CC BY
12
Методы исследования
УДК 614.7:616-056.<3-02:54
Канд. мед. наук Г. И. Виноградов
МЕТОДИЧЕСКИЕ ВОПРОСЫ ИЗУЧЕНИЯ ХИМИЧЕСКИХ АЛЛЕРГЕНОВ В ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЕ
Киевский научно-исследовательский институт общей и коммунальной гигиены
им. А. Н. Марзеева
Учет аллергенного действия химических веществ при гигиеническом нормировании связан с рядом трудностей, которые носят методологический и методический характер. Методическим подходам к изучению химических аллергенов посвящены исследования О. Г. Алексеевой, Л. А. Дуевой, Г. П. Трубицкой и соавт. Однако и до сих пор некоторые вопросы не решены. С гигиенической точки зрения особо важным представляется установление зависимости аллергенного эффекта от дозы и пути поступления химических веществ в организм.
Данные исследования проведены на примере распространенных загрязнителей атмосферного воздуха (формальдегида, окиси углерода) и воды водоемов (хлористого бутила и хлористого бензила).
В I серию опытов было взято 30 морских свинок, разделенных на 3 группы (1-я — контроль). При этом предусматривалось длительное (в течение 7 мес) воздействие химических веществ по 7 ч ежедневно. Концентрацию формальдегида и окиси углерода брали на уровне установленных максимальных разовых концентраций для атмосферного воздуха — соответственно 0,038 и 3 мг/м3. На протяжении 4 мес эксперимента аллергологиче-ские реакции у интактных животных были отрицательными: дегрануляция базофилов периферической крови не превышала 10%, показатель повреждения нейтрофилов был в пределах 0,08%, а комплементсвязывающие антитела в сыворотке не обнаруживались. Затравка морских свинок формальдегидом приводила к развитию сенсибилизации через 1 мес ингаляционного воздействия. Об этом свидетельствовали результаты аллергологических проб: степень дегрануляции базофилов достигала 50,4±0,8 (резко положительная реакция), показатель повреждения нейтрофилов — 0,27±0,003 (резко положительная реакция), ^ титра антител был равен 2,5±0,26. Интенсивность сенсибилизации в последующие месяцы воздействия формальдегида существенных изменений.не претерпевала. Достоверное повышение процента дегрануляции базофилов через 2 мес затравки, а также снижение к этому времени показателя повреждения нейтрофилов не влияли на выраженность реакции: в обоих случаях она была -М—К как и в конце первого месяца затравки. »
Окись углерода в концентрации 3 мг/м3 через 1 мес затравки аллергенного эффекта не вызывала, и аллергологические реакции оставались на уровне контроля. Необходимо отметить, что длительная (до 4 мес) затравка также не привела к сенсибилизации.
Подводя итоги этого эксперимента, можно заключить, что для выявления аллергенного эффекта простых химических соединений (в данном случае « формальдегида и окиси углерода) вполне достаточна 30-дневная затравка по 7 ч ежедневно.
Следующая, II серия опытов была посвящена определению оптимального режима затравки для возможности выявления аллергенного эффекта. Исследования проведены на примере формальдегида в концентрации 0,038 мг/м3. В опыт взяты 3 группы животных по 10 особей в каждой: 1-я — контрольная, 2-я — ежедневная затравка в течение 30 дней по 7 ч ежеднев-
но, 3-я — дробная затравка также по 7 ч ежедневно с интервалом 2—3 дня. Использованы те же методы, что и в I серии, причем реакции ставили в динамике: до начала опыта, после затравки, а затем через 2, 4, 6 и 8 нед после окончания воздействия. Анализ полученных данных показывает, что и режим сенсибилизации существенно не отражается на выраженности аллерго-логического эффекта. Сразу после затравки и через 2 нед после ее окончания степень дегрануляции базофилов и показатель повреждения нейтрофи-лов достоверно более выражены при дробном поступлении формальдегида. Однако оценка этих реакций (как мы указывали выше) свидетельствует о том, что при обоих вариантах режима сенсибилизации их интенсивность одинаковая--1—I—К Это позволяет считать, что аллергенный эффект можно выявить как при ежедневной, так и при дробной затравке с интервалом 2—3 дня.
Нам представляется целесообразным в дальнейшем использовать ежедневную затравку экспериментальных животных химическим аллергеном, так как эти условия ближе к естественным.
С гигиенических позиций важно было оценить также возможность возникновения аллергенных эффектов не только при ингаляционном, но и при пероральном поступлении химических веществ, что особенно важно для практики нормирования аллергенов в воде водоемов. Исходя из этого, мы предприняли серию исследований аллергенной активности двух химических соединений — хлористого бутила и хлористого бензила — при их пероральном поступлении в организм в различных дозах.
Результаты исследований позволяют считать, что аллергия к химическим веществам может возникать при проникновении их через неповрежденную стенку желудочно-кишечного тракта. Это проявляется в образовании сыво4 роточных аутоантител к тканевым антигенам печени и кишечника, деграну-1 ляции базофилов периферической крови под влиянием антигена. В резуль-| тате воздействия хлорорганических соединений происходят усиленное образование бляшек аутоиммунного гемолиза и активация плазмоцитарной реакции, отражающей реактивность иммунокомпетентных клеток лимфоидной системы. Исследования аллергенного действия хлористого бутила и хлористого бензила продемонстрировали возможность проведения экспериментов по изучению аллергенной активности химических веществ не только на морских свинках, как это было рекомендовано ранее, но и на белых крысах — наиболее распространенном виде лабораторных животных, используемых в токсикологии.
Одной из существенных трудностей постановки серологических реакций является выбор антигена. Применение гаптена во многих случаях ограничено, а то и вообще невозможно, если он водонерастворим. Мы использовали главным образом тканевый антиген, приготовленный in vivo (Г. И. Виноградов и соавт.).
Анализ результатов исследований позволяет рекомендовать изучение аллергенной активности химических веществ, загрязняющих как атмосферный воздух, так и воду водоемов, в эксперименте на лабораторных животных с соблюдением адекватности пути поступления этих веществ в организм, как это происходит в естественных условиях. Наиболее целесообразно проводить исследования при ингаляционной или пероральной затравке животных в течение 30 дней. Для установления сенсибилизирующего действия-химических веществ, загрязняющих окружающую среду, необходимо использовать наиболее информативные аллергические реакции с применением аллергена in vitro (реакции дегрануляции базофилов периферической крови и тучных клеток перитонеальной жидкости, определение показателя повреждения нейтрофилов) и серологические реакции (реакцию связывания комплемента на холоду). Вместе с тем необходимо дальнейшее совершенствование наиболее современных методов оценки состояния Т- и В-систем иммунитета (реакции властной трансформации лимфоцитов, спонтанного и иммунного розеткообразования, определение иммуноглобулинов и др.)
ЛИТЕРАТУРА
Алексеева О. ГДуеваЛ.А. Аллергия к промышленным химическим соединениям. М., 1978.
Алексеева О. Гs— В кн.: Принципы и методы установления предельно допустимых концентраций вредных веществ в воздухе производственных помещений. М., 1970, с. 111—120.
Методические указания к экспериментальному изучению аллергенных свойств химических ингредиентов атмосферных загрязнений. Киев, 1968.
Определение состояния иммунологической реактивности организма при воздействии факторов окружающей среды. Киев, 1976.
Трубицкая Г. П., Боков А. Н., Алексеева О. Г.— Гиг. труда, 1977, № 10, с. 13—17.
Поступила 20/Х1 1978 г.
УДК 616.34-008.37(В. coll)-078
Проф. Г. П. Калина МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФЕКАЛЬНЫХ КИШЕЧНЫХ ПАЛОЧЕК
. Московский научно-исследовательский институт гигиены им. Ф. Ф. Эрисмана
Выделение фекальных кишечных палочек (ФКП) из общего числа бактерий группы кишечных палочек (БГКП) основано на способности ферментировать лактозу с образованием газа в средах с ингибиторами при повышенной температуре инкубации, для Е. coli — на способности продуцировать индол при повышенной температуре инкубации (признаки, определяющие принадлежность цитратположительных кишечных палочек — Ц+КП к ФКП рассмотрены в работе Г. П. Калины). К ФКП могут быть отнесены все представители группы кишечных палочек независимо от их родовой принадлежности, хотя степень их индикаторного значения различна.
Из методов определения ФКП наиболее распространен посев в лактозо-желчную среду с бриллиантовым зеленым при одновременном посеве в бульон для определения индола. Обе среды инкубируют при 44,0—44,5°С в течение 22—24 ч (MacKenzie и соавт.). Этот метод проверен и апробирован в ряде стран — Англии (Thomas; Taylor), где он рекомендован официально, Франции (Pantaleon и соавт.; Buttiaux и соавт.), Италии (Graziadei-Celoria), Голландии (Mossel), Греции (Papavassiliou). Все эти авторы предусматривают в качестве первого этапа культивирование в неингибиторной или сла-боингибиторной среде при 35—37°С (например, в лактозопептонной среде, служащей для определения индекса БГКП).
Поскольку основным, наиболее часто встречающимся представителем ФКП являются Е. coli, сохранившие способность ферментировать лактозу и продуцировать индол при 44,5°С, метод Мак-Кензи (комплекс двух тестов) может быть принят за основу определения этого компонента ФКП. Основной недостаток системы Мак-Кензи — определение индола в дополнительной среде — бульоне. При качественном определении это означает удвоение используемых емкостей, а при количественном — удвоение 2, 3, 5-го рядов этих емкостей.
Попытки совмещения определения двух свойств — сбраживания углевода и продукции индола в одной емкости или в ряду емкостей предпринимались неоднократно (И. Е. Минкевич, 1949; Schubert). Установлено, что присутствие разлагаемых углеводов и спиртов тормозит продукцию индола. Наибольшее торможение оказывает разложение глюкозы, наименьшее — маннита (Fischer), мальтозы (И. Е. Миневич, 1949), галактозы (Rappaport и соавт.). Введение триптофана в концентрациях от 0,005% (Acklin) до 0,02— 0,04% (Schubert; Rappaport и соавт.) или комплексов, содержащих его (Isenberg и Sundheim), способствует успешному процессу образования индола. Л. М. Горовиц-Власова заменяла триптофан триптическим переваром пептона (по типу пептона Хоттингера), Pugsley и соавт.—триптоном.
