Метод подготовки проб для газохроматографического определения жирных кислот без предварительной экстракции липидов Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

БИОХИМИЯ

БИОХИМИЯ

© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2012 УДК 616.153.915-074:543.544.45

A. B. Ариповский, П. О. Колесник, М. И. Веждел, В. Н.Титов

МЕТОД ПОДГОТОВКИ ПРОБ ДЛЯ ГАЗОХРОМАТОГРАФИЧЕСКОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЖИРНЫХ КИСЛОТ БЕЗ ПРЕДВАРИТЕЛЬНОЙ ЭКСТРАКЦИИ ЛИПИДОВ

ФГУ Российский кардиологический научно- производственный комплекс Минздравсоцразвития РФ, Москва; ФГУН Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии, Оболенск, Московская область

Предложено усовершенствование метода количественного газохроматографического определения жирных кислот в пробах биологических жидкостей. Вместо традиционной экстракции липидов по Фолчу с последующим промыванием, концентрированием и метилированием экстрактов может быть использована прямая сапонификация и метилирование высушенных в вакууме жидких проб (50—200 мкл). Для сопоставления эффективностей предложенного и общепринятого методов с их помощью проведена оценка сходимости результатов определения состава жирных кислот цельной крови, плазмы, эритроцитарной массы, гомогенатов печеночной и мышечной тканей. Предложенный метод использован для определения особенностей состава жирных кислот у пациентов с ишемической болезнью сердца.

Ключевые слова: жирные кислоты, газовая хроматография, ишемическая болезнь сердца

AripovskyA.V., KolesnikP.O., VejdelM.I., Titov V.N.

THE PREPARATION PROCEDURE OF TESTS FOR THE GAS CHROMATOGRAPHIC DETERMINATION OF FAT ACIDS WITHOUT PRELIMINARY EXTRACTION OF LIPIDS The enhancement of the procedure of quantitative gas chromatographic determination of fat acids in biologic liquids samples is proposed. Instead of the conventional Folch procedure of extraction of lipids with subsequent ablution, concentration andmethylation of extracts the direct saponification and methylation of vacuum dried liquid samples (50-200 mkl) can be applied. To compare the effectiveness of the proposed and conventional procedures both of them had been applied to evaluate how converge the results of determination of composition of fat acids in whole blood, blood plasma, packed red blood cells, homogenates of hepatic and muscular tissues. The proposed procedure is applied to determine the characteristics of fat acids composition inpatients with ischemic heart disease.

Key word s: fat acid, gas chromatography, ischemic heart disease

Составной частью современного диагностического процесса можно считать аналитическое определение концентраций жирных кислот (ЖК) в разных биологических средах с целью диагностики нарушений их переноса, поглощения клетками и метаболизма при патологических состояниях. Объектами аналитической процедуры являются полярные и неполярные липиды, отдельные классы липопротеинов, плазматические мембраны клеток и субклеточных орга-нелл, плазма крови, эритроциты и лейкоциты, липиды атероматозных бляшек, биоптаты подкожной жировой ткани. Методы определения подобных объектов остаются весьма трудоемкими и методически сложными [9, 15]. Несмотря на это, они являются частью многих экспериментальных и клинических протоколов; особые затруднения обычно вызывает процедура первичной физико-химической подготовки проб, которая мало изменилась за последние полвека.

Количественное определение состава ЖК биологических сред начинается с экстракции липидов и концентрирования экстракта [13]. Наиболее часто извлечение липидов из матричного материала проб проводят по методу Фолча [10]: он включает экстракцию из биологического образца, в том числе и гомогената ткани, 6—10-кратным объемом

Для корреспонденции:

Титов Владимир Николаевич, д-р мед. наук, проф., руководитель

лаб. клин. биохимии липидов

Адрес: 122551, Москва, ул. 3-я Черепковская, 15а

Телефон: 414-63-10

E-mail: [email protected]

смеси хлороформа с метанолом в отношении 2:1, промывание органического экстракта изотоническим NaCl или KCl и концентрирование его в вакууме. Предложено также использовать смеси спиртов и углеводородов для экстракции липидов и ЖК из биологических образцов [12, 14].

Выход липидов при их экстракции по методу Фолча в оптимальных условиях составляет 85—95%, однако его величина ощутимо зависит от эффективности гомогенизации и особенностей исследуемого материала. Кроме того, следует иметь в виду, что часть ЖК ковалентно связана в составе гликолипидов и протеолипидов [7, 11]: упомянутые липиды принципиально не могут быть извлечены органическим растворителем в ходе экстракции по Фолчу, их не удается перевести в метиловые эфиры и определить методом газовой хроматографии. Экстракция липидов по Фолчу часто приводит к образованию трудно расслаивающейся трехфазной системы водный метанол — хлороформ — мелкодисперсный твердый биологический материал; обычно требуется длительное (многочасовое) отстаивание или применение процедур фильтрования или эффективного центрифугирования. Длительные операции с разбавленными растворами липидов в органических растворителях всегда сопровождает частичное окисление двойных связей в составе эссенциальных полиеновых ЖК [8] и последующая окислительная полимеризация ненасыщенных ЖК и липидов; использование же низких температур, инертных атмосфер и предварительно дегазированных растворителей значительно осложняет препаративную процедуру.

Цель работы — упростить метод предварительной подготовки проб для газохроматографического определе-

3

КЛИНИЧЕСКАЯ ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА, № 1, 2012

Соотношение концентраций индивидуальных ЖК в пробах биологических жидкостей по данным предлагаемого и традиционного методов

Проба Соотношение концентраций (Х ± АХ;р < 0,05; n = 7)

16:0/18:0 18:0/18:2 18:2/20:4 18:2/22:5 18:2/22:6 20:4/20:3

Кровь 2,23 ± 0,18 2,26 ± 0,14 0,45 ± 0,02 0,43 ± 0,04 2,07 ± 0,07 2,18 ± 0,09 34,06 ± 2,89 37,58 ± 2,81 6,43 ± 0,40 6,97 ± 0,27 5,72 ± 0,07 5,65 ± 0,08

Плазма крови 3,09 ± 0,04 0,21 ± 0,005 3,71 ± 0,15 116,6 ± 16,4 19,4 ± 2,7 4,42 ± 0,11

3,14 ± 0,08 0,21 ± 0,003 3,70 ± 0,21 124,3 ± 21,5 17,4 ± 2,0 4,40 ± 0,11

Эритроциты 1,98 ± 0,29 0,60 ± 0,20 2,00 ± 0,13 18,34 ± 4,49 4,29 ± 0,94 8,86 ± 1,54

1,98 ± 0,19 0,66 ± 0,07 1,99 ± 0,19 16,52 ± 2,43 3,97 ± 0,48 7,93 ± 1,67

Гомогенат печени 0,48 ± 0,01 2,38 ± 0,06 1,42 ± 0,06 1,89 ± 0,20 4,70 ± 0,43 1,38 ± 0,01

0,46 ± 0,02 2,39 ± 0,05 1,39 ± 0,05 1,75 ± 0,19 4,32 ± 0,46 1,38 ± 0,02

Гомогенат мышцы 1,54 ± 0,072 0,50 ± 0,012 3,45 ± 0,17 35,4 ± 3,2 26,25 ± 2,27 6,03 ± 0,14

1,62 ± 0,105 0,58 ± 0,051 3,44 ± 0,18 34,2 ± 2,5 25,34 ± 2,73 6,18 ± 0,16

Примечание. В числителе — показатели, полученные методом 1; прямое метилирование ЖК в высушенной биологической среде без предварительной экстракции липидов, в знаменателе — экстракция липидов по Фолчу с последующим метилированием ЖК.

ния ЖК. Предлагаем проводить процессы сапонификации и метилирования в высушенном в вакууме биологическом материале без предварительной стадии экстрационного выделения липидов по Фолчу. Этот метод пробоподготовки использован нами при количественном определении состава ЖК в биологических пробах у пациентов с ишемической болезнью сердца (ИБС) и в модельных гомогенатах тканей.

Материалы и методы. Образцы цельной крови, плазмы, эритроцитарной массы получены от пациентов в отделении атеросклероза Института клинической кардиологии им. А. Л. Мясникова ФГУ РКНПК. Гомогенаты тканей (грудная мышца курицы и печень быка) приготовлены с использованием стандартного поршневого стеклянного гомогенизатора.

Для количественного определения ЖК использовали пробы крови 12 пациентов с ИБС с динамически значимыми стенозами коронарных артерий (1-я группа); отбор пациентов проводили согласно критериям ВОЗ и данным корона-рографии. Группа состояла из 5 женщин и 7 мужчин, средний возраст пациентов составлял 57 ± 7 лет. По данным ко-ронарографии они имели выраженный атероматоз интимы и гемодинамически значимые стенозы коронарных артерий. Группа сравнения (2-я) состояла также из 12 пациентов без клинических проявлений ИБС, возраст больных 45 ± 3 года. ЖК определяли на аналитическом газовом хроматографе модели "Вариан 3900" (фирма "Вариан", США) при использовании кварцевой капиллярной колонки (размером 15 м х 0,25 мм х 0,3 мкм) с неподвижной жидкой фазой "Супелковакс-10" производства фирмы "СУПЕЛКО" (Швейцария). Объем вводимой пробы — 2 мкл, метод ввода пробы — без деления потока газа-носителя (гелий); переход в режим деления потока газа-носителя — через 24 с. Температурная программа анализа — от 90oC (задержка — 0,5 мин) до 240oC (5 мин) со скоростью 60С/мин. Использован пламенно-ионизационный детектор (260oC), регистрацию сигнала осуществляли при использовании компьютерной программы "Мультихром-1,5х" ЗАО "Амперсенд" (Россия). Количественное определение ЖК выполнено методом внутреннего стандарта (в качестве стандартного образца использована С17:0 маргариновая кислота) с предварительным вычислением калибровочных коэффициентов для каждой ЖК при хроматографировании модельной смеси индивидуальных ЖК с маргариновой кислотой.

В таблице приведены сравнительные данные, полученные при параллельном использовании предложенного нами безэкстракционного метода (метод 1) и традиционного метода (метод 2), который включает предварительную экстракцию липидов по Фолчу.

Метод 1. Получение метиловых эфиров ЖК путем прямой дериватизации лиофилизированных проб. В коммерческие стеклянные виалы для работы под давлением (толсто-

стенные сосудики с герметизирующими винтовыми крышками и тефлоновыми прокладками) вносили по 100 мкл жидких образцов биологических материалов, добавляли 100 мкл раствора внутреннего стандарта (маргариновая кислота в метаноле с концентрацией 200—300 мкг/мл), помещали открытые виалы в гнезда карусельной центрифуги установки "Savant SpeedVac" и сушили материал в вакууме при комнатной температуре до постоянного веса (длительность процесса сушки определена экспериментально и составляет 60 мин). К идентичному результату приводит и использование сублимационной сушилки "Иней 3-2"; в этом случае спиртовой раствор внутреннего стандартного образца добавляли после лиофилизации.

Дериватизацию выполняли известным методом [14]: к высушенному биологическому материалу добавляли 150 мкл 0,5 N метоксида Na в метаноле и нагревали в течение 2—3 мин в настольном термоблоке при 60—65oC. Далее добавляли 1,0 мл 10% метанольного раствора трехфтористого бора, герметично завинчивали покрышки дери-ватизационных сосудиков и нагревали в течение 45 мин при 75oC. Идентичные результаты мы получили и при сапони-фикации сухого остатка добавлением 150 мкл 0,5 N метанольного раствора едкого натра (вместо метоксида Na) с последующим нагреванием омыленного образца с 1 мл смеси 2 N метанольный раствор сухого хлористого водорода — бензол — 2,2-диметоксипропан в соотношении 100:20:5. Температурные условия омыления и метилирования в этом случае идентичны приведенным выше. По окончании метилирования в охлажденные виалы вносили 1 мл н-гептана, 1 мл H2O, экстрагировали метиловые эфиры в углеводородную фазу и добивались полного расслоения эмульсии на низкооборотной центрифуге установки "Savant SpeedVac" в течение 0,5—1,0 мин. В случае недостаточно эффективного расслоения водно-спиртовой и углеводородной фаз (после 1-минутного центрифугирования) к смеси добавляли каплю (10—15 мкл) н-пропанола и повторно центрифугировали смесь в течение 1 мин. Экстрагированные в гептановую фазу метиловые эфиры определяли на газовом хроматографе.

Метод 2. Стандартная экстракция липидов по Фолчу с последующей переэтерификацией извлеченных ЖК в метиловые эфиры. В соответствии с описанным в литературе методом [10] 0,5 мл жидкого образца дважды экстрагировали порциями по 5 мл смеси хлороформа с метанолом в соотношении 2:1, добиваясь эффективного разделения фаз с помощью высокооборотного центрифугирования. Объединенные экстракты промывали 5 мл 0,9% раствора NaCl, вновь центрифугировали, отделяли хлороформную фазу и удаляли растворитель на роторном испарителе. Способ де-риватизации экстрагированных липидов идентичен описанному в методе 1.

4

БИОХИМИЯ

Результаты и обсуждение. Сравнение результатов хроматографических определений, полученных при использовании двух описанных выше методов пробоподготовки, свидетельствует о близости их метрологических характеристик. Оба метода (с предварительной экстракцией липидов и без нее) обеспечивали высокую степень извлечения липидов из образцов (более 90%) и типичные для хроматографических определений относительные погрешности результатов (3—7%). Для более тонкой количественной оценки соответствия получаемых обоими методами результатов в таблице приведены средние значения и доверительные интервалы (при 95% надежности) ряда произвольных безразмерных отношений концентраций индивидуальных ЖК в биологических объектах различной природы.

Результаты хроматографического определения содержания индивидуальных ЖК чаще приводят в относительных величинах (в долях от суммы площадей пиков всех индивидуальных ЖК) и реже — в абсолютных величинах (мг/л, мкг/ мл). Однако в ряде случаев определение абсолютных концентрационных характеристик ЖК в биологических средах для клинической биохимии оказывается предпочтительным [4, 5].

Можно согласиться c мнением авторов работ [4, 16] о целесообразности параллельного, биометрического использования как абсолютных значений параметров (концентраций индивидуальных ЖК в пробах), так и параметров относительных (относительные концентрации индивидуальных насыщенных, моноеновых, ненасыщенных и полиеновых ЖК в общей сумме, соотношение суммарных концентраций ш3- и ю6-эссенциальных полиеновых ЖК, специфичное соотношение ю6 С204 арахидоновой/ю3 С205 эйкозапентановой ЖК). Несомненно, большая "информационная емкость" в первом случае компенсируется существенным уменьшением ошибок и улучшением воспроизводимости результатов (включая и межлабораторную) в последнем. Ведь экспериментальные значения относительных параметров свободны от ошибок при разбавлении крови консервантами и антиоксидантами, не изменяются при препаративных ошибках на разных стадиях химической работы (взвешивание стандартных соединений, отбор аликвот, определение параметров калибровки). К тому же при фракционировании биоматериалов определение сухой массы фракций (эритроцитарной или лейкоцитарной массы, липопротеинов высокой или низкой плотности) оказывается крайне затруднительным, и нахождение абсолютного содержания ЖК в этих условиях кажется нецелесообразным.

Это касается в первую очередь ЖК, содержание которых в межклеточной среде (плазме крови) имеет диагностическое значение: функциональные пары пальмитиновая С ЖК—олеиновая С181 ЖК, ю-6 С204 apaxидoнoвaя — ю-6 С203 дигомо-у-линоленовая ЖК, ю-6 С181 олеиновая — ю-7 С161 пальмитолеиновая ЖК, C лауриновая — С миристино-вая особенно интересны с диетологической точки зрения [1, 2]. Наиболее информативно определение соотношения ш-3/ш-6 эссенциальных полиеновых ЖК [3].

Результаты определения относительного содержания ЖК в биологических пробах в публикациях можно встретить чаще, чем абсолютные концентраций ЖК [2, 14]. Лучшими при относительном выражении содержания ЖК являются и результаты контроля качества.

Как следует из таблицы, предложенный нами метод прямого метилирования высушенной биомассы при значительно меньшей трудоемкости пробоподготовки позволяет получить результаты, которые статистически не отличаются от таковых, полученных при использовании классического метода Фолча. Близость величин доверительных интервалов в обеих сериях результатов свидетельствует о том, что разброс параметров обусловлен скорее причинами хроматографической природы (дискриминация компонентов в испарителе, неточность интегрирования малых пиков и пр.), нежели факторами, связанными с особенностями предварительной подготовки образцов.

Метод внутреннего стандарта применен также для оценки остаточного содержания липидов, которые принципиально не могут быть определены при использовании классического метода Фолча. Для этого высушенный остаток биологического материала, предварительно проэкстрагированного по Фолчу, подвергали сапонификации и метилированию описанным выше методом, количественно определяли остаточные липиды. В большинстве случаев относительное содержание не экстрагируемых по Фолчу липидов сравнительно невелико (в плазме крови 3,5%, гомогенате мышечной ткани курицы 6,5%, в гомогенате бычьей печени 1,5%). Однако в некоторых образцах эритроцитарной массы содержание неэкстрагируемых липидов достигало 18%. Кроме того, состав ЖК липидов неэкстрагируемого остатка во всех случаях отличался от экстрагируемых липидов. Так, отношение С160/ С180 в неэкстрагируемом остатке было меньше, а отношение C180/C182, наоборот, существенно возрастало. Следовательно, этот недостаток классического метода Фолча — игнорирование наличия липидов, не экстрагируемых системой хлороформ—метанол, — может оказаться весьма существенным при оценке содержания липидов в образцах со значительным содержанием протео- и гликолипидов, частично полимеризованных жиров и других высокомолекулярных или гидрофильных производных высших ЖК.

Сопоставление суммарного содержания насыщенных ЖК в плазме крови пациентов c ИБС и в группе сравнения показывает, что концентрация их при ИБС является достоверно более высокой (733 ± 72 мг/л против 461 ± 41 мг/л в группе сравнения). Содержание эссенциальных полие-новых ЖК в плазме крови при ИБС также превышает аналогичную величину в группе сравнения (1036 ± 101 мг/л против 463 ± 60 мг/л): в частности, концентрация арахи-доновой кислоты составляет 208 ± 21 мг/л, что достоверно выше таковой в группе сравнения (147 ± 10 мг/л). Аналогичные наблюдения сделаны и при сравнении суммарного содержания моноеновых ЖК (С181) олеиновая, С161 паль-митолеиновая и С18:1 транс-элаидиновая ЖК), для которых также выявлены достоверные различия между группами пациентов с коронарным атероматозом, ИБС и группой сравнения. Итак, при использовании предложенного нами безэкстракционного метода пробоподготовки сохраняются все возможности классического метода экстракции липидов по Фолчу и все соотношения между индивидуальными ЖК, которые отмечены ранее [2, 3, 7, 16] для плазмы больных ИБС в сравнении с плазмой здоровых. Можно полагать, что его использование позволит существенно упростить и ускорить лабораторные манипуляции в ходе клинико-диагностического анализа состава ЖК биологических материалов.

Таким образом, основное преимущество предложенного нами метода заключается в принципиальном упрощении и ускорении подготовки биологических образцов для хроматографического анализа. Производительность сушильных установок типа "SpeedVac" высока и определяется только числом гнезд в карусели центрифуги (то же самое справедливо относительно устройств для препаративной сублимационной сушки); таким образом несколько десятков образцов могут быть высушены, прометилированы и полностью подготовлены для анализа в течение сравнительно короткого времени (2—3 ч). Существенным является и то, что процесс подготовки образца этим способом заключается в выполнении последовательности несложных операций, не требующих высокой квалификации персонала, и ее легко автоматизировать в отличие от общепринятой схемы: двукратная экстракция по Фолчу ^ промывка ^ концентрирование ^ дериватизация. Метод может быть применен для проведения больших скрининговых определений состава ЖК биологических сред в клинических и биохимических лабораториях, позволит значительно упростить подготовку образцов для проведения газохроматографических анализов и оптимизировать аналитическую технологию в кли-

5

КЛИНИЧЕСКАЯ ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА, № 1, 2012

нической биохимии. Предложенный метод дериватизации может оказаться полезным и стать основой для широкого использования хроматографического определения ЖК как диагностического теста в клинической практике.

ЛИТЕРАТУРА

1. Караман Ю. К., Кантур T. A., Жукова H. B. // Здоровье. Медицинская экол. — 2009 — № 4—5. — С. 39—40.

2. Лебединская М. Р. // Международ. мед. журн. — 2002. — Т. 6, № 2—3. — С. 159—160.

3. Лейн Л. Ю. // Укр. науч.-мед. журн. — 2003. — № 1—2. — С. 8—10.

4. Титов B. H., Лисицын Д. M. Жирные кислоты. Физическая химия, биология и медицина. — М., 2006. — С. 467—538.

5. Титов В. Н., Дугин С. Ф., Дмитриев В. А. и др. // Клин. лаб. ди-агн. — 2006. — № 11. — С. 3—12.

6. Титов В. Н., Арапбаева А. А., Федоров С. В. и др. // Клин. лаб. диагн. — 2006. — № 3. — С. 3—9.

7. Aras O., Dilsizian V. // Curr. Opin. Biotech. — 2007. — Vol. 18. — P. 46—51.

8. DmitrievL. F., Titov V. N. // Ageing Res. Rev. — 2010. — N 4. — P. 200—210.

9. Eder К. // J. Chromatogr. В. Biomed. Appl. — 1995. — Vol. 671, N 2. — P. 113—131.

10. Folch J., LeesM., Sloane-Stanley G. H. // J. Biol. Chem. — 1957. — Vol. 226. — P. 497—505.

11. Ichihara K., Yamaguchi C, Araya Y. // Lipids. — 2010. — Vol. 45, N 4. — P. 367—374.

12. JeannotteR., Hamel C, JabajiS. // Talanta. — 2008. — Vol. 77. — P. 195—199.

13. King J. W. // Grasas Aceites. — 2002. — Vol. 16. — P. 8—21.

14. Knapp D. R. Handbook of analytical derivatization reactions. — 1979.

15. Mehta A., Orser A. M., Carlson M. G. // J. Chromatogr. В. Biomed. Sci. Appl. — 1998. — Vol. 719, N 1—2. — P. P. 9—23.

16. SchwertnerH. A., MosserE. L. // Clin. Chem. — 1993 — № 4. — P. 659—663.

Поступила 11.04.11

© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2012

УДК 617.582+617.5841-001.5-008.9-074

А. В. Еликов, С. А. Караваев, П. И. Цапок

ОСОБЕННОСТИ МЕТАБОЛИЗМА У БОЛЬНЫХ С ПЕРЕЛОМОМ КОСТЕЙ ГОЛЕНИ И БЕДРА В ЗАВИСИМОСТИ ОТ СРОКА ИММОБИЛИЗАЦИИ

Кафедра биологической химии ГОУ ВПО Кировская государственная медицинская академия Росздрава

Проведено комплексное биохимическое обследование 20 больных с переломами костей голени и бедра в возрасте от 18 до 50 лет, которым в качестве лечения был выбран метод скелетного вытяжения, подразумевающий длительное ограничение двигательной активности. Взятие крови проводили на 7, 14, 21, 28 и 35-е сутки после травмы. В плазме крови исследовали показатели белкового, пуринового обмена, процессов липопероксидации (ЛП) и антирадикальной активности. Установлены катаболическая направленность метаболизма, интенсификация процессов ЛП на фоне снижения антирадикальной активности. Полученные данные можно рекомендовать для контроля влияния вынужденного ограничения двигательной активности на течение посттравматического процесса.

Ключевые слова: гиподинамия, белковый обмен, пуриновый обмен, липопероксидация, антирадикальная активность

Yelikov A.V., Karavayev S.A., Tzapok P.I.

THE CHARACTERISTICS OF METABOLISM IN PATIENTS WITH FRACTURES OF SHIN AND THIGH BONES DEPENDING ON IMMOBILIZATION PERIOD The comprehensive biochemical examination of 20 patients with fractures of shin and thigh bones aged from 18 to 50 years was organized. The treatment consisted of skeletal traction meaning a lingering limitation of locomotive activity. The blood sampled at 7th, 14th, 21th, 28th and 35th days after trauma. The blood plasma was analyzed to establish the indicators of protein and purine metabolism, lipoperoxidation processes and antiradical activity. The study established the catabolic direction of metabolism and the intensification of lipoperoxidation processes of the background of decreasing of antiradical activity. The research data can be recommended to apply in controlling the impact of forced limitation of locomotive activity on the course ofpost-trauma process.

Key words: hypodynamia, protein metabolism, purine metabolism, lipoperoxidation, antiradical activity

Длительное ограничение двигательной активности — гиподинамия является фактором, существенно осложняющим течение основного патологического процесса. Показано что, ограничение двигательной активности сопровождается стрессовой реакцией с соответствующими сдвигами метаболизма [4, 5], при этом ведущую роль в развитии неблагоприятных сдвигов метаболизма играет активация

Для корреспонденции:

Еликов Антон Вячеславович, канд. мед. наук, доц. каф. биол. химии Адрес: 610027, Киров, ул. К. Маркса, 112 Телефон: (8332)67-83-58 E-mail: [email protected]

процессов липопероксидации (ЛП) и снижение ресурсов антиоксидантной защиты (АОЗ) организма [2]. Цель нашей работы — изучить состояние белкового и пуринового обмена, а также процессы ЛП и АОЗ в плазме крови при вынужденном ограничении двигательной активности у больных с переломом костей голени и бедра в зависимости от срока иммобилизации.

Материалы и методы. Проведено клиническое обследование 20 мужчин с переломами костей голени и бедра в возрасте от 18 до 50 лет без сопутствующей патологии, находящихся на лечении в Кировской областной клинической больнице № 3. В качестве лечения был выбран способ скелетного вытяжения, подразумевающий достаточно продолжительный

6