CC BY
96
24. Таточенко В. К., Озерецковский Н. А., Федоров А. Н. Иммунопрофилактика. Справочник. -2011. - 198 с.
25. Храпова Н. П., Алексеев В. В., Дрефс Н. М. и др. // Чрезвычайные ситуации междунар. значения в общест. здравоохранении в решениях Санкт-Петербургского саммита «группы восьми» и санит. охрана территорий государств-участников СНГ: матер. VII межгосударственной науч.-практич. конф. государств-участников СНГ. - Оболенск, 2006. -С. 165-166.
26. Цыркунов В. М. Противоэпидемические мероприятия в очагах инфекционных болезней: учеб. пособ. / Под ред. Г. Н. Чистенко. - Мн.: БГМУ. - 2006. - 324 с.
27. Щуковская Т. Н. // Современные технологии в реализации глобальной стратегии борьбы с инфекционными болезнями на территории государств-уч астников Содружества Независимых Государств: Матер. IX межгосударственной науч.-практич. конф. государств-участников СНГ. - Волгоград, 2008. -С. 314-315.
28. Casadeval A. // Emerg. Infect. Dis. - 2002. -V ol. 8 (8). - P. 833-841.
29. Daya M., Nakamura Y. // Crit. Care Clin. - 2005. -Vol. 21 (4). - P. 747-763.
30. Kman N. E., Nelson R. N. // Emerg. Med. Clin. North. Am. - 2008. - Vol. 26 (2). - P. 517-547.
31. Poland G. A. // Clin. Infect. Dis. - 2010. - Vol. 50 (2). -P. 45-53.
К. Ю. Тихаева, Л. В. Ткаченко, Л. Н. Рогова, Д. В. Куркин
Волгоградский государственный медицинский университет, кафедра акушерства и гинекологии ФУВ, кафедра патологической физиологии
МЕТОД МОДЕЛИРОВАНИЯ ХРОНИЧЕСКОГО ВОСПАЛЕНИЯ ЭНДОМЕТРИЯ И ЕГО ПАТОГЕНЕТИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ
УДК 618.14-002-092.4
Авторами описан простой и доступный метод моделирования хронического воспаления эндометрия. Модель может быть использована как для изучения патогенеза, так и для разработки новых подходов к патогенетической терапии изучаемой патологии.
Ключевые слова: хронический эндометрит, воспаление, моделирование.
K. Y. Tikhaeva, L. V. Tkachenko, L. N. Rogovа, D. V. Kurkin
A METHOD OF MODELING CHRONIC ENDOMETRIAL INFLAMMATION AND ITS PATHOGENETIC SUBSTANTIATION
The authors described a simple and available method of modeling chronic endometrial inflammation. The model can be used to study the pathogenesis as well as to develop new approaches to pathogenetic therapy of this pathology.
Keywords: chronic endometritis, inflammation, modeling.
Проблема хронического эндометрита (ХЭ) остается одной из актуальных в клинической и экспериментальной медицине. По данным А. В. Шуршалиной (2007), ХЭ был единственной верифицированной причиной невынашивания беременности у 52 % и бесплодия у 18,8 % обследованных пациенток [11].
В настоящее время ХЭ рассматривается как клинико-морфологический синдром, который является исходом длительно существующего повреждения эндометрия инфекционным агентом, в результате чего возникают множественные вторичные морфофункциональные изменения, нарушающие циклическую трансформацию и ре-цепторный аппарат слизистой оболочки тела матки [7, 9].
Морфологическими критериями ХЭ являются лимфо-плазмо-цитарные инфильтраты, обнаружение очагов фиброза в строме и в стенках спиральных артерий, преимущественно в базаль-ном слое эндометрия [4]. В настоящее время большинство авторов отмечают возрастание роли условно-патогенных возбудителей воспалительных процессов органов малого таза (ВЗОМТ).
К их числу относятся аэробные грампо-ложительные бактерии родов: Streptococcus, Staphylococcus, Enterococcus, Corynebacterium и аэробные грамотрицательные палочки семейства Entero-bacteriaceae: Escherichia coli, Enterobacter spp., Proteus spp., Klebsiella spp., Pseudomonas spp. Среди анаэробных бактерий
чаще встречаются грамотрицательные неспоро-образующие бактерии родов Bacteroides, Fusobacterium, Prevo-tella и грамположительные бактерии родов Clostridium spp., Peptostrepto-coccus, Peptococcus [3, 6, 9, 11].
С конца XX в. считается, что ведущим инициатором ВЗОМТ являются ассоциации неспо-рообразующих грамотрицательных (бактероиды, превотелла, фузобактерии) и грамположитель-ных анаэробных микроорганизмов (пептостреп-тококки и клостридии), аэробной грамотрица-тельной (кишечная палочка, клебсиелла, протей, энтеробактерии) и реже грамположительной микробной флоры (стрептококк, энтерококк, стафилококк) [12-14].
В настоящий момент существует несколько методик моделирования хронического воспалительного процесса внутренних половых органов: методика О. А. Тихоновской (1986) с использованием изолированной суточной культуры золотистого стафилококка, JIAN Zi-jian с соавт. (2004) предлагают внутриматочное орошение 3%-й уксусной кислотой в течение 3 дней, а затем контаминацию полости матки изолированной культурой E.coli и S.aureus. В работе Н. А. Гаря-евой, Ю. В. Беда, А. Н. Пермяковой (2004) предлагается вводить флогоген в виде Staphylococcus aureus и/или Escherichia coli в дозе 3106 микробных в парацервикальную клетчатку в области перешейка матки. В работе Л. А. Самородиновой [7] для моделирования хронического сальпингоофорита применяется каррагинин. Такой метод зачастую приводит к образованию гранулем, что более типично для воспаления специфической этиологии (микобак-терии туберкулеза), доля которого как этиологического фактора не более 10 %.
Приведенные методики моделирования подразумевают работу с изолированной бактериальной культурой, что технологически сложно, требует специального оборудования и небезопасно для исследователя.
Использование в качестве возбудителя моноагента, противоречит актуальным взглядам на этиологию хронического воспаления эндометрия. Как указано выше, в современной этиологии хронических воспалительных заболеваний половых органов превалирует именно микст-инфекция.
В связи с технической сложностью, известной опасностью и высокой стоимостью описанных методик моделирования, была поставлена цель, разработать патогенетически обоснованный метод моделирования хронического воспаления эндометрия, который был бы дешевле, безопасней и проще для экспериментатора.
Для моделирования воспалительного процесса брюшины крыс используется раствор аутокаловых масс [5]. Среди бактерий,
культивированных из ЖКТ, более 99,9 % являются облигатными анаэробами, из которых доминирующими представителями являются: Bacteroides, Bifidobacterium, Eubacterium, Lactobacillus, Clostridium, Fusobacterium, Peptococcus, Peptostreptococcus, Escherichia и Veillonella [1].
В связи с большим значением в этиологии хронического эндометрита именно условно-патогенной флоры, нами была выдвинута гипотеза, о том, что моделировать хроническое воспаление эндометрия можно также путем использования аутокала.
ЦЕЛЬ РАБОТЫ
Разработать безопасную и доступную методику моделирования хронического воспаления эндометрия.
МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ
Выполнено 6 серий эксперимента на 40 половозрелых самках белых крыс линии Вистар массой (198,0 ± 3,8) г. Животные содержались в обычных условиях вивария на стандартной диете. Все эксперименты проводились в утренние часы натощак под наркозом препаратом Рометар (2-3 мг на 1 кг массы животного) с соблюдением стандартов.
У животных первой серии проводился забор биологического материала в исходном состоянии.
Во второй серии (контроль) проводилась лапаротомия, а затем - послойное ушивание п е редней брюшной стенки. С 3-го дня после операции проводили антибактериальную терапию препаратом «Цефтриаксон» в соответствии с весом животного в течение 7 дней.
В третьей серии проводили нижнесрединную лапаротомию. Матку выводили в рану и тщательно обкладывали стерильными салфетками. Стенку яйцевода прокалывали тонкой инъекционной иглой и с помощью инсулинового шприца в полость матки вводили 0,2 мл аутока-ловой взвеси с целью моделирования хронического воспаления эндометрия. Брюшную полость ушивали наглухо послойно. С 3-х суток после операции проводили антибактериальную терапию препаратом широкого спектра действия - цефтриаксон в соответствии с весом животного в течение 7 дней.
В четвертой серии проводили нижнесрединную лапаротомию. С целью моделирования хронического воспаления эндометрия, по описанной выше методике, в полость матки вводили 0,1 мл аутокаловой взвеси. Брюшную полость ушивали наглухо послойно. С 3-х суток после операции проводили антибактериальную терапию препаратом широкого спектра действия -цефтриаксон в соответствии с весом животного в течение 7 дней.
В пятой серии в полость матки вводили 0,05 мл аутокаловой взвеси с целью моделирования хронического воспаления эндометрия. Брюшную полость ушивали наглухо послойно. С 3-х суток после операции проводили антибактериальную терапию препаратом широкого спектра действия - цефтриаксон в соответствии с весом животного в течение 7 дней.
У животных шестой серии с целью моделирования хронического воспаления эндометрия вводили в 0,05 мл аутокаловой взвеси в полость матки, но в послеоперационном периоде не назначался антибактериальный препарат.
Аутокаловую взвесь готовили непосредственно перед экспериментом. Собирали кал половозрелых самок крыс. Кал смешивали с физиологическим раствором в пропорции 1:10 пропорции (Никонов В. М., 1988), раствор дважды фильтровали сквозь марлевый стерильный материал.
На 41-е сутки проводили выведение животных из эксперимента, путем введения летальной дозы Рометара. Осуществляли забор 2 мл крови из подключичной вены, в которой определяли уровень лейкоцитарного индекса интоксикации (ЛИИ) и забор биологического материала для гистологического исследования (матку). Полученный препарат из ткани фиксировали в нейтральном забуференном формалине и после обезвоживания в серии спиртов возрастающей
концентрации заливали парафином по общепринятой методике. Гистологические методы включали окраску гематоксилин-эозином.
Для оценки морфологической картины применяли полуколичественный метод оценки степени выраженности лимфоцитарной, плазма-цитарной инфильтрации стромы эндометрия в биопсийном материале, разработанный Э. А. Казачковой (1985). Для статистической оценки использовали критерий Манна-Уитни (средние величины выражали как Ме [25 и 75 перцентиль]).
Лейкоцитарный индекс интоксикации (ЛИИ) отражает интенсивность процессов тканевой деградации и уровень эндогенной интоксикации (Кальф-Калиф Я. Я., 1941). ЛИИ представляет собой соотношение уровней клеток крови, повышающихся при гнойных процессах (миелоци-ты, палочкоядерные, сегментоядерные) к клеткам, количество которых при этих процессах падает (лимфоциты, моноциты, эозинофилы). Вычисление ЛИИ проводили по общеизвестной методике Я. Я. Кальф-Калифа (1941). Нормальные значения ЛИИ колеблются в пределах от 0,5 до 1,5 Ед.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Полученные результаты представлены в табл. 1 и 2.
Номер серии Морфологическая картина ЛИИ, ед.
1-я, п = 5 Единичные лейкоциты, лимфоциты 0,9-1,3
2-я, п = 5 Единичные лейкоциты, лимфоциты, эозинофилы в поле зрения 0,8-1,2
3-я, п = 5 Лейкоцитарная инфильтрация стромы, множественно нейтрофилы, единичные лимфоциты, макрофаги, отек стромы, полнокровие сосудов 1,9-2,3
4-я, п = 10 Лимфо-плазмоцитарная инфильтрация стромы, единичные нейтрофилы, макрофаги, склероз спиральных артерий 1,2-1,5
5-я, п = 10 Лимфо-плазмоцитарная инфильтрация стромы, единичные нейтрофилы, макрофаги, склероз спиральных артерий 1,1-1,5
6-я, п = 5 Лейкоцитарная инфильтрация стромы, множественные нейтрофилы, единичные лимфоциты, макрофаги, отек стромы, полнокровие сосудов, тромбозы 2,4-2,7
Таблица 1
Гистологическая картина ткани эндометрия и показатель ЛИИ
Таблица 2
Показатели клеточного инфильтрата в эндометрии (в баллах) (Ме [25 и 75 перцентили])
Номер серии Нейтрофил Макрофаг Лимфоцит Плазмоцит Эозинофил
1-я 1[0;1] 1[0;1] 1[1;1] 0[0;0] 1 [1 ;2]
2-я 1[0;1] 1[0;1] 1[0;1] 1[1;1] 1[0;1]
3-я 3 [2;4] *** 1[0;1] 1[0,25;1] 0[0;0] 1[1;0]
4-я 1 [1;2] * 1,5[1,5;2]* 2,5[1,5;3] *** 2[1;3] ** 1,5[1,5;2] **
5-я 1 [1;2] * 1,5[1;2] ** 3[1, 5;2]** * 2[1;2] ** 2,5[1;3] **
6-я 3,5[1;4] 1,5[1;1,5] 0[0;0] 0 2[0;1]
р < 0,05; р < 0,01; р < 0,001.
Как видно из табл. 1, у крыс 1-й серии в ткани эндометрия наблюдались единичные нейтрофи-лы, лимфоциты, округлые железы нормального строения, артерии без особенностей. Показатель ЛИИ находился в пределах 0,9-1,3.
Во второй серии на 41-е сутки в ткани эндометрия наблюдались единичные нейтрофилы, лимфоциты, эозинофилы, округлые железы нормального строения, артерии без особенностей.
Статистически достоверных отличий в показателях клеточной инфильтрации эндометрия между первой и второй сериями не выявлено: число нейтрофилов, макрофагов, лимфоцитов, плазмоцитов и эозинофилов в группе контроля: 1 [0;1]; 1 [0;1]; 1 [0;1]; 1 [1;1]; 1 [0;1]. В исходном состоянии, соответственно: 1 [0;1] 1, (р > 0,1); [0;1], (р > 0,1); 1 [1;1], (р > 0,1); 0 [0;0], (р > 0,1); 1 [1 ;2], (р > 0,1).
В 3-й серии на сроке наблюдения в гистологическом препарате отмечались: единичные плазмоциты и лимфоциты, небольшой отек стро-мы, большое количество нейтрофилов. Данная картина более типична для фазы подострого воспаления. Число нейтрофилов в ткани эндометрия в баллах выросло в сравнении с контрольной серией с 1 [0;1] до 3 [2;4], р < 0,001. При этом число макрофагов в ткани эндометрия составило 1 [0;1], (р > 0,1), лимфоцитов 1 [0,25;1], (р > 0,1), плазмоцитов 0 [0;0], (р > 0,1) эозино-филов 1 [1 ;0], (р > 0,1).
В пользу тенденции к генерализации воспалительного процесса свидетельствует увеличение показателя ЛИИ до 1,9-2,3 (в исходном состоянии 0,9-1,3).
В 4-й и 5-й сериях, на фоне уменьшения объема вводимой взвеси аутокала, в гистологическом материале обнаружены воспалительные инфильтраты из лимфоидных элементов, в меньшей степени лейкоцитов, расположенных чаще вокруг желез и кровеносных сосудов, реже диффузно; плазматические клетки, единичные макрофаги, слабовыраженный фиброз стромы, незначительный склероз стенок артерий эндометрия. Данная картина типичная для хронизации
воспаления эндометрия (Кузнецова А. В., 2000). Показатели клеточной инфильтрации в баллах в 4-й серии составили: нейтрофилов 1 [1;2], (р < 0,05), макрофагов 1,5 [1,5;2], (р < 0,05), лимфоцитов 2,5 [1,5;3], (р < 0,01), плазмоцитов 2 [1 ;3], (р < 0,01), эозинофиллов 1,5 [1,5;2], (р < 0,01). В 5-й группе: 1 [1;2], (р < 0,05); 1,5 [1;2], (р < 0,01); 3 [1,5;2], (р < 0,001); 2 [1 ;2], (р < 0,01); 2,5 [1;3], (р < 0,01) соответственно. Обращает на себя внимание, что величина названных показателей воспалительного инфильтрата, значимо отличается от таковых контрольной серии. Видимых морфологических различий в гистологическом материале, полученном у крыс 4-й и 5-й серий, не выявлено. Показатели ЛИИ в 4-й серии находились в пределах 1,2-1,5; в 5-й серии - 1,1-1,5.
У животных 6-й серии после моделирования хронического воспаления эндометрия в послеоперационном периоде не назначался антибактериальный препарат. При гистологическом исследовании у двух крыс из пяти была картина более типичная для острого эндометрита, три крысы из пяти погибли до выведения из эксперимента. Показатели ЛИИ 2,4-2,7. Эти данные указывают на генерализацию процесса и необходимость в ходе моделирования хронического воспаления эндометрия использовать антибактериальные препараты.
Полученные данные говорят о том, что введение в полость матки по указанной методике от 0,05 до 0,10 мл аутокаловой взвеси приводит к формированию гистологической картины хрони-зации воспаления эндометрия. Необходимо отметить, что объем 0,05 мл вводить технически затруднительно, так как невозможен достоверный контроль за поступлением аутокаловой взвеси в полость матки. В дальнейшей работе мы отказались от введения объемов менее 0,1 мл.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Анализ полученных результатов показывает, что, при введении в полость матки аутокаловой взвеси, у экспериментальных крыс развивается
картина хронизации воспаления эндометрия, о чем свидетельствуют лимфоплазмоцитарная инфильтрация тканей эндометрия, фиброз стромы, склеротические изменения стенок артерий, что позволяет использовать предлагаемую модель как для изучения патогенеза хронического эндометрита, так и для разработки новых подходов к патогенетической терапии изучаемой патологии.
ЛИТЕРАТУРА
1. Барановский А. Ю, Кондрашина Э. А. Дисбакте-риоз и дисбиоз кишечника. - СПб.: Питер, 2000. - С. 17.
2. Горин В. С., Кондранина Т. Г., Молоткова Д. Е. и др. // Вопросы гинекологии акушерства и перинато-логии. - 2009. - № 8 (2). - С. 47-55.
3. Казачкова, Э. А. Патогенез, клинико-морфологи-ческая характеристика и лечение воспалительных заболеваний матки и придатков: дис. ... д-ра мед. наук / Э. А. Казачков. - Челябинск, 2000. - 303 с.
4. Константинова О. Д., Черкасов С. В., Кремле-ва Е. А. и др. // Мат. VII Рос. форума «Мать и дитя». -М., 2005. - С. 408-409.
5. Кузнецова А. В // Архив патологии. - 2000. -№ 3. - С. 48-52.
6. Никонов В. М. Местная детоксикация в комплексном лечении разлитого аппендикулярного перитонита у детей: автореф. дис. ... канд. мед. наук. -М., 1988.
7. Островский В. К., Мащенко А. В., Янголен-ко Д. В. и др. // Клин. лаб. диагностика. - 2006. - № 6. -С. 50-55.
8. Прилепская В. Н. Особенности инфекционных процессов нижнего отдела половых путей: Возможности терапии препаратами для локального применения: матер. VII Рос. нац. конгр. «Человек и лекарство». - М.: Медпресс-информ, 2002. - С. 15-22.
9. Самородинова Л. А. // Бюл. эксперим. биол. и медицины. - 1966. - № 2. - С. 123-124.
10. Серов В. Н, Тихомиров А. Л, Лубнин Д. М. Современные принципы терапии воспалительных заболеваний женских половых органов: метод. пособие. - М., 2003. - 23 с.
11. Тихоновская О. А. Моделирование острого и хронического воспаления придатков матки // Молодежь и научно-технический прогресс: тез. докл. -Томск, 1986. - С. 76.
12. Шуршалина А. В. Хронический эндометрит у женщин с патологией репродуктивной функции: автореф. дис. ... д-ра мед. наук. - М., 2007.
13. Уткин Е. В., Кулавский В. А. // Рос. вестн. акуш.-гин. - 2008. - Т. 8, № 1. - С. 40-44.
14. Черкасов, Е. А. Кремлева и др. // Матер. VII Рос. форума «Мать и дитя». - М., 2005. - С. 408-409.
15. Haggerty C. L, et al. // Clin. Infect. Dis. - 2004. -Vol. 39 (7). - P. 990-995.
М. Е. Стаценко, С. В. Туркина, Н. Н. Шилина,
М. А. Косивцова, Ю. Е. Лопушкова, А. А. Винникова,
Б. А. Лемперт, Е. Н. Заводчикова
Волгоградский государственный медицинский университет, кафедра внутренних болезней педиатрического и стоматологического факультетов
ОСОБЕННОСТИ СОСТОЯНИЯ МИКРОЦИРКУЛЯЦИИ У БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКОЙ СЕРДЕЧНОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТЬЮ И САХАРНЫМ ДИАБЕТОМ ВТОРОГО ТИПА
УДК 616.12-008.46:616.379-008.64
Сочетание хронической сердечной недостаточности (ХСН) и сахарного диабета (СД) 2-го типа ведет к увеличению частоты встречаемости и усилению тяжести поражения органов-мишеней, при этом немаловажную роль играет развитие эндотелиальной дисфункции и формирование патологических типов микроциркуляции как у пациентов с ХСН, так и СД 2-го типа.
Целью исследования являлось изучение особенностей микроциркуляции у больных ХСН и СД 2-го типа. Была выявлена большая доля спастического типа микроциркуляции у больных с ХСН и СД 2-го типа по сравнению с группой пациентов с изолированной ХСН, где преобладал гиперемический тип.
Более высокие показатели перфузии периферических тканей наблюдались у пациентов при отсутствии сочетания ХСН с СД 2-го типа.
При интерпретации вклада различных компонентов в формирование определенного типа микроциркуляции отмечена большая роль нейрогенного компонента у пациентов, страдающих СД 2-го типа. У больных ХСН без сопутствующего СД преобладала роль миогенного и в меньшей степени эндотелиального компонентов.
Ключевые слова: микроциркуляция, хроническая сердечная недостаточность,
сахарный диабет второго типа.
