CC BY
58
УДК 616.1: 549.3+549.5
МЕТОДЫ ОБНАРУЖЕНИЯ ВНЕКЛЕТОЧНЫХ МИНЕРАЛЬНЫХ ЗЕРЕН В ТКАНЯХ СЕРДЕЧНО-СОСУДИСТОЙ СИСТЕМЫ
Л.М. Ламанова*, Ф.В. Алябьев**
*ГОУ ВПО Томский государственный университет **ГОУ ВПО Сибирский государственный медицинский университет Росздрава, г. Томск E-mail: LMLamanova@mail.ru
METHODS OF EXTRACELLULAR MINERALS IDENTIFICATION IN CARDIOVASCULAR SYSTEM
L.M. Lamanova*, F.V. Alyabyev**
*Tomsk State University “Siberian State Medical University, Tomsk
Целью исследования является изучение патогенной минерализации в сердечно-сосудистой системе (ССС). С помощью различных физических, и физико-химических методов, а также впервые примененных к тканям человеческого организма минералогических методов, были впервые выявлены различные минералы, кроме широко известного карбонат-содержащего гидроксилапатита и некоторых других фосфатов. Наиболее важными из этих новых минералов, по возможному воздействию на организм человека, представляются оксиды и сульфиды металлов с переменной валентностью. Причиной отложения минералов в тканях предположительно является распад металлосвязывающих белков и/или липидно-металлических комплексов. Источник Ti, скорее всего ятрогенный. Ключевые слова: сердечно-сосудистая система, биоминерализация, биогенный внеклеточный магнетит, магге-мит, патогенная минерализация, внеклеточные оксиды.
The aim of this reseach is to study the ectopic mineralization in cardiovascular system tissues. By means of different physical and physico-chemical analitic techniques and mineralogical methods, various minerals in addition to carbon-bearing hydroxyapatite have been revealed for the first time. The most important ones among new minerals according to their possible impact on human organisms are oxides and sulphides of metals with variable valencies. The cause of the minerals deposition in tissue hypothetically is decomposition of the metal-binding proteins and/or of the lipid-metal binding complexes. The most likely source of the titanium minerals is iatrogenic one.
Key word: cardiovascular system, biomineralization, biogenic extracellular magnetite, maghemite, ectopic mineralization, extracellular oxides.
Введение
В последние десятилетия за рубежом и отчасти в России проявляется устойчивый интерес к медицинской минералогии. Более 50 лет, с помощью минералогических оптическо-поляризационных методов исследуются такие патогенные биоминеральные объекты человеческого организма, как уролиты, холелиты, зубные, слюнные и прочие крупные полиминеральные образования, легко извлекаемые из организма, по причине отсутствия тесной связи с тканью. Минерализация тканей изучена значительно хуже. В настоящее время, в соответствии с потребностями протезирования, детально изучен физиоген-ный процесс минерализации костной ткани. В остальных тканях человеческого организма, до последнего времени, физическими и электронно-микроскопическими методами интенсивнее всего изучается такая распространенная патологическая минерализация, как кальциноз. С 90-х гг. XX в. исследуется физиогенная магнетитовая минерализация в мозгу человека [1] и патогенная минерализация при различных нервных и возрастных болезнях: болезнь Альцгеймера, Паркинсона и др. Изучаются патогенные образования, вызванные экзогенным воздействи-
ем на человека диетических неорганических частиц и частиц вдыхаемого воздуха: Пейеровы бляшки в подвздошной кишке, силикоз легких и тд. Тем не менее, не смотря на развитие инновационных технологий и прецизионных методов, в сфере наук о человеческом организме остается еще очень много белых пятен. Одной из наименее исследованных областей является минералогения в кардиоваскулярной системе. Основной причиной отставания науки в сфере медицинской минералогии является отсутствие надлежащих методик исследования, удовлетворяющих требованию сохранения, сложившегося в организме в процессе функционирования, структурно-морфологического взаимоотношения биологических тканей человека с патогенным или физиогенным неорганическим минеральным веществом.
В медицине подготовку гистологических препаратов кальцинированных тканей начинают с их декальцинации
- минералы растворяют. Физики как правило озоляют образцы при температуре 400-600 °С, опасаясь, что в высоком вакууме препарат начнет “газить”, или в случае разогревания образца пострадает оптика прибора. Минералоги в высушенном образце механическим способом
отделяют кальцинат от биологической ткани и исследуют собственно кальцинат. Таким образом, складывается парадоксальная ситуация - никто не изучает зону взаимодействия патогенных минеральных агрегатов с тканью. Минеральные зерна, образующиеся в тканях, не затронутых интенсивной кальцинацией, исключаются из сферы изучения и медиков и физиков и минералогов. Поэтому широко известным тканевым минералом является только один - карбонатсодержащий гидроксил-апатит, составляющий основу скелета и отлагающийся практически во всех органах при эктопической минерализации, сопровождающий некроз, и активное воспаление. Многочисленные работы по эктопической кальцификации в ССС, выполняются на высоком техническом уровне, но ни в одной из этих статей к тканям не применяются минералогические методы исследования (иммерсионный и минераграфический). Обычно исследования минерального вещества ведутся на субклеточном уровне или ограничиваются магнитометрической аппаратурой [2]. Все они не учитывают возможности присутствия в организме внеклеточных магнитных зерен: ферромагнетиков и парамагнетиков, не смотря на то, что в настоящее время, во всем мире особенное внимание исследователей уделяется механизмам биомедицинских эффектов, производимых электромагнитными полями в организме человека. Во всех работах по этой тематике подчеркивается, что физическая природа биологических эффектов низкочастотных магнитных полей до сих пор не выяснена
[3].
Целью работы является изучение процессов минерализации в ССС.
Материал и методы
Минералогическому исследованию были подвергнуты эктопические кальцинаты и ткани, не имеющие заметной кальцификации, в том числе и жировая ткань ССС. Для этой цели были разработаны необходимые методики выявления и исследования минералов в тканях сердечно-сосудистой системы. В Роспатент поданы соответствующие заявки на изобретение [4, 5, 6].
Объектами исследования являются кальцинированные и не кальцинированные ткани кардиоваскулярной системы: в основном клапаны и участки восходящих аорт кардиологических больных, а также коронарные сосуды, ткани миокарда, перикарда, эпикарда. Для сравнения исследовались клапаны и участки восходящих аорт молодых (до 25 лет) кардиологически здоровых людей, а также ткани сердца свиней и коров. Взятые фрагменты фиксировались в 12%-ном растворе формалина в течение 12 недель, затем высушивались на воздухе и подвергались различным видам анализов. Всего было исследовано около 500 образцов тканей кардиологических больных, 20 фрагментов тканей молодых людей погибших от внезапной смерти, 5 свиных аорт и 5 аорт коров.
Методы обнаружения внеклеточных минеральных зерен в тканях ССС отражены в таблице 1.
Очень эффективным и простым методом изучения высушенных тканей показал себя минералографический метод исследования высушенного образца ткани в отраженном свете, заключающийся в высушивании выдержанной в формалине ткани на воздухе при комнатной температуре в течение 1-3 дней, с последующим быстрым разрезанием (желательно поперек коллагеновых волокон) тонким алмазным диском. Затем, после быстрого высушивания и полировки на плотной бумаге или на стекле, с помощью алмазной пасты образец с полированной поверхностью аншлифа изучают в отраженном свете поляризационного микроскопа, при этом анализируют формы выделения минеральных зерен, и их фазовый состав прекрасно визуализированные, благодаря высокой отражательной способности оксидов и сульфидов. Во многих случаях для количественного исследования тканевой минерализации достаточно просто разрезать высушенную ткань.
Результаты
Было изучено более 150 аншлифов изготовленных из кальцинатов и не кальцинированных тканей из сердечно-сосудистой системы.
В ходе исследований, кроме известных науке для ССС
Таблица 1
Методы обнаружения минеральных зерен в тканях ССС человека
Метод обнаружения минеральных зерен Используемые для исследования ткани Виды анализов с использованием выделенного минерального материала
Исследование высушенной ткани Кальцинированные Количественный и визуальный минералогический
и не кальцинированные ткани ССС анализ. Фотоматериал
Исследование ткани высушенной Кальцинированные Количественный и визуальный минералогический
и разрезанной тонким алмазным диском и не кальцинированные ткани анализ. Фотоматериал
Исследование аншлифов, изготовленных Кальцинированные Количественный и минералографический анализ.
из высушенной ткани. (Минераграло- и не кальцинированные ткани Фотоматериал
фический метод)
Растворение жировой ткани, с целью Жировая ткань Материал для иммерсионной диагностики и микрозондовых
выявления минеральных зерен исследований. Фотоматериал
Озоление тканей при 500 °С, с последующим Любые ткани, включая жировую. Материал для рентгенофазового, иммерсионного, термического
фазовым определением минералов анализа. Фотоматериал
Исследование ультратонких срезов тканей, Любые ткани, включая жировую, Проведение электронно- дифрактометрического
изготовленных для электронной микроскопии при условии заморозки ткани анализа минеральных зерен. Фотоматериал
Рис. 1. Фотографии с аншлифов, изготовленных из тканей без видимой кальцификации: а) отчетливо слоистая структура распределения оксидов в аншлифе ткани; б) рассеянно-вкрапленное расположение сульфидов меди (халькопирита) в аншлифе ткани восходящей аорты. Оксиды металлов, расположенные вблизи поверхности и просвечивающие сквозь высушенный коллаген сердечных клапанов; в) игольчатый рутил и сильно магнитные сферические зерна магнетита; г) оксиды Бе, И, Сг. Минеральные зерна из жировой ткани: д) кристалл со средним двупреломлением, является водным силикатом или хлоридом хрома (вскипает под электронным пучком); е) аномально высокое содержание оксидов в жировой ткани. Значительная часть зерен относится к сильномагнитным магнетиту и маггемиту
минералов классов фосфатов и карбонатов, с помощью минералографического метода были впервые выявлены минералы классов оксидов и сульфидов.
Изучение аншлифов показало, что в тканях сердечнососудистой системы оксиды пользуются большим распространением, чем сульфиды.
Зерна внеклеточных оксидов встречены в эктопических кальцинатах, в толще коллагеновых волокон тканей, а также непосредственно в жировой ткани посреди полупрозрачных жировых клеток и между жиробелковыми глобулами в атеросклеротических бляшках. Зерна оксидов содержатся в тканях ССС вне зависимости от степени кальцинации. Форма зерен разнообразная: блестящие гладкие шарики, октаэдры, уплощенные зерна с округлыми краями, короткостолбчатые и игольчатые кристаллы (рис. 1 в, г). Размер зерен от 0,2 мм и менее, редко встречаются зерна размером до 1 мм, блеск от по-луметаллического, до тусклого смолистого. Большинство зерен обладает магнитностью различной степени. Магнетитовые и маггемитовые кристаллы либо прилипают к стальной игле, либо отскакивают от нее в силу своего однодоменного строения.
В процессе описания аншлифов выявлены следующие особенности:
1. Оксиды могут находиться в толще коллагеновых волокон, в жире бляшек, на поверхности клапанов, даже в тех случаях, когда кальцификация совершенно отсутствует или не заметна.
2. Отмечается относительная неравномерность распределения зерен оксидов и сульфидов в толще кальци-натов ССС.
3. Распределение зерен оксидов и сульфидов подчинено структурам и текстурам вмещающих кальцинатов и, в некоторой степени, органогенным структурам, зонам деструкции тканей и может быть гнездовидным, слоистым (рис. 1 а) и беспорядочно вкрапленным (рис. 1 б).
4. Часто наблюдается приуроченность зерен оксидов и сульфидов к зонам матричных везикул, “незрелого” (недостаточно в той или иной степени раскристал-лизованного) апатита, т.е. к зонам активного роста кальцината.
5. Встречены зерна оксидов в так называемом белковокальциевом детрите.
6. Сульфиды сердечно-сосудистой системы относятся к различным минералогическим видам. С увереннос-
тью можно сказать, что в тканях встречаются сульфиды меди, в частности халькопирита (рис. 1 б).
7. Кроме того встречены сульфиды желтого цвета с быстро появляющейся побежалостью буроватого оттенка, либо с побежалостью ярких красных, зеленых и синих цветов. Похожие желтые сульфиды обнаружены автором в холелитах.
8. На основании некоторых минералографических свойств, таких как рельеф, относительная отражательная способность, цвет минерала, можно сделать вывод о том, что не только в пределах одного кальцина-та, но и рядом, на расстоянии десятков микрон, могут встречаться как сульфиды, так и оксиды. Данное обстоятельство свидетельствует о неоднородности окислительно-восстановительного потенциала в пределах зоны минералообразования. Такую неоднородность можно объяснить наличием микробиальных пленок [7], во внутренней части которых образуются восстановительные условия.
9. Необходимо подчеркнуть, что кристаллы оксидов и сульфидов являются первыми минералами, образующимися в процессе минерализации мягких тканей сердечных клапанов и стенок сосудов. Кристаллы апатита если и присутствуют на этом раннем этапе, то только наноразмерные. Этот факт представляется любопытным с точки зрения патогенезиса кальцинации тканей, т.к. указывает на возможность значитель-
ного влияния образующихся оксидов с их активной поверхностью, на инициацию патогенного апатитового минералообразования.
10. В образовании оксидов и сульфидов КВС нельзя исключить и значительную роль микробной металло-редукции. Существует весьма обширный список литературы о железоредуцирующих бактериях в прокариотах и в организме человека (например, в маг-нитосомах головного мозга)
11. Находка оксидов и сульфидов в КВС подтверждает последнюю гипотезу о миксоматозных изменениях в сердечных клапанах под влиянием металлопротеи-наз [8].
12. Необходимо учитывать, что оксиды и сульфиды в организме человека, являясь ферромагнитными и парамагнитными минералами, не могут не реагировать на внешние магнитные поля различных частот, а значит, возможны и негативные воздействия этих полей на организм.
Микрозондовый анализ в рентгеновской лаборатории ОИГГМ СО РАН, г. Новосибирска показал присутствие окислов Fe, Mn, Mg, Al, Si, Ti, Cr. Соотношению содержаний окислов в минеральных зернах соответствовали следующие минералы: ильменит, пирофанит, хромит, эско-лаит, рутил, а также ряд минералов хрома (силикатов и хлоридов) [9].
При исследовании минералов в ССС обнаружилось, что в жировой ткани человека, страдающего заболеваниями данной системы, образуются различные минералы [10].
В данной работе исследовались 60 образцов из жировой ткани кардиоваскулярной системы больных сердечно-сосудистыми заболеваниями (операционный материал): из зон липидных пятен сосудов, липидных отложений атеросклеротических бляшек, жировых отложений внешней части восходящей аорты, при этом степень кальцификации тканей сосудов могла быть различной от сильной до очень слабой. Примерно половина образцов, по-видимому, относилась к бурой жировой ткани. Все образцы содержали большое количество липидов низкой плотности и имели гранулированное строение жировой ткани. Исследования велись на микроскопах МИН-9 и AXIOSCOP 40 фирмы ZEISS, прозрачные минералы исследовались в иммерсии. Во всех образцах, в большем или меньшем количестве, были отмечены прозрачные и непрозрачные минеральные зерна, преимущественно округлой, реже призматической или таблитчатой формы (рис. 1 д). Прозрачные зерна часто имели зеленовато-голубоватый цвет различных оттенков и степени прозрачности. При исследовании в ОИГГиМ г. Новосибирска на Camebax Micro (качественный анализ на приставке KEVEX, по энергетическому спектру) все они имели в составе Cr, Cl, и Si. Количественному анализу препятствовало присутствие в минерале воды - под электронным пучком зерна вскипали.
Наиболее распространенными минеральными зернами в жировой ткани являются ферромагнитные магнетит и маггемит (рис. 1 е), неравномерно распределенные в объеме патогенно измененных тканей. Такое распределение неорганических минеральных зерен характерно
для эктопической минерализации в целом и коррелирует с участками тканей пораженных воспалением, нарушенным кровообращением и недостаточным тканевым дыханием.
Непрозрачные минералы из жировой ткани исследовались на микрозонде, и относятся к тем же, ранее изученным, оксидам железа, хрома и титана, что и во всей сердечнососудистой системе кардиологических больных.
Пять образцов жировой ткани без пробоподготовки, во избежание заражения пробы, были проанализированы на приборе ED-2000 фирмы OXFORD. Образец, извлеченный из 12% формалина и высушенный, выкладывался в кювету и анализировался в вакууме. Кроме Ca, Si, Al, S, Cl и K во всех образцах жировой ткани содержалось в весовых процентах железо в количестве 1,03-2,15, медь
0.0373-0,0291, цинк 0,0567-0,1074, марганец 0,0392-
0,0474. В трех образцах присутствовал хром в количестве 0,01-0,238, в двух присутствовал титан 0,036-0,26 весовых процента.
По данным масс-спектрометрического и рентгенофлуоресцентного анализов в жировой ткани накапливается ванадий и, в меньшей степени, кремний, барий и сера. Содержания Р и Са снижены по сравнению с другими тканями КВС. Кроме V, в жировой ткани обычно присутствуют повышенные содержания Ti, Mn, Cu, Cr, Co, Ni, Fe, As, Sb. Содержания Cd варьируют в широких пределах. Содержания Pb наоборот постоянны и стабильны. Могут присутствовать Ge, Ta, Bi.
Для дальнейшего изучения минеральных зерен из жировой ткани необходима разработка методики наиболее полного растворения жировой ткани для выделения минералов с целью дальнейшего исследования их микро-зондовым, рентгенофазовым поляризационно-оптическим и другими методами.
Другим информативным методом исследования тканей является метод просвечивающей электронной микроскопии (ПЭМ), с применением ультратонкого среза ткани, изготовленного для электронномикроскопических исследований, для изучения минеральных зерен с помощью электронной микродифрактометрии. При этом используется обычный ультратонкий срез, изготовленный для изучения биологической ткани под просвечивающим трансмиссионным электронным микроскопом (например, СМ-12 Philips) по обычной методике. Electron Microscopy. Methods and Protocols. Ed. John Kuo. 2007. Humana Press Inc., New Jersey. 608 p.
С минеральных зерен, заключенных в тонком срезе биологической ткани препарата снимаются микродиф-рактограммы, расшифровка которых дает возможность выявить степень кристалличности неорганических зерен, тип кристаллических решеток и, в ряде случаев, точно определить фазовый минеральный состав зерен.
Исследование 10 микродифрактограмм снятых на просвечивающем трансмиссионном электронном микроскопе СМ-12 Philips с кристаллов, содержащихся в двух ультратонких срезах миокарда кардиобольных, позволило выявить следующее:
1. Оба ультратонких среза, диаметром 2 мм содержали значительное количество (более 20) кристаллических зерен наноуровневого размера.
Рис 2. а, 5.: поликристаллическое зерно (5) и его кольцевая мнкроднфракгограмма из ультратонкого препарата миокарда (а). Диагностирован минерал маггемит-С Ре203. Плоскость (230). в, Г: монокристалл гексагонального облика из ультратонкого препарата миокарда (г) и его точечная электронная микродифрактограмма (в)
2. 9 из 10 кристаллических зерен являлись монокристаллами (рис. 2 в, г) и только одно зерно представляло собой поликристаллический агрегат (рис. 2 а, б).
3. Незначительная часть монокристаллов содержит воду или гидроксил-радикал. Об этом свидетельствует аморфизация кристалла под электронным пучком.
4. Большая часть этих монокристаллов была диагностирована, как кубический аналог гематита маггемит, обладающий сильными ферромагнитными свойствами.
Обсуждение
Железосодержащие минералы, в т.ч. оксиды, могут образоваться в тканях ССС в результате разложения железосвязывающих белков (ферритин, лактоферрин, транс-феррин, дивалентный транспортер металлов-1 металлосвязывающих жиров и других железосвязывающих соединений (мочевой кислоты, цитратов, аскорбатов).
При микроэлементном исследовании тканей различными методами обнаружилась интересная картина. Все использованные инструментальные количественные и полуколичественные методы элементарного анализа, а именно ИНАА, 1СР, РФА, спектральный показали, что ткани без кальцината и с малым количеством кальцината содержат максимальные количества большинства микроэлементов, в первую очередь металлов, в то время как в тканях со значительной кальцинацией содержания элементов понижены. Это может свидетельствовать либо об обеднении микроэлементного состава тканей сердечнососудистой системы из-за локально ухудшающегося метаболизма, в процессе отложения в них гидроксилапати-та, либо о существовании двух разнонаправленных процессов, сопровождающих тканевую дистрофию.
Первый процесс, протекающий при закислении среды в процессе воспаления тканей и/или нарушении клеточного дыхания, при активном распаде белковых метал-лсвязывающих молекул (ферментов, витаминов, транспортных белков и т.д.) и сопровождающийся отложением в стенку сосудов и в клапаны металлсодержащих соединений, преимущественно соединений элементов с переменной валентностью, принимающих активное участие в метаболизме.
Второй процесс - накопление биоапатита, что, как известно, наблюдается при относительном ощелачивании
среды (например, вследствие развития бактерий) и при разрушении клеточных структур. Не исключено, что оба процесса могут протекать независимо друг от друга.
Второй процесс может являться следствием первого, т.к. образовавшиеся в процессе распада белковых структур ионы металлов организуются в минеральные фазы и способствуют процессам адсорбции и катализа на поверхности минеральных и коллоидных частиц. Возможны и внутрилипосомные минералообразующие процессы. Магнитные свойства оксидов создают местный резонансный эффект с окружающими ЭМП и усугубляют денатурацию белков. Ионы железа и металлов с переменной валентностью через реакцию Фентона усиливают оксида-тивный стресс, вызывая разрушение клеток. Содержимое клеток, изливаясь в межклеточное пространство, способствует кальцинации окружающих тканей.
Заключение
До настоящего времени основным методом выявления элементов, в том числе металлов в биопсийных и аутопсийных препаратах тканей является гистохимический анализ, предполагающий нахождение элементов в тканях в растворимом ионном, ионокомплексном или коллоидном состоянии. Гистохимия, являясь одним из основных диагностических методов в медицине, не предусматривает образования в тканях неорганических минеральных зерен. Это невозможно, во-первых, из-за слабой реакции минеральных зерен с гистохимическими красителями. Во-вторых, вследствие невозможности приготовления гистологического препарата с помощью стеклянного ножа из-за высокой твердости минеральных частиц. В-третьих, из-за белково-липидной мембраны окружающей минеральные частицы, наподобие тех мембран, которые окружают прекрасно изученные магнето-сомные кристаллы магнетита в бактериях. Поэтому для адекватной медицинской диагностики микроэлементного состава тканей недостаточно гистохимических методов. Необходимо изучение минерализации тканей человеческого организма в целом и в ССС в частности с применением минералографического, иммерсионного и других методов, общепринятых в минералогических исследованиях.
Изучение морфологии, структуры, размера и состава минеральных зерен и их агрегатов (в том числе ультра-
тонких и наноразмерных) имеет важное значение в контексте взаимодействия минеральных частиц с клетками тканей организма и, вследствие этого, возможными эффектами токсичности, термо- и фотокатализа. Известно, что одни кристаллические минеральные частицы (например, кварц) являются более вредными для организма человека, чем их аморфные минеральные аналоги, в то время как другие (например, оксид титана) в большей степени способствуют воспалению тканей в тонкодисперсном состоянии.
Характер влияния патогенных минеральных образований на организм человека изучен слабо. До сих пор нигде в мире не проводилось минералогическое эталонирование мягких тканей животных и человека. Это задача будущего.
Литература
1. Kirschvink, J.L., Kobayashi-Kirschvink, A., Woodford, B.J. Magnetite biomineralization in the human brain (1992) Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, 1989. - №16. - PP 7683-7687.
2. J. Galazka-Friedman, E.R. Bauminger, A.Friedman, D. Koziorowski, K. Szlachta Human nigral and liver iron comparison by Mu,ssbauer spectroscopy, electron microscopy and ELISA. Hyperfine Interac, 2005. - T. 165. - PP. 285-288.
3. Миляев И.А., Бинги В.Н. О физической природе магнитобиологических эффектов // Квантовая электроника, 2006.
- Т. 36. - №8. - С. 691-701.
4. Ламанова Л.М. Заявка в Роспатент №2009129904 от
03.08.2009. Способ обнаружения внеклеточных оксидов и сульфидов в тканях сердечнососудистой системы.
5. Ламанова Л.М. Заявка в Роспатент №2009135229 от
21.09.2009. Способ выделения минеральных зерен из жировой ткани.
6. Ламанова Л.М. Заявка в Роспатент №2009135480 от
23.09.2009. Способ применения ультратонкого среза тканей для изучения минеральных зерен.
7. Николаев Ю.А., Плакунов В.К. Биопленка - “Город микробов” или аналог многоклеточного организма? // Микробиология, 2007. - Т.76. - №2. - С. 149-163.
8. Togashi, M., Tamura, K., et al. Role of matrix metalloproteinases and their tissue inhibitor of metalloproteinases in myxomatous change of cardiac floppy valves// Pathology International, 2007.
- V.57. - Issue 5. - P. 251-259.
9. Ламанова Л.М. Оксиды железа, хрома, титана в кровеносной системе человека // Материалы Международ. минер. семинара “Структура и разнообразие минерального мира” Сыктывкар: Ин-т геологии Коми НЦУрО РАН, 2008. - С. 8285.
10. Ламанова Л. М. Минералообразование в жировой ткани человека // Федоровские чтения. Изд-во РМО. СПб. 2008. -С. 269-271.
Поступила 13.09.2009
