CC BY
110
Сибирский медицинский журнал, 2007, № 5
ЛИТЕРАТУРА
1. Беленький М.Л. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта. — Л., 1963. — С.81-107.
2. Гончарик И.И. Болезни желудка и кишечника. — Минск, 1994. - 160 с.
3. Гребенев А.Л., Мягкова Л.П. Болезни кишечника. — М., 1994. — 400 с.
4. Григорьев П.Я, Яковенко Э.П. Диагностика и лечение хронических болезней органов пищеварения. — М., 1990. — 364 с.
5. Лебедев В.П. Клиническая фитотерапия. — Новосибирск, 2003. — 368 с.
6. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. — М., 2005. — 832 с.
7. Сергиенко В.И., Бондарева И.Б. Математическая статистика в клинических исследованиях. — М., 2000. — 263 с.
8. Сидоров К.К. О классификации токсичности ядов при парентеральных способах введения // Токсикология новых промышленных химических веществ. — М., 1973. — Вып. 13. — С.47-51.
© КОРНОПОЛЬЦЕВА Т.В., ТАНХАЕВА Л.М., АСЕЕВА Т.А. - 2007
МЕТОДИКА КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ СУММЫ ФЛАВОНОИДОВ В НАДЗЕМНОЙ ЧАСТИ GENTIANA ALGIDA
Т.В. Корнопольцева, Л.М. Танхаева, Т.А. Асеева
(Институт общей и экспериментальной биологии СО РАН, директор — д.б.н., проф. Л.Л. Убугунов, отдел биологически активных веществ, зав. — д.м.н., проф. С.М. Николаев)
Резюме. Горечавка холодная — лекарственное растение, используемое в традиционной медицине при заболеваниях горла и при интоксикациях. Для стандартизации данного сырья разработана методика количественного определения суммы флавоноидов спектрофотометрическим методом в пересчете на лютеолин-стандарт, которая может быть использована при определении подлинности лекарственного сырья.
Ключевые слова: ОеиНаиа algida, методика определения суммы флавоноидов, антимикробный эффект.
Gentiana algida Pall. горечавка холодная (spang rgyan) — лекарственное растение, известное в тибетской медицине как лучшее средство для лечения болезней горла, легких и при интоксикациях [1,4]. По данным Ц. Хайдава с соавт. [7] и Самтэна [6] цветки горечавки холодной входят в состав сложных прописей, назначавшихся при крупозной пневмонии, хронических гнойных заболеваниях, связанных с увеличением общего объема легких и возникновением различных опухолей в них, остром и хроническом бронхите, отеках и язвах в горле, заболеваниях полости рта.
Надземная часть растения содержит иридоиды, ксантоны, алкалоиды, флавоноиды [5].
При фармакологических исследованиях различных фракций горечавки холодной (хлороформной, этила-цетатной и бутанольной), проведенных в Институте общей и экспериментальной биологии СО РАН, высокую противовоспалительную активность показала эти-лацетатная фракция. Данное обстоятельство позволяет предложить в качестве критерия подлинности сырья содержание в нем веществ фенольного характера (фла-воноидов).
Материалы и методы
Для количественного определения флавоноидов — соединений, имеющих собственное поглощение в УФ- и частично в видимой области спектра, использовали спект-рофотометрический метод анализа. Зависимость оптической плотности от длины волны измеряли на спектрофотометре Alient-8453E с частотой шага в 1 нм.
Для количественного определения экстрактивных веществ использовался фармакопейный метод [3].
Результаты и обсуждение
Дифференциальный метод спектрофотометричес-кого анализа основан на использовании реакции ком-плексообразования с раствором алюминия хлорида. Полученные комплексы имеют максимумы поглощения, которые позволяют более избирательно определить количество флавоноидов, поскольку эта область спектра достаточно удалена от максимумов поглощения сопутствующих фенольных и других органических веществ, содержащихся в экстрактах сырья [2].
При исследовании УФ-спектров спиртового извлечения из данного сырья было обнаружено, что максимумы УФ-спектров спиртовых извлечений горечавки холодной близки к максимумам УФ-спектров поглощения ГСО лютеолина. Далее при добавлении к спиртовому извлечению горечавки холодной раствора алюминия хлорида II-ой максимум поглощения УФ-спектра
смещался к 400 нм и совпадал с максимумами поглощения стандартного образца лютеолина, снятого в аналогичных условиях.
Подобраны оптимальные условия экстракции, при которых достигается максимальный выход флавоноидов, так концентрация экстрагента — 70% этанол, температура экстракции 60°С, время экстракции 60 минут, соотношение сырье — экстрагент 1:16, размер частиц сырья 0,5-1мм, для максимального извлечения флавоноидов достаточно 3-х кратной экстракции.
Методика количественного определения суммы флавоноидов в пересчете на лютеолин-стандарт в надземной части горечавки холодной.
Аналитическую пробу сырья измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 0,5 мм.
Около 1 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в колбу со шлифом вместимостью 250 мл, прибавляют 100 мл 50% этанола. Колбу присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане в течение 75 мин., периодически встряхивая для смывания частиц сырья со стенок. Горячее извлечение фильтруют через бумажный фильтр в мерную колбу вместимостью 200 мл. Экстракцию повторяют дважды по 50 мл и извлечения фильтруют в ту же мерную колбу. После охлаждения объем объединенных извлечений доводят 50% этанолом до метки и перемешивают (раствор А).
В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 1 мл раствора А и 1 мл раствора алюминия хлорида в 95% этаноле, 1 мл разведенной уксусной кислоты и доводят объем раствора 95% этанолом до метки. Через 40 минут измеряют оптическую плотность раствора на спектрофотометре при длине волны 400 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм.
В качестве раствора сравнения используют раствор, состоящий из 1 мл извлечения, 1 капли разведенной уксусной кислоты и доведенный 95% этанолом до метки в мерной колбе на 25 мл.
Параллельно измеряют оптическую плотность раствора Государственного стандартного образца (ГСО) лютеолина, приготовленного аналогично испытуемому раствору.
Содержание суммы флавоноидов в пересчете на лютеолин на абсолютно сухое сырье в процентах (Х) вычисляют по формуле:
Х _Рх х Мо х 200 х 25 х100 х100 Do х М х 100 х 25 х(100
где Dх — оптическая плотность испытуемого раствора; Мо — масса ГСО лютеолина в граммах; 200 — объем извлечения, мл; 25 — объем разведения, мл; Do — оптическая плотность раствора ГСО лютеолина; 100 — объем ГСО лютеолина; М — масса сырья в граммах; W — потеря в массе при высушивании сырья в процентах.
Таблица 1
Метрологическая характеристика определения суммы флавоноидов в пересчете на лютеолин-стандарт и экстрактивных веществ в надземной части
горечавки холодной
Сибирский медицинский журнал, 2007, № 5 флавоноидов в пересчете на лютеолин-стандарт и про-
Исследуемые биологически активные вещества Х ср. f S Sx x А отн.
Содержание суммы флавоноидов, % 1,9 9 0,05 0,016 0,036 4,6
Содержание суммы экстрактивных веществ, % 22,8 9 1,08 0,343 0,775 1,76
водилась на образцах Gentiana algida, собранных в Тун-кинском районе в 2000 году (табл. 1).
Были проведены эксперименты с добавками лютеолина непосредственно при экстракции сырья (табл. 2). Исходя из полученных данных, содержание флаво-ноидов в надземной части горечавки холодной в пересчете на лютео-лин-стандарт составляет 1,9%, причем относительная ошибка опыта с добавками лютеолина не превышает относительной ошибки метода.
Таким образом, разработана методика количественного определения флавоноидов в пересчете на лю-теолин-гликозид в надземной части горечавки холодной, которая может использоваться при определении подлинности рассматриваемого
Количественная оценка велась по выходу суммы вида лекарственного сырья.
Результаты опытов с добавками лютеолина
Таблица 2
Найдено фла- Добавлено Должно быть Найдено Абсолютная Относи-
воноидов в лютеолина, флавоноидов флавоноидов ошибка, тельная
сырье, г г и лютеолина и лютеолина, г ошибка, %
0,01722 0,00430 0,02152 0,02100 0,00052 2,43
0,01716 0,00429 0,02145 0,02090 0,00055 2,56
0,01720 0,00860 0,02580 0,02500 0,00080 3,10
0,01708 0,00854 0,02562 0,02610 -0,00048 1,87
0,01696 0,01267 0,02963 0,03019 -0,00055 1,87
0,01710 0,01282 0,02992 0,03039 -0,00047 1,58
METHOD OF THE QUANTITATIVE DETERMINATION OF THE AMOUNT FLAVONOIDS IN
ELEVATED PART GENTIANA ALGIDA
T.V. Kornopolzeva, L.M. Tanhaeva, T.A. Aseeva (Institute of General and Experimental Biology, Ulan-Ude)
The Gentiana algida — a medicinal plant, used at traditionally medicine at disease blazed and at departure. For standardization given cheese is designed methods of the quantitative determination of the bags-we flavonoids in recalculation on lyteolin-standard, which can be able used at determination of authenticity medicinal cheese.
ЛИТЕРАТУРА
1. Базарон Э.Г., Асеева Т.А. «Вайдурья-онбо» - трактат индо-тибетской медицины (Приложение). — Новосибирск: Наука, 1985. - С.45.
2. Беликов В.В., Точкова Т.В. Реакция комплексообразова-ния в анализе флавоноидов// Матер. 2-го Всесоюз. симп. по фен. соед. — Алма-Ата: Наука, 1973. — С.168-172.
3. Государственная фармакопея СССР: Вып. 1. Общие методы анализа / МЗ СССР. — 11-е изд., доп. — М.: Медицина, 1987. — 336 с.
4. «Джуд-ши»: Канон тибетской медицины. Пер. с тибетского. — М.: Восточная литература РАН, 2001. — 766 с.
5. Растительные ресурсы СССР: Цветковые растения, их химический состав, использование; Семейства СарпйИасеае - Р1аПэдпасеае. — Л.: Наука, 1990. — 328 с.
6. Самтэн. Учебник тибетской медицины. Новый рассвет или краткая суть медицины. — Улан-Удэ: Изд-во БНЦ СО РАН, 2006. — С.85.
7. Хайдав Ц., Алтанчимэг Б., Варламова Т.С. Лекарственные растения в монгольской медицине. — Улан-Батор, 1985. — 390 с.
