CC BY
20
((¡Г\ СибАК
^^ Журнал «Инновации в науке» www.sibac.info_№ 12 (88), 2018 г.
РУБРИКА «МЕДИЦИНА»
МЕТОДИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ МОДЕЛИРОВАНИЯ САХАРНОГО ДИАБЕТА
В ЭКСПЕРИМЕНТЕ
Зайцев Константин Васильевич
канд. мед. наук, руководитель экспериментальной лаборатории биомедицинских технологий ФГБУ «Сибирский федеральный научно-клинический центр Федерального медико-биологического агентства»,
РФ, г. Томск E-mail: ZaycevKV@med. tomsk. ru
Жукова Оксана Борисовна
д-р мед. наук, ведущий научный сотрудник экспериментальной лаборатории биомедицинских технологий ФГБУ «Сибирский федеральный научно-клинический центр Федерального медико-биологического агентства»,
РФ, г. Томск E-mail: exper@med.tomsk.ru
Гостюхина Алена Анатольевна
канд. биол. наук, научный сотрудник экспериментальной лаборатории биомедицинских технологий ФГБУ «Сибирский федеральный научно-клинический центр Федерального медико-биологического агентства»,
РФ, г. Томск E-mail: exper@med.tomsk.ru
Абдулкина Наталья Геннадьевна
д-р мед. наук, заместитель генерального директора по научно-клинической работе ФГБУ «Сибирский федеральный научно-клинический центр Федерального медико-биологического агентства»,
РФ, г. Томск E-mail: nauka@med.tomsk.ru
Воробьев Виктор Александрович
канд. мед. наук, генеральный директор ФГБУ «Сибирский федеральный научно-клинический центр
Федерального медико-биологического агентства», РФ, ЗАТО Северск
E-mail: kb81 @med. tomsk. ru
METHODOLOGICAL ASPECTS OF MODELING OF DIABETES IN THE EXPERIMENT
Constantin Zaitsev
Ph.D. in Medical Science, Head of Experimental Laboratory of Biomedical Technologies of Siberian Federal Science-clinical Center of Federal medicobiological agency,
Russia, Tomsk
Oksana Zhukova
Ph.D. in Medical Science, Leading researcher of Experimental Laboratory of Biomedical Technologies of Siberian Federal Science-clinical Center of Federal medicobiological agency,
Russia, Tomsk
Alena Gostyukhina
Ph.D. in Biological Science, researcher of Experimental Laboratory of Biomedical Technologies of Siberian Federal Science-clinical Center of Federal medicobiological agency,
Russia, Tomsk
Natal'ya Abdulkina
Ph.D. in Medical Science, Deputy general director for research and clinical work of Siberian Federal Science-clinical Center of Federal medicobiological agency,
Russia, Tomsk
Victor Vorob'ev
Ph.D. in Medical Science, General director of Siberian Federal Science-clinical Center
of Federal medicobiological agency, Russia, Tomsk region, Seversk
(JT, СибАК
www.sibac.info
Журнал «Инновации в науке» _M12 (SS), 201S г.
АННОТАЦИЯ
Исследование было посвящено определению оптимальной дозы аллоксана для моделирования состояния сахарного диабета у крыс. Три группы животных по 10 особей в каждой получали раствор моногридрата аллоксана в различных концентрациях. Контролем служила группа из 10 крыс, которым вводили физиологический раствор в эквивалентном объеме. У всех животных проводили динамическую оценку содержания глюкозы крови в течение 14 суток эксперимента. Установлено, что у крыс при введении 12 мг/100 г аллоксана уровень глюкозы не превышал референсных границ нормального значения, 17 мг/100 г - повышенная концентрация глюкозы во все сроки эксперимента, 22 мг/100 г веса - летальная доза аллоксана. Таким образом, для моделирования сахарного диабета адекватной дозой аллоксана является 17 мг/100 г веса крысы.
ABSTRACT
The study has been devoted to determination of the optimal dose of alloxan to model diabetic state in rats. Three groups of animals each of them consists of 10 ones received solution of monohydrate alloxan in different concentrations. The control has been presented by the group of 10 rats, which obtained saline solution injection in equivalent volume. Dynamic assessment of blood glucose level was performed for all animals during 14 days of the experiment. It has been found that injection of 12 mg of alloxan/100 g of weight in rats has not caused exceeding of glucose level over reference limits of the normal value, one of 17 mg/100 g of weight has increased glucose concentration at all times of the experiment, and one of 22 mg/100 g of weight was lethal dose of alloxan. Thus, the dose of 17 mg alloxan/100 g of rat weight is adequate to simulate diabetes.
Ключевые слова: биологическое моделирование; сахарный диабет; аллоксан.
Keywords: biological modeling; diabetes mellitus; alloxan.
Биологическое моделирование является необходимым «инструментарием» для экспериментальной медицины. На сегодняшний день выявление закономерностей и особенностей развития патологических процессов, формирования их осложнений, разработка способов лечения и профилактики заболеваний, изучение механизмов действия лекарственных средств с целью направленного их применения было бы крайне затруднительно без моделирования соответствующих патологических состояний у экспериментальных животных.
Высокая социальная значимость сахарного диабета обусловливает актуальность данной проблемы для медико-биологической науки [3, 5]. К настоящему времени разработано несколько способов моделирования сахарного диабета в эксперименте: хирургический (полное или частичное удаление поджелудочной железы), химический (введение химических веществ, избирательно воздействующих на р-клетки островков Лангерганса), эндокринный (введение аденогипофизарного, соматотропного и адренокортикотропного гормонов), иммунологический (введение антител против инсулина) и генетический (использование чистых линий животных с наследственно обусловленной формой патологии) [1, 2].
Наиболее удобным способом в современных условиях экспериментальной диабетологии считается моделирование сахарного диабета с помощью панкреотоксинов: аллоксан, стрептозотоцин, дити-зон и другие [6]). При этом необходимо учитывать, что эффективная доза препарата зависит от вида животного, способа введения, состояния питания и прочих условий[7].
Целью настоящей работы явилось определение оптимальной дозы аллоксана для моделирования состояния сахарного диабета у крыс.
Материал и методы
Исследования проводили в утренние часы для исключения влияния на результаты суточных коле-
баний функциональных параметров [4]. Сахарный диабет I типа моделировали у 30 крыс-самцов линии Wistar с помощью однократного введения раствора моногидрата аллоксана («Sigma», США). Для определения оптимальной дозы аллоксана в эксперименте использовали три различные его концентрации: 12, 17 и 22 мг на 100 г животного. Инъекции вводили внутрибрюшинно, так как данный способ введения отличается малой травматичностью для животных. При моделировании учитывали, что диабетогенное действие аллоксана более активно проявляется у животных, находящихся на предварительно голодной диете [8], поэтому все экспериментальные крысы в течение 24 ч до начала моделирования не получали пищу, но при этом доступ к воде для них оставался неограниченным. Контролем служила группа из 10 крыс, которым аналогично вводили физиологический раствор в эквивалентном объеме. До начала эксперимента, а также на 1-е, 3-е, 7-е и 14-е сутки после введения аллоксана у всех животных с помощью глюкометра «Accu-Chek Performa Nano» («Roche Diagnostics», Германия) определяли уровень глюкозы в капиллярной крови, полученной путем разреза десны. При обработке полученных данных были использованы методы статистического описания, включающие проверку на нормальность распределения исследуемого признака по критерию Шапиро-Вилка, расчет среднего (М), ошибки среднего (m), сравнение показателей с помощью непараметрического критерия Манна-Уитни.
Результаты исследования
Полученные результаты показали, что у контрольных животных изучаемый показатель во все сроки эксперимента был на уровне 5,405,76 ммоль/л. До введения аллоксана уровень глюкозы в крови у всех животных соответствовал норме. У животных первой опытной группы, получивших 12 мг/100 г веса тела аллоксана, во все сроки эксперимента концентрация глюкозы колебалась от
^ СибАК
www.sibac.info
Журнал «Инновации в науке» _№ 12 (88), 2018 г.
4,28 до 6,26 ммоль/л. При использовании аллоксана в дозе 17 мг/100 г веса крысы в 1-е сутки уровень глюкозы увеличился в 2 раза, максимальное значение было достигнуто на 7-е сутки (22 ммоль/л), в конце эксперимента отмечено снижение до 13,3
ммоль/л. Доза аллоксана 22 мг/100 г вызвала резкий подъем концентрации глюкозы в первые сутки и гибель всех животных данной группы в течение недели (рисунок 1).
ммоль/л
40
30
20
10
до введения 1-е 3-е 7-е 14-е
сутки после введения
контроль
доза аллоксана 12 мг/100 г веса доза аллоксана 17 мг/100 г веса доза аллоксана 22 мг/100 г веса
Рисунок 1. Динамика содержания глюкозы крови у крыс при моделировании аллоксан-индуцированного
сахарного диабета
0
Известно, что аллоксан вызывает избирательное повреждение проницаемости плазмолеммы р-клеток поджелудочной железы, которые вырабатывают инсулин, вследствие его реакции с дитиоловыми группами, необходимыми для поддержания целостности мембран [8]. В-клетки поджелудочной железы разрушаются от действия аллоксана, инсулин не вырабатывается и формируется сахарный диабет [2]. Этим объясняется резкое повышение глюкозы в крови крыс на все исследуемые сутки эксперимента.
Заключение
Установлено, что у крыс при введении 12 мг/100 г аллоксана уровень глюкозы не превышал референс-ных границ нормального значения, 17 мг/100 г -повышенная концентрация глюкозы во все сроки эксперимента, 22 мг/100 г веса - летальная доза аллоксана. Таким образом, для моделирования сахарного диабета адекватной дозой аллоксана является 17 мг/100 г веса крысы.
Список литературы:
1. Баранов В.Г. Экспериментальный сахарный диабет: монография. - Л.: Наука, 1983. - 240 с.
2. Можейко Л.А. Экспериментальные модели для изучения сахарного диабета // Журнал Гродненского медицинского университета. - 2013. - № 3. - С. 26-29.
3. Сахарный диабет: диагностика, лечение, профилактика / под ред. И.И. Дедова, М.В. Шестакова, Е.Н. Андреева и др. - М.: Медицинское информационное агентство, 2011. - 145 с.
4. Степанова С.И., Галичий В.А. Космическая биоритмология. Хронобиология и хрономедицина. - М. Изд-во Триада-Х, 2000. - 239 с.
5. Эпидемиология сахарного диабета и прогноз его распространенности в Российской Федерации / Ю.И. Сун-цов, Л.Л. Болотская, О.В.Маслова, И.В. Казаков // Сахарный диабет. - 2011. - №1. - С. 15-19.
6. Etuk E.U. Animals models for studying diabetes mellitus // Agric. Biol. J.N. Am. - 2010. - Vol. 1, N 2. - P. 130134.
7. Anti-diabetic and antioxidant effects of Zingiber Officinale on alloxan-induced and insulin-resistant diabetic male rats / B.O. Iranloye et. al // J. Physiol. Sci. - 2011. - Vol. 26. - P. 89-96.
8. Lenzen S. The mechanisms of alloxan and streptozotocin induced diabete // Diabetologia. - 2008. - V. 51. -P. 216-226.
