CC BY
52
136 Clinical Medicine, Russian journal. 2017; 95(2)
_DOI http://dx.doi.org/10.18821/0023-2149-2017-95-2-136-139
Original investigations
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2017 Удк 616.634:577.175.44]-053.9-074
Коновалов С.С.1, Полякова В.О.23, дробинцева А.о.2, Кветной и.М.2'3, Кветная Т.В.3, Линькова Н.С.34
мелатонин: возможность анализа маркера возраст-ассоциированной патологии в буккальном эпителии и моче
'«Международная академия наук экологии, безопасности человека и природы», 199026, Санкт-Петербург, Россия; 2ФГБНУ «Научно-исследовательский институт акушерства, гинекологии и репродуктологии им. Д.О. Отта», 199034, Санкт-Петербург;
3ФГБУ «Санкт-Петербургский институт биорегуляции и геронтологии» СЗО РАН, 197110, Санкт-Петербург; 4ФГАОУ ВО «Санкт-Петербургский политехнический университет Петра Великого», 195251, Санкт-Петербург
Эпифизарный и экстраэпифизарный мелатонин является маркером темпа старения организма и позволяет оценивать функциональное состояние нейроиммуноэндокринной системы. В настоящей работе использованы новый метод неинвазивной оценки экспрессии экстраэпифизарного мелатонина в буккальном эпителии и определение основного метаболита эпифизарного мелатонина 6-сульфатоксимелатонина (6-СОМТ) в моче у людей пожилого возраста. Уровень мелатонина в буккальном эпителии в норме, ниже и выше ее выявлен соответственно у 20,5, 43,2 и 36,3% пациентов. Проведение такого комплексного исследования может быть рекомендовано для пациентов пожилого возраста при онкологических, нейродегенеративных, сердечно-сосудистых заболеваниях и возрастной макулодистро-фии. Кроме того, анализ экспрессии мелатонина в буккальном эпителии можно применять для интегральной оценки биоритмов организма у людей пожилого возраста.
Ключевые слова: мелатонин; буккальный эпителий; 6-сульфатоксимелатонин; патология; пожилой возраст. для цитирования: Коновалов С.С., Полякова В.О., Дробинцева А.О., Кветной И.М., Кветная Т.В., Линькова Н.С. Мелатонин: возможность анализа маркера возраст-ассоциированной патологии в буккальном эпителии и моче. Клин. мед. 2017; 95(2): 136—139. DOI http://dx.doi.org/10.18821/0023-2149-2017-95-2-136-139
для корреспонденции: Линькова Наталья Сергеевна — д-р биол. наук, доц. каф. «Медицинская физика» Санкт-Петербургского политехнического университета Петра Великого; e-mail: [email protected]
Konovalov S.S.1, Polyakova V.O.23, Drobintseva A.O.2, Kvetnoy I.M.23, Kvetnaia T.V.3, Linkova N.S.3-4
MELATONIN: THE POSSIBILITY TO ANALYSE THE MARKER OF AGE-RELATED PATHOLOGY IN THE BUCCAL EPITHELIUM AND URINE
'International Academy of Ecology, Human Safety and Nature Science, 199026 Saint Petersburg, Russia
2 D. O. Ott Research Institute of Obstetrics and Gynecology, 199034 Saint Petersburg, Russia
3 Saint Petersburg Institute of Bioregulation and Gerontology, 197110 Saint Petersburg, Russia
4 Peter the Great Saint-Petersburg Polytechnical University, 195251 Saint Petersburg, Russia
Extrapineal and pineal melatonin is the marker of the aging rate of organism making it possible to characterize functional condition of the neuro-immuno-endocrine system. In this article we have used the new method for non-invasive diagnostics of melatonin expression in buccal epithelium and determination of the main melatonin metabolite 6-hydroxymelatonin sulfate (6-HMS) in urine of elderly people. Normal, impaired and enhanced melatonin expression was documented in 20.5%, 43.2% and 36.30% of the patients respectively. Such comprehensive melatonin and 6-COMT studies can be recommended for elderly patients with oncological, neurodegenerative, cardiovascular diseases, and ageing macular dystrophy. Moreover, melatonin expression analysis in buccal cells can be used for integral investigation of biorhythms in elderly people. K e y w o r d s: melatonin; buccal epithelium; 6-HMS; pathology; elderly age.
For citation: Konovalov S.S., Polyakova V.O., Drobintseva A.O., Kvetnoy I.M., Kvetnaia T.V., Linkova N.S. Melatonin:
the possibility to analyse the marker of age-related pathology in the buccal epithelium and urine Klin. med. 2017; 95(2): 136—139.
DOI http://dx.doi.org/10.18821/0023-2149-2017-95-2-136-139
For correspondence: Natalya S. Linkova — Sc.D., assistant professor of the department of Medical Physics Peter the Great Saint Petersburg Polytechnic University, E-mail: [email protected]
Conflict of interest. The authors declare no conflict of interest. Acknowledgments. The study had no sponsorship.
Received 15.02.16 Accepted 22.03.16
Мелатонин — гормон шишковидной железы, который участвует в регуляции функций иммунной, нервной и эндокринной систем, оказывает пролиферотроп-ное действие, модулируя дифференцировку и апоптоз клеток, участвует в регуляции зрительной функции, снижает уровень холестерина, повышает устойчивость организма к стрессам и высоким физическим нагрузкам, способствует нормализации артериального давления [1, 2]. Мелатонин является маркером старения
организма, так как снижение ночного пика секреции этого гормона у людей старше 60 лет играет ведущую роль в нарушении циркадианных ритмов организма и приводит к ускоренному старению нейроиммуноэн-докроинной системы [3]. Мелатонин является эндогенным антиоксидантом и способствует связыванию свободных радикалов (гидроксильная группа, синглет-ный кислород, пероксинитрит) [4]. Выявлено стимулирующее действие мелатонина на активность антиок-
Клиническая медицина. 2017; 95(2)
РР! http://dx.doi.org/10.18821/0023-2149-2017-95-2-136-139
Оригинальные исследования
сидантной системы (ферменты супероксиддис-мутаза, глутатионпероксидаза, глутатионредуктаза, глюкозо-6-фосфат-дегидрогеназа) и подавляющее действие на прооксидантный фермент КО-синтазу [5]. Во многих исследованиях показан противоопухолевый эффект ме-латонина, который опосредован его влиянием на секре -цию гипофизарных и половых гормонов, вовлеченных в рост опухолей, и модуляцию иммунного ответа [6, 7]. Известно, что 6-сульфатоксимелатонин (6-СОМТ) является основным метаболитом мелатонина и уровень его экскреции с мочой отражает уровень синтеза мелатонина в шишковидной железе [8, 9].
Экстрапинеальный мелатонин широко распространен в организме человека и животных: клетки, продуцирующие мелатонин, обнаружены в слизистой оболочке желудочно-кишечного тракта и дыхательных путей, в поджелудочной железе, надпочечниках, щитовидной железе, тимусе, мозжечке, мочеполовой системе, плаценте и других органах. Более того, показана активная продукция мелатонина в неэндокринных клетках — тучных клетках, естественных киллерах, эозинофильных лейкоцитах, тромбоцитах, эндотелио-цитах, буккальном эпителии (БЭ) [10, 11]. Широкое рас -пространение экстраэпифизарного мелатонина в организме отражает его ключевую роль как межклеточного нейроэндокринного регулятора и координатора многих сложных и взаимосвязанных биологических процессов [12—14]. Верификация экспрессии мелатонина в БЭ открывает новые возможности для неинвазивной оценки уровня экстраэпифизарного мелатонина [15—17]. Кроме того, изменения функциональной активности клеток БЭ (экспрессия различных сигнальных молекул, процессы клеточного обновления и дифференцировки) во многом отражают состояние локального и системного гомеостаза организма и его нарушения при патологических состояниях [17—20].
Целью исследования было сравнение показателей экспрессии мелатонина в БЭ и экскреции 6-СОМТ с мочой у людей пожилого возраста с различными соматическими заболеваниями.
Материал и методы
В исследовании приняли участие 44 человека (40 женщин и 4 мужчины) в возрасте от 60 до 74 лет. Средний возраст пациентов составил 69,3 ± 3,2 года. У всех пациентов выявлены характерные возрастные заболевания сердечно-сосудистой, опорно-двигательной, эндокринной и иммунной систем. В среднем на одного пациента приходилось 3—4 заболевания. Заболевания сердечно-сосудистой системы (артериальная гипертен-зия, ишемическая болезнь сердца, аритмия) выявлены у 39 пациентов. Заболевания опорно-двигательного аппарата (остеохондроз, остеоартроз) обнаружены у 34 пациентов. У части пациентов выявлены онкологические заболеваниям, такие как колоректальный рак (у 1), рак прямой кишки (у 1), меланома (у 1), рак простаты (у 1), рак молочной железы (у 2), рак вульвы (у 1), базально-
клеточный рак кожи (у 22). Кроме того, у испытуемых встречались такие заболевания, как рассеянный склероз (у 1), миома и фибромиома матки (у 2), последствия перенесенного полиомиелита с нижним вялым пара-парезом (у 1), врожденная аномалия развития сосудов (у 1), аутоиммунный тиреоидит и узловой зоб (у 4), сахарный диабет (у 7), бронхиальная астма (у 3), псориаз (у 1), макулодистрофия (у 23), глаукома (у 4), катаракта (у 3), доброкачественная энходрома костей (у 1).
Анализ экспрессии мелатонина в буккальном эпителии. БЭ получали с внутренней поверхности щеки через 4 ч после промывания полости рта физиологическим раствором. Цитологические мазки были приготовлены с использованием метода жидкостной цитологии на основе автоматизированной системы Novaprep «NRS» (Франция). Образцы БЭ промывали в фосфатно-солевом буфере (PBS) и ресуспендировали в 10 мл фиксирующего раствора (4% раствор формальдегида и 0,1% раствор глутарового альдегида) в течение 10 мин. После фиксации в клеточную суспензию добавляли PBS, центрифугировали и дважды промывали PBS. Далее клетки БЭ пермеабилизировали с помощью 0,03% раствора Triton X-100 (Sigma, США) в течение 20 мин. Суспензию клеток дважды промывали PBS, затем мазки помещали на предметные стекла. Имму-нофлюоресцентную конфокальную микроскопию проводили с использованием первичных антител к мелато-нину (1:75, Dako) и наборов для иммунофлюоресцент-ной визуализации щелочной фосфатазы Vector Red. На микрофотографиях зеленая флюоресценция соответствует проявлению вторичных антител AlexaFluor488 (экспрессия мелатонина), ядра клеток окрашены DAPI (синяя флюоресценция). Изучение препаратов проводили в конфокальном микроскопе Olympus FluoView FV1000 при увеличении в 200 раз, морфометрический анализ изображений — в программе «Видеотест-Морфология 5.2» по показателю оптической плотности экспрессии (в условных единицах — усл.ед.).
Анализ экскреции 6-сульфатоксимелатонина с мочой. Метод определения уровня экскреции 6-СОМТ отличается высокой чувствительностью, и параметры ночного содержания указанного метаболита в моче коррелируют с содержанием мелатонина в плазме крови [18]. В связи с тем что в литературе отсутствуют данные о достоверных гендерных различиях в секреции мелатонина, в группы сравнения включались как мужчины, так и женщины соответствующего возраста. Мы использовали биохимический метод оценки этого показателя. Концентрацию экскретируемого 6-СОМТ в ночной моче оценивали у всех пациентов методом иммуноферментного анализа с использованием тест-системы IBL: melatonin sulfat 6-sulfatoxymelatonin, ELISA (Германия).
Для проведения исследования собирали общую (интервал сбора 8 ч — с 23 до 7 ч) порцию мочи с обязательным указанием ее объема. Во время ночного сбора мочи исключали воздействие света на сетчатку. Со-
Clinical Medicine, Russian journal. 2017; 95(2) DOI http://dx.doi.org/10.18821/0023-2149-2017-95-2-136-139
Original investigations
50 4СЧ 30 20 100
44,44
44,44
11,12
50 40 302010 0
42,10
31,60
26,30
Нормальный Выше нормы Ниже нормы
Рис. 2. Экскреция 6-СОМТ с мочой у пациентов пожилого возраста с экспрессией мелатонина в БЭ, соответствующей возрастной норме.
31,25
18,75
Нормальный Выше нормы Ниже нормы
Рис. 3. Экскреция 6-СОМТ с мочой у пациентов пожилого возраста с экспрессией мелатонина в БЭ ниже возрастной нормы.
50,00
50-, 4030 20100-
Нормальный Выше нормы Ниже нормы
Рис. 4. Экскреция 6-СОМТ с мочой у пациентов пожилого возраста с экспрессией мелатонина в БЭ выше возрастной нормы.
бранную мочу центрифугировали в течение 1 мин при 12 000 g и отбирали аликвоты (10 мкл) в микропробирки с крышкой. Часовую экскрецию 6-СОМТ определяли, исходя из расчета: общий объем мочи за ночь (в мл) концентрация 6-СОМТ (в нг/мл)/8 ч, и получали показатель часовой экскреции 6-СОМТ (в нг/ч).
Исследование проводили в сравнении с возрастными нормами содержания мелатонина в БЭ. В проведенном ранее исследовании нами было установлено, что для людей в возрасте от 60 до 74 лет нормой содержания мелатонина в БЭ является интервал от 1,2 до 1,7 усл.ед., для людей старше 70 лет — от 0,8 до 1,2 усл. ед. Нормальной экскрецией 6-СОМТ с мочой для людей пожилого возраста в ночное время суток считается 380—800 нг/ч, в дневное время — 380—400 нг/ч [18]. Все пациенты заполняли анкеты, в которых указывали свой возраст, место проживания, информацию о заболеваниях, данные о приеме лекарственных препаратов, наличии проблем со сном и условиях сна. Для оценки межгрупповых различий применяли /-критерий Стью-дента. Статистическую обработку результатов проводили в программах MS Excel и Prizma 6.
Результаты и обсуждение
У 17 (38,64%) из 44 пациентов, принимавших участие в исследовании, показатели экспрессии мелато-нина в БЭ и экскреции 6-СОМТ с мочой соответствовали возрастным нормам. У 27 (61,36%) пациентов эти показатели возрастным нормам не соответствовали. У 19 (43,2%) пациентов отмечен пониженный показатель экспрессии мелатонина в БЭ, у 16 (36,6%) пациентов уровень мелатонина в БЭ был выше возрастной нормы, у 20,5% пациентов уровень мелатонина в БЭ соответствовал возрастной норме. Уровень мелатонина в БЭ, соответствующий возрастной норме, отмечен у 9 (20,5%) из 44 пациентов. При этом у 4 пациентов из этой группы отмечался и нормальный уровень экскреции 6-СОМТ. У 4 пациентов уровень экскреции 6-СОМТ был выше возрастной нормы (от 1745 до 5024 нг/ч), у одной на фоне нормального содержания мелатонина в БЭ отмечался низкий уровень экскреции 6-СОМТ (303 нг/ч; рис. 1 на 3-й странице обложки, рис. 2).
В группе пациентов с показателем экспрессии ме-латонина в БЭ, соответствующим возрастной норме, только у 2 пациенток выявлены онкологические забо-
левания (базально-клеточный рак кожи), а также глаукома, катаракта, повышено артериальное давление, желчнокаменная болезнь. У одной пациентки в возрасте 66 лет из этой группы испытуемых наблюдался низкий уровень экскреции 6-СОМТ (303 нг/ч). Основные заболевания, указанные ею в анкете, — цереброваску-лярная болезнь и неврит тройничного нерва. Высокий уровень экскреции 6-СОМТ отмечался у пациентки 63 лет, страдающей фибромиомой матки (5024 нг/ч), и у пациентки 79 лет, страдающей катарактой и глаукомой (1745,6 нг/ч). Практически у всех пациентов этой группы отмечены нарушения сна.
Уровень мелатонина в буккальном эпителии ниже возрастной нормы. У 19 (43,2%) пациентов выявлен пониженный (относительно возрастной нормы) уровень МТ в БЭ (рис. 3). У 5 пациентов этой группы выявлен пониженный уровень экскреции 6-СОМТ. У 6 пациентов уровень экскреции 6-СОМТ соответствовал возрастной норме, а у 8 испытуемых экскреция 6-СОМТ была повышена, причем повышение отмечалось в диапазоне от 848 до 91 941 нг/ч (см. рис. 3). У 2 пациентов из группы с низким показателем экспрессии мелатонина в БЭ отмечены онкологические заболевания (рак прямой кишки I стадии и рак молочной железы в фазе ремиссии). Из числа других заболеваний выявлены рассеянный склероз, аутоиммунный ти-реоидит и узловой зоб, бронхиальная астма, псориаз, доброкачественная энхондрома бедренной кости и ма-кулодистрофия; 5 из 19 пациентов этой группы имели нарушения сна.
Уровень мелатонина в буккальном эпителии выше возрастной нормы. У 16 (36,3%) из 44 пациентов выявлен более высокий (относительно возрастной нормы) уровень мелатонина в БЭ. У пациентов этой группы отмечены онкологические заболевания (колоректальный рак, меланома кожи, рак простаты, рак вульвы, базально-клеточный рак кожи), заболевания опорно-двигательной и сердечно-сосудистой систем, макулодистофия, глауко -ма, последствия нейроинфекции с нижним вялым пара-парезом, кохлеовестибулярный синдром и сенситивная атаксия. У 8 пациентов этой группы обаружен более высокий (относительно возрастной нормы) уровень экскреции 6-СОМТ. Другие 8 пациентов при высоком уровне мелатонина в БЭ имели нормальный (у 5) и низкий (у 3) уровень экскреции 6-СОМТ (рис. 4). У пациентов этой
Клиническая медицина. 2017; 95(2)
DOI http://dx.doi.org/10.18821/0023-2149-2017-95-2-136-139
Оригинальные исследования
группы нарушений сна не наблюдалось.
В заключение следует отметить, что неинвазивная оценка экспрессии мелатонина в БЭ и определение экскреции метаболита мелатонина 6-СОМТ с мочой у людей пожилого возраста являются взамодополняющими исследованиями, первое из которых позволяет оценить особенности синтеза экстраэпифизарного мелатонина, а второе — синтез мелатонина в шишковидной железе. Эти исследования не могут заменить друг друга, но, применяемые совместно, позволяют провести интегральную оценку темпа старения и функционального состояния организма. Проведение такого комплексного исследования может быть рекомендовано при онкологических, нейродегенеративных, сердечно-сосудистых заболеваниях и возрастной макулодистрофии. Установлено, что у пациентов с повышенной (относительно возрастной нормы) экспрессией мелатонина в БЭ не наблюдается нарушения цикла сон—бодрствование, а уровень экскреции 6-СОМТ соответствует возрастной норме. Эти данные позволяют использовать анализ экспрессии мелатонинав БЭ для интегральной оценки биоритмов организма у людей пожилого возраста, что подтверждает ранее высказанные гипотезы о применении БЭ при многих диагностических исследованиях.
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Финансирование. Отсутствует.
ЛИТЕРАТУРА
(остальные источники см. в REFERENCES)
1. Арутюнян А.В., Степанов М.Г., Керкешко Г.О., Айламазян Э.К. Нарушение гипоталамической регуляции репродуктивной функции при воздействии нейротоксических соединений и мелатонина. Журнал акушерства и женских болезней. 2003; (2): 77—80.
2. Пальцев М.А., Кветной И.М. Руководство по нейроиммуно-эндокринологии. 3-е изд. М.: ЗАО «Шико»; 2014.
6. Пальцев М.А., Кветной И.М., Полякова В.О., Гурко Г.И., Мур-салов С.У Нейроиммуноэндокринные механизмы старения и возрастной патологии. СПб.: Наука; 2012.
7. Хавинсон В.Х., Коновалов С.С. Избранные лекции по геронтологии. СПб.: Прайм-Еврознак; 2009.
8. Линькова Н.С., Полякова В.О., Кветной И.М. Особенности эпифизарно-тимических взаимоотношений при старении. Успехи геронтологии. 2011; 24(1): 38—42.
9. Линькова Н.С. Возможности взаимной компенсации функций эпифиза и тимуса при их возрастной инволюции. Профилактическая и клиническая медицина. 2011; (4): 113—6.
15. Кветная Т.В., Линькова Н.С., Седов Е.В., Мурсалов С.У., Козлов К.Л. Экспрессия факторов дифференциации и ремоде-лирования межклеточного матрикса в буккальном эпителии человека при старении. Успехи геронтологии. 2013; 26(3): 432— 6.
16. Коновалов С.С., Литвякова О.М., Линькова Н.С., Седов Е.В., Кветная Т.В., Мурсалов С.У. и др. Иммуноцитохимическое исследование буккального эпителия: оптимизация диагностики рака молочной железы. Молекулярная медицина. 2012; (6): 57—9.
17. Пальцев М.А., Кветной И.М., Полякова В.О., Коновалов С.С., Литвякова О.М., Линькова Н.С. и др. Сигнальные молекулы в буккальном эпителии оптимизация диагностики социально значимых заболеваний. Мол. мед. 2012; (4): 18—23.
18. Седов Е.В., Линькова Н.С., Козлов К.Л., Кветная Т.В., Коновалов С.С. Буккальный эпителий как объект оценки биологи-
ческого возраста и темпа старения организма. Успехи геронтологии. 2013; 26(4): 610—3.
19. Ермаченков М.Н., Гуляев А.В., Арутюнян А.В., Милютина Ю.П., Анисимов В.Н. Возрастные изменения экскреции 6-суль-фатоксимелатонина у больных раком желудка и у больных раком толстой кишки. Успехи геронтологии. 2012; 25(2): 244—9.
REFERENCES
1. Arutyunyan A.V., Stepanov M.G., Kerkeshko G.O., Aylamazy-an E.K. Disorder of hypothalamic regulation of reproduction function during of neurotoxic drugs and melatonin activity. Zhurnal akusherstva i zhenskikh bolezney. 2003; 2: 77—80. (in Russian)
2. Pal'tsev M.A., Kvetnoy I.M. The Application of Neuro-immuno-endocrinology. 3rd Ed. Moscow; 2014. (in Russian)
3. Bubenik G.A., Konturek S.J. Melatonin and aging: prospects for human treatment. J. Physiol. Pharmacol. 2011; 62(1): 13—9.
4. Karaaslan C., Suzen S. Antioxidant properties of melatonin and its potential action in diseases. Curr. Top. Med. Chem. 2015; 15(9): 894—903.
5. Pandi-Perumal S.R., Daniel P. Cardinali Melatonin: From Molecules to Therapy. Nova Publishers; 2007.
6. Pal'tsev M.A., Kvetnoy I.M., Polyakova V.O., Gurko G.I., Mursa-lov S.U. Neuro-immuno-endocronology Mechanisms of Aging and Age-related Diseases. St. Perersburg: Nauka; 2012. (in Russian)
7. Khavinson V.Kh., Konovalov S.S. The Select Lections of Gerontology. St. Petersburg: 2009. (in Russian)
8. Lin'kova N.S., Kvetnoy I.M., Polyakova V.O. Special aspects of pineal gland and thymic relationships during aging. Uspekhi geron-tologii. 2011; 24(1): 38—42. (in Russian)
9. Lin'kova N.S. Abilities of compensation of pineal gland and thymus function and its age-related pathology. Profilakticheskaya i klinicheskaya meditsina. 2011; (4): 113—6. (in Russian)
10. Kvetnoy I.M., Hernández-Yago J., Hernández J.M., Kvetnaya T.V., Reiter R.J., Khavinson V.K. Diffuse neuroendocrine system and mitochondrial diseases: molecular and cellular bases of pathogen-esis, new approaches to diagnosis and therapy. Neuro Endocrinol. Lett. 2000; 21(2): 83—99.
11. Kvetnoy I.M., Ingel I.E., Kvetnaya T.V., Malinovskaya N.K., Rapoport S.I., Raikhlin N.T. et al. Gastrointestinal melatonin: cellular identification and biological role. Neuro Endocrinol. Lett. 2002; 23(2): 121—32.
12. Khavinson V.Kh., Lin'kova N.S. Morphofunctional and molecular bases of pineal gland aging. Hum. Physiol. 2012; 38(1): 101—7.
13. Khavinson V.Kh., Lin'kova N.S., Kvetnoy I.M., Kvetnaya T.V., Polyakova V.O., Korf H.W. Molecular cellular mechanisms of pep-tide regulation of melatonin synthesis in pinealocyte culture. Bull. Exp. Biol. Med. 2012; 153(2): 255—8.
14. Sookprasert A., Johns N.P., Phunmanee A., Pongthai P., Cheaw-chanwattana A., Johns J. et al. Melatonin in patients with cancer receiving chemotherapy: a randomized, double-blind, placebo-controlled trial. Anticancer Res. 2014; 34(2): 7327—37.
15. Kvetnaya T.V., Lin'kova N.S., Sedov E.V., Mursalov S.U., Ko-zlov K.L. The expression of differential and matrix remodelling factors in human buccal epithelium in aging. Uspekhi gerontologii 2013; 26(3):432—6. (in Russian)
16. Konovalov S.S., Litvyakova S.S., Lin'kova n.S., Sedov E.V., Kvetnaya T.V., Mursalov S.U. et al. Immunocytochemic investigation of buccal epithelium: optimization of breast cancer diagnostics. Mol. Med 2012; 6: 57—9.
17. Pal'tsev M.A., Kvetnoy I.M., Polyakova V.O., Konovalov S.S., Litvyakova O.M., Lin'kova N.S. et al. Signal molecules in buccal epithelium: optimization of diagnostics social-significant diseases. Mol. Med. 2012; (4): 18—23. (in Russian)
18. Sedov E.V., Lin'kova N.S., Kozlov K.L., Kvetnaya T.V., Konovalov S.S. Buccal epithelium as an object for testing of biological age and the speed of aging. Uspekhi gerontologii. 2013;26(4): 610—3. (in Russian)
19. Ermachenkov M.N., Gulayev A.V., Arutyunyan A.V., Milyutina Ju. P., Anisimov V.N. Age-related changes of 6-oksysilphatmelatonin excretion in intestine cancer and rectum cancer patients. Uspekhi geontologii. 2012; 25(2): 24—9. (in Russian)
20. Paakkonen T. Urinary melatonin: a noninvasive method to follow humanpineal function as in three experimental conditions. J. Pineal. Res. 2006; 40: 110—5.
Поступила 05.02.16 Принята в печать 22.03.16
