выделенном квадрате указаны тринадцать годовых колец)
Сравнение методов визуализации годовых колец у позвонков скатов, таким образом, показывает, что наилучшие результаты дает окрашивание декальцинированного материала 1%-ным спиртовым раствором бриллиантового зеленого.
Заключение
Результаты проведенного исследования позволяют говорить о том, что обычная гистологическая методика позволяет хорошо визуализировать годовые кольца у позвонков скатов. Однако ее использование требует навыков получения качественных продольных и поперечных срезов. Она затратна по времени, требует большого расхода химреактивов, использования дорогостоящего оборудования для производства гистологических препаратов, поэтому малопригодна для изучения большого количества образцов.
Предложенная нами методика окрашивания целого позвонка в 1%-ном спиртовом растворе бриллиантового зеленого намного проще и дешевле. При этом она пригодна для достоверного определения возраста скатов и изучения большого количества предварительно декальциниро-ванных образцов. Полученные результаты могут быть использованы для определения возрастного состава популяций ромбовых скатов, обитающих в прикамчатских водах.
Литература
1. Шейко Б.А., Федоров В.В. Класс Cephalaspidomorphi - Миноги. Класс Chondrichthyes -Хрящевые Рыбы. Класс Holocephali - Цельноголовые. Класс Osteichthyes - Костные рыбы // Каталог позвоночных Камчатки и сопредельных морских акваторий. - Петропавловск-Камчатский: Камчатский печатный двор, 2000. - С. 7-69.
2. Долганов В.Н., Тупоногов В.Н. Определительные таблицы скатов родов Bathyraja и Rhinoraja (сем. Rajidae) дальневосточных морей России // Известия ТИНРО. - 1999. - Т. 126. -С.657-664.
3. Орлов А.М. Алеутский скат - Bathyraja aleutica (Gilbert, 1896) // Промысловые рыбы России / под ред. О.Ф. Гриценко, А.Н. Котляра и Б.Н. Котенева. - М.: ВНИРО, 2006а. - Т. 1. -С.45-46.
4. Орлов А.М.. Пятнистый скат - Bathyraja maculata Ishiyama et Ishihara, 1977 // Промысловые рыбы России / под ред. О.Ф. Гриценко, А.Н. Котляра и Б.Н. Котенева. - М.: ВНИРО, 2006б. - С. 46-47.
5. Орлов А.М. Скат Мацубары - Bathyraja matsubarai (Ishiyama, 1952) // Промысловые рыбы России / под ред. О.Ф. Гриценко, А.Н. Котляра и Б.Н. Котенева. - М.: ВНИРО, 2006в. - Т. 1. -С. 47-49.
6. Орлов А.М. Щитоносный скат - Bathyraja parmifera (Bean, 1881) // Промысловые рыбы России / под ред. О.Ф. Гриценко, А.Н. Котляра и Б.Н. Котенева. - М.: ВНИРО, 2006г. - Т. 1. -С.49-50.
7. Пространственное распределение массовых видов скатов рода Bathyraja в районе северных Курильских островов и юго-восточной Камчатки в различные сезоны 1996-1997 гг. / Р.Н. Фатыхов, Ю.Н. Полтев, И.Н. Мухаметов, О.Ю. Немчинов // Промыслово-биологические исследования рыб в тихоокеанских водах Курильских островов и прилежащих районах Охотского и Берингова морей в 1992-1998 гг. - М.: ВНИРО, 2000. - С. 104-120.
8. Орлов А.М., Токранов А.М. Природоохранный статус хрящевых рыб (Chondrichthyes) дальневосточных вод России // Сохранение биоразнообразия Камчатки и прилегающих морей: Тез. докл. XII междунар. науч. конф., посвященной 300-летию со дня рождения С.П. Крашенинникова. - Петропавловск-Камчатский: Камчатпресс, 2011. - С. 113-117.
9. Adams P.B. Life history patterns in marine fishes and their consequences for fisheries management // Fishery Bulletin. - 1980. - V. 78, № 1. - P. 1-10.
10. Sharks and their relatives: ecology and conservation / M. Camhi, S. Fowler, J. Musick, A. Brautigam, S. Fordham // IUCN/SSC Shark Specialist Group. IUCN, Gland, Switzerland and Cambridge, UK, 1998. - 39 p.
11. Casey J.M., Myers R.A. Near extinction of a large, widely distributed fish // Science. -1998. -281. - P. 690-692.
12. Cortes E. Life history patterns and correlations in sharks // Reviews in Fisheries Science. -2000. - V. 8, № 4. - P. 299-344.
13. Fishery stability, local extinctions, and shifts in community structure in skates / N.K. Dulvy, J.D. Metcalfe, J. Glanville, M.G. Pawson, J.D. Reynolds // Conservation Biology. - 2000. - №. 14 (1). P.283-293.
14. Gulf of Alaska skates. In Stock assessment and fishery evaluation report for the groundfish resources of the Gulf of Alaska / S. Gaichas, N. Sagalkin, C. Gburski, D. Stevenson, R. Swanson // North Pacific groundfish stock assessment and fishery evaluation reports for 2006. Appendix B. Chapter 16. -2005. - P. 881-926.
15. Holden M.J. Problems in the rational exploitation of elasmobranch populations and some suggested solutions // Sea fisheries research. - New York: John Wiley and Sons, 1974. - P. 117-137.
16. Hoenig J.M., Gruber, S.H. Life-history patterns in the elasmobranchs: implications for fisheries management // Elasmobranchs as living resources: advances in the biology, ecology, systematics, and the status of the fisheries: NOAA Technical Report NMFS 90. - 1990. - P. 1-16.
17. King J.R., McFarlane G.A. Marine fish life history strategies: applications to fishery management // Fisheries Management and Ecology. - 2003. - № 10. - P. 249-264.
18. Cailliet G.M., Goldman K.J. Age determination and validation in chondrichthyan fishes // Biology of sharks and their relatives. - FL, Boca Raton: CRC Press, 2004.
19. Davis C.D., Gailliet G.M., Ebert D.A. Age and growth of the roughtail skate Bathyraja trachura (Gilbert1892) from the eastern North Pacific // Environmental Biology of Fishes - 2007. -№ 80. - P. 325-336.
20. Life history and population dynamics of Alaskan skates: providing essential biological information for effective management of bycatch and target species / D.A. Ebert, W.D. Smith, D.L. Haas, S.M. Ainsley, G.M. Cailliet // North Pacific Research Board Final Report 510. - 2007. - 124 p.
21. Gallagher M.J., Green M.J., Nolan C.P. The potential use of caudal thorns as anon-invasive ageing structure in the thorny skate (Amblyraja radiate Donovan, 1808) // Environmental Biology of Fishes. - 2006. - № 77. - P. 265-272.
22. Matta M.E., Gunderson D.R. Age, growth, maturity and mortality of the Alaska skate, Bathyrajaparmifera, in the eastern Bering Sea // Environmental Biology of Fishes. - 2007. - № 80 (23). - P. 309-323.
23. Долганов В.Н. Размеры, возраст и рост скатов семейства Rajidae дальневосточных морей России // Известия ТИНРО. - 2005. - Т. 143. - С. 84-89.
24. Age and growth estimates for the smooth skate, Malacoraja senta, in the Gulf of Maine / L.J. Natanson, J.A. Sulikowski, J.R. Kneebone, P.C. Tsang // Environmental Biology of Fishes. -2007. - № 80. - P. 293-308.
25. Деревщиков А.В. Методические подходы к определению возраста звездчатого ската (Amblyraja radiate) с использованием целых позвонков и их срезов // Рыбное хозяйство. - М.: ФГУП «Национальные рыбные ресурсы», 2013. - № 1. - С. 43-46.
26. Henderson A.C., Arkhipkin A.I., Chtcherbich J.N. Distribution, Growth and Reproduction of the White-spotted Skate Bathyraja albomaculata (Norman, 1937) around the Falkland Islands // J. Northw. Atl. Fish. Sci. - 2005. - № 35. - P. 79-87
27. Bancroft D., Stevens A., Turner D.R. Theory and practice of histological techniques. - Edinburgh-London-Melbourne-New York: Churchill Livingstone Inc., 1990. - 725 p.
28. Bell T.A., Lightner D.V. A handbook of normal penaeid shrimp histology. - Louisiana. Baton Rouge: The World aquaculture society, 1988. - 114 p.
29. Correia J.P., Figueiredo I.M. A modified decalcification technique for enhancing growth bands in deep-coned vertebrae of elasmobranchs // Environmental Biology of Fishes. - 1997. - № 50. -P. 225-230.
Информация об авторах Information about the authors
Виноградская Анастасия Викторовна - Камчатский филиал ФГБНУ «ВНИРО»; 683000, Россия, Петропавловск-Камчатский; специалист; vinogradskaya.a@kamniro.ru
Vinogradskaya Anastasiya Viktorovna - Kamchatka Branch of Russian Federal Research Institute of Fisheries and Oceanography "VNIRO"; 683000, Russia, Petropavlovsk -Kamchatsky; specialist; vinogradskaya. a@kamniro. ru
Матвеев Андрей Анатольевич - Камчатский филиал ФГБНУ «ВНИРО»; 683000, Россия, Петропавловск-Камчатский; специалист; matveev.a.a@kamniro.ru
Matveev Andrey Anatolevich - Kamchatka Branch of Russian Federal Research Institute of Fisheries and Oceanography "VNIRO"; 683000, Russia, Petropavlovsk-Kamchatsky; specialist; matveev.a.a@kamniro.ru
Рязанова Татьяна Вячеславовна - Камчатский филиал ФГБНУ «ВНИРО»; 683000, Россия, Петропавловск-Камчатский; ведущий научный сотрудник, кандидат биологических наук; ryazanova.t.v@kamniro. ru
Ryazanova Tatyana Vyacheslavovna - Kamchatka Branch of Russian Federal Research Institute of Fisheries and Oceanography "VNIRO"; 683000, Russia, Petropavlovsk-Kamchatskу; Leading Researcher, Candidate of Biological Sciences; ryazanova.t.v@kamniro.ru
Терентьев Дмитрий Анатольевич - Камчатский филиал ФГБНУ «ВНИРО»; 683000, Россия, Петропавловск-Камчатский; ведущий научный сотрудник, кандидат биологических наук; terentiev.d.a@kamniro.ru
Terentiev Dmitry Anatolyevich - Kamchatka Branch of Russian Federal Research Institute of Fisheries and Oceanography "VNIRO"; 683000, Russia, Petropavlovsk-Kamchatskу; Leading Researcher, Candidate of Biological Sciences; terentiev.d.a@kamniro.ru
Курбанов Юрий Каримович - Камчатский филиал ФГБНУ «ВНИРО»; 683000, Россия, Петропавловск-Камчатский; специалист; kurbanov.u.k@kamniro.ru
Kurbanov Yuri Karimovich - Kamchatka Branch of Russian Federal Research Institute of Fisheries and Oceanography "VNIRO"; 683000, Russia, Petropavlovsk-Kamchatskу; specialist; kurbanov.u.k@kamniro.ru
