Научная статья на тему 'Механохимическая солюбилизация диоксида кремния полифенольными соединениями в составе растительного сырья'

Механохимическая солюбилизация диоксида кремния полифенольными соединениями в составе растительного сырья Текст научной статьи по специальности «Промышленные биотехнологии»

CC BY
586
98
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.
Журнал
Химия растительного сырья
Scopus
ВАК
AGRIS
CAS
RSCI
Ключевые слова
ДИОКСИД КРЕМНИЯ / КАТЕХИНЫ ЗЕЛЕНОГО ЧАЯ / МЕХАНОХИМИЧЕСКАЯ АКТИВАЦИЯ / РАСТВОРЕНИЕ

Аннотация научной статьи по промышленным биотехнологиям, автор научной работы — Шаполова Елена Геннадиевна, Ломовский Олег Иванович

Mеханохимическое взаимодействие аморфного диоксида кремния с катехинами растительного сырья использовано для растворения диоксида кремния при нейтральном рН. На основе изучения кинетики растворения модельных систем «диоксид кремния пирокатехин» предложен механизм взаимодействия полифенолов с диоксидом кремния, включающий взаимодействие гидроксильных групп на поверхности кремнезема с полифенолами, образование поверхностных комплексов и переход комплексов в раствор. Механохимическая обработка пирокатехина, природных катехинов в составе растительного сырья с аморфным диоксидом кремния приводит к увеличению скорости растворения вследствие образования хелатных комплексов.

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Похожие темы научных работ по промышленным биотехнологиям , автор научной работы — Шаполова Елена Геннадиевна, Ломовский Олег Иванович

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Текст научной работы на тему «Механохимическая солюбилизация диоксида кремния полифенольными соединениями в составе растительного сырья»

Химия растительного сырья. 2011. №4. С. 145-152.

УДК 547.458.8 + 577.15

МЕХАНОХИМИЧЕСКАЯ СОЛЮБИЛИЗАЦИЯ ДИОКСИДА КРЕМНИЯ ПОЛИФЕНОЛЬНЫМИ СОЕДИНЕНИЯМИ В СОСТАВЕ РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ

© Е.Г. Шаполова1’2, О.И. Ломовский1

1 Институт химии твёрдого тела и механохимии СО РАН, ул. Кутателадзе,

18, Новосибирск, 630128 (Россия)

2НОЦ «Молекулярный дизайн и экологически безопасные технологии», ул. Пирогова, 2, Новосибирск, 630090 (Россия), e-mail: shapolova@solid.nsc.ru

Механохимическое взаимодействие аморфного диоксида кремния с катехинами растительного сырья использовано для растворения диоксида кремния при нейтральном pH, На основе изучения кинетики растворения модельных систем «диоксид кремния - пирокатехин» предложен механизм взаимодействия полифенолов с диоксидом кремния, включающий взаимодействие гидроксильных групп на поверхности кремнезема с полифенолами, образование поверхностных комплексов и переход комплексов в раствор, Механохимическая обработка пирокатехина, природных катехи-нов в составе растительного сырья с аморфным диоксидом кремния приводит к увеличению скорости растворения вследствие образования хелатных комплексов,

Ключевые слова: диоксид кремния, катехины зеленого чая, механохимическая активация, растворение,

Работа выполнена при поддержке гранта: CRDFROXO-OO8-NO-O6.

Введение

Ежедневное поступление кремния необходимо для нормального развития и жизнедеятельности человека и животных. Этот элемент способствует биосинтезу коллагена, кальцификации костей, входит в состав эластина кровеносных сосудов, придавая им, эластичность и непроницаемость, улучшает усвоение фосфатов растениями, защищает их от грибковых инфекций [1-5]. Наибольшей биологической эффективностью обладают органические производные ортокремневой кислоты - эфиры с белками и полисахаридами, эфиры оксикарбоновых и оксибензойных кислот, эфиры и комплексы полифенолов [6].

Механическое взаимодействие используется для модификации физических и химических свойств веществ, определяющих биологическую доступность, активность и устойчивость. Биологическая доступность и активность вещества возрастает с увеличением его растворимости и скорости растворения. Меха-нохимический подход обеспечивает селективное получение молекулярных комплексов, свойства которых с практической точки зрения предпочтительны по сравнению с индивидуальными соединениями. В ряде случаев удается направленным образом изменить биологическую активность, снизить токсический эффект или достигнуть синергизма действия нескольких компонентов [7-9].

В соединениях кремнезема хелатного типа с кислород- и азотсодержащими органическими соединениями атом кремния координирован шестью полярными атомами. Условиями образования хелатных комплексов являются отсутствие пространственных ограничений и нужная ориентация координированных атомов в хелатирующем агенте. Этим требованиям отвечают ароматические соединения, содержащие гидроксильные группы в ортоположении. В структуре пирокатехина и его производных гидроксильные группы располагаются в плоскости кольца, расстояние кислород-кислород равно расстоянию между атомами кислорода в структуре с октаэдрической координацией атомов кремния.

* Автор, с которым следует вести переписку,

Обычно для получения хелатных комплексов кремния используют методы, основанные на взаимодействии реагентов в водных растворах оснований при длительном нагревании [10-12]. Полифенолы в жидкой фазе легко окисляются и полимеризуются, поэтому актуален поиск методов синтеза, лишенных побочных реакций. В ходе твердофазного механохимического синтеза реагенты и продукты находятся в устойчивой к окислению твердой форме, что позволяет предотвратить потери полифенолов в побочных реакциях [13].

Цель данной работы - экспериментальное изучение механохимических реакций между диоксидом кремния и полифенольными соединениями, протекающих с образованием растворимых хелатированных форм диоксида кремния и разработка способа получения препарата из растительного сырья, содержащего водоростворимые формы диоксида кремния.

В качестве модельных систем выбраны силикагель и пирокатехин, как простейшее хелатирующее фенольное соединение. Однако использование комплексов на основе пирокатехина для биологических систем затруднено тем, что пирокатехин менее устойчив к окислению, чем его производные. Проблему решает использование природных аналогов пирокатехина, содержащих гидроксильные группы в ортоположении. Одним из основных источников таких полифенолов, обладающих антиоксидантной активностью, является зеленый чай.

В зеленом чае присутствует от 4 до 12 различных типов катехинов. Их концентрация может изменяться от 10 до 300 мг на грамм сухого чая. В среднем общее содержание катехинов в чае составляет 12%. Около 95% всех катехинов приходится на 4 главных компонента: эпикатехин (2-8%), эпигаллокатехин (I) (9-12%), эпикатехингаллат (8-19 %) и эпигаллокатехингаллат (II) (54-70%) [14].

Разработка простого метода получения препаратов кремния, растворяющихся при нормальных условиях и нейтральном pH с образованием мономерных форм диоксида кремния, открывает перспективы для профилактической медицины, животноводства и растениеводства.

Экспериментальная часть

Реактивы и материалы: силикагель для хроматографии фракции 325-200 мкм с удельной поверхность 290 м2/г, пирокатехин 99% чистоты (Alfa Aesar), молибдат аммония х.ч. ГОСТ 3765-78, серная кислота х.ч. ГОСТ 4204 («Реахим»), аскорбиновя кислота ГОСТ 4815 ч.д.а., щавелевая кислота х.ч. ГОСТ 22180-76, ацетат аммония ч. ГОСТ 3117-78, аммиак х.ч. ГОСТ 3760-79, силикат натрия ГОСТ 50418-92, бромид калия о.с.ч. 22-3, ГОСТ 4160-74, формалин х.ч. ГОСТ 1625-89 («Реахим»), ацетонитрил (Сорт 1, «Криохром», РФ), бидистиллированная вода ГОСТ 6709-72, порошок зеленого чая Camelia sinensis (L.), содержащий порядка 12-15% катехинов, производство «Дагомысчай» (Краснодарский край).

Механическая обработка силикагеля с полифенольными соединениями. Механическую обработку проводили в вибрационной мельнице SPEX Mill 8000 (США) и планетарно-центробежной мельнице АГО-2 (ИХТТМ СО РАН, Новосибирск) с водяным охлаждением барабанов. Для механохимической обработки в Spex Mill 8000 использовали стальной барабан (стальные сферические мелющие тела 0 5 мм, 50 г). Ускорение рабочих тел приблизительно 8-10 g. Условия механической обработки в АГО-2: частота вращения барабанов - реакторов 630 мин-1, обеспечивающая расчетное ускорение рабочих тел 20 g. Вместимость барабанов 40 мл. Загрузка шаров диаметром 5 мм в стандартный стальной барабан АГО-2 состав-

он

эпигаллокатехин (I)

он

эпигаллокатехингаллат (II)

ляли 200 г. Соотношение масс шаров и навески реагентов 50 : 1, массовое соотношение реагентов 10 : 1. Время пребывания обрабатываемого материала в зоне воздействия - 40-120 сек.

Исследование растворения диоксида кремния. Растворение полученных образцов осуществляли в

0.01 M буфере на основе ацетата аммония при постоянном перемешивании магнитной мешалкой при 600 мин-1, гидромодуле 1000 и температуре 25 °С. pH раствора контролировали с помощью ионометра-кондуктометра «Анион-4100». Через каждые 10-30 мин отбирали пробы, которые центрифугировали в течение 5 мин (7000 мин-1). Супернатант использовали для спектрофотометрического анализа.

Удельную поверхность образцов определяли по тепловой десорбции аргона на приборе «Сорбиметр М» («Катакон», Россия).

Определение содержания растворимых мономерных форм кремния спектрофотометрическим методом. Анализ содержания мономерных форм кремния проводили фотометрическим методом [15] на спектрофотометре UNICO-2800 (США). Проведена оптимизация методики с учетом специфики используемых реагентов и механически активированных образцов. Для устранения мешающего действия свободных фенолов, которые образуют с молибдатом аммония желтые комплексы, выбран раствор формалина.

В пробирку на 5 мл отбирали 350 ці исследуемого раствора. Затем добавляли кислый раствор мо-либдата аммония (0,5 M) 150 ці и выдерживали 10 мин для того, чтобы образовался желтый кремниймо-либденовый комплекс. Далее добавляли 100 ці раствора формалина (40%) и выдерживали еще 10 мин. После этого к раствору прибавляли 3,15 мл воды и 300 ці восстановителя - смеси аскорбиновой (0,4 М) и щавелевой кислот (0,7 М). Через 30 мин проводили фотометрическое измерение при длинах волн 810 и 1000 нм, длина оптического пути составляла 10 мм.

При каждом фотометрическом определении одновременно с исследованием растворов проводили калибровку на стандартном растворе, по которой и рассчитывалось содержание кремния. Построение калибровочного графика проводили с использованием градуировочных растворов в диапазоне концентраций от 400 до 3200 мкг/мл.

Определение содержания галлокатехинов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Метод ВЭЖХ использовали для определения состава галлокатехинов чая, способных вступать в реакцию ком-плексообразования, и изучения устойчивости полифенольных соединений при механической обработке.

ВЭЖХ - анализ галлокатехинов растительного сырья. Воздушно-сухой чайный лист измельчали до размеров частиц менее 500 мкм. Экстракцию образцов проводили бидистиллированной водой при гидромодуле 1000, комнатной температуре и постоянном перемешивании в течение 1 ч. Полученный экстракт центрифугировали при 8000 мин-1 15 мин. Супернатант фильтровали через фильтр с размером пор менее 5 мкм и использовали для ВЭЖХ. В качестве элюента использовали смесь воды, ацетонитрила и фосфорной кислоты.

ВЭЖХ - анализ продуктовмеханической активации. Механически обработанные образцы в течение

1, 3, 5, 10, 15 мин в вибромельнице SPEX растворяли в бидистиллированной воде при перемешивании магнитной мешалкой в течение 1 ч. Взвесь центрифугировали (8000 мин-1, 15 мин), отбирали пробы для ВЭЖХ. Аналогично поступали с образцами катехинсодержащего растительного сырья, подвергнутого механической обработки в мельнице АГО-2 в течение 20, 40, 60, 100, 150 с при ускорении мелющих тел 20-60 g.

Обсуждениерезультатов

Известные методы получения комплексов полифенолов с диоксидом кремния основаны на взаимо -действии реагентов в водных растворах оснований: пиридина, аминов, в растворе аммиака и оснований щелочных металлов. Поэтому отправной точкой исследования было изучение динамики растворения диоксида кремния в присутствии пирокатехина в щелочной среде. Время растворения образцов примерно соответствует времени пребывания веществ в желудочно-кишечном тракте (4-5 ч). Результаты представлены на рисунке 1.

Видно, что введение пирокатехина позволяет повысить скорость растворения относительно исход -ного образца вследствие образования комплексных соединений (рис. 1а). Однако необходимые для этого высокие значения pH неприемлемы для живых организмов. Поэтому среда для растворения образца должна быть слабощелочной или слабокислой и не подниматься выше pH 8.

Растворение образцов проводили в буфере при pH 7 - оптимальном значении, совместимом с различными типами биологических тканей. Показано уменьшение скорости растворения диоксида кремния

фактически в два раза по сравнению с предыдущим случаем. Скорость растворения физической смеси пирокатехина и силикагеля мало отличается от скорости растворения исходного силикагеля (рис. 16). Т.е. в данном случае не происходит значительного образования комплексных соединений кремния, повышающих скорость растворения диоксида кремния.

При переходе от индивидуального пирокатехина к галлокатехинам в матрице растительного сырья, скорость растворения в нейтральной среде смеси значительно уменьшается по сравнению с исходным силикагелем (рис. 2а). Наиболее вероятными причинами падения скорости растворения могут являться сорбционные процессы: адсорбция высокомолекулярных органических веществ растительного сырья на поверхности силикагеля и ее блокирование; адсорбция Б1(ОН)4 на частицах растительного сырья.

При использовании экстракта катехинсодержащего растительного сырья обеспечивается минимизация второго фактора (адсорбции на частичках растительного сырья), в результате скорость растворения силикагеля в экстракте выше по сравнению со скоростью растворения физической твердофазной смеси. Однако она остается меньше скорости растворения исходного силикагеля при прочих равных условиях (рис. 26).

Данные эксперименты показывают, что при pH 7 не происходит химического взаимодействия между диоксидом кремния и полифенольными соединениями. В случае нахождения полифенолов в матрице растительного сырья превалируют сорбционные процессы.

Рис. 1. Динамика растворения исходного силикагеля (1) и силикагеля в растворе пирокатехина (2): а - pH 9,5, б - pH 7,0

Рис. 2. Влияние добавки зеленого чая на динамику растворения силикагеля при рН=7: а - силикагель (1), физическая смесь силикагеля и порошка зеленого чая (2); б - силикагель (1), силикагель в водном экстракте чая (2)

На модельных системах изучены и оптимизированы процессы, приводящие к образованию продукта, обеспечивающего при растворении повышенные концентрации соединений кремния в растворе. Осуществлена совместная механохимическая активация силикагеля и пирокатехина. Выбраны оптимальные времена и интенсивности воздействия, которые не приводят к деградации образцов, что показано хроматографическим анализом.

Продукт механокомпозит представляет собой гетерогенную систему, свойства которой определяются развитой поверхностью раздела фаз. Физико-химические особенности механокомпозита определяются избыточной энергией, возникающей в результате межфазного поверхностного взаимодействия и активации исходных фаз. Улучшенные условия для обмена массой между частицами реагентов являются одним из важнейших свойств механокомпозитов.

При добавлении воды к механокомпозиту начинается взаимодействие компонентов, при этом скорость реакции на границе раздела фаз существенно превышает скорость реакции с участием растворенно-гопирокатехина. В результате механическая активация силикагеля в присутствии пирокатехина позволяет повысить скорость его растворения при нейтральной реакции среды в 3-5 раз по сравнению с образцами того же силикагеля, подвергнутого механической активации в тех же условиях, но без добавок (рис. 3а).

Активированный силикагель растворяется в растворе пирокатехина с несколько большей скоростью, нежели в воде. Однако скорость растворения существенно меньше скорости растворения механокомпозита «силикагель - пирокатехин», особенно на начальных этапах растворения. Данное обстоятельство указывает на возможность взаимодействия диоксида кремния и пирокатехина уже на стадии совместной механической активации.

Известно, что механически активированные образцы способны к релаксации - в зависимости от условий обработки и типа обрабатываемого материала наблюдается «отжиг» дефектов при хранении активированного образца и, как следствие, снижение его реакционной способности. Обсуждаемый эффект может усиливаться под действием внешних факторов: перепада температур, изменения влажности и т.д. Часто процессы релаксации локализуются на поверхности и нивелируют эффект развитой границы раздела.

Для изучения устойчивости полученных препаратов при хранении осуществляли растворение в аналогичных условиях через две недели и через месяц после механической обработки. Кривая растворения для механокомпозита фактически не изменилась, в то время как скорость растворения активированного силикагеля в воде и в растворе пирокатехина уменьшилась примерно на 30-40% (рис. 36).

Таким образом, установлено, что при хранении полученных механокомпозитов не происходит значительного изменения их свойств, в то время как препараты на основе механически обработанного кремнезема без добавок неустойчивы вследствие протекания релаксационных процессов.

Рис. 3. Динамика растворения активированного силикагеля (1), совместно активированного силикагеля с пирокатехином (2), активированного силикагеля в растворе пирокатехина (3): а - свежеприготовленные системы, б - те же системы после двух недель хранения в твердом виде

Рассмотрен механизм взаимодействия между реагентами, приводящий к увеличению эффективности процесса растворения аморфного диоксида кремния.

На кривой растворения механокомпозита (рис. 3а) можно выделить несколько участков. Такое растворение можно представить как суперпозицию растворения «активной» и «неактивной» формы. Видимо, на первом участке быстро растворяется активная форма, после чего кинетика образования продукта определяется её накоплением. Возможно, что такой активной формой является аморфный диоксид кремния с гидроксильными группами на поверхности, по которым происходит взаимодействие с пирокатехином.

Для изучения роли поверхностных гидроксильных групп в реакции между силикагелем и пирокатехином проводили предварительное гидроксилирование поверхности силикагеля. При механической обработке силикагеля с водой происходит искажение связей 81-0-81 на поверхности, в результате чего возрастает вероятность гидролиза, сопровождаемого образованием групп 81-ОН. В результате скорость растворения механокомпозита на основе гидроксилированного диоксида кремния увеличивается относительно скорости растворения механокомпозита, полученного без предварительного гидроксилирования.

Таким образом, повышение выхода мономерных форм диоксида кремния в раствор может происходить благодаря как активации силикагеля и накоплению им избыточной энергии вследствие деформации связей, так и активации поверхности гидроксилированием и увеличению эффективности образования поверхностных комплексов.

Изученные на модельных системах процессы применены для получения растворимых хелатирован-ных комплексов исходя из аморфного диоксида кремния и галлокатехинов растительного сырья.

По ВЭЖ-хроматограмме (рис. 4) видно, что зеленый чай содержит эпигаллокатехин (БвС) (I), эпи-галлокатехингаллат (БвСв) (II) и эпикатехингаллат (БСв), которые имеют в своем составе хелатирующие группы. Все эти соединения при взаимодействии с диоксидом кремния могут образовать хелатные крем -нийсодержащие комплексы.

Большая часть биологически активных соединений чая сосредоточена внутри клетки и изолирована от внешних физико-химических воздействий, в том числе взаимодействия с реагентами, прочной клеточной стенкой. Необходимыми условиями механохимического получения из растительного сырья препарата, содержащего целевые соединения в водорастворимой форме, является разрушение клеточных стенок и обеспечение доступа реагентов к внутриклеточным галлокатехинам.

Механическая активация сопровождается полным нарушением исходного строения растительной ткани, в том числе целостности клеточных стенок [16]. Таким образом, на стадии механической обработки за счет разрушения структуры клеточной стенки удается снять диффузионные затруднения, т.е. существенно облегчить доступ реагентов и растворителя к содержимому растительных клеток. Методом ВЭЖХ установлено, что после механической активации при контакте обработанного сырья с водой происходит увеличение выхода основных катехинов на 20-35%.

В результате механохимической обработки галлокатехинов в матрице растительного сырья с диоксидом кремния получены системы, при контакте которых с водой наблюдается повышение скорости растворения диоксида кремния в 2-3 раза (рис. 5) по сравнению с диоксидом кремния, подвергнутым механической обработке без добавок.

Эффекты, наблюдаемые в системах с растительным сырьем, аналогичны эффектам, которые обнаружены на модельных системах, что позволяет говорить о единстве механизмов образования в обоих случаях растворимых комплексных соединений.

Твердофазное механохимическое взаимодействие аморфного кремнезема и полифенолов зеленого чая с целью получения препаратов, содержащих биодоступный кремний и антиоксиданты, является перспектив ным способом переработки отходов чайного производства и кремнеземсодержащих растений. С практической точки зрения метод механической активации как один из вариантов «сухих» технологий важен, так как обладает рядом преимуществ в плане экологических и экономических характеристик [13].

Рис. 4. Хроматограмма галлокатехинов зеленого чая Рис. 5. Динамика растворения диоксида

кремния из механокомпозита на основе зеленого чая и силикагеля: 1 - активированный силикагель, 2 - совместно активированный силикагель и порошок чая (10 : 1),

3 - активированный силикагель в растворе чая

Выводы

1. Механохимическая реакция силикагеля с пирокатехином приводит к образованию растворяющихся при нейтральном pH механокомпозитных порошков. Образующиеся растворы содержат повышенные концентрации кремнезема.

2. При хранении полученных механокомпозитов не происходит значительного изменения их свойств, в то время как препараты на основе механически обработанного кремнезема неустойчивы.

3. Предложен механизм взаимодействия пирокатехина с силикагелем, включающий взаимодействие гидроксильных групп на поверхности силикагеля с пирокатехином, образование поверхностных комплексов диоксида кремния с пирокатехином, образование и выход в раствор хелатных комплексов, содержащих мономеры диоксида кремния.

4. При совместной механической обработке катехинсодержащего сырья - зеленого чая и силикагеля наблюдаются эффекты, аналогичные эффектам в системе силикагель - пирокатехин. Механохимическое взаимодействие катехинов растительного сырья и аморфного диоксида кремния обеспечивает получение препаратов, содержащих хелатированный диоксид кремния.

Список литературы

1. Carlisle E.M. Silicon: a possible factor in bone calcification // Science. 1970. N167. Pp. 179-280.

2. Schwartz K. Growth-promoting effects of silicon in rats // Nature. 1972. N239. Pp. 333-334.

3. Айлер P. Химия кремнезема: Пер. с англ., М., 1982. Т. 1, 2.

4. Воронков М.Г., Кузнезов И.Г. Кремний в живой природе. Новосибирск, 1984. 157 с.

5. Колесников М.П. Формы кремния в растениях // Успехи биологической химии. 2001. №41. C. 301-332.

6. Van Dyck K. Bioavailability of silicon from food and food supplements // Fresenius J. Anal. Chem. 1999. N363.

Pp. 541-544.

7. Shakhtshneider T.P., Boldyrev V.V., Vasilchenko M.A., Politov A.A. The mechanochemical preparation of solid disperse systems of ibuprofen-polyethylene glycol // International Journal of Pharmaceutics. 1996. V. 130. Pp. 25-28.

8. Дубинская A.M., Якушева Л.Д., Аверьева Е.Г. Повышение скорости растворения гризеофульвина путем механического диспергирования с одновременным включением в полимерную матрицу // Химико-фармацевтическийжурнал. 1988. Т. 22. С. 1125-1129.

9. Shakhtshneider T.P., Boldyrev V.V. Mechanochemical synthesis and mechanical activation of drugs // Reactivity of molecular solids. New York: John Wiley & Sons, LTD. 1999. Pp. 271-311.

10. Rosenheim A., Raibmann B., Schendel G., Z. Uber Brenzcatechinate usw // Anorg. Allg. Chem. 1931. N196. Pp. 160-176.

11. Dennis W., Bfrnum K. Reaction of colloidal silica and silica acid in aqueous ammonia // Inorg. Chem. 1972. N11. Pp. 1424-1429.

12. Nakamichi Yamasaki, Yi Wana. Dissolution behavior of silica in catechol solution // Chem. Soc. Jpn. 1995. N9. Pp. 746-748.

13. Ломовский О.И., Болдырев B.B. Механохимия в решении экологических задач. Новосибирск, 2006. 221 с.

14. Яшин Я.И., Яшин А.Я., Н.И. Черноусова. Хроматография чая // Химия и жизнь. 2005. №3. C. 50-53.

15. Мышляева Л..В., Краснощеков В.В. Аналитическая химия кремния. М., 1972. 201 с.

16. Бычков А.Л., Королев К. Г., Рябчикова Е. И., Ломовский О.И. Изменение клеточной стенки при механической активации растительной и дрожжевой биомассы // Химия растительного сырья. 2010. №1. С. 49-56.

Поступило в редакцию 14 октября 2010 г.

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.