CC BY
18
УДК 619:612.015:619:616.1:636.2
Kicepa Я.В., д.вет.н., професор ©
Лъв\всъкий нацюналънийутеерситет ветеринарногмедицини та бютехнологт
iMeni С.З.Гжицъкого
МЕТАБОЛ13М Б1ЛК1В У XBOPOI ЛЕЙКОЗОМ ВЕЛИКО! Р0ГАТ01ХУДОБИ
Встановлений зв'язок м1ж тлътстю iмуноглобулшв у сироватщ xpoei i розвитком лейкозного процесу на ргзних його cmadinx. У тфжованих тварин кшътстъ iмуноглобулшв майже не змшюетъся, в той час яку хворих врантй cmadii захворювання i у хворих з клшчними ознаками (активна стад1я) pieenb окремих isomunie iмуноглобулшв ргзко понижений. Кглъкгстъ iмуноглобулшв у сироватщ Kpoei хворих лейкозом тварин понижуетъся на 35-41% пор1вняно з i'x тлътстю у здорових тварин. Такий iмунодефщитний стан розвиваетъся паралелъно з прогресуванням лейкозного процесу i розвитком пост1йного л1мфоцитозу.
В сироватщ молока дослгджено 15 амтокислот, сума яких у здорових Kopie склала 910,14±189,70 мг%>; в групах коргв, ят знаходилисъ в передлейкозному стат i в рантй cmadii лейкозу загалъна i'x тлътстъ тдвищуетъся до 992,25±232,01 мг%, modi як в активтй cmadii лейкозу наступав значне зменшення i'x KWbKOcmi до 686,04±173,96 мг%, тобто на 224,10 мг% (24,62%) nopiвнянo з показникамиу здорових тварин.
Ключов1 слова: велика рогата худоба, лейкоз, бтки, кров, молоко, iмyнoглoбyлiнu,aмiнoкucлomu, 6rnKoei фракцИ.
Вступ. Центральне мюце в оргашзм1, займають бшки. Вони мають винятково важливе значения для будови та функцюнування Bcix кл1тин, тканин i систем оргашв. Бшки становлять основу структури та процеЫв обмшу Bcix кл1тин i цшого оргашзму.
Про штенсившсть i характер обмшу бшюв можна судити за концентращею бшюв та !х складових частин (альбумши, а-, Р-, у- глобулши). Глобулярш бшки роздшяються на а-, Р-, та у- глобулши. Найбшьшу молекулярну масу мають гама-глобулши, до яких вщносяться ¿муноглобулши (Ig) [2, 14]. 1з загально! кшькосп Bcix ¿муноглобулмв у сироватщ кров! бшьш як 70% ирииадае на бшки класу G. [13, 19].
Висока продуктившсть тваринництва вимагае обгрунтованого впливу на ироцеси обм1ну речовин та розробку метод1в цшеспрямованого впливу на орга-шзм тварин, яю розкривають мехашзм метабол1ту в них [3, 5, 8]. Виходячи з вищенаведеного перед нами постало завдання дослщити метабол1зм бшюв у велико1 рогато! худоби на р1зних стад1ях розвитку лейкозного процесу.
Матер1али i методи. Дослщження проводились в 1нститут1 патологи кров! та трансфуз!йно! медицини Академ!! медичних наук Укра!ни (м. Льв!в) i у
©Kicepa Я.В., 2013
130
Льв1вському национальному ушверситсп ветеринарно! медицини та бютехнологи ¿меш С.З.Гжицького. В неблагополучних щодо лейкозу господарствах - "ТараЫвка", "Подшля" i "Славутич" Збаразького району Тернопшьсько! облает! були проведен! дослщження на 75 клмчно здорових та хворих лейкозом коровах чорно-рябо! породщвжом 5-10 роюв.
За результатами гематолопчних дослщжень було сформовано п'ять дослщних груп. Перша група - здоров! тварини. Друга група - шфшоваш тварннн - Р1Д позитивно реагуючг Третя група - xBopi тварини в передлейкознш стади, яю квал1ф1кувались як пщозрш в захворюванш лейкозом. Четверта група - рання стад1я лейкозу - до ще! групи вщбирались тварини, яю характеризувались сублейкем1чним р1внем лейкоцитозу в кровг Пята група - активна стад1я лейкозу - цю групу формували тварини, в яких виявили низьк1 показники еритроцит1в - 4,80 млн/мкл i гемоглоб1ну - 6,89 г%, що в1дображае анем1ю.
Для дослщження брали кров з яремно! вени, одержували сироватку, в якш проводили к1льк1сне визначення ¿муноглобул1н1в методом рад1ально! ¿мунодифуз11 в гел1 [1]. Дослщжувалось молоко м1крометодом нисх1дно! розподшьчо! хроматограф!! на nanepi. В гщрол1затах сироватки молока кор!в визначали кшькють 7-и зам1нних i 8-и незамшних ам1нокислот [18]. Статистичну обробку результат1в проводили за Стьюдентом.
Результати дослщжень. Ступ1нь захисту орган1зму в1д шфекцп корелюе з р1внем ¿муноглобул1н1в в сироватщ кров1. Особливо актуальна дана проблема при л1мфопрол1феративних захворюваннях, до яких вщноситься i лейкоз велико1 рогато! худоби, обумовлений дефектн!стю ¿мунно! системи [4, 7, 17]. Bipyc лейкозу велико! рогато! худоби штегруеться в геном В-л!мфоцит!в (Н.В.Н!колаева i сп!вавтори, 1981; В.1.Тамошюнас, 1981), як! е попередниками плазматичних кл!тин, синтезуючих i секретуючих ¿муноглобул!ни. Тому кшьккна оц!нка р!вня ¿муноглобул!н!в на р!зних етапах розвитку лейкозного процесу е актуальною для встановлення ступеня порушення функц!! ¿мунно! системи [6, 16, 20].
Нашими дослщженнями показано [9], що кшькють ¿муноглобул!н!в у сироватщ кров! в шфжованих кор!в (РЩ-позитивно реагуюч!) незначно в!др!зняеться в!д !х к!лькост! у здорових тварин (таблиця 1). В той же час, зниження к!лькост! ¿муноглобул!н!в проходить паралельно з прогресуванням лейкозного процесу i розвитком пост!йного л!мфоцитозу. Так, у хворих тварин в активнш стади розвитку хвороби к!льк!сть ¿муноглобул!н!в була значно понижена пор!вняно з здоровими тваринами. Вм!ст IgG2 в сироватщ кров! у ще! групи тварин знизився в середньому до 8,34 мг/мл; IgGi - до 6,93 мг/мл i IgM -до 1,63 мг/мл. Одержан! результати дослщжень свщчать, що м!ж к!льк!стю ¿муноглобулмв в сироватц! кров! i nepe6iroM лейкозного процесу на р!зних його стад!ях ¿снуе прямий зв'язок. Кшькють ¿муноглобул!н!в в сироватц! кров! знижуеться у хворих тварин на 35-41% пор!вняно з !х к!льк!стю у здорових тварин. Результати наших дослщжень узгоджуються з результатами R.M.Jacobs (1980), Е.В.Кузнецова (1989).
131
Таблиця 1
Кшьккш змши ¡муноглобулш1в сироватки кров1 велико! рогато!' худоби при лейкоз^ М±ш, п=15, (мг/мл)_
1муно-глобул1ни Здоров1 1нф1коваш Стади лейкозного процесу
Перед-лейкозна- Рання Активна
1й01 10,7±2,3 10,5±1,5* 9,8±1,1* 7,98±0,97* 6,93±1,2*
1й02 14,08±1,7 13,43±2,74* 11,27±1,8* 10,68±2,5* 8,34±1,9***
1ЕМ 2,52±0,38 2,49±0,47* 2,30±0,28* 2,17±0,33* 1,63±0,23**
Примита: в1ропдшсть р1зниць 1з здоровими тваринами: * - Р<0,05;** - Р<0,01; *** -Р<0,001.
Для з'ясування динамжи змш обмшу бшюв I бшкових фракцш проведен! бюх1м1чш дослщження кров1 та молока вщ здорових I хворих лейкозом кор1в з метою вияснення особливостей цих змш залежно вщ стадш переб1гу лейкозного процесу [10, 11]. Дослщження показали, що кшькють загального бшка в сироватщ кров1 (таблиця 2) здорових кор1в складае в середньому 8,12г%. Цд даш показують, що сезони року I р1зний ф1зюлопчний стан оргашзму, при яких дослщжувались тварини, суттево не впливають на його стабшьшсть. У хворих лейкозом кор1в вщм1чаеться тенденщя до його зниження, що складае в активнш стади 7,06 г%. Анал1з показниюв бшкових фракцш показав, що спостер1гаеться зниження глобулмв I гама-глобулш1в на вс1х стад1ях лейкозного процесу.
Таблиця 2
Кшьккть загального бшка 1 бшкових фракцш в сироватщ кров1 ко|Мв
на р1зних стад1ях лейкозного процесу, М±ш, п=24
Пока-зники Одиниця Клшчно Стади лейкозного процесу
вим1ру ЗДОРОВ1 Передлейкозна Рання Активна
Загальний г% 8,12 ± 7,52 ± 7,30 ± 7,06±
бшок 0,01 0,02** 0,02** 0,03**
Гло-булши г% 4,95 ± 0,02 4,36 ± 0,03** 4,14 ± 0,02** 3,86 ± 0,03**
Гама- г% 3,04 ± 2,59 ± 2,42 ± 2,10 ±
глобул1ни 0,04 0,01** 0,02** 0,02**
Примита: в1ропдшсть р1зниць 1з здоровими тваринами: * - Р<0,05;** - Р<0,01; *** -Р<0,001.
Динамжа змш загального бшка \ бшкових фракцш в молощ (таблиця 3) засвщчила, що кшькють загального бшка в молощ \ в сироватщ молока знижуеться на вс1х стад1ях лейкозного процесу. 3 показниюв бшкових фракцш сироватки молока суттев1 змши виявлеш у вмют1 альфа-лактоальбуммв, кшьюсть яких вщ початку до юнця захворювання достов1рно зменшуеться пор1вняно ¿з здоровими тваринами.
132
Таблиця 3
Динамжа змш загального бшка 1 бшкових фракцш в молощ
ко|Ив на р|зних стад1ях лейкозного процесу, М±ш, п=24_
Одиниця вишру Клшчно здоров1 Стади лейкозного процесу
Показники Передлей-козна Рання Активна
Загальний бшок г% 3,21 ± 2,99 ± 2,63 ± 2,58 ±
в молощ 0,281 0,47 0,05* 0,04*
Загальний бшок г% 0,93 ± 0,89 ± 0,80 ± 0,72 ±
сироватки молока 0,01 0,02** 0,02** 0,01**
Альфа-лактоальбумши сироватки молока г% 0,187 ± 0,002 0,171 ± 0,003** 0,169 ± 0,003** 0,157± 0,002**
Примита: в1ропдшсть р1зниць 1з здоровими тваринами: * - Р<0,05;** - P<0,01; *** -P<0,001.
Результати дослщжень показали, що стутнь порушення бшкового обмшу у кор1в знаходиться в прямш залежност1 вщ стади протжання лейкозного процесу I цшковито залежить вщ кшьккних показниюв кров1, тобто кшькост1 лейкоцит1в в 1 мкл кров1 I вщсоток л1мфоцит1в в лейкоформул1, як1 вщображають як благополучшсть вщ лейкозу, так I наявшсть захворювання на р1зних стад1ях його прояву.
В роботах В.К.Рудзит (1973), М.О.Раушенбаха (1974), В.Н. Байковой (1977), О.В.Жуковой (1981) ввдшчаеться, що розвиток лейкозу у людини зв'язаний з глубокими змшами в обмш1 ароматичних амшокислот, яю займають ключов1 позици в метабол1чних циклах бюлопчно активних сполук [15]. Виходячи з вищенаведеного, перед нами постало завдання дослщити стан метабол1зму амшокислот сироватки молока у здорових I хворих лейкозом кор1в з метою вияснення !х рол1 в патогенез! лейкозу. Проведен! дослщження показали [12], що в груш здорових тварин кщькють амшокислот у р1зних тварин I при кожному дослщженш коливалась в широких межах, що, на наш погляд, було пов'язано з шдивщуальними особливостями I ф1зюлопчним станом оргашзму в перюд дослщжень. При шших дослщженнях кшьккть амшокислот коливалась вщ мш1мальних до максимальних величин.
У хворих тварин змши проходять в загальнш кшькост1 амшокислот. Кшькють 1х в груш здорових тварин склала 910,14±189,70 мг%, у хворих лейкозом тварин спостер1гаеться зниження !х вм1сту до 686,04±173,96 мг%, тобто на 224,1 мг% (24,62%) пор1вняно з показниками у здорових тварин. Под1бш змши вщм1чеш I в сум1 замшних I незамшних амшокислот. Так, кшьккть незамшних амшокислот з 502,76±99,91 мг% знизилась до 391,80±95,09 мг%, тобто на 110,96 мг%(22,07%). Показники замшимих амшокислот з 407,38±89,79 мг% знизились до 294,26±78,87 мг%, що на 113,12 мг% або на 27,77% нижче показниюв здорових кор1в. При цьому необхщно вщм1тити, що в процентному сшввщношенш загальна кщьккть незамшних амшокислот переважае над замшними.
133
Висновки. 1. При прогресуванш лейкозного процесу загальна кшьккть ¿муноглобулш1в i ix окремих ¿зотишв, особливо IgG2, в сироватщ кров1 хворих лейкозом тварин знижуеться. В активнш стади захворювання кшькють IgGi, IgG2, IgM знижуеться вщповщно на 35,2, 40,8 i 35,3% пор1вняно з i'x piBHeM в сироватщ Kpoßi здорових тварин.
2. В сироватщ молока сума амшокислот склала 910,14±189,70 мг%, в той час як у хворих лейкозом Kopie наступае значне зменшення загально! кiлькocтi амшокислот до 686,04±173,96 мг%, тобто на 224,10 мг% нижче piвня здорових Kopie.
Л1тература
1. Адаменко Г.П. Модификация метода Mancini для количественного определения иммуноглобулинов. Лабораторноедело. 1981, №6, с. 371-372.
2. Бережная Н.М., Ддкут С.И. Биологическая роль иммуноглобулина М. Киев. 1983, 132 с.
3. Бусол В.А., Доронин H.H., Мандыгра Н.С. и другие. Лейкоз сельскохозяйственных животных. - К.,Урожай,1988. - 264 с.
4. Бусол В.О., Шаповалова О.В. Деяю ocoбливocтi розвитку ¿мунно! реакци у телиць, вакцинованих проти лейкозу. 36ip. статей наук.-практ. конф., XapKiB, 1994, с. 82-83.
5. Васильева Е.А. Клиническая биохимия сельскохозяйственных животных. - Москва: Россельхозиздат, 1974. - 192 с.
6. Вознюк В.П. Активность естественной и антителозависимой цитотоксичности лейкоцитов при лимфолейкозе и миеломной болезни. Л1карськасправа. 1995, №5-8, с. 103-104.
7. Гусева С.А., Федько A.A. Взаимодействие лимфоцитов и нейтрофилов периферической крови в стимуляции лимфокинообразования при хронических лейкозах. Гематол. и трансфузиол., 1991, №6, с. 6-9.
8. 3aßiproxa A.I. Здобутки та перспективи в 6opoTb6i з лекозом велико! рогато! худоби //Аграрний BicHHK Причорномор'я: 36ipHHK наукових праць "BeTepHHapHi науки". - Одеса, 2003. - Вип. 21. - С. 65-70.
9. Kicepa Я.В. Характеристика iмyнoглoбyлiнiв велико! рогато! худоби при лейкозг //Науково-техшчний бюлетень.- Львiв.-2005, випуск 6, №2.- С.80-83.
10. Kicepa Я.В. Виявлення i ощнка ступеня ураженосп Kopie лейкозом. //Науковий бюлетень „Ветеринарна бютехнолопя".-Ки!в.-2005, № 6.- С.94-99.
11. Kicepa Я.В. EioxiMi4Hi змши в Kpoßi i мoлoцi Kopie на pi3HHx cтaдiяx лейкозного процесу. //Мтжвщомчий тематичний науковий 36ipHHK.-Ветеринарнамедицина. XapKiB.-2005, том 1.- С.509-513.
12. Kicepa Я.В. Амшокислотний склад сироватки молока у здорових i хворих лейкозом Kopie. //Науковий вкник ЛНАВМ ¿М..С.З. Гжицького. Том 7, № 1.- Льв1в.-2005.- С.46-52.
13. Маслянко Р.П. Биосинтез иммуноглобулинов у животных //С-х. биология.- 1976.- В. 2.-С. 61-66.
14. Маслянко Р.П. OcHOBHiMyHo6^orii'.^bBiB:BepTHKanb, 1999.-472 с.
134
15. МельникЮ.Ф., МандиграМ.С. Ешзоотолопчна ефектившсть заход1в боротьби з лейкозом велико! рогато! худоби //В¿сник аграрно! науки, лютий 2004. - С. 26-28.
16. Нагаева Л.И. Патогенез и иммунология лейкоза крупного рогатого скота. Рига, Зинатне, 1988, 220с.
17. Николаева Н.В. Имунная система при лимфопролиферативных заболеваниях у крупного рогатого скота. Иммунологические аспекты лимфопролиф. забол. Новосибирск, 1987, с. 32-70.
18. Пасхина Т.С. Количественное определение аминокислот при помощи хроматографии на бумаге методом образования медных производных аминокислот с нингидрином. Методические письма. М., 1959, 1, с.12-18.
19. Шмелева С.Б., Костина Г.А. Сыворотка крови животных реконвалесцентов //Ветеринария.- 1996.- № 7.- С. 34-38.
20. Schiltz P.M. Characterization of tumor-infiltrating lymphocytes derived from human tumors for use as adoptive immunotherapy of cancer. // J.Immunother.-1997.-V. 20.-P. 377-387.
Summary
Y.V. Kisera, Doctor of Veterinary Sciences, Professor
Lviv national university of veterinary medicine and biotechnologies named after S.Z.Gzhytskyj, Lviv, Ukraine METABOLISM OF PROTEINS IN SICK CATTLE WITH LEUKEMIA
It was distinguised the correlation between the quantity of immunoglobulines in blood serum and the development of leucosis processes at its different stages. In infected animals the quantity of immunoglobulines isn't almost changed an the same time as in sick animals at carly stage of disease and in sick animals with clinical symptoms (active stage) of level of some izotypes of immunoglobulines is reduced suddenly. The quantity of immunoglobulines in blood serum of sick animals which have leucosis is reduced on 35-41 per cent in comparison with their quantity in healthy animals. Such immunodeficite state is developing together with the leucosis processes and the development of constant lymphocytosis.
It was found out fifteen aminoacids in milk serum, sum of which in healthy cows consisted of 910,40±189,70 mg%, in groups of cows, which are found at pre-leucosis state and at the carly stage of leucosis, and their common quantity is exceeded to 992,25±232,01 mg%, at the same time as at the active stage of leucosis, the considerable diminishing of their quantity is coming to 686,04±173,96 mg%, that is on 224,10 mg% (24,62%) in comparison with the indicer in healthy animals.
Key words: Cattle, leucosis, blood, serum, milk , common protein, protein fraction, immunoglobulines, aminoacids.
Рецензент - к.б.н., доцент Турко 1.Б.
135
