CC BY
14
2010 г.
из разделов в 2010 г. указано в скобках: «ПЦР-выявле-ние ВГС» (125), «ПЦР-выявление ВГВ» (115), «ПЦР-вы-явление ВИЧ» (90), «ПЦР-выявление Chlamidia trachomatis, Mycoplasma hominis, Ureaplasma urealyticum (260)», «ПЦР-выявление Neisseria gonorrhoeae» (90), «ПЦР-выявление микобактерий туберкулеза» (25), «ПЦР-выявление ВПЧ» (90), «Количественное определение РНК ВГС методом ПЦР» (90), «Количественное определение ДНК ВГВ методом ПЦР» (65).
Оценка качества ПЦР-исследований проводится ФСВОК на основании полученных от лабораторий-участ-ников результатов исследования наборов контрольных образцов (КО), содержащих закодированные положительные и отрицательные пробы. Состав наборов ежегодно утверждается экспертной группой ФСВОК.
В ходе внешней оценки качества (ВОК) качественных (неколичественных) исследований правильными считают положительные результаты, полученные при исследовании образцов, содержащих РНК или ДНК соответствующих патогенов и отрицательные результаты, полученные при исследовании образцов, их не содержащих. В тезисах изложены данные по двум из перечисленных выше разделов ФСВОК.
Доля правильных ответов в разделе «ПЦР-выявление ВГС» в 200 -2010 гг. (1-й цикл) составила соответственно для концентрации 104 МЕ/мл 98%-97%; 103 МЕ/мл 95%-92%; 9х102 МЕ/мл 75% - 88%; отрицательных КО 96% - 98%. Доля правильных ответов при выявлении ДНК C. trachomatis соответственно: 104 копий/мл 94%-92%; 103 копий/мл 82-73%; отрицательных КО 97% - 99%.
Полученные результаты позволяют отметить, что доля правильных результатов снижается при уменьшении концентрации ДНК или РНК в образце.
В 2010 г. в ФСВОК впервые в стране организованы разделы для количественного определения РНК ВГС и ДНК ВГВ с использованием ПЦР. ВОК определения вирусной нагрузки с 2007 г. проводится и в организованном разделе «ПЦР-выявление ВИЧ», участники которого могут представлять результаты исследования в количественном и/или качественном вариантах. При ВОК результатов количественных разделов рассчитывают диапазон удовлетворительных результатов - интервал, включающий в себя 90% результатов всех участников ^±1,64s, где ЦЗ - среднее геометрическое значение результатов участников, использовавших определенный набор реагентов, s - стандартное отклонение величины ЦЗ в логарифмической шкале.
Анализ сведений об использованных в ходе работы методах, реактивах и оборудовании показал:
1. лаборатории-участники ФСВОК используют для ПЦР-исследований преимущественно реактивы отечественного производства;
2. среди методов детекции продуктов амплификации, применяемых участниками ФСВОК в 2010 г., наименее используемым следует считать метод электрофореза. Так, только 11% участников раздела «ПЦР-выяв-ление ВГС» использовали названный метод, остальные - преимущественно методы амплификации в присутствии флуоресцентно меченых зондов с детекцией сигнала в режиме реального времени (RT-PCR) - 62% или по конечной точке (end point) - 25%. При использовании ПЦР для выявления ДНК Chlamidia trachomatis метод электрофореза применяли для детекции продуктов амплификации 22% участников ФСВОК, методы RT-PCR и end point - 42 и 36%, соответственно. Во всех разделах, за исключением «ПЦР-выявление ВИЧ», более 90% участников использовали реагенты отечественных производителей.
МЕТОДИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ НАБОРОВ РЕАГЕНТОВ, ПРЕДНАЗНАЧЕННЫХ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ РНК ВИРУСОВ МЕТОДОМ ОБРАТНОЙ ТРАНСКРИПЦИИ-ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИЕЙ
Сизикова Т.Е., Мельникова Е.В., Меркулова О.В., Мельников Д.Г., Петров А.А., Меркулов В.А.
Филиал ФГУ «48 Центральный научно-исследовательский институт Министерства обороны Российской Федерации - Вирусологический центр» г. Сергиев Посад Московской обл., Россия
Целью работы является анализ методических аспектов определения чувствительности амплификационных наборов реагентов, предназначенных для выявления РНК вирусов методом обратной транскрипции - полимеразной цепной реакцией (ОТ ПЦР). Проведенный анализ основывается на результатах, полученных при испытании ОТ - ПЦР набора реагентов для выявления РНК возбудителя Аргентинской геморрагической лихо-
радки - вирус Хунин. За чувствительность того или иного метода обычно принимают минимальное количество концентрацию возбудителя, которое можно выявить с помощью данного метода.
На практике для определения чувствительности метода используют формулу: S = АхР,
где: S - чувствительность метода выраженная в УЕ мл-1, А - концентрация возбудителя в препарате,
.ПРЕПАРАТЫ
УЕ-мл-1, Р - высшее разведение исследуемого препарата, в котором еще наблюдают положительную реакцию, УЕ - условная единица.
В проведенных экспериментах по определению чувствительности набора реагентов для выявления РНК вируса Хунин установлено, что расчетная чувствительность ^р) составляет 3,5-102 БОЕ-мл-1, ошибка метода (б) равна х/: 2,82.
Максимальную и аналитическую чувствительность определяли по формулам:
Sm=Spхs (2),
Sm=Spхsх1,96 (3),
где: Sm - максимальная чувствительность набора реагентов, Saн - аналитическая чувствительность набора реагентов, 1,96 - коэффициент Фишера - Стью-дента для уровня надежности Р = 0,05 для числа степеней свободы п .
Определенные в результате проведенных исследований величины максимальной ^т= 1,0-103 БОЕ-мл-1) и аналитической ^ан = 2,0-103 БОЕ-мл-1) чувствительности следует использовать при определении, как воспроизводимости так и специфичности набора реагентов для выявления РНК вируса Хунин методом ОТ-ПЦР.
ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ ДЕЗИНФИЦИРУЮЩИХ СРЕДСТВ НА РЕЗУЛЬТАТЫ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА
Шумаков И.В., Туманова О.Ю., Бобко Д.И., Ястребова О.Н.
ЗАО «Вектор-Бест», г. Новосибирск, Россия
В настоящее время во многих КДЛ традиционно применяют 6% перекись водорода или хлорсодержащие дезинфектанты, хотя в ряде опубликованных работ доказано, что растворы и пары этих веществ оказывают значительное негативное влияние на результаты исследований методом иммуноферментного анализа (ИФА).
Цель настоящей работы - изучение влияния дезинфектантов различных типов на результаты ИФА с использованием модельных экспериментов и выбор оптимальных методов и средств дезинфекции в КЛД.
Материалы и методы. Исследования проводили на коммерческих наборах реагентов «Бест-анти-ВГС», (ЗАО «Вектор-Бест», Новосибирск), предназначенных для выявления иммуноглобулинов классов О и М к вирусу гепатита С. В экспериментах использовали дезинфицирующие средства отечественного и зарубежного производства. Анализировались образцы сыворотки крови доноров, а также сыворотки, содержащие антитела к ВГС.
Результаты исследований. Пары перекиси водорода и хлора вызывают увеличение оптической плотности (ОП) отрицательных образцов сыворотки крови, величина ОП положительных сывороток - снижается, в
сравнении с контролем. В результате отрицательные сыворотки определяются как слабоположительные (снижение специфичности). При попадании микроколичеств перекиси в рабочие растворы конъюгата и хромогена ОП положительных сывороток - снижалась. Вследствие этого были получены ложноотрицательные результаты для большей части положительных образцов (снижение чувствительности). Полученные нами данные показали, что внесение микроколичеств 70% этанола и современных дезинфектантов в рабочем разведении в растворы конъюгата или хромогена, так же как и инкубация планшета в присутствии их паров, не оказывало существенного влияния на качество анализа образцов сыворотки крови.
Таким образом, экспериментально подтверждено, что использование в лаборатории перекиси водорода или хлорсодержащих дезинфицирующих средств приводит к получению искаженных результатов ИФА за счет негативного влияния на его чувствительность и специфичность. Оптимальным для обработки в течение рабочего дня является 70% этиловый спирт, а для обеззараживания отходов, проведения плановых и генеральных уборок помещений - дезинфектантов на основе ЧАС и их комбинаций со спиртами.
(«
