Научная статья на тему 'МЕТОД ОЦЕНКИ РЕЗИСТЕНТНОСТИ ОРГАНИЗМА К ДЕЙСТВИЮ НЕБЛАГОПРИЯТНЫХ ФАКТОРОВ'

МЕТОД ОЦЕНКИ РЕЗИСТЕНТНОСТИ ОРГАНИЗМА К ДЕЙСТВИЮ НЕБЛАГОПРИЯТНЫХ ФАКТОРОВ Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

CC BY
46
6
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.
Журнал
Гигиена и санитария
Scopus
ВАК
CAS
RSCI
PubMed
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Похожие темы научных работ по фундаментальной медицине , автор научной работы — М.Г. Чистяков, Р.Д. Ильинская, О.В. Боровиков, А.П. Парахонский, Г.М. Синицина

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Текст научной работы на тему «МЕТОД ОЦЕНКИ РЕЗИСТЕНТНОСТИ ОРГАНИЗМА К ДЕЙСТВИЮ НЕБЛАГОПРИЯТНЫХ ФАКТОРОВ»

хода (инвентарь пищеблоков, столовых и детских дошкольных учреждений) для сравнения высеваемости при использовании разных сред обогащения. Смывы брали двумя тампонами, которые помещали в среды обогащения. После инкубации в термостате при 37° С делали пересев со сред обогащения на плотные дифференциальные среды: с солевого бульона наМСА и с предлагаемой нами среды обогащения на МПНА.

Данные параллельных исследований приведены в табл. 2.

Из табл. 2 видно, что индикаторная среда обогащения повышает вы-севаемость патогенного стафилококка почти в 2 раза по сравнению с солевыми средами, одновременно сокращается расход времени и материалов на выделение патогенного стафилококка.

Индикаторную среду обогащения для стафилококков готовят следующим образом. На 100 мл воды берут 1 г пептона, 0,5 г хлористого натрия, 1,5 г маннита, кипятят, добавив 1 мл индикатора Андреде, и стерилизуют при 0,5 атм 20 мин. Перед употреблением вводят 40 000 ЕД водного раствора полимиксина М. Среда имеет слегка розоватый цвет. Стафилококк, развиваясь, изменяет ее цвет на ярко-малиновый, четкие результаты получают через 48 ч инкубации.

Приготовление МПНА: к 100 мл воды добавляют 5 г сухого питательного агара производства Дагестанского института питательных сред, после его расплавления вводят 1,5 г маннита, 1 мл индикатора Андреде и стерилизуют при 1 атм 30 мин. После охлаждения до 50° С в агар вводят 40 000 ЕД водного раствора полимиксина М и 8000 ЕД водной взвеси антибиотика нистатина, тщательно перемешивают и разливают в чашки Петри по 20 мл. Перед посевом чашки подсушивают в термостате.

ЛИТЕРАТУРА. Гордеева Е. А., Войнарская Е. Г.—«Лабор. дело», 1973, № 3, с. 174—175.— Навашин С. М., Фомина И. П. Справочник по антибиотикам. М., 1968, с. 205—206.— Остроумов П. Б— «Лабор. дело», 1971, № 3, с. 185.— Чистович Г. Н.— В кн.: Санитарная микробиология. Под ред. Г. П. Калины и Г. Н. Чистович. М., 1969, с. 95—102.

Поступила 5/111 1977 г.

УДК 616-002.5-092.9:613.2

М. Г. Чистяков, Р. Д. Ильинская, О. В. Боровиков, А. П. Парахонский,

Г. М. Синицина

МЕТОД ОЦЕНКИ РЕЗИСТЕНТНОСТИ ОРГАНИЗМА К ДЕЙСТВИЮ НЕБЛАГОПРИЯТНЫХ ФАКТОРОВ

Кубанский медицинский институт им. Красной Армии, Краснодар

При изучении биологической ценности продуктов питания, получаемых от сельскохозяйственных животных, в корм которых включается определенное количество биомассы дрожжей, выращенных на основе нефтяных дистиллятов, представлялось целесообразным исследование влияния этих продуктов на резистентность организма белых крыс к экспериментальной туберкулезной инфекции.

Опыты проводили на 120 белых крысах линии Вистар с исходным весом 100—120 г, разделенных на 2 равные группы в зависимости от рационов. Животных 1-й группы содержали на рационе, включающем 10 г молока, 10 г обезжиренного творога, 1,5 г сливочного масла и Юг яиц. Продукты получали от коров и кур, в корме которых 25% белка было заменено белком углеводородных дрожжей, выращенных на основе дизельного топлива1. Контролем служили крысы 2-й группы, в рацион которых включались в таком же количестве аналогичные молочные продукты и яйца, получаемые от

1 Состав дрожжей: 67,2% белка, 0,7% жиров, 16,1% углеводов и 0,1% остаточных углеводородов

контрольных коров и кур, кормившихся обычными традиционными комбикормами. Молочно-яичные продукты в обоих рационах обеспечивали 64,9% (3,35 г) белков, 92,5% (2,84 г) жиров, 5,6% (0,6 г) углеводов и 45,4% калорийности (42,8 ккал). Остальные проценты питательных веществ и калорийности обеспечивались за счет зерновой смеси (7 г), хлеба пшеничного (6 г), корнеплодов (15 г) и жидких пивных дрожжей (4 г); последние служили также источником витаминов группы В. Общая калорийность рационов равнялась 94,25 ккал.

Половина животных каждой группы получала соответствующий рацион 3 мес и половина — 6 мес. В конце этих сроков крысам внутрибрю-шинно вводили 1 мг (в объеме 0,5 мл взвеси)1 20-дневной культуры палочки туберкулеза бычьего типа (штамм № 8), выращенной на плотной среде Мордовского.

Это доза обусловливала минимальное развитие туберкулезного процесса, который можно было выявить лишь иммунологическими и патоморфо-гическими методами. По данным предварительного исследования, от такой дозы в течение первых 10 дней у зараженных животных внешних признаков болезни нет, но в соответствующих тканях, как правило, развиваются умеренные специфические изменения, которые дают возможность судить о возникновении туберкулезного процесса в организме.

С помощью иммунологических исследований выявляли специфический ответ на заражение организма микобактериями туберкулеза, для чего использовали метод Ерне— Нордина в модификации Дуброва, с помощью которого определяли динамику образования антителосинтезирующих клеток (АТСК) в ткани селезенки. Бляшки гемолиза исчисляли на миллион ядросодержащих клеток селезенки. Кроме того, выявляли возникновение специфической сенсибилизации организма. С этой целью у зараженных крыс исследовали активность кислой фосфатазы вперитонеальных макрофагах после воздействия на них туберкулином (И. М. ЛямпертиВ. А. То-дер). Макрофаги, полученные из брюшной полости без предварительной стимуляции, культивировали в смеси раствора Хенкса с инактивированной бычьей сывороткой (40%). В 1 из 2 культур, полученных от каждой крысы, добавляли очищенный туберкулин (РРД) в дозе 50 мкг/мл и инкубировали 24 ч при 37°С. Контрольную культуру инкубировали в обычной среде. Кислую фосфатазу определяли по методу Гомори в модификации Битенски. Результаты исследований обрабатывали статистически по-Ашмарину и Воробьеву.

Для гистологического исследования брали легкие, печень, селезенку и медиастинальные лимфатические узлы. Парафиновые срезы окрашивали гематоксилином и эозином, а для выявления плазматических клеток использовали окраску по Шубичу. При микроскопировании подсчитывали по 100—200 плазматических клеток с последующей дифференцировкой различных форм плазматического ряда по Пражской номенклатуре 1960 г.„ учитывая бласты, зрелые и незрелые плазмоциты.

Все исследования проводили через 6, 8 и 10 дней после заражения -Животных забивали путем декапитации.

При наблюдении за подопытными крысами в период пребывания на рационах никаких отклонений в их общем состоянии и поведении не выявлено. Животные обеих групп имели здоровый внешний вид, адекватно-реагировали на обстановку и естественные раздражения, с одинаково» охотой ели кормовую смесь с испытываемыми и контрольными продуктами. Не установлено различий между группами и в весовом показателе.

При тщательном ежедневном осмотре крыс в дни после заражения видимых внешних признаков заболевания не отмечено. Результаты иммунологических исследований представлены в табл. 1 и 2.

1 Культуру палочки туберкулеза суспендировали в смеси физиологического раствора с глицерином 9:1.

В табл. 1 отражены количественные показатели образования АТСК в ткани селезенки на 6, 8, 10-й дни после воздействия на организм крыс микобактериями туберкулеза. г.*

Как видно из представленных в табл. 1 данных, по количеству АТСК существенных различий между группами крыс не имеется. У экспериментальной и контрольной групп полученные числовые значения оказались совершенно идентичными как при 3-, так и при 6-месячном сроке кормления соответствующими рационами. В этой таблице отчетливо показана динамика образования АТСК, которая имеет одинаковую закономерность у обеих групп. Наибольшие количества клеток, продуцирующих антитела, выявлены на 6-й день, в последующие дни отмечено уменьшение иммунного ответа. Таким образом, можно полагать, что в ответ на воздействие антигеном до 6-го дня в организме, по-видимому, происходило нарастание реакции образования АТСК, а затем наступила фаза затухания иммунного ответа, что согласуется с литературными данными (Г. А. Гурвич и Е. А. Кабанова). Следует также отметить, что цифровые значения АТСК, приведенные в табл. 1, показывают достаточно высокий уровень иммунной реакции организма крыс в ответ на внедрение туберкулезного антигена.

При исследовании сенсибилизации организма к туберкулезной инфекции получены данные, которые представлены в табл. 2 и отражают выяв-ляемость кислой фосфатазы в перитонеальных микрофагах зараженных крыс, находившихся на разных рационах.

Результаты, приведенные в табл. 2, свидетельствуют об отсутствии различий в проценте выявляемости кислой фосфатазы в макрофагах животных обеих групп при том и другом сроках кормления. Из этой таблицы также следует, что преинкубация культур перитонеальных макрофагов с туберкулином резко увеличивает выявляемость кислой фосфатазы, что свидетельствует о клеточном проведении повышенной чувствительности замедленного типа (К. Ф. Дубров). Увеличение выявляемости этого фермента после инкубации с туберкулином в перитонеальных макрофагах животных, получавших рационы с экспериментальными и контрольными продуктами, было однозначным (соответственно в 2,35 и 2,77 раза после 3 мес и в 2,45 и 2,6 раза — после 6 мес кормления).

Таблица 2

Активность кислой фосфатазы перитонеальных макрофагов у зараженных туберкулезом животных (процент макрофагов с активной кислой фосфатазой)

Опыт Контроль

Срок кормления, мес Инкубация макрофагов Инкубация макрофагов

без РРД с РРД без РРД с РРД

3 6 14,4^0,77 Р> 0,9 12,75—0,56 Р=1 33,86^1,51 Р>0,9 31,20^:0,80 Р>0,1 13,41^0,76 12,75 — 0,60 36,48=!= 1,13 33,25^0,87

Примечание. Р вычислен по отношению к данным контрольного рациона.

Таблица 1

Количество и динамика антителосинтезнрующих клеток в селезенке крыс, зараженных палочкой туберкулеза (Л*=£/л бляшек на миллион клеток)

. о «. ш о , о а Рацион

Срок КОРУЛ! кия, м День г ле зар жения экспериментальный контрольный Р

3 6 6-Й 8-й 10-й 6-й 8-й 10-й 234,3=Ь2,5 162,7^3,5 115,3—2,7 240,82=2,5 164,9=!= 1,4 120,5=^1,8 232,7^:2,3 163,8^=2,6 117,7— 1,6 242,4=!= 2,01 166,6=2= 1,53 122,5—1,4 >0,7 >0,7 >0,4 >0,6 >0,4 >0,4

Повышенная чувствительность сенсибилизированных макрофагов проявляется в их способности активироваться под воздействием малых доз специфического антигена. Эта активация связана с накоплением лизосо-мальных ферментов (Dannenberg), к которым относится кислая фосфатаза (De Duve), и повышением специфической фагоцитарной активности (К. Barnet).

Таким образом, параллельное увеличение процента выявляемости кислой фосфатазы в макрофагах при инкубации их в среде с РРД у животных экспериментального и контрольного рационов свидетельствует об одинаковой степени формирования повышенной чувствительности замедленного типа, являющейся, по мнению многих авторов (М. М. Авербах и соавт.; David, и др.), центральным звеном в противотуберкулезном иммунитете.

Патоморфологическими исследованиями выявлена следующая картина. При вскрытии всех зараженных крыс в каждой группе у 85% обнаружились видимые специфические патологоанатомические изменения. Это были мелкие (с просяное зерно) беловатые бугорки твердой консистенции, локализованные на костальной и диафрагмальной плевре, а также на желудочно-кишечной связке малого сальника. Такие же узелки в 52% случаев встречались в печени, в 12% — в легких. Медиастинальные лимфатические узлы были увеличены, гиперемированы, края селезенки округлены.

Воздействие микобактерий туберкулеза на организм крыс, содержавшихся на экспериментальном и контрольном молочно-яичных рационах, вызывает в том и другом случае идентичные по своему характеру гисто-морфологические изменения, которые заключаются в пролиферации рети-кулоэндотелиальных элементов без прогрессирования и распада и обусловлены чрезвычайно развитой способностью трансформации клеток соединительной ткани.

Учитывая, что иммунитет при туберкулезе в основном является клеточным, значительный интерес представляет изучение плазмоклегочной реакции, особенно в первую декаду развития туберкулезного процесса, когда микобактерии оказывают в основном сенсибилизирующее и стимулирующее действие. Дифференцированная характеристика клеток плазматического ряда позволила выявить особенности этой реакции у исследованных животных. Так как из общего количества плазматических клеток только определенная часть синтезирует антитела, наибольший интерес представляют молодые, незрелые формы клеток.

В табл. 3 представлены данные о количестве клеток плазматического ряда у крыс в разные дни после заражения.

Таблица 3

Динамика появления дифференцированных плазматических клеток в разных группах

крыс (в %)

Группа День исследования после заражения

6-й 8-й 10-й

Б Н3 3 Б НЗ 3 Б НЗ 3

1-я 2-я 1-я 2-я пг 55,3 I 40,5 I 4,2 66,1 1 33,9 1 — 60,5 38,1 1,4 58,3 40,2 1,5 >имечание. Б — Лиме, 58,8 60,5 59,8 50,4 - бласты, Ьатический узел 31,2 1 10,0 34,1 | 6,4 Селезенка 30.0 10,2 41.1 8,5 НЗ — незрелые пла 40.2 I 38,2 I 21,6 41,4 1 40,0 1 18,6 34.3 38,3 27,4 36,7 38,3 25,0 змоциты, 3 — зрелые плазыо-

ииты.

Из табл. 3 видно, что количественное распределение клеток плазматического ряда свидетельствует об отсутствии иммунологических различий у экспериментальных и контрольных животных. Поскольку зрелые плазматические клетки являются менее активными продуцентами антител, увеличение их количества в иммунокомпетентных органах рассматривается как показатель снижения иммунологической настроенности организма. Из данных этой таблицы видно, что наибольшая иммунологическая активность у обеих групп приходится на 6-й и 8-й дни после заражения, так как на 10-й день в плазмоцитарном ряду имеется значительный сдвиг в сторону увеличения количества зрелых клеток.

В целом морфологическая динамика клеток плазматического ряда находится в корреляции с динамикой образования АТСК, выявленных у этих животных с помощью реакции локального гемолиза. Иными словами, результаты гистологических исследований совпали с данными иммунологических исследований.

Выводы

1. Молоко, творог, сливочное масло и яйца, полученные от коров и кур, в корме которых 25% белка было заменено белком углеводородных дрожжей, выращенных на основе дизельного топлива, не оказывают усугубляющего влияния на развитие туберкулезного процесса у крыс.

2. По влиянию на иммунозащитную функцию и резистентность организма к инфекции эти продукты совершенно равнозначны высококачественным контрольным молочно-яичным продуктам.

ЛИТЕРАТУРА. Авербах М. М., Литвинов В. И. и др. — «Пробл. туб.», 1972, № 6, с. 60. — Г у р в и ч Г. А., К а б а н о в а Е. А. — «Вести. АМН СССР», 1969, № 10, с. 13. — Дубров К. Ф. — В кн.: Вопросы прикладной иммунологии. Л., 1967, с. 15. — Л я м п е р т И. М., Тодер В. А. — «Вестн. АМН СССР», 1970, № 7, с. 41. — Ш у б и ч М. Г. — «Арх. пат.», 1965, № 7, с. 27. — В а г n е t К. et а. — «Folia. microbiol. (Praha)», 1968, v. 13, p. 562. — Bitensky L. — «Quart. J. micr. Sei.», 1963, v. 104, p. 193. — Dannenberg A. — «Bact. Rev.», 1968, v. 32, p. 85. — D a> vid I. K. — «Fed. Proc.», 1971, v. 30, p. 1730. — Duve С h. de. Enzyme Cytology. London, 1967. — Jeme N. К., N o r d i n A. A. — «Science», 1963, v. 140, p. 405.

Поступила 9/1X 1975 г..

Обзоры

УДК 614.71(44)

Канд. биол. наук В. Д. Фокина

ОХРАНА АТМОСФЕРНОГО ВОЗДУХА ОТ ЗАГРЯЗНЕНИЯ ВО ФРАНЦИИ

Всесоюзный научно-исследовательский институт информации и технико-эконсмических исследований по сельскому хозяйству, Москва

Развитие промышленности, транспорта, рост городов, строительство крупных индустриальных комплексов приводят во Франции, как и в других экономически развитых странах, к усилению загрязнения атмосферы. Значительная часть — 37% вредных выбросов приходится на различные отрасли промышленности, 25% — на отопление, 23% — на транспорт и 15% — на теплоэлектроцентрали.

Развитие различных видов транспорта (особенно автомобильного) является причиной повышенного поступления в атмосферу загрязняющих веществ. По обеспеченности автомашинами Франция занимает одно из первых мест в мире, уступая только США (во Франции 1 автомобиль приходит-

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.