CC BY
67
21. Sanchez O. Immunosuppressive therapy in connective tissue diseases-associated pulmonary arterial hypertension / O. Sanchez,
O. Sitbon, X. Jais [et al.] // Chest. - 2006. - V. 130, № 1. - P. 182-189.
22. Thabut G. Pulmonary hemodynamics in advanced COPD candidates for lung volume reduction surgery or lung transplantation / G. Thabut, G. Dauriat, J. B. Stern [et al.] // Chest. - 2005. - V. 127, № 5. - P. 1531-1536.
23. Tuder R. M. Exuberant endothelial cell growth and element of inflammation are present in plexiform lesions of pulmonary hypertension / R. M. Tuder, B. Groves, D. B. Badesch, N. F. Voelkel // Am. j. pathol. -1994. - V. 144. - P. 275-285.
24. Venugopal S. K. Demonstration that C-reactive protein decreases eNOS expression and bioactivity in human aortic endothelial cells / S. K. Venugopal, S. Devaraj, I. Yuhanna [et al.] // Circulation. -2002. - V. 106. - Р. 1439-1441.
25. Verma S. Endothelin antagonism and interleukin-6 inhibition attenuate the proatherogenic effects of C-reactive protein / S. Verma,
S. H. Li, M. V. Badiwala [et al.] // Circulation. - 2002. - V. 105. -Р. 1890-1896.
Поступила 01.10.2010
В. Н. НЕЛЮБИН1, В. П. МУДРОВ1, Р. И. СЕПИАШВИЛИ2
МЕСТНАЯ РЕГУЛЯЦИЯ ИММУННОГО ОТВЕТА ПРИ ГАСТРОДУОДЕНАЛЬНОЙ ПАТОЛОГИИ, ОБУСЛОВЛЕННОЙ HELICOBACTER PYLORI И ВИРУСАМИ ГЕРПЕСА
1НУЗ Центральная клиническая больница № 6 ОАО «РЖД»,
Россия, 109388, г. Москва, ул. Шоссейная, 43, тел. (495) 354-87-47. E-mail: vlnelyubin@mail.ru;
2Институт иммунофизиологии,
Россия, 117513, г. Москва, ул. Островитянова, 4
Обследовано 32 пациента с воспалительными заболеваниями желудка и двенадцатиперстной кишки. Методом ПЦР исследовали биоптаты из неизмененной слизистой оболочки (СО) и краевой зоны воспаления, а также мононуклеарные клетки периферической крови (МНК). Определяли наличие Helicobacter pylori (H. pylori) и вирусов группы герпеса. Экспрессию мРНК цитокинов: ИЛ-1Р, ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-6, ИЛ-10, Ил-18, ИФН-у, ФНО-а - определяли методом ПЦР в реальном времени. Результаты исследования биопсийного материала СО показали высокую частоту обнаружения (до 80%) патогенных штаммов H. pylori и вирусов герпеса (ЭБВ, ВГЧ-6, -7, -8) в различных сочетаниях. В зависимости от типа инфицирования (бактериальное, вирусное, смешанное) наблюдается различный спектр и уровень экспрессии мРНК цитокинов. При моноинфекции (бактериальной или вирусной) местная иммунная реакция развивается преимущественно по Th 1-му типу, при микст-инфекции - по Th 1-му и Th 2-му типам одновременно. В таких случаях необходим выбор адекватной антибактериальной и антивирусной терапии с индивидуальным подбором иммуномодуляторов.
Ключевые слова: ЖКТ, H. pylori, герпес-вирусы, цитокины, мРНК.
V. N. NELYUBIN1, V. P. MUDROV1, R. I. SEPIASHVILI2
LOCAL REGULATION OF IMMUNE RESPONSE ON GASTRODUODENAL PATHOLOGY, STIPULATED HELICOBACTER PYLORI AND HERPESVIRIDAE
1Central hospital № 6 of the Russian railways JSC,
Russia, 109388, Moscow, Shosseinaya str., 43, tel. (495) 354-87-47. E-mail: vlnelyubin@mail.ru;
2Institute of immunophisiology,
Russia, 117513, Moscow, Ostrovityanova str., 4
It was investigated 32 patients with the inflammatory diseases of stomach and duodenum. Biopsies from the normal mucous, from the zone of inflammation and the mononuclear cells of the peripheral blood (PBMC) was investigated by polymerase chain reaction (PCR). It was determined the presence of Helicobacter pylori (H. pylori) and Herpesviridae. Expression of mRNA of cytokines: IL-1p, IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-18, IFN-y, TNF-a was detected by real time PCR. Results of investigation biopsies was revealed high frequency finding (80%) pathogenic stamms of H. pylori and Herpesviridae (EBV, HHV-6, HHV-7, HHV-8) in various combinations. In dependency of infection’s type (bacterial, viral, mixed) different spectrum and level of mRNA citikines expression was observed. In mono-infection (bacterial or viral) it develop on Th 1- type, in mixt-infection - on Th 1 and Th 2 types simultaneously. In this cases it is necessary to select the adequate tactics of treatment with the designation both of antibacterial and antiviral medication with the individual selection of immunomodulators.
Key words: GUT, H. pylori, Herpesviridae, citokines, mRNA.
Эпидемиологическими исследованиями последних лет установлено, что в развитии хронических воспалительных заболеваний желудочно-кишечного тракта, гастродуоденальной области в частности, помимо основного этиологического фактора Helicobacter pylori
(H. pylori) [1, 2, 4] принимают участие вирусы группы герпеса (Epstein-Barr virus, Cytomegalovirus, Human herpes virus VI, VII). Выраженность воспалительных и деструктивных изменений слизистой оболочки при данной патологии коррелирует с наличием агрессивных
Кубанский научный медицинский вестник № 8 (122) 2010 УДК 616.33/.34-002+616.523]-08:615.372
Кубанский научный медицинский вестник № 8 (122) 2010
штаммов H. pylori (CagA+VacA+), а также с наличием вирусов в очаге поражения и их репертуаром [5, 6, 10].
Не исключено, что локально запускаемый цитокино-вый каскад играет ключевую роль в прогрессировании хронических воспалительных и деструктивных процессов в слизистой оболочке гастродуоденальной области. В связи с этим новым направлением в изучении данной патологии является изучение местной цитокиновой регуляции иммунного ответа.
Стимулирующее действие на выработку цитокинов клетками слизистой желудка инфицированных людей оказывают липополисахарид клеточной стенки H. pylori, уреаза, CagA-протеин и некоторые другие его антигены. В ответ на стимул синтезируются интерлейкины: ИЛ-1р, ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-10, ИЛ-12, ИЛ-18, ФНО-а [7, 8, 9 и др.]. Однако о влиянии вирусов группы герпеса на синтез цитокинов в слизистой оболочке известно значительно меньше, особенно в сочетании с H. pylori. В связи с этим целью нашего исследования стало изучение местной цитокиновой реакции в слизистой оболочке при инфицировании H. pylori и вирусами герпеса.
Материалы и методы
Обследовано 32 пациента с воспалительными заболеваниями желудка и двенадцатиперстной кишки. Степень повреждения слизистой желудочно-кишечного тракта (ЖКТ) оценивали по данным эзофагогастроду-оденоскопии (ЭГДС), цитологического и гистологического исследований. Для изучения брали биоптаты из области визуально не измененной слизистой оболочки и краевой зоны воспаления, а также мононуклеарные клетки периферической крови (МНК). Методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) определяли наличие Helicobacter pylori и вирусов группы герпеса: вирус простого герпеса 1-го и 2-го типов (ВПГ-1, 2), варицел-
ла зостер вирус (ВЗВ), вирус Эпштейна-Барр (ЭБВ), цитомегаловирус (ЦМВ), вирус герпеса человека 6, 7, и 8-го типов (ВГЧ-6, 7, 8) с использованием наборов реактивов отечественных производителей: «Литех», «ДНК-технология», «Биоком», «АмплиСенс». В МНК и биоптатах слизистой оболочки методом ПЦР в реальном времени определяли уровень экспрессии матричных РНК (мРНК) цитокинов: ИЛ-1р, ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-6, ИЛ-10, Ил-18, ИФН-у, ФНО-а. Статистические различия в количественной экспрессии мРНК оценивали по расширенному t-критерию [3].
Полученные результаты и обсуждение
Исследования биопсийного материала слизистой оболочки гастродуоденальной области показали высокую встречаемость, до 80%, патогенных штаммов H. pylori при хронических воспалительных заболеваниях желудка и двенадцатиперстной кишки. Однако необходимо отметить, что у 5 пациентов с воспалительными изменениями слизистой оболочки H. pylori обнаружен не был.
При эрозивно-язвенных изменениях слизистой оболочки была выявлена высокая частота обнаружения ульцерогенных штаммов cagA+ vacA+ - H. pylori, а при поверхностном гастрите обнаруживали преимущественно слабопатогенные cagA- vacA-штаммы.
Наряду с H. pylori в бипсийном материале обнаруживали наличие специфических участков ДНК вирусов герпеса: ЭБВ, ВГЧ-6 и ВГЧ-7. Вируса простого герпеса -1, 2 и ЦМВ не было обнаружено ни у одного из пациентов. При тестировании МНК на наличие инфекционных агентов была обнаружена персистенция фрагментов ДНК H. pylori и Herpesviridae в клетках периферической крови (таблица).
Проведенные исследования показали различие в характере инфицирования слизистой оболочки
Частота встречаемости H. pylori и вирусов герпеса в биоптате и клетках периферической крови
Hp ure Hp cagA Hp vac A ЭБВ ВГЧ-6 ВГЧ-7
Биоптат 80,6% 74,2% 74,2% 16,1% 33,3% 16,1%
МНК 13,3% 40,0% 25,8% 6,5% 32,3% 41,9%
12,0
10,0
8,0
6,0
4,0
2,0
□Биоптат СО норм. ■Биоптат СО восп.
ИЛ-1р ИЛ-2 ИЛ-4 ИЛ-6 ИЛ-10 ИЛ-18 ИФН-у ИФН-а
Рис. 1. Уровень экспрессии мРНК цитокинов при хеликобактерном инфицировании
0
148
12,0
10,0
8,0
6,0
4.0
2.0 0
Биоптат СО норм.
Биоптат СО восп.
ИЛ-1Р ИЛ-2 ИЛ-4 ИЛ-6 ИЛ-10 ИЛ-18 ИФН-у ИФН-a
Рис. 2. Уровень экспрессии мРНК цитокинов при герпес-вирусном инфицировании
45.0
40.0
35.0
30.0
25.0
20.0
15.0
10.0 5,0
0
□ Н. pilori
□ ЭБВ + ВГЧ-6, 7
□ ЭБВ + ВГЧ-6, 7 + Н. pilori
ИЛ-1Р ИЛ-2 ИЛ-4 ИЛ-6 ИЛ-10 ИЛ-18 ИФН-у ИФН-а
Рис. 3. Уровень экспрессии мРНК цитокинов при бактериальном, вирусном и вирусно-бактериальном инфицировании в очагах воспаления
обследованных больных - моноинфицирование H. pylori и вирусами герпеса, а также смешанное - бактериально-вирусное инфицирование. В соответствии с этим для дальнейшей работы пациентов разделили три группы:
1) моноинфекция H. pylori (6 чел.);
2) моноинфекция ЭБВ и ВГЧ-6, -7 типа (5 чел.);
3) микст-инфекция H. pylori и Herpesviridae (21 чел.).
При определении уровней экспрессии мРНК цитокинов в МНК периферической крови статистически значимых различий между группами обнаружено не было.
При сравнении профилей мРНК цитокинов в нормальной и деструктивно изменённой слизистой были получены следующие результаты.
При моноинфицировании H. pylori выявлена высокая экспрессия мРНК ИЛ-6, ИФН-у, ФНО-а в очаге воспаления (рис. 1).
При вирусном инфицировании выявлено повышение экспрессии мРНК ИЛ-1в, ИЛ-2, ИЛ-10, ИФН-у, ФНО-а, а также в очаге воспаления (рис. 2). Причем мРНК ИЛ-6 имел нулевую экспрессию как в неизмененной слизистой оболочке, так и в очаге воспаления, а мРНК ИЛ-4 показал высокий уровень экспрессии в неизмененной слизистой оболочке при нулевой в очаге воспаления.
Сравнение уровней экспрессии мРHK цитокинов
при различных вариантах инфицирования в очагах деструктивного воспаления слизистой оболочки показало, что высокий уровень экспрессии мРHK ИЛ-18 имеет
место при всех типах инфицирования. При вирусном
инфицировании местная иммунная реакция развивается преимущественно по Th 1-му типу с высокой экспрессией ИЛ-2, ИЛ-10, ИФ^у, ФHО-a, а при смешанной бактериально-вирусной инфекции наблюдаются
высокие уровни экспрессии мРHK всех исследованных
цитокинов (рис. 3).
В результате проведенных исследований было получено, что наряду с H. pylori в развитии хронических воспалительных заболеваний гастродуоденальной области принимают участие вирусы герпеса. Частота их выявления связана с характером и объемом деструктивных изменений слизистой оболочки.
Обнаружено, что не у всех пациентов с воспалительными изменениями слизистой оболочки определялся H. pylori. В этих случаях в слизистой оболочке определяли наличие одного или двух представителей вирусов герпеса.
В зависимости от типа инфицирования наблюдается различный спектр и уровень экспрессии мРHK
^банский научный медицинский вестник № 8 (122) 2010
УДК 618.29-007-07 Кубанский научный медицинский вестник № 8 (122) 2010
цитокинов в зоне воспаления слизистой оболочки ЖКТ. При бактериальном инфицировании H. pylori, как и при вирусной моноинфекции, местная иммунная реакция развивается преимущественно по Th 1-му типу с высокими уровнями экспрессии мРНК ИЛ-1Р, ИЛ-2, ИЛ-10, ИФН-у, ФНО-а.
Более пристального внимания заслуживает местная иммунная реакция при бактериально-вирусной коинфекции. Высокие уровни экспрессии мРНК исследованных цитокинов при смешанном инфицировании могут свидетельствовать о неадекватной иммунной реакции в очаге воспаления. Разнонаправленные иммунологические события, развивающиеся при бактериально-вирусном инфицировании, как по Th 1-му, так и по Th 2-му типу с высвобождением большого количества биологически активных веществ в пораженной слизистой оболочке, и обуславливают, по нашему мнению, развитие глубоких деструктивных процессов.
Таким образом, определение типа инфицирования при гастродуоденальной патологии имеет большое значение для выбора тактики лечения данных пациентов. В большинстве случаев не учитывается часто встречающийся бактериально-вирусный характер инфицирования слизистой оболочки при гастродуоденальной патологии, и в связи с этим применяются традиционные схемы лечения, направленные на эрадикацию только H. pylori. В комплексе диагностических мероприятий следует использовать методы, позволяющие выявлять не только H. pylori, но и возможную контаминацию вирусами. Такой подход позволит выбирать адекватную тактику лечения с назначением как антибактериальных, так и противовирусных препаратов с индивидуальным подбором иммуномодуляторов.
Коллектив авторов выражает благодарность сотруднику НИИ ФХМ (г. Москва) А. В. Чеканову за помощь в статистической обработке данных.
ЛИТЕРАТУРА
1. Андерсен Л., Норгаард А., Беннедсен М. Клеточный иммунный ответ организма на инфекцию Helicobacter pylori // Рос. журн. гастроэнтерол., гепатол., колопроктол. - 1999. - Т. IX, № 2. - С. 22-26.
2. Аруин Л. И., Капуллер Л. Л., Исаков В. А. Морфологическая диагностика болезней желудка и кишечника. - М.: Триада-Х, 1998. -496 с.
3. Дерффель К. Статистика в аналитической химии. - М.: Мир, 1994. - 242 с.
4. Исаков В. А., Домарадский И. В. Хеликобактериоз. - М.: Медпрактика-М, 2003. - 412 с.
5. Нелюбин В. Н., Мудров В. П. Бактериально-вирусное коин-фицирование слизистой оболочки при гастродуоденальной патологии // Иммунопатология, аллергология, инфектология. - 2004. -№ 2. - С. 111-115.
6. Gonelli A, Boccia S., Boni M. et al. Human herpesvirus 7 is latent in gastric mucosa // J. med. virol. - 2001 . - № 63 (4). - P. 277-283.
7. Lindholm C., QuidingJarbrink M., Lonroth H., Svennerholm A. M. Induction of chemokine and cytokine responses by Helicobacter pylori in human stomach explants // Scand. j. gastroenterol. - 2001. -№ 36 (10). - P. 1022-1029.
8. Scott Algood Н. M., Cover T. L. Helicobacter pylori persistence: an overview of Interactions between H. pylori and host immune defenses // Clinical microbiology reviews. - 2006. - Vol. 19, №. 4. -P. 597-613.
9. Stromberg E., Edebo A., Svennerholm A. M., Lindholm C. Decreased epithelial cytokine responses in the duodenal mucosa of Helicobacter pyloriinfected duodenal ulcer patients // Clin. diagn. lab. immunol. - 2003 Jan. - № 10 (1). - P. 116-124.
10. Tsamakidis K., Panotopoulou E., Demitroulopoloulos D. et al. Herpes simplex virus type 1 in peptic ulcer disease: an inverse association with Helicobacter pylori // World j. gastroenterol. - 2005. -№ 11 (42). - P. 6644-6649.
Поступила 26.10.2010
E. E. ПАНКОВА, С. А. МАТУЛЕВИЧ, Т. А. ГОЛИХИНА, М. В. КЛИПА
МОНИТОРИНГ ВРОЖДЁННЫХ ПОРОКОВ РАЗВИТИЯ В СИСТЕМЕ ОЦЕНКИ ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРЕНАТАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ
В КРАСНОДАРСКОМ КРАЕ
Краевая клиническая больница № 1 им. проф. С. В. Очаповского,
Кубанская межрегиональная медико-генетическая консультация,
Россия, 350086, г. Краснодар, ул. 1 Мая, 167. E-mail: kubanmgk@mail.ru
Для эффективной реализации задач генетического мониторинга наряду с врожденными пороками развития (ВПР) у новорожденных необходимо учитывать случаи ВПР у плодов, диагностированных при проведении пренатальной диагностики и элиминированных по медицинским показаниям на различных сроках беременности. По данным мониторинга, в Краснодарском крае за период 19992007 гг. общая частота полного спектра ВПР составила 19,77 V, 21-й формы ВПР строгого учета - 8,62V. Пренатальная диагностика способствовала уменьшению общей частоты ВПР у новорождённых до 16,18V и 21-й формы ВПР строгого учета - до 6,46V.
Ключевые слова: мониторинг, врожденные пороки развития, пренатальная диагностика.
E. E. PANKOVA, S. A. MATULEVICH, T. A. GLIKHINA, M. V. KLIPA
GENETIC MONITORING OF CONGENITAL MALFORMATIONS WITHIN THE PRENATAL DIAGNOSTICS EFFICIENCY ASSESSMENT SYSTEM IN KRASNODAR REGION
Regional clinical hospital № 1 by hym. prof. S. V. Ochapovskiy. Kuban interregional medico-genetic advice, Russia, 350086, Krasnodar, 1st of May street, 167. E-mail: kubanmgk@mail.ru
