Методика внутриплевральной прививки опухолей Текст научной статьи по специальности «Ветеринарные науки»

ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ

Экспериментальные исследования

© Н. В. АНДРОНОВА, 1991 УДК 616.006:615

Н. В. Андронова

МЕТОДИКА ВНУТРИПЛЕВРАЛЬНОЙ ПРИВИВКИ ОПУХОЛЕЙ

НИИ экспериментальной диагностики и терапии опухолей, лаборатория фармакологии и токсикологии лекарств МНПО «Эврика»

Метастатический плеврит — частое тяжелое осложнение в онкологической практике, которое трудно поддается лечению [3, 4}. Химиотерапия, системная и внутриполостная, как один из основных методов лечения больных с этой патологией недостаточно эффективна [ 1 ]. Поэтому разработка новых средств и методов лечения больных с метастатическим плевритом я-вляется -актуальной проблемой. Экспериментальные модели опухолевого плеврита, необходимые для решения этих задач, отсутствуют. Первым этапом создания такой модели является разработка методики внутриплевральной прививки опухолей.

В данной работе описана методика внутриплев-ральной прививки лимфолейкоза Р-388 мышам и карциносаркомы Уокера-256 (КСУ) крысам. Выбор штаммов обусловлен тем, что они рекомендованы Фармакологическим комитетом Минздрава СССР для изучения противоопухолевых препаратов, предлагаемых для испытания в клинике [2].

В параллельных экспериментах проводили сравнительное изучение характера роста опухолей при их внутриплевральной и внутрибрюшинной прививке.

В работе использованы мыши-самки линии ЭВАг с массой тела 20—22 г, крысы-самки линии АУЫаг с массой тела 120—200 г и указанные опухолевые штаммы второй — шестой генераций. Внутриплевральная прививка проводилась под вйутрибрюшинным тиопенталовым наркозом (90 мг/кг мышам и 60 мг/кг крысам). Животное укладывали на левый бок. Мышь фиксировали с помощью атравматических зажимов, крысу фик-

сировать необязательно. Ножницами рассекали кожу по средней аксиллярной линии от нижней границы подмышечной области до нижнего края, реберной дуги. Этот прием предотвращает попадание прививочного материала под кожу, способствует безошибочному введению опухолевых клеток в плевральную полость и:позволяет использовать иглу с ограничителем. Это особенно важно для таких мелких лабораторных животных, как мыши. Кожу и фасции раздвигали браншами ножниц на расстояние 0,5—1 см. Взвесь опухолевых клеток вводили в плевральную полость через четвертое межреберье при помощи шприца с иглой для внутрикожного введения. Для предотвращения повреждения легочной ткани затупляли иглу и надевали на нее ограничитель на расстоянии 1 мм от нижнего края среза. Мышам в плевральную полость вводили 5-Ю5 -опухолевых клеток в 0,2 мл взеси, разведенной средой 199, а крысам 5* 106 клеток в 0,5 мл взвеси. Кожу зашивали непрерывным швом хлопчатобумажными нитками кожной иглой.

Внутрибрюшинно как мышам, таки крысам прививали такое же количество опухолевых клеток.

Наблюдение продолжали до гибели животных. Павших животных вскрывали, жидкость из плевральной и брюшной полости собирали при помощи шприца с иглой.

Качество методики в серии из 3—4 экспериментов оценивали по прививаемости опухоли, выживаемости животных, а также по объему выпота в брюшной и плевральной полости. Наличие опухолевых клеток в плевральном выпоте мышей с Р-388 и крыс с КСУ подтверждено цитологически.

Результаты экспериментов представлены в'таблице, из которой видно, что при внутриплевральной прививке Р-388 развивался у 100 % животных. Средняя продолжительность жизни мышей с Р-388 при внутриплевральной прививке составляла 6,5+ ±0,3 (6,8-М),2) дня, объем выпота в плевральной полости 0,9+0,1 (1,0+0,8) мл, при внутрибрюшинной прививке средняя продолжительность жизни была 10,9+0,7 (11,6-7-10,2) дня, объем асцита — 2,0+0,2 (2,2+1,8) мл.

Таким образом, при внутриплевральной прививке средняя продолжительность жизни мышей с Р-388 на 40 % (р<0,05) меньше, а объем выпота на 50 % (р<0,05) меньше по сравнению с внутри-

Характеристика роста лимфолейкоза мышей Р-388 й К СУ-256 крыс при внутриплевральной и внутрибрюшинной прививке

Прививка Животные Опухолевый штамм Число ОПЫ- ТОВ Число ЖИ- ВОТ- НЫХ Прививочная доза Прививае- мость, % Продолжительность жизни, дни Объем выпота, мл Солид- ный рост

Внутриплевральная Мыши ова2 Р-388 4 19 5-105/0,2 мл 100 6,5±0,3 (6,8+6,2) 0,9±0,1 (1,0+0,8) Есть

Внутрибрюшинная То же 3 23 5-1070,2 мл 100 Ю,9±0,7 2,0+0,2

Внутриплевральная Крысы К СУ-256 4 15 5-106/0,5 мл 100 (1.1,6+10,2) (2,2+1,8)

Внутрибрюшинная » 4 21 5-106/0,5 мл 100 5,0±0,6 (5,6+4,4) 7,6±0,7 (8,3+6,9) 7,8±0,6 (8,4+7,2) 9,5+0,8 (10,3+8,7) Нет »

Примечание. В скобках — доверительный интервал.

брюшинной прививкой. У всех мышей с Р-388 отмечен солидный рост опухоли: у животных с внутриплевральной прививкой в плевральной полости, у мышей с внутрибрюшинной прививкой в брюшной, полости. Средняя продолжительность жизни крыс с КСУ при: внутриплевральной прививке составляла • 5,0±0,6 (5,6+4,4) дня, объем, выпота в плевральной полости — 7,8±0,6 (8,4+ +7,2) мл; при внутрибрюшинной прививке средняя продолжительность жизни была 7,6+0,7 (8,3-4-6,9) дня, объем - асцита — 9,5+0,8 (10,3+ +8,7) мл. Таким образом, при внутриплевральной прививке КСУ средняя продолжительность жизни крыс уменьшалась на 36 % (р<0,05), а объем выпота был на 20 % (р<0,05) меньше по сравнению с внутрибрюшинной прививкой. Солидного роста опухоли не наблюдали ни у. одного животного. Прививаемость КСУ при обоих видах прививки составляла 100 %.

Разработанная методика» внутриплевральной прививки обеспечивает 100 % прививаемость опухолевых штаммов и может быть использована для создания модели опухолевого плеврита в эксперименте. - '■

ЛИТЕРАТУРА

1. Лайт Р. У. Болезни плевры — М., 1986.

- 2. Методические рекомендации по изучению специфической активности противоопухолевых препаратов, предлагаемых 1 для испытания в клийике.— М., 1984.

3. Chernow В., Sahn S. А. // Amer. J. Med.— 1977.— Vol. 63.— P. 695—702.

4. Goldsmith Н. S., Bailey H. D., Gallahan E. L., Beattie E. J. // Arch. Surg— 1967;— Vol. 94.— P. 483—488.

... . ' Поступила J5.08.9i

© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 1991

УДК 616.6!-001.26.-092.9:616.152.21:616.008

В. В. Остапенко, Н. В. Любимова, Л. С. Бассалык, ■ё:;Г. Слесаренко, А. А. Вайнсон

ФЕРМЕНТУРИЯ В ОЦЕНКЕ ЗАЩИТНОГО ДЕЙСТВИЯ ГИПОКСИИ ПРИ ОБЛУЧЕНИИ ОБЛАСТИ ПОЧЕК МЫШЕЙ

Днепропетровский медицинский институт, НИИ клинической онкологии и НИИ экспериментальной диагностики и терапии опухолей ВОНЦ АМН СССР, Москва

Для снижения тяжести радиационного поражения нормальных тканей при лучевой терапии опухолей было предложено использовать во время об-лучения дыхание гипоксической газовой смесью, содержащей 8 % кислорода [5]. В клинике -такая смесь применяется при предоперационном облучении опухолей желудка [4] и сочетанном лучевом лечении опухолей шейки матки [3]. Точная оценка в эксперименте защитного действия смеси такого состава проведена только, для костного мозга и кишечника в условиях тотального облучения животных [1], хотя она необходима и для остальных дозолимитирующих тканей. Почки являются одним из органов, лимитирующих подведение дозы при облучении новообразований брюшной полости. Сообщение о радиационной нефропатии, возникшей в результате лучевой терапии, появились в литературе достаточно давно [6]. В число заболеваний, явившихся причиной проведения ра-

диотерапии, входили лимфосаркомы, нейробласто-мы, эмбриомы почки, опухоль Вильмса, рак легкого, семинома, тератокарцинома яичка, эмбриональная карцинома ретроперитонеальной области, карциномы яичника, фаллопиевых труб, рак поджелудочной железы, т. е. облучение почки----со-

всем не редкая ситуация в клинике.

Учитывая, что почка состоит из разнородных клеточных элементов, отличающихся по интенсивности кровообращения, степени оксигенации и длительности митотического цикла, необходимо знать защитное действие гипоксии для различных отделов. В связи с этим возникает потребность в количественных тестах для оценки степени лучевого поражения почки, отражающих повреждение различных морфофункциональных структур [8, 9].

Ранее нами была показана диагностическая ценг ность определения активности ферментов в моче при лучевом поражении почек [2]. Предлагаемый тест обладает рядом преимуществ по сравнению с другими общепринятыми показателями. В частности, наряду с неинвазивностью и возможностью повторного прижизненного исследования этот метод характеризуется высокой чувствительностью и селективностью. Селективность определяется тем, что концентрация ферментов в различных отделах нефрона выражена по-разному, у-глюта-милтрансфераза (ЕС 2.З.2.2.:-у-ГТ) и М-ацетил-Б-глюкозаминидаза (ЕС 3.2.1.30; НАГ) находятся преимущественно в проксимальных канальцах почки с локализацией в щеточной каемке и лизосо-мах нефротелия соответственно [7]. Следовательно, изменение экскреции ферментов с мочой может отражать степень поражения проксимального отдела нефрона.

Цель данной работы — изучение радиопротек-торного действия гипоксии с использованием в качестве критерия ее определения активности ферментов в моче.

Материалы и методы. Эксперименты провели на 176 мышах-самцах Иг (СВАХС57В1) массой 22— 26 г. Почки неанестезированных животных облучали локально на рентгеновской установке «Стабилипан» (220 кВ, 15 мА, 1,8 Гр/мин) через отверстия размером 13X17 мм в свинцовой диафрагме. При однократном облучении при дыхании воздухом дозы варьировали от 11 до 18 Гр, а в условиях гипоксии — от 12 до 19 Гр, в обоих случаях интервал между группами 1 Гр. В условиях фракционированного воздействия (5 фракций в течение 5 дней) суммарные дозы при облучении на воздухе составляли 25—35 Гр, при облучении в условиях гипоксии—30—40 Гр, интервал между группами 5 Гр. Каждая группа состояла из 8 животных.

При облучении в условиях гипоксии животные дышали газовой смесью (8 % Ог и 92 % N2) в течение 2 мин до и во время облучения.

Сбор образцов мочи для определения активности ферментов проводили с 8 до 10 ч утра. Сразу после сбора мочу центрифугировали пр,и температуре 4°С в Течение 15 мин при 900 С5. Активность у-ГТ и НАГ в моче экспериментальных мышей определяли при помощи колориметрических методов на автоматическом селективном анализаторе «НгЧасЫ-717Е» (Япония). Расчет актив-