CC BY
21Ф В ПОМОЩЬ ПРАКТИЧЕСКОМУ ЦИТОЛОГУ
МЕТОД ЖИДКОСТНОЙ ЦИТОЛОГИИ В ДИАГНОСТИКЕ РАКА ЯИЧНИКОВ
М.Г. ЛЕОНОВ1, В.И. НОВИК2, С.А. БЕЛЯЕВА1, Я.-Х.Б. ЕРШОВА1
1ГБУЗ «Онкологический диспансер № 3» Министерства здравоохранения Краснодарского края (г. Новороссийск), 2 ФГБУ «Научно-исследовательский институт онкологии им. Н.Н. Петрова» Минздрава России
Ключевые слова: рак яичников, традиционное цитологическое исследование, метод жидкостной цитологии.
Известный традиционный способ цитологической диагностики рака яичников (РЯ) при исследовании экссудатов брюшной и плевральной полостей имеет ряд недостатков. Таковыми являются: загрязнение фона исследуемого препарата элементами воспаления, некроза, эритроцитами и артефактами; плохая сохранность, повреждение и разрушение клеток, особенно злокачественных, которые очень чувствительны к изменениям внешней среды и быстро подвергаются распаду. Все это требует немедленного приготовления цитологических препаратов после получения экссудата или смыва брюшной полости, поскольку образуются фибриновые сгустки при большом содержании крови или недостаточном количестве антикоагулянта или его отсутствии в экссудате; неравномерно располагается клеточный материал на предметном стекле; затруднена цитологическая диагностика из-за наличия единичных опухолевых клеток. Возникает и невозможность быстрого обзора препарата из-за имеющихся участков много-слойности, что также затрудняет цитологическую диагностику.
Достоверность традиционного цитологического исследования экссудатов брюшной и плевральной полостей составляет не более 60%, что недостаточно для установления диагноза [1, 2, 3, 4].
Цель исследования
Повышение точности цитологической диагностики РЯ и его рецидивов.
Материалы и методы исследования
В исследование были включены 105 человек, из них 72 пациентки с подозрением на РЯ и 33 боль-
ных РЯ после проведенного лечения с подозрением на рецидив заболевания.
Материал для цитологического исследования, при наличии плеврального выпота, был получен у троих больных путем плевральной пункции, при наличии асцита было выполнено 67 лапараценте-зов под контролем УЗИ (аппарат TOSHIBA Aplio 500, конвексный датчик 3-5 МГц), а при отсутствии или незначительном количестве в брюшной полости выпота, выявленного с помощью лучевых методов (УЗИ, МРТ, КТ), было выполнено 35 смывов из брюшной полости при помощи пункции заднего свода влагалища. Полученный материал из брюшной и/или плевральной полостей для цитологического исследования делили на 2 порции, одну из которых исследовали традиционным цитологическим методом, другую — методом жидкостной цитологии (ЖЦ).
К экссудату или смыву брюшной полости добавляли раствор антикоагулянта — цитрат Na 5%, его центрифугировали на центрифуге «Элекон ЦЛМН-Р10-014» при скорости 2 000 об/мин в течение 10 мин, из осадка готовили препарат для традиционного цитологического исследования. При выраженном геморрагическом экссудате клеточный осадок ресуспензировали, добавляя 5-8 мл Cytorich Red collection fluid на 15-30 минут. Затем суспензию снова центрифугировали. Для получения препаратов методом ЖЦ к клеточному осадку добавляли питательную среду 199 в объеме 4 мл. Клеточную суспензию центрифугировали в Cytofuge-2 при скорости 1 000 об/мин 8 мин. При этом использовали предметные стекла с поли-Ь-лизиновым покрытием, снижающим потерю клеточного материала и обеспечивающим быстрое и прочное прикрепление исследуемого материала к стеклу. Полученный монослойный препарат сушили на воздухе, фиксацию проводили фиксатором Май-Грюнвальда, а окраску — по методу Романовского-Гимзе.
Автоматизированным методом препараты изготавливали с помощью универсального настольного робота Shandon Varistain Gemini ES,
Таблица 1
Сравнительная оценка эффективности цитологических методов диагностики рака яичников и его рецидивов
Исследуемая группа Количество исследуемых, N Метод жидкостной цитологии, N (%) Традиционное цитологическое исследование, N (%) Р
Подозрение на РЯ, из них: 72 57 (79,2) 42 (58,4) <0,05
— плевральная жидкость 3 3(100) 3(100)
— асцитическая жидкость 57 46 (80,7) 34 (59,4)
— смыв брюшной полости 12 8 (66,7) 5(14,7)
Диспансерные больные РЯ, 33 21 (63,6) 17(53,1) <0,05
из них:
— асцитическая жидкость 10 10(100) 9(90)
— смыв брюшной полости 23 11 (47,8) 8 (34,5)
позволяющего свести к минимуму погрешности метода, улучшить качество фиксации окраски, обеспечить быстрое и одновременное окрашивание большого количества цитологических препаратов.
Микроскопирование препаратов проводили под эмерсионной системой с использованием видеомикроскопа Micros МС 1000 (LCD), обеспечивающего просмотр изображения в реальном времени. Результаты микроскопирования фотографировали и сохраняли на CD Card, что позволило создать фотоархив.
Для оценки эффективности метода ЖЦ провели сопоставление его результатов и традиционного цитологического исследования.
Результаты исследования и их обсуждение
В результате проведенного исследования обнаружена существенная разница в диагностике РЯ и его рецидивов после проведенного лечения среди сравниваемых групп (см. табл. 1).
Из 72 человек первой группы, обследуемых традиционным цитологическим методом, рак яичников диагностирован у 42 (58,4%), а методом жидкостной цитологии — у 57 (79,2%).
При исследовании асцитической жидкости методом жидкостной цитологии был диагностирован железистый рак — аденокарцинома у 80,7% из 57 обследуемых с подозрением на рак яичников, а традиционным методом — у 59,4%. Причем, у одной больной двумя методами цитологического исследования была диагностирована адено-карцинома желудка с диссеминацией по брюшине и установлен диагноз рак желудка IV стадия, метастазы в яичник.
Во второй группе из 33 больных, находящихся на диспансерном наблюдении после проведенного лечения по поводу рака яичников, рецидив
заболевания традиционным методом был диагностирован в 17 (53,1%) случаях, а при использовании метода жидкостной цитологии — в 21 (63,6°%).
В результате применения метода ЖЦ снизилось число неудовлетворительных микроскопических препаратов на 20,8%. Диагностическая ценность метода ЖЦ в диагностике РЯ и его рецидивов в целом выше в 1,5 раза (р< 0,05).
Представляем клинические случаи использования метода ЖЦ в диагностике первичного рака яичников и его рецидивов.
Клинический случай 1. Больная М., 63 года, обратилась в ГБУЗ «Онкологический диспансер №3» (г. Новороссийск) 15.05.14 г. по направлению врача акушера-гинеколога женской консультации.
Первые признаки заболевания почувствовала два месяца назад, когда появились слабость, недомогание, дискомфорт после приема пищи, увеличение в объеме живота, одышка после умеренной физической нагрузки. 18.04.2015 г. обратилась к врачу акушеру-гинекологу в женскую консультацию, где ей было проведено клини-ко-лабораторные и инструментальные обследования. СА 125 — 128,36 Ед/мл. УЗИ органов малого таза — эхографические признаки солид-но-кистозного образования правого яичника размером 75x80 мм с неровными контурами, при ЦДК наличие интранодулярного типа кровотока. В брюшной полости значительное количество ас-цитической жидкости. Больная направлена в онкологический диспансер с целью уточнения диагноза и определения тактики лечения.
Ей было выполнен лапароцентез под контролем ультразвука. Получено около 8,5 л асцити-ческой жидкости. Цитологическое исследование клеточного осадка экссудата брюшной полости выполнено традиционным методом и мето-
дом ЖЦ с использованием питательной среды 199. В результате проведенного традиционного цитологического исследования обнаружены лишь единичные клетки, похожие на опухолевые (стр. 43, рис. 1), а в препаратах, полученных методом ЖЦ, обнаружены группы клеток аденокар-циномы (стр. 43, рис. 2).
В дальнейшем 28.05.2014 г. была выполнена операция: лапаротомия, экстирпация матки с придатками, экстирпация большого сальника. ПГИ № 8354-68 папиллярная цистоаденокарци-нома правого яичника, папиллярная цистоадено-карцинома левого яичника с инвазией в маточную трубу, метастаз папиллярной аденокарциномы в большой сальник.
При этом было зафиксировано совпадение результатов цитологического исследования экссудата брюшной полости, выполненного методом ЖЦ, с результатами гистологического исследования операционного материала.
Заключительный клинический диагноз: РЯ рТ3ЫхМ0 III стадия.
Клинический случай 2. Больная П., 57 лет, наблюдалась в ГБУЗ «Онкологический диспансер № 3» (г. Новороссийск) с 02.09.13 г. по поводу рака яичников. 12.09.13 г. была выполнена операция: надвлагалищная ампутация матки с придатками, резекция большого сальника. ПГИ № 213407 папиллярная аденокарцинома обоих яичников с метастазами в большой сальник. В послеоперационном периоде больной проведено 6 курсов полихимиотерапии. Больная находилась под диспансерным наблюдением.
При контрольном обследовании в июне 2014 г. проведено УЗИ органов малого таза и брюшной полости — обнаружено незначительное количество асцитической жидкости в малом тазу, СА 125 — 312,15 Ед/ мл. Выполнена пункция заднего свода влагалища, получен смыв из брюшной полости. Из клеточного осадка смыва брюшной полости были приготовлены морфологические препараты традиционным способом, методом ЖЦ. В результате использования комбинированной морфологической диагностики были обнаружены клетки аденокарциномы во всех препаратах (стр. 43, рис. 3). По результатам выполненного обследования у больной диагностирован рецидив РЯ.
Таким образом, жидкостная цитология с использованием питательной среды 199, в отличие от традиционного цитологического исследова-
ния экссудатов плевральной и брюшной полостей или смыва брюшной полости, значительно повышает чувствительность цитологического метода исследования за счет получения моно-слойных препаратов. Эти препараты характеризуются равномерным, тонкослойным (монослой-ным) распределением клеточного материала на небольшом участке предметного стекла, хорошей визуализацией деталей ядра и цитоплазмы, значительным снижением числа элементов воспаления, эритроцитов, слизи и артефактов. При жидкостной цитологии сокращается время, повышаются точность и производительность исследования.
Чувствительность метода жидкостной цитологии в исследовании составила 87,8%, а специфичность — 92,1%.
Качественный и количественный состав питательной среды 199 при использовании в диагностике РЯ является адекватным для нормального метаболизма клеток, способен поддерживать их нормальное осмотическое давление и необходимый уровень кислотно-щелочного равновесия. Использование питательной среды 199 значительно повышает возможности сохранения и транспортировки клеток (до 72 часов) и их дальнейшего использования для морфологического и иммуноцитохимического исследований.
Питательная среда 199 выпускается отечественной промышленностью, что обусловливает невысокую себестоимость и соответствие использования метода ЖЦ критерию промышленной применяемости.
Литература
1. Петрова А.С. Цитологическое исследование в диагностике опухолей. Патологоанатомическая диагностика опухолей человека / под ред. Н.А. Кра-евского. — М.: Медицина, 1993. — 185 с.
2. Долгов В.В., Шабалова И.П„ Миронова И.И. и соавт. Выпотные жидкости. Лабораторное исследование. — Москва-Тверь: ООО «Издательство «Триада», 2006. — 161 с.
3. Савостикова М.В. Жидкостная цитология и им-муноцитохимическое исследование в цитологической диагностике биологических жидкостей и смывов с брюшины при онкогинекологических заболеваниях // Онкогинекология. — 2013. — № 4. — С. 41-55.
4. Волченко Н.Н., Славнова Е.Н., Тугулукова А.А. Жидкостная цитология в онкологии И Онкология. Журнал им. П. А. Герцена. — 2013. — № 5. — С. 26-31.
THE POSSIBILITIES OF THE METHOD OF LIQUID-BASED CYTOLOGY IN DIAGNOSTICS OF MALIGNANT TUMOR OF OVARIES
Leonov M.G.1, Novik V.I.2, Belyaeva S.A.1, Yershova Y.H.-B.1
1 Oncology center No.3, Novorossiysk, Russia, e-mail: novonko@yandex.ru
2 Petrov Research Institute of Oncology, St. Petersburg, Russia
Keywords: ovarian cancer, liquid-based cytology, traditional cytological examination, nutrient medium 199.
Abstract. The work presents comparative results of cytological examination using a method of liquid-based cytology and a traditional method of detection of exudates in peritoneal and pleural cavities, as well as peritoneal lavages obtained from 105 patients of whom 72 were suspected with ovarian cancer and 33 patients were with ovarian cancer after they had undergone treatment and were suspected with recurrence of the disease.
Tire study revealed that diagnostic value of a method of liquid-based cytology in the diagnosis of ovarian cancer and its recurrences is 1,5 times higher than that of a traditional cytological examination.
