CC BY
3
5. Термины, определения и обозначения метрологических 6. Хахенбсрг X., Шмидт А. Газохроматографический ана-характеристик анализа веществ. — Там же, 1975, № 10, лиз равновесной паровой фазы: Пер. с англ. М., 1979. С. 2058—2063. Поступила 10.07.85
УДК 614.777:579.842.15)-078
Л. А. Сичинский
МЕТОД УСКОРЕННОГО ВЫЯВЛЕНИЯ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ДИЗЕНТЕРИИ И ИХ АНТИГЕНОВ В ВОДЕ
Кишиневский медицинский институт
В литературе имеются указания на возможность вторичного загрязнения водопроводной воды патогенными микроорганизмами, в том числе шигеллами, при недостаточно эффективной работе очистных сооружений на водопроводных станциях, вследствие изношенности труб разводящей сети, неполной их герметизации, при аварийных ситуациях, а также в тех случаях, когда вода населению подается с перебоями [1, 3, 6, 7]. Несмотря на то что водный путь передачи дизентерии отмечен в основном для шигелл Флекснера [4], в последнее время встречаются сообщения о передаче через воду и дизентерии Зонне, возбудители которой обладают высокой устойчивостью во внешней среде [2].
В данной работе описан новый ускоренный метод обнаружения шигелл Зонне в воде при их наличии даже в незначительных концентрациях.
В ходе экспериментальных исследований была разработана реакция торможения агглютинации цветных шигеллезных шариков (РТАЦШ)—ускоренный иммунологический тест индикации шигелл и их антигенов в воде и других объектах внешней среды, не требующий выделения возбудителя в чистой культуре. При постановке реакции использовали полученный нами [5] синтетический цветной шигеллезный диагностикум (СЦШД), который представляет собой гомогенную суспензию цветных искусственных клеток-шариков диаметром 5—7 мкм, нагруженных дизентерийным антигеном Зонне и взвешенных в забуференном физиологическом растворе рН [7,2]. Принцип РТАЦШ состоит в том, что воду, в которой предполагается наличие шигелл, смешивают с диагностической сывороткой и через определенное время добавляют СЦШД. Если в воде имеется антиген шигелл, соответствующий антителам сыворотки, то происходит нейтрализация последних. В результате добавляемые сенсибилизированные шигеллезным антигеном шарики не склеиваются, а скатываются, подобно эритроцитам, на дно лунки. Таким образом, специфическое взаимодействие антигена и антитела в реакции выявляется с помощью сенсибилизированных искусственных клеток-шариков по феномену задержки их агглютинации.
Постановка РТАЦШ осуществляется микрометодом в плексигласовых лунках. Для этого разводят не воду, содержащую антиген шигелл [как
зто принято в реакции нейтрализации антител (РНАт), например, с использованием эритроци-тарного диагностикума], а иммунную сыворотку, причем разведения делают не двукратные, а 1 :1,5, что позволяет значительно повысить чувствительность реакции. К разведениям иммунной сыворотки в объеме 0,025 мл (1 капля) в микролунках добавляют по 0,05 мл воды (2 капли), содержащей антигены шигелл, после ее предварительного прогревания на кипящей водяной бане в течение 30 мин. Пластинки с микролунками встряхивают, накрывают стеклом и инкубируют при 37 °С в течение 45—60 мин, после чего во все микролунки добавляют по 0,025 мл СЦШД, встряхивают и вновь инкубируют. Результаты РТАЦШ учитывают через 2—3 ч по феномену торможения агглютинации цветных шигеллезных шариков и образованию на дне микролунки осадка з виде зеленой точки с ровными краями (положительный результат) вследствие скатывания цветных шариков, указывающего на наличие в воде антигенов шигелл. При их отсутствии отмечается агглютинация цветных шариков с формированием в лунке нежно-голубоватой полусферы (отрицательный результат). К реакции ставят несколько контролей: 1) заведомо известный дизентерийный антиген + диагностическая дизентерийная сыворотка + гомологичный сыворотке СЦШД (положительный результат); 2) заведомо известный дизентерийный антиген + нормальная сыворотка + СЦШД (положительный результат); 3) заведомо отрицательный антиген -г диагностическая дизентерийная сыворотка + гомологичный сыворотке СЦШД (отрицательный результат).
Чувствительность РТАЦШ мы определяли в модельных опытах с использованием 18-часовых агаровых культур шигелл Зонне и аналогичных бактериальных диагностикумов производственного изготовления. Эта реакция позволяла выявлять до 10 тыс. микробных клеток на 1 мл, что в 50—60 раз превышает возможности известной РНАт по Леви и Момот. При постановке РТАЦШ с культурами и стандартными сыворотками против родственных в антигенном отношении бактерий, а также других представителей семейства Enterobacteriaceae (S. enteritidis, S. paratyphi В, E. coli 0124, 055, Sil. sonnei, Sh. flexneri 1—5, Sh. flexneri 6, J. enterocolitica и др.) положитель-
Результаты обнаружения шигелл Зонне и их антнгенов в искусственно зараженных пробах воды
Концентрация шигелл в мл воды =
Концент- § 1
рация микробов- Метод об- ¡X О* ц
загрязни- наруже- л s
тел en в ния г о 3 о" 3 о о о о * о. я
2 S о о 2 н H ь- 3 1- H s =: з- о
о со СО - S О) - to ЬгГ 3
300 млн. БМ — + + + _ _ _
РТАЦШ + + + + + + — — -
30 млн. БМ — + + + + — — — — —
РТАЦШ + + + + ■+ + + — —
3 млн. БМ — + + + + — — — — -
РТАЦШ + + + + + -1- + — —
300 тыс. БМ — + + + + — — — — —
РТАЦШ + + + + + + +
Конт- БМ — + + + + _ _ — —
роль РТАЦШ + + + + + + + — —
Примечание- + положительный, — отрицательный результаты, БМ — бактериологический метод.
ных результатов не было получено, что указывает на высокую специфичность реакции.
С помощью РТАЦШ производили также выявление дизентерийного антигена шигелл Зонне в искусственно зараженной воде. Результаты сравнивали с данными бактериологического метода. Исследовали кипяченую водопроводную воду, зараженную одновременно шигеллами Зонне и микробами-загрязнителями (смесь кишечных палочек 0124 и Olli) в различных концентрациях (см. таблицу). Было исследовано по 10 проб каждой концентрации объемом 250 мл. Анализ воды проводили с помощью бактериологического метода и РТАЦШ через сутки после заражения. Воду высевали на среду Плоскирева и Левина с левомицетином, в дальнейшем ее исследовали по общепринятой схеме. После высева пробы воды подвергали кипячению на водяной бане в течение 30 мин, затем исследовали в РТАЦШ, согласно приведенной выше методике.
Как видно из таблицы, при наибольшей концентрации микробов-загрязнителей (300 млн. микробных тел в 1 мл) шигеллы высевались
только из проб воды, содержащих 3-Ю5 и более микробных тел в 1 мл (в 90 % случаев). С уменьшением концентрации микробов-загрязнителей чувствительность бактериологического метода несколько возрастает, однако выделить шигеллы Зонне удается только при их концентрации не менее 100 тыс. микробных тел в 1 мл воды (в 90— 100% проб), что, по-видимому, связано с частичной гибелью шигелл в течение суток. Эффективность же индикации с помощью РТАЦШ была высокой.независимо от концентрации микробов-загрязнителей. Она позволяла выявить антигены шигелл Зонне во всех пробах воды в концентрации 10—25 тыс. микробных клеток в 1 мл в минимально короткие сроки (5—6 ч) без необходимости выделения возбудителя в чистой культуре или его подращивания на элективных питательных средах. Такую разницу между бактериологическим методом и РТАЦШ (Р<0,001) можно объяснить тем, что иммунологическая реакция позволяет выявлять не только живые целостные микробные клетки, но и погибшие и даже их антигенные фрагменты. Последнее обстоятельство имеет важное значение и при ретроспективной оценке эпидемической ситуации, когда выделить возбудителей дизентерии уже практически невозможно.
Полученные результаты по исследованию проб искусственно зараженной воды свидетельствуют о возможности использования разработанной реакции в целях ускоренного обнаружения шигелл и их антигенов в воде.
Литература
1. Влодавец В. В. — В кн.: Проблемы санитарной микробиологии окружающей среды. М., 1977, с. 5—13.
2. Григорьева Л. В. — В кн.: Санитарно-бактериологиче-ское и вирусологическое исследование воды. Киев, 1981, с. 37—57.
3. Ковалев Г. К. — Гиг. и сан., 1982, № 9, с. 67—71.
4. Покровский В. И.. Блюгер А. Ф., Солодовников 10. П., Новицкий И. И. Дизентерия (шигеллезы). Рига, 1979.
5. Сичинский Л. А., Никитин В. М. — Здравоохранение (Кишинев), 1984, № 2, с. 20—22.
6. Kohl И7. — Ost. Ärzteztg., 1972, Bd 27, S. 241—246.
7. Viana F. C., Moreira E. C., Barbosa M. — Arg. Esc. Vet. (Minas Gérais), 1975, vol. 27, p. 119—122.
Поступила 05.06.85
УДК 614.718-07-092.9:612.6
Н. Н. Костродымов
УСКОРЕННЫЙ МЕТОД ИЗУЧЕНИЯ ПОЛОВОГО ПОВЕДЕНИЯ БЕЛЫХ КРЫС-САМЦОВ В ГИГИЕНИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЯХ
ЦОЛИУВ, Москва
Одним из важных вопросов при гигиеническом регламентировании загрязнителей воздушной среды является совершенствование методов, позволяющих выявлять наиболее ранние неблагоприятные изменения в организме экспериментальных животных.
Нами было показано, что цнтронеллол в субтоксических концентрациях вызывает изменение сексуальной активности (СА) и ряда показателей поведенческих реакций белых крыс обоего пола [2]. Указанные изменения мы связывали с воздействием цитронеллола на центральный от-
