CC BY
6
ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ ХИМИЯ, ФАРМАКОГНОЗИЯ / PHARMACEUTICAL CHEMISTRY, _PHARMACOGNOSY_
DOI: https://doi.org/10.23670/IRJ.2022.126.11 МЕТОДИКА КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ СУММЫ ФЛАВОНОИДОВ В СЫРЬЕ СТЕВИИ РЕБО
Научная статья
Курдюков Е.Е.1' *, Митишев А.В.2, Семенова Е.Ф.3, Гаранина Е.О.4, Немова А.Ю.5, Фриндак К.А.6
1 ORCID : 0000-0001-9512-6770;
2 ORCID : 0000-0002-3327-9744;
3 ORCID : 0000-0002-7987-6886;
1 2' 4 5' 6 Пензенский государственный университет, Пенза, Российская Федерация 3 Крымский федеральный университет им. В.И. Вернадского, Симферополь, Российская Федерация
* Корреспондирующий автор (e.e.kurdyukov[at]mail.ru)
Аннотация
Целью данной работы явилось качественное и количественное изучение флавоноидных соединений листьев стевии Ребо. Объектом для исследования служили листья стевии Ребо, собранные на территории РФ, Индии и Парагвая. Растительный материал был высушен воздушно-теневым способом. Проведено количественное определение суммы флавоноидов в стевии листьях методом дифференциальной спектрофотометрии. Для подтверждения наличия флавоноидов в стевии листьях использовали тонкослойную хроматографию. Методом дифференциальной спектрофотометрии в экстрактах из листьев стевии Ребо подтверждено наличие флавоноидов, определены аналитические максимумы исследуемых соединений 400±2 нм. Обоснованы оптимальные условия экстракции флавоноидов из сырья данного растения (экстрагент - спирт этиловый 70%; соотношение «сырье - экстрагент» -1:100; время экстракции - 45 минут; степень измельченности сырья - 2,0 мм).
Ключевые слова: Stevia rebaudiana Bertoni, флавоноиды, спектрофотометрия, количественное определение, цинарозид, Стевия Ребо.
A METHODOLOGY FOR QUANTITATIVE DETERMINATION OF FLAVONOID AMOUNT IN STEVIA
REBAUDIANA RAW MATERIAL
Research article
Kurdyukov Y.Y.1' *, Mitishev A.V.2, Semenova E.F.3, Garanina E.O.4, Nemova A.Y.5, Frindak K.A.6
1 ORCID : 0000-0001-9512-6770;
2 ORCID : 0000-0002-3327-9744;
3 ORCID : 0000-0002-7987-6886;
i, 2, 4, 5, 6 penza State University, Penza, Russian Federation 3 V.I. Vernadsky Crimean Federal University, Simferopol, Russian Federation
* Corresponding author (e.e.kurdyukov[at]mail.ru)
Abstract
The aim of this work was a qualitative and quantitative study of flavonoid compounds in stevia rebaudiana leaves. The object of the study was the leaves collected in Russia, India, and Paraguay. Plant material was air- and shade-dried. A quantitative determination of the amount of flavonoids in the leaves by differential spectrophotometry was performed. Thin-layer chromatography was used to confirm the presence of flavonoids in the leaves. The presence of flavonoids in stevia rebaudiana leaf extracts was confirmed by differential spectrophotometry; the analytical maximums of the studied compounds were determined at 400±2 nm. Optimal conditions for the extraction of flavonoids from raw materials of this plant (extractant - ethyl alcohol 70%; ratio "raw material - extractant" - 1:100; extraction time - 45 minutes; degree of crushing of raw materials - 2.0 mm) were substantiated.
Keywords: Stevia rebaudiana Bertoni, flavonoids, spectrophotometry, quantification, cinaroside.
Введение
В медицинской практике многих стран сырье стевии Ребо (Stevia rebaudiana Bertoni, сем. Астровые - Asteraceae) применяется в качестве антидиабетического средства. По литературным данным продукты на основе растения стевия Ребо обладают гипотензивным, адаптогенным, гипогликемическим, антимикробным, антиоксидантным действиями [1], [5], [15], [16].
Актуальной проблемой является выработка эффективных стандартов относительно лекарственного сырья из стевии Ребо для нужд фармацевтической промышленности. В листовых пластинках стевии содержатся дитерпеновые гликозиды, флавоноиды, фенилпропаноиды, сапонины [2], [4], [6], [11]. Однако химический состав разновидностей стевии недостаточно изучен. В процессе практического выявления, в том числе количественным способом, флавоноидов в растительном сырье принято использовать те или иные методики спектрофотометрии [7], [10], [12], [14]. Данные методы отличаются простотой, быстротой и удобством, отсутствует необходимость использования дорогостоящей техники.
Методы и принципы исследования
Субстратом для исследовательской работы послужили подвергнутые сушке листовые пластинки стевии Ребо ^еща rebaudiana ВеЛот). Происхождение сырья - Пензенская, Тверская области, Краснодарский край, Республика Крым, а также импорт из Парагвая и Индии.
С целью установления факта наличия флавоноидов в исследуемых образцах применялся метод тонкослойной хроматографии (ТСХ) [7], [8], [9], [10]. На линию старта хроматографической пластинки, которая была приведена в активное состояние в сушильном шкафу при температуре 100-105 оС, с помощью пипетки было нанесено 0,02 мкл водно-спиртового экстракта из листовых пластинок стевии Ребо. При этом веществами-свидетелями выступали спиртовые растворы стандартных образцов (СО) цинарозида, лютеолина, кофейной кислоты, хлорогеновой кислоты, рутина, гиперозида, кверцетина. В дальнейшем хроматографическую пластинку располагали в камеру для хроматографии. В последней была создана атмосфера с высоким содержанием испаренных растворителей. Выдержка составляла 1 сутки. Собственно процесс тонкослойной хроматографии производился восходящим методом по формуле хлороформ - этиловый спирт 70 % - вода (26:16:3) на стандартных хроматографических пластинках «Сорбфил-ПТСХ-АФ-Ф-УФ». После того как фронт растворителя проходил около 8 см, используемую пластинку извлекали из рабочей камеры, высушивали и детектировали зоны веществ. Получившиеся хроматограммы изучались в условиях естественного освещения, в ультрафиолетовом спектре при длинах волн равных 366 и 254 нм, проводилась спектрофотометрия. Кроме этого, полученные хроматограммы подвергались воздействию щелочного раствора ДСК и фосфорно-молибденовой кислоты.
Содержание суммы флавоноидов оценивали методом дифференциальной спектрофотометрии в пересчете на цинарозид [8], [9]. Для измерений на спектрофотометре СФ-200 использовали кварцевые кюветы с толщиной поглощающего слоя 10 мм. Спектры собственного поглощения флавоноидов листьев стевии регистрировали в интервале длин волн 200 - 500 нм. Для количественного определения флавоноидов в извлечениях из листьев стевии применяли метод дифференциальной спектрофотометрии. Статистическую обработку осуществляли по методике, описанной в ГФ XIII. Содержание суммы флавоноидов в пересчете на цинарозид в процентах (Х) вычисляли по формуле:
л _ Лх100х25х100 Л ~~ 350хах2х(100?И0
где:
А -оптическая плотность раствора;
350 -удельный показатель поглощения цинарозида с алюминия хлоридом при длине волны 400 нм;
а - навеска сырья, г;
М -влажность сырья, %.
Основные результаты и обсуждение
Итогом проведенного анализа с использованием метода тонкослойной хроматографии (ТСХ) стал факт доминирования в листовых пластинках стевии Ребо такого флавоноида как цинарозид. На полученной в результате исследования хроматограмме заметно, что присутствует ярко выраженная область оранжевого оттенка Rf (фактор удерживания) в районе 0,55 на уровне стандартного образца хлорогеновой кислоты. Также на полученной хроматограмме видна область желтого оттенка с Rf (фактор удерживания) в районе 0,64 на уровне стандартного образца цинарозида (рис.2). Следовательно, наиболее практичным способом осуществления качественного исследования листовых пластинок стевии Ребо и веществ на их основе методом ТСХ является применение вещества-стандарта цинарозида с целью подсчета величин Rf.
В соответствии с данными литературы, можно сказать, что цинарозид характерен для сырья многих представителей семейства сложноцветные (пижма, одуванчик, расторопша др.) [8], [9].
Рисунок 1 - Схема хроматограммы извлечения из стевии листьев. Система хлороформ - этиловый спирт 70 % - вода
(26:16:3):
1 - извлечение из стевии листьев (1:50); 2- СО цинарозида, 3 - СО лютеолина; 4 - СО кофейной кислоты; 5 - СО хлорогеновой кислоты; 6 - СО рутина; 7 - СО гиперозида; 8 - СО кверцетина DOI: https://doi.Org/10.23670/IRJ.2022.126.11.1
Выбор оптимального экстрагента и параметров экстракции имеют непосредственное влияние на выход действующих веществ. Результаты исследования влияния экстрагента на процесс экстракции представлены в табл. 1.
Таблица 1 - Зависимость выхода флавоноидов листьев стевии от концентрации экстрагента DOI: https://doi.Org/10.23670/IRJ.2022.126.11.2
№ п\п Сорт стевии, место произрастания Спирт этиловый, % Содержание флавоноидов, % (по СО цинарозида) Содержание флавоноидов, % (по удельному показателю поглощения цинарозида при (А= 400 нм)
Рамонская
1 сластена (Россия, Краснодар) 40 1,24 ±0,03 1,21 ±0,03
Рамонская
2 сластена (Россия, Краснодар) 70 1,74 ±0,02 1,71 ±0,02
Рамонская
3 сластена (Россия, Краснодар) 95 1,69 ±0,04 1,66 ±0,04
При исследовании влияния, различных параметров экстракции на выход действующих веществ, нами были получены следующие результаты (таб. 2).
Таблица 2 - Влияние различных факторов на полноту извлечения флавоноидов DOI: https://doi.Org/10.23670/IRJ.2022.126.11.3
Экстрагент Соотношение «сырье -экстрагент» Степень измельченности, мм Время экстракции, мин Содержание суммы флавоноидов в пересчете на цинарозид, %
Влияние соотношения «сырье - экстрагент»
Спирт 70 % 1:25 1 45 1,46 ± 0,10
Спирт 70 % 1:100 1 45 1,70 ± 0,03
Спирт 70 % 1:200 1 45 1,53 ± 0,06
Влияние степени измельченности
Спирт 70 % 1:100 1 45 1,70 ± 0,03
Спирт 70 % 1:100 2 45 1,74 ± 0,03
Спирт 70 % 1:100 3 45 1,61 ± 0,03
Влияние времени экстрагирования
Спирт 70 % 1:100 2 45 1,74 ± 0,05
Спирт 70 % 1:100 2 90 1,57 ± 0,03
Спирт 70 % 1:100 2 120 1,51 ± 0,09
С целью разработки проекта методики количественного определения суммы флавоноидов определены оптимальные условия экстракции: экстрагент - спирт этиловый 70%; соотношение «сырье - экстрагент» - 1:100; время экстракции - 45 минут; степень измельченности сырья - 2 мм.
Следует отметить, что, по нашим данным, степень измельчения от 1 до 3 мм сильного влияния на экстракцию не оказывает. В качестве оптимальной нами выбрана степень измельчения 2 мм.
Количественное определение содержания флавоноидов основано на химической реакции комплексообразования с хлоридом алюминия [5], [6], [7] ,[8]. В процессе данной реакции происходит батохромный сдвиг полосы поглощения флавоноидов. Последний успешно детектируется в ультрафиолетовом спектре как максимальное значение поглощения на длинах волн от 380 до 412 нм [5], [7], [8]. Проведенное практическое исследование позволило выявить, что в
присутствии хлорида алюминия максимальное значение поглощения продукта реакции комплексообразования с участием флавоноидов стевии приходится на длину волны 400±2 нм.
Л,
50 оо ВО 00 » ОО во 00 М («Л
Рисунок 2 - УФ спектр водно-спиртового извлечения стевии листьев: 1 - исходный раствор (1:5000); 2 - раствор в присутствии А1С13 DOI: https://doi.Org/10.23670/IRJ.2022.126.11.4
Рисунок 4 - Электронные спектры раствора цинарозида в присутствии А1С13 DOI: https://doi.Org/10.23670/IRJ.2022.126.11.5
Л V
\
Л \ ч
¡и <:с "Л'1 » » ю и т » М
Рисунок 5 - УФ-спектр извлечения из стевии листьев (1:1250) в присутствии А1С13 DOI: https://doi.Org/10.23670/IRJ.2022.126.11.6
В результате использования различных концентраций этанола положение максимумов не меняется. В результате комплексообразования флавоноидов стевии с хлоридом алюминия образуется комплексное соединение с максимумом поглощения 400 нм.
В нашей работе в качестве стандарта был использован цинарозид, который с хлоридом алюминия имеет максимум при 400 ±2 нм (рис. 3) и также используется в методиках анализа сырья, содержащего флавоноиды [7], [9], [10], [14]. Следовательно, извлечение из листьев стевии и цинарозид по спектральным характеристикам близки, и цинарозид может быть использован в методике количественного определения в качестве стандарта.
Максимальное количество флавоноидов из листьев стевии в оптимальных условиях составило 1,74% весовых, что позволяет поставить это растение по содержанию флавоноидов в один ряд с уже используемыми лекарственными растениями - источниками флавоноидов (табл.3).
Для того чтобы предлагаемая методика заняла достойное место при определении качества листьев стевии, были определены метрологические характеристики, ошибка единичного определения с доверительной вероятностью 95% составляет не более ± 1,39 % (табл.3). Полученные данные свидетельствуют об отсутствии систематической ошибки используемой нами методики.
Таблица 3 - Метрологические характеристики методики количественного определения суммы флавоноидов в листьях
стевии
DOI: https://doi.Org/10.23670/IRJ.2022.126.11.7
Лекарс твенно е растит ельное сырье N F Х S2 S Р, % t (Р, 9 ДХ Е, %
Рамонс кая сласте на (Красн одар) 5 4 1,74 0,0003 2 0,0178 89 95 2,776 ±0,016 ±0,50
Рамонс кая сласте на (Тверь) 5 4 1,38 0,0002 5 0,0158 11 95 2,776 ±0,014 ±0,51
Рамонс кая сласте на (Пенза ) 5 4 1,59 0,0011 3 0,0336 15 95 2,776 ±0,029 ±1,01
София (Пенза ) 5 4 1,47 0,0009 2 0,0303 32 95 2,776 ±0,027 ±1,03
Стевия (Параг вай) 5 4 1,42 0,0005 3 0,0230 22 95 2,776 ±0,020 ±0,80
Стевия (Индия ) 5 4 1,13 0,0009 7 0,0311 45 95 2,776 ±0,027 ±1,39
Рамонс кая сласте на (Крым) 5 4 1,52 0,0015 7 0,0396 23 95 2,776 ±0,034 ±1,37
Примечание: N - число независимых параллельных определений; X- среднее значение определяемой величины; S2-средняя квадратичная ошибка; S - стандартное отклонение; Р - доверительная вероятность; t (Р, I) - критерий Стьюдента; АХ - полуширина доверительного интервала; Е - относительная ошибка среднего результата
Заключение
Установлены оптимальные условия методики экстракции стевии листьев:
- экстрагент - 70% спирт этиловый;
- соотношение «сырье и экстрагент» - 1: 100;
- степень измельченности сырья - 2 мм;
- время экстракции - 45 мин.
Определено, что в листьях стевии содержится до 1,74% суммы флавоноидов.
Полученные результаты доказывают, что листья стевии являются перспективным лекарственным растением, и являются ценным источником флавоноидов. Целесообразно дальнейшее изучение для разработки нормативных документов.
Конфликт интересов
Не указан.
Рецензия
Все статьи проходят рецензирование. Но рецензент или автор статьи предпочли не публиковать рецензию к этой статье в открытом доступе. Рецензия может быть предоставлена компетентным органам по запросу.
Conflict of Interest
None declared.
Review
All articles are peer-reviewed. But the reviewer or the author of the article chose not to publish a review of this article in the public domain. The review can be provided to the competent authorities upon request.
Список литературы / References
1. Горбатенко Л.Е. Стевия - ценное пищевое и лекарственное растение / Л.Е. Горбатенко, О.О. Дзюба // Новые и нетрадиционные растения и перспективы их использования: материалы V Международного симпозиума; — М.: Российский университет дружбы народов (РУДН), 2003. — с. 317-319.
2. Жужжалова Т.П. Изменение химического состава стевии при возделывании в ЦЧР. / Т.П. Жужжалова, Г.К. Подпоринова, М.В. Зимин // Интродукция нетрадиционных и редких растений : материалы VI Международной научно-практической конференции; — Белгород: Перо, 2006. — с. 41-43.
3. Курдюков Е.Е. К вопросу стандартизации по содержанию флавоноидов листьев стевии как нового вида лекарственного растительного сырья. / Е.Е. Курдюков, А.В. Кузнецова, Е.Ф. Семенова и др. // Химия растительного сырья. — 2019. — № 1. — с. 217-224.
4. Курдюков Е.Е. Количественное определение суммы дитерпеновых глюкозидов в сырье стевии. / Е.Е. Курдюков // Известия высших учебных заведений. Поволжский регион. Медицинские науки. — 2018. — № 3. — с. 4349. — DOI: 10.14258/^^.2019014067
5. Курдюков Е.Е. Макро- и микроморфологические особенности листьев стевии Ребо Stevia rebaudiana Bertoni при интродукции в Среднем Поволжье. / Е.Е. Курдюков, Е.Ф. Семенова // Научные ведомости Белгородского государственного университета. Серия Медицина и фармация. — 2017. — № 26. — с. 137-145.
6. Курдюков Е.Е. Изучение химического состава стевии листьев. / Е.Е. Курдюков, Т.А. Пономарева, А.А. Горбунова и др. // Вестник Пензенского государственного университета. — 2019. — № 4. — с. 65-68.
7. Куркин В.А. Флавоноиды листьев гинкго двулопастного (Gihkgo biloba L.). / В.А. Куркин // Химия растительного сырья. — 2012. — № 2. — с. 85-88.
8. Куркин В.А. Зверобой: итоги и перспективы создания лекарственных средств / В.А. Куркин, О.Е. Правдивцева
— Самара: Офорт, 2008. — 127 с.
9. Куркина А.В. Флавоноиды фармакопейных растений / А.В. Куркина — Самара: Офорт, 2012. — 290 с.
10. Морозова Т.В. Содержание суммы флавоноидов с сырье боярышника полумягкого / Т.В. Морозова, В.А. Куркин, О.Е. Правдивцева // Материалы V научно-практической конференции «Современные аспекты использования растительного сырья и сырья природного происхождения в медицине»; — М.: Изд-во Первого МГМУ им. И.М. Сеченова, 2017. — с. 151-152.
11. Подпоринова Г.К. Химический состав растительного сырья стевии. / Г.К. Подпоринова, Н.Д. Верзилина, К.К. Полянский // Известия вузов. Пищевая технология. — 2005. — № 4. — с. 74-75.
12. Самылина И.А. Пути использования лекарственного растительного сырья и его стандартизация. / И.А. Самылина, И.А. Баландина // Фармация. — 2004. — № 52. — с. 39-41.
13. Самылина И.А. Научные основы разработки и стандартизации лекарственных растительных средств. / И.А. Самылина, В.А. Куркин, Г.П. Яковлев // Ведомости Научного центра экспертизы средств медицинского применения. — 2016. — № 1. — с. 41-44.
14. Самылина И.А. Проблемы стандартизации лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных средств / И.А. Самылина // Традиционная медицина и питание: теоретические и практические аспекты: материалы 1-го Международного научного конгресса; — М.: Институт традиционных методов лечения МЗ РФ, 1994.
— с. 203.
15. Семенова Е.Ф. Антимикробная активность извлечений из сырья стевии / Е.Ф. Семенова, Е.Е. Курдюков, А.И. Шпичка // Сборник статей VI Международной научной конференции «Актуальные проблемы медицинской науки и образования»; — Пенза: Изд-во ПГУ, 2017. — с. 144-146.
16. Семенова Н.А. Стевия - растение XXI века / Н.А. Семенова — СПб: ДИЛЯ, 2005. — 160 с.
Список литературы на английском языке / References in English
1. Gorbatenko L.E. Steviya - tsennoe pistahevoe i lekarstvennoe rastenie [Stevia is a valuable food and medirinal plant] / L.E. Gorbatenko, O.O. Dzyuba // New and non-traditional plants and prospers for their use: proceedings of the V International Symposium; — M.: Peoples' Friendship University of Russia (RUDN), 2003. — p. 317-319. [in Russian]
2. Zhuzhzhalova T.P. Izmenenie ximkheskogo sostava stevii pri vozdely'vanii v CzChR [Change in the ^em^al ramposition of stevia during cultivation in the ^R]. / T.P. Zhuzhzhalova, G.K. Podporinova, M.V. Zimin // Introdudion of non-traditional and rare plants : materials of the VI International Saen^fe and Predial Confere^e; — Belgorod: Pero, 2006.
— p. 41-43. [in Russian]
3. Kurdyukov E.E. K voprosu standartizarii po soderzhaniyu flavonoidov list'ev stevii kak novogo vida lekarstvennogo rastitel'nogo sy'r'ya [On the issue of standardization on the rantent of flavonoids of stevia leaves as a new type of medirinal plant raw materials]. / E.E. Kurdyukov, A.V. Kuzneczova, E.F. Semenova et al. // Ximiya rastitel'nogo sy'r'ya [Chemistry of plant raw materials]. — 2019. — № 1. — p. 217-224. [in Russian]
MewdynapodnhM MayuMO-uccAedoBameAbCKUu wypnan ■ № 12 (126) • fleKaöpb
4. Kurdyukov E.E. Kolichestvennoe opredelenie cummy' diterpenovy'x glyukozidov v sy'r'e stevii [Quantitative determination of the amount of diterpene glycosides in stevia raw materials]. / E.E. Kurdyukov // Izvestiya vy'sshix uchebny'x zavedenij. Povolzhskij region. Medicinskie nauki [News of higher educational institutions. Volga region. Medical sciences]. — 2018. — № 3. — p. 43-49. — DOI: 10.14258/jcprm.2019014067 [in Russian]
5. Kurdyukov E.E. Makro- i mikromorfologicheskie osobennosti list'ev stevii Rebo Stevia rebaudiana Bertoni pri introdukcii v Srednem Povolzh'e [Macro- and micromorphological features of the leaves of Stevia Rebo Stevia rebaudiana Bertoni during introduction in the Middle Volga region]. / E.E. Kurdyukov, E.F. Semenova // Nauchny'e vedomosti Belgorodskogo gosudarstvennogo universiteta. Seriya Medicina i farmaciya [Scientific bulletin of Belgorod State University. Medicine and Pharmacy Series]. — 2017. — № 26. — p. 137-145. [in Russian]
6. Kurdyukov E.E. Izuchenie ximicheskogo sostava stevii list'ev [Study of the chemical composition of stevia leaves]. / E.E. Kurdyukov, T.A. Ponomareva, A.A. Gorbunova et al. // Vestnik Penzenskogo gosudarstvennogo universiteta [Bulletin of the Penza State University]. — 2019. — № 4. — p. 65-68. [in Russian]
7. Kurkin V.A. Flavonoidy' list'ev ginkgo dvulopastnogo (Gihkgo biloba L.) [Flavonoids of the leaves of ginkgo biloba (Ginkgo biloba L.)]. / V.A. Kurkin // Ximiya rastitel'nogo sy'r'ya [Chemistry of plant raw materials]. — 2012. — № 2. — p. 85-88. [in Russian]
8. Kurkin V.A. Zveroboj: itogi i perspektivy' sozdaniya lekarstvenny'x sredstv [Hypericum: results and prospects for the creation of medicines] / V.A. Kurkin, O.E. Pravdivceva — Samara: Ofort, 2008. — 127 p. [in Russian]
9. Kurkina A.V. Flavonoidy' farmakopejny'x rastenij [Flavonoids of pharmacopoeia plants] / A.V. Kurkina — Samara: Ofort, 2012. — 290 p. [in Russian]
10. Morozova T.V. Soderzhanie summi flavonoidov s sire boyarishnika polumyagkogo [The content of the sum of flavonoids from the raw material of hawthorn semi-soft] / T.V. Morozova, V.A. Kurkin, O.E. Pravdivtseva // Materials of the V scientific and practical conference "Modern aspects of the use of plant raw materials and raw materials of natural origin in medicine; — M.: Publishing House of the First Moscow State Medical University named after I.M. Sechenov, 2017. — p. 151152. [in Russian]
11. Podporinova G.K. Ximicheskij sostav rastitel'nogo sy'r'ya stevii [Chemical composition of stevia plant raw materials]. / G.K. Podporinova, N.D. Verzilina, K.K. Polyanskij // Izvestiya vuzov. Pishhevaya texnologiya [News of universities. Food technology]. — 2005. — № 4. — p. 74-75. [in Russian]
12. Samy'lina I.A. Puti ispol'zovaniya lekarstvennogo rastitel'nogo sy'r'ya i ego standartizaciya [Ways of using medicinal plant raw materials and its standardization]. / I.A. Samy'lina, I.A. Balandina // Farmaciya [Pharmacy]. — 2004. — № 52. — p. 39-41. [in Russian]
13. Samy'lina I.A. Nauchny'e osnovy' razrabotki i standartizacii lekarstvenny'x rastitel'ny'x sredstv [Scientific basis for the development and standardization of herbal medicines]. / I.A. Samy'lina, V.A. Kurkin, G.P. Yakovlev // Vedomosti Nauchnogo centra e'kspertizy' sredstv medicinskogo primeneniya [Bulletin of the Scientific Center for the Examination of Medical Products]. — 2016. — № 1. — p. 41-44. [in Russian]
14. Samilina I.A. Problemi standartizatsii lekarstvennogo rastitelnogo sirya i lekarstvennikh rastitelnikh sredstv [Problems of standardization of medicinal plant raw materials and medicinal herbal remedies] / I.A. Samilina // Traditional medicine and nutrition: Theoretical and practical aspects: Materials of the 1st International Scientific Congress; — M.: Institute of Traditional Methods of Treatment of the Ministry of Health of the Russian Federation, 1994. — p. 203. [in Russian]
15. Semenova Ye.F. Antimikrobnaya aktivnost izvlechenii iz sirya stevii [Antimicrobial activity of extracts from stevia raw materials] / Ye.F. Semenova, Ye.E. Kurdyukov, A.I. Shpichka // Collection of articles of the VI International Scientific Conference "Actual problems of medical science and education"; — Penza: PSU Publishing House, 2017. — p. 144-146. [in Russian]
16. Semenova N.A. Steviya - rastenie XXI veka [Stevia is a plant of the XXI century] / N.A. Semenova — SPb: DILYA, 2005. — 160 p. [in Russian]
