CC BY
4
УДК «14.7:57«.Я]-07в+(14.4-0?в
Г. П. Калина (Москва)
МЕТОДИЧЕСКИЕ ПОДХОДЫ К ИЗУЧЕНИЮ УСЛОВНО-ПАТОГЕННЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ В ОБЪЕКТАХ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ
В Московском НИИ гигиены им. Ф. Ф. Эрисма-на .на протяжении многих лет проводилось изучение условно-патогенных микроорганизмов и разрабатывались специальные питательные среды для нх обнаружения, количественного учета и идентификации. В данной статье подводятся некоторые итоги этой работы в связи с 60-летием института.
Еще в 30-х годах П. П. Дьяконов впервые в мире обосновал значение условно-патогенных микробов в возникновении пищевых токсиконнфекций и интоксикаций, что ныне повсеместно признано. В большом объеме эта проблема начала разрабатываться в лаборатории с середины 60-годов, когда возникла необходимость создания специальных питательных сред для целевого выявления тех или иных условно-патогенных микроорганизмов, виновных в пищевых отравлениях. К тому времени этих микроорганизмов насчитывалось уже несколько десятков. За прошедшие 15 лет наметились и определенные единые подходы к этим методическим разработкам. Обилие новых условно-патогенных микробов, по своей биологии и характеру обменных процессов часто значительно различающихся, требует новых принципов разработки схем исследования и прежде всего отказа от «универсальных» сред и перехода к средам целевого назначения, используемых для обнаружения и идентификации микроорганизмов только определенных групп, родов или видов, выявление которых вызвано оперативными целями или необходимостью решения поставленныхзадач. Практически этот принцип давно уже введен в практику исследований на сальмонеллы, стафилококки, О.рег-Гг^епБ, В. сегеиэ, энтерококки. Например, в схемах обследования пищевых токсиконнфекций предусматривается обязательное использование целевых исследований на упомянутые микроорганизмы, плюс еще на токсин ботулизма, а при показаниях — на галофильные вибрионы. И хотя требовать введения еще новых питательных сред при обследовании пищевых токсиконнфекций —значит усложнить работу практических лабораторий, однако только применение ¿пециализированных сред для эдвардсиелл, протея (вместо не оправдавшего себя посева по Шукевичу), аэромонад могло бы значительно снизить процент пищевых токсиконнфекций с нерасшифрованной этиологией.
Но есть область, где использование специализированных сред для преимущественного обнаружения определенных микробов обязательно: это обследования объектов окружающей среды, поиски экологических ниш. Практика нашей лаборатории и принимавших участие в апробации раз-
работанных лабораторией сред показала существенное повышение высеваемости, а часто и смены отрицательных результатов положительными при использрвании специализированных сред.
В настоящее время лабораторией разработаны целевые среды первого (жидкие среды накопления) и второго (дифференциально-элективные плотные среды) этапов для выделения и ориентировочной идентификации энтерококков, протея, клебсиелл, эдвардсиелл, аэро-, псевдо- и алломонад. Эти среды разработаны с учетом тщательно изученных биологических и биохимических свойств микробов, для которых они предназначены, их устойчивости к антибиотикам, типа катаболизма, эвтрофизма некоторых из них, т. е. способности развиваться в ограниченных минеральных средах в присутствии единственного источника углеродного и азотного питания, энергии. Учет ферментативных свойств позволил в плотной среде второго этапа получить сигнальную идентификацию искомого микроба, а для некоторых видов протея — и окончательную. Использована также особенность интерференции отдельных метаболитов, например торможение реакции на сероводород и индол в присутствии кислых метаболитов — продуктов брожения углеводов, а также нейтрализующих последние продукты декарбоксилирования некоторых аминокислот.
Новые целевые среды обнаружения позволили нам определить экологию протея в поверхностных водах, загрязняемых сбросами хозяйственно-бытовых сточных жидкостей и стоками мясопро-мышленных комплексов, установить частоту обсе-мёненности моргановским протеем сточных жидкостей и поверхностных вод. Упрощено выявление аэромонад в поверхностных водах, питьевой воде -и пищевых продуктах, определены обсемененность поверхностных вод клебсиеллами и частота наличия их в кишечнике человека. При исследовании рептилий Московского зоопарка использование универсальных сред на эдвардсиеллы не дало положительных результатов, а применение специализированных сред позволило обнаружить их в большом числе проб и установить частоту наличия их у животных некоторых видов — черепах, змей, ящериц, крокодилов. Только благодаря специальным средам были выявлены алломонады в сточных жидкостях зоны умеренного климата, до этого обнаруженные только в сточных жидкостях и поверхностных водах южных регионов страны.
Существенное значение имеет третий этап — индентификация выделенных культур. Рекомендуемые инструкциями и методическими указаниями наборы тестов, увеличивающиеся непрерывно с
Эффективность предлагаемых комплексных сред идентификации (X) по сравнению с традиционными (£)
Микроорганизмы Число исследований Число емкостей Сроки исследования, дни
£ А ь - в
Эшерихии 6 6 4 6 2 4
Клебсиелл ы 3 7 2 7 3 4
Протей:
1-й вариант 6 6 2 6 2 4
2-й вариант 6 6 2 6 2 4
Энтерококки 4 10 1 10 2 5
Эдвардсиеллы: 7 7 1 7 2 4
основные тесты *
то же вместе с допол-
нительными 20 20 6 20 3 5
Сальмонеллы 10 10 3' 10 2 4
Примечание. В сроки исследования в обоих случаях не включено время, необходимое для проведения серологической идентификации.
открытием новых диагностических признаков, усложняют работу практических лабораторий. При современном научном уровне выходом из положения может быть переход на комплексные среды (в одной, двух, реже в трех емкостях определяются основные решающие диагностические признаки микроба, для которого предназначены соответствующие комплексные среды). Идея создания ком-илексных сред не нова> и получила начало еще в 1911 г., когда Рассер и Вашингтон предложили двусахарную среду. Однако эта среда и ее многочисленные аналоги, как и разработанная в нашей, лаборатории среда ДУКС, могут быть отнесены к разряду универсальных. Целевые же комплексные среды, разработанные в нашей лаборатории для
бактерий кишечной группы, клебсиелл, протея, эдвардсиелл, аэро- и алломонад, энтерококков, сальмонелл, предназначены только для их идентификации. Преимущество этих комплексных сред очевидно, о чем свидетельствуют данные таблицы.
Таким образом, применение комплексных сред для упрощенного и ускоренного определения принадлежности микроба к тому или иному виду повышает производительность труда, ускоряет сроки исследования, экономит средства, посуду, место в термостате.
Несомненно, что отсутствие фабричного приготовления всех предлагаемых лабораторией питательных сред создает дополнительные трудности при изучении пищевых токсикоинфекций и проведении других работ в практических лабораториях. Однако широко применяются, особенно при изучении пищевых токсикоинфекций среды, также еще не выпускаемые промышленностью, молочно-солевой агар или желточно-солевой агар для выделения стафилококков, среды для выделения С1. регГпг^епз и В. сегегш. Только еще предполагается выпуск промышленностью магниевой и селенитовой сред. И тем не менее все эти среды взяты на вооружение практикой. С равным успехом могут быть приготовлены в лабораторных условиях и предлагаемые лабораторией среды, было бы только желание их использовать. Жизнь сама усложняет практику работы, и сейчас даже при использовании обычных методов и сред выделение и идентификация патогенных и условно-патогенных микробов неизмеримо более сложны, чем 30—50 лет назад. Следует надеяться, что отечественная промышленность начнет производство столь необходимых целевых и комплексных диагностических сред.
Поступила 18.03. Ы
УДК 614.777+628.1.03):[546.47/.49 + 546.56
Л. А. Алешина, А. А. Каплин
ПРИМЕНЕНИЕ МЕТОДА ИНВЕРСИОННОМ ВОЛЬТАМПЕРОМЕТРИИ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ Не, Ав, Си, РЬ, СЛ, 1п и Мп В ПОВЕРХНОСТНЫХ ВОДАХ И ДОННЫХ ОТЛОЖЕНИЯХ
Томский НИИ курортологии и Томский политехнический институт
Среди химических факторов загрязнителей окружающей среды все большее внимание привлекают тяжелые металлы и близкие к ним химические элементы (Г. Н. Красовский и В. В. Соколовский; А. Хорват). В связи с этим возникает необходимость в разработке чувствительных и экспрессных методов определения их ПДК в различных объектах окружающей среды. Одним из более перспек-1тивных является метод инверсионной вольтампе-рометрин (А. Г. Стромберг и соавт.; А. А. Каплин и соавт., 1978; Г. Н. Веретина и соавт.) Этот метод обладает высокой абсолютной чувствительностью (до Ю-10—1012 г), аппаратура срав-
нительно проста, возможно определить одновременно несколько элементов из одной пробы.
В данной работе предлагается инверсионно-вольтамперометрическая методика определения 1 I», Аб, Си, РЬ, Сс1, Мп в водах и донных отложениях пресных озер. Предел обнаружения элементов Ю-4 мг/л. Применяются полярограф ЬР-7 и электролитическая ячейка со вставными кварцевыми стаканчиками, в качестве индикаторных электродов — ртутный пленочный и графитовый, электрод сравнения — насыщенный каломельный электрод. Для снижения предела обнаружения и повышения воспроизводимости анодных пиков
