CC BY
145
новых препаратов, разрабатываемых из природного сырья // Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. - М., 2000. - С.346-348.
5. Лукьянова Л.Д. Методические рекомендации по экспериментальному изучению препаратов, предлагаемых для клинического изучения в качестве анти-гипоксических средств. - М., 1990. - 57 с.
6. Методические указания по доклиническому изучению новых препаратов, разрабатываемых из природного сырья // Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. - М., 2000. - С. 346-348.
7. Определение безопасности и эффективности биологически активных добавок к пище / Методические указания МУК 2.3.2.721-98. Минздрав России. -М., 1999. - 88 с.
8. Сергиенко В.И., Бондарева И.Б. Математическая статистика в клинических исследованиях. - М.: Гэотар Медицина, 2000. - 263 с.
9. Сур С.В., Гриценко Э.Н. Проблемы и перспективы разработки и внедрения современных лекарственных средств растительного происхождения // Фарматека. - 2001. - № 9. - С.10-14.
10. Фролова Л.Н. Изучение химического состава и разработка методов стандартизации лекарственных средств из органо-минерального комплекса мумие: дис. ... канд. фарм. наук. - М., 1999. -227 с.
11. Фролова Л.Н., Киселева Т.Л. Биологическая активность мумие. Публикация 8. Адаптогенное дей-
ствие. Влияние на иммунную систему // Традиционная медицина. - 2009. - №2. - С. 65-71.
12. Шакиров А.Ш. Тайна древнего бальзама мумие-асиль. - Изд. 4-е. - Ташкент: Медицина, 1983.
- 47 с.
13. Юматов Е.А. Устойчивость к эмоциональному стрессу и сердечно-сосудистые реакции при действии нейропептида - субстанции «Р» // Вазоактивные пептиды. - София, 1980. - С. 44-45.
Алексеева Эльвира Алексеевна - кандидат медицинских наук, зав. кафедрой анатомии и физиологии, медицинский факультет Бурятского государственного университета. ул. Октябрьская, 36 а, тел. 66-20-62, e-mail: alecseevaelvira@mail.ru
Шантанова Лариса Николаевна - доктор биологических наук, профессор, зав. лабораторией безопасности биологически активных веществ, Институт общей и экспериментальной биологии СО РАН. Тел. 43-37-13, e-mail: shantanova@mail .ru
Alekseeva Elvira Alekseevna - candidate of medical sciences, head of department of anatomy and physiology, medical faculty, Buryat State University, Oktyabrskaya 36 «a», tel. 66-20-62, e-mail: alecseevaelvira@mail.ru
Shantanova Larisa Nikolaevna - doctor of biological sciences, professor, head of laboratory of safety of biological active substances, Institute of General and Experimental Biology, SB RAS, tel.43-37-13, e-mail: shantanova@mail.ru
УДК 615.324
И.М. Бальхаев, Л.Н. Шантанова МЕХАНИЗМЫ АДАПТОГЕННОГО ДЕЙСТВИЯ АПИЛАКА
В статье приведены результаты исследования возможных механизмов адаптогенного действия апилака. Одним из молекулярно-клеточных механизмов, лежащих в основе стабилизации мембран под влиянием апилака, является ингибирование процессов перекисного окисления липидов.
Ключевые слова: апилак, стресс, адаптация, ПОЛ.
I.M. Balkhaev, L.N. Shantanova MECHANISMS OF ADAPTOGENE EFFECT OF APILAC
This article presents the results of research on possible mechanisms of adaptogene action of apilac. One of the molecular-cellular mechanisms underlying the stabilization of membranes by means of apilac influence is the inhibition of the processes of lipid peroxidation.
Keywords: apilac, stress, adaptation, LPO.
Вопросы сохранения и укрепления здоровья населения становятся актуальными в условиях современного общества с присущими ему особенностями (природно-экологическими, социальноэкономическими, научно-техническими) [4]. Это связано и со снижением адаптационных возможностей человека под влиянием экстремальных факторов в условиях интенсивного изменения среды обитания (из-за усиливающейся природоо-
бразующей деятельности человеческой цивилизации).
Этими факторами являются, прежде всего, психоэмоциональные стрессы и перегрузки человеческого организма, связанные с изменением темпа жизни (в том числе синдром мегаполиса, гиподинамия, астенические состояния), быстрым перемещением в пространстве (перелеты), расширением ареала пребывания человека (от аркти-
ческих до горно-пустынных областей), вредными воздействиями окружающей среды и производственной деятельности, к которым можно отнести факторы физической (электромагнитные колебания, электромагнитные волновые излучения и т.д.) и химической природы (массовое потребление ксенобиотиков и повышенное их содержание в окружающей среде).
Медицинские науки, обладая уникальными методами представления и анализа информации на всех уровнях от популяционного до организ-менного, должны способствовать решению одной из основных задач человечества - перехода к устойчивому развитию. Фармакологическая коррекция в данной ситуации выступает как важный способ сохранения относительного динамического постоянства внутренней среды организма, увеличения потенциала адаптации, способствует профилактике переутомления и реабилитации после сильных нагрузок и в конечном итоге повышению качества жизни.
Целенаправленно созданные синтетические психостимуляторы имеют ряд общих недостатков, причинно связанных с механизмом их действия - прямым или непрямым адреномиметиче-ским эффектом. Это обстоятельство не позволяет использовать их для восстановления умственной и физической работоспособности, а тем более в качестве средств профилактики, увеличивающих потенциал адаптации. Кроме того, эффект синтетических фармакологических средств является двояким - одновременно с воздействием на патологический процесс эти препараты, не обладая высокой избирательностью действия, оказывают влияние и на здоровые клетки, ткани и органы организма (в том числе на скорость и течение биохимических реакций) [3]. На вышеуказанном фоне значимость для фармакологической коррекции адаптации человека к условиям современной жизни обретает применение природных адапто-генных средств. Их определение дано научной школой Н.В. Лазарева - «это средства, повышающие способность организма человека адаптироваться к превышению над нормой физических, химических и психологических факторов окружающей среды».
В этом плане интерес представляет традиционная медицина, в которой тонизирующие лекарственные препараты занимают особое место. Однако, несмотря на существование ряда используемых в настоящее время адаптогенных средств, необходимо проводить исследования по поиску
новых эффективных природных адаптогенов из экологически чистых, экономически выгодных и широко распространенных видов растительного и животного сырья.
Также перспективным направлением представляется изучение влияния продуктов пчеловодства на состояние организма, в том числе маточного молочка пчел, издавна используемого в традиционной медицине в качестве тонизирующего средства в период весенней астенизации организма, реконвалесценции, а также в геронтологии [9]. В клинической практике препарат из маточного молочка пчел «Апилак» применяется при гипотрофии и анорексии у детей, гипотонии, невротических расстройствах и нарушении лактации в послеродовом периоде [7]. Имеющиеся в литературе данные о биостимулирующем действии апилака дают основание полагать, что он может оказывать адаптогенное действие, повышая неспецифическую резистентность организма.
Целью настоящего исследования - определение возможных механизмов адаптогенного действия апилака.
Материал и методы. С целью изучения возможных механизмов защитного действия апилака были исследованы особенности его влияния на устойчивость мембран клеток, процессы пере-кисного окисления липидов и параметры антиок-сидантной защиты организма, биосинтез и энергообеспечение.
Влияние апилака на устойчивость мембран эритроцитов изучали in vitro. Резистентность мембран эритроцитов, как известно, можно определить по степени их гемолиза под действием разрушающего фактора. Опыты проводились с использованием 1%-ной суспензии эритроцитов донорской крови. Гемолиз вызывали реактивом Фентона, хлорпро-мазином и в гипоосмотической среде [6]. Апилак в реакционную среду добавляли в концентрациях:
0,01; 0,02; 0,03; 0,04; 0,05 мг/мл.
Исследование влияния апилака на энергетический статус организма и интенсивность процессов ПОЛ, а также на процессы энергообеспечения проведено на белых беспородных крысах обоего пола массой 160-180 г. В качестве интенсивной дозированной физической нагрузки использовали плавание с 7%-ным грузом в течение 10 минут. Животным опытной группы внутрижелудочно вводили водный раствор лиофилизированного апилака в дозе 400 мг/кг в течение 7 дней до физической нагрузки. Животные контрольной группы получали эквиобъемное количество дистиллиро-
ванной воды. В качестве препарата сравнения использовали деалкоголизированный раствор элеутерококка в дозе 5 мл/кг. На 7-й день эксперимента после нагрузки животных декапитировали под легким эфирным наркозом и для установления влияния апилака на энергетический статус организма и интенсивность процесса определяли концентрацию МДА в сыворотке крови и гомогенате скелетной мышцы, содержание сульфгидрильных групп и активность каталазы сыворотки крови; на процессы энергообеспечения - содержание АТФ, пировиноградной, молочной кислот и коэффициент лактат/пируват.
Влияние апилака на процессы синтеза белка и углеводов изучалось с помощью эксперимента на неполовозрелых белых беспородных крысах обоего пола с исходной массой 80-100 г. Животным опытной группы внутрижелудочно вводили апилак в дозе 400 мг/кг ежедневно в течение 21 дня один раз в сутки, животным контрольной группы
- эквиобъемное количество дистиллированной воды. В качестве препарата сравнения использовался деалкоголизированный экстракт элеутерококка. На 21-е сутки эксперимента определяли прирост массы животных, содержание ДНК, РНК и общего белка в гомогенате сердечной и скелетной мышц, а также концентрацию гликогена в гомогенате печени и скелетной мышцы.
Результаты и обсуждение. Исследование влияния испытуемого средства на перекисный гемолиз эритроцитов, вызванный реактивом Фентона и фотоактивированным хлорпромазином, показало, что апилак в концентрации, соответствующей экспериментально-терапевтической дозе 400 мг/ кг (установлена в предварительных экспериментах), оказывает выраженное мембраностабилизирующее действие, уменьшая степень перекисно-го гемолиза эритроцитов соответственно на 70 и 60% по сравнению с показателями в контроле. Та-
ким образом, полученные данные свидетельствуют, что апилак обладает выраженным мембраностабилизирующим действием, уменьшая степень перекисного гемолиза, что, очевидно, связано с инактивацией свободных радикалов, индуцируемых реагентом Фентона и фотоактивированным хлорпромазином.
Исходя из результатов эксперимента, можно сделать вывод, что у животных после интенсивной дозированной физической нагрузки отмечается существенное повышение уровня МДА в сыворотке крови и гомогенате ткани скелетной мышцы, а также снижение концентрации сульфгидрильных групп и активности каталазы сыворотки крови, свидетельствующее об активации процессов ПОЛ и угнетении активности эндогенной антиокислительной системы организма животных в результате действия интенсивных физических нагрузок. Введение апилака в указанной дозе на фоне физической нагрузки сопровождалось менее выраженными изменениями показателей свободнорадикального окисления и параметров антиокислительной системы. Так, концентрация МДА в гомогенате ткани скелетной мышцы и сыворотке крови животных опытной группы была соответственно на 35 и 20% ниже, чем аналогичные показатели у животных контрольной группы. При этим на фоне введения испытуемого средства в сыворотке крови животных опытной группы отмечалось увеличение уровня сульфгидрильных групп, а также повышение активности каталазы в среднем на 25 % по сравнению с контролем, что говорит о повышении мощности эндогенной антиокислительной системы под влиянием испытуемого средства.
Полученные данные свидетельствуют, что апилак обладает антиокислительными свойствами, ингибируя процесс свободнорадикального окисления и повышая активность эндогенной антиокислительной системы организма (табл. 1).
Таблица 1
Влияние апилака на содержание МДА в сыворотке крови, гомогенате ткани скелетной мышцы и содержание SH-гpyпп
№ п/п Показатели Группы ЖИВОТНЫХ
Интактная Контрольная Апилак
1 МДА в крови, мкМ/мин 2,2±0,02 3,1±0,09 2,5±0,06*
2 МДА в гомогенате, нМ/г ткани 1,6±0,01 2,9±0,09 1,9±0,11*
3 SH-гpyппы, мМ 24,3±2,42 18,2±1,83 22,8±1,52*
4 Каталаза, мкат/л 3,4±0,22 3,1±0,26 3,9±0,38*
Примечание: * - здесь и далее значения, достоверно отличающиеся от данных животных контрольной группы при р<0,05.
У животных под влиянием интенсивной физической нагрузки отмечается существенное снижение концентрации АТФ и повышение уровня молочной кислоты в тканях, что является основным лимитирующим фактором работоспособности. Курсовое введение апилака в указанной дозе сопровождалось активацией ресинтеза АТФ, о чем свидетельствует двукратное повышение его уровня в гомогенате скелетной мышцы животных опытной группы. Наряду с этим под влиянием испытуемого средства отмечалось существенное снижение концентрации молочной кислоты (на
36% по сравнению с данными у животных контрольной группы). Определение коэффициента лактат/пируват показало его снижение под влиянием апилака на 20% по сравнению с таковым у животных контрольной группы.
Таким образом, апилак способствует снижению окислительно-восстановительного потенциала, что свидетельствует о понижении интенсивности окислительного процесса и переходе клеток на более экономное использование кислорода (табл. 2).
Таблица 2
Влияние апилака на содержание АТФ, пировиноградной и молочной кислот в тканях у белых крыс на фоне дозированной физической нагрузки
№ п/п Показатели Группы 5 кивотных
Интактная Контрольная Апилак
1 АТФ, мг/г 0,8±±0,4 0,3±±0,01 0,6±±0,07*
2 Пировиноградная к-та, мМ 3,2±±0,25 3,9±0,26 3,1±0,34*
3 Молочная к-та, мМ 48,5±±3,63 102,0±4,50 65,0±5,52*
4 МК/ПВК 15,1±±1,33 26,1±±2,54 20,9±±1,82*
При исследовании влияния апилака на процессы синтеза белка и углеводов было установлено, что длительное (21-дневное) введение апилака в дозе 400 мг/кг неполовозрелым белым крысам сопровождается активацией процессов синтеза белка и углеводов, о чем свидетельствует повышение концентрации нуклеиновых кислот, общего белка и гликогена в тканях животных опытной группы. Так, на фоне введения испытуемого препарата отмечалось повышение содержания РНК и ДНК в скелетной мышце соответственно на 65 и 25%, концентрации общего белка в скелетной мышце на 22% по сравнению с аналогичными показателями у крыс контрольной группы. Полученные данные свидетельствуют, что апилак оказывает
выраженное анаболическое действие, повышая синтез белка в тканях, что, в свою очередь, сопровождается увеличением прироста массы тела животных опытной группы в среднем на 30% по сравнению с таковым у животных контрольной группы. Наряду с этим у животных опытной группы отмечалось достоверное повышение концентрации гликогена в печени (на 22%), а также тенденция к увеличению содержания гликогена в скелетной мышце, свидетельствующая об активации синтеза углеводов под влиянием испытуемого препарата.
Таким образом, на основании полученных результатов можно заключить, что апилак стимулирует процессы синтеза белка и гликогена (табл. 3).
Таблица 3
Влияние апилака на содержание общего белка и нуклеиновых кислот в гомогенате сердечной и скелетной мышц, концентрацию гликогена в гомогенате скелетной мышцы и печени белых крыс
№ Показатели Группы ЖИВОТНЫХ
п/п Контрольная Апилак
1 Прирост массы тела, г 6,2±±0,40 8,0±±0,75*
2 РНК в скелетной мышце, мкг/г/% 8,6±±0,10 14,2±±1,34*
3 ДНК в скелетной мышце, мкг/г/% 18,8±±1,83 23,5±±0,48*
4 Общий белок в скелетной мышце, г/% 3,7±±0,04 4,5±±0,20*
5 Гликоген в скелетной мышце, г/% 535,0±±43,5 596,0±±35,2
6 Гликоген в печени, г/% 1100±± 18,5 1346±±47,3*
На основании полученных в работе данных можно полагать, что одним из молекулярноклеточных механизмов, лежащих в основе стабилизации мембран под влиянием апилака, является ингибирование процессов перекисного окисления липидов. Это подтверждается снижением под влиянием апилака концентрации пероксидации липидов - малонового диальдегида при воздействии на организм интенсивных физических нагрузок. Показано, что мембраностабилизирующая активность апилака обусловлена повышением мощности эндогенной антиокислительной системы организма, о чем свидетельствует увеличение под его влиянием уровня сульфгидрильных групп и активности каталазы крови, это, в свою очередь, обеспечивает восполнение эндогенных резервов антиоксидантов и инактивацию токсичных перекисных продуктов, образующихся в результате процессов перекисного окисления липидов, вследствие чего уменьшается «расход» активных эндогенных антиоксидантов. Кроме этого, поскольку свободные радикалы являются разобщителями процесса окислительного фос-форилирования, можно полагать, что снижение продуктов концентрации перекисного окисления липидов обеспечивает нормальный уровень ресинтеза АТФ при интенсивных физических нагрузках.
Литература
1. Агаджанян Н.А., Миррахимов М.М. Горы и резистентность организма. - 1970. - 165 с.
2. Азовцев Г.Р., Изюнов Е.Г., Зыков А.А. Средства, обладающие способностью повышать работоспособность организма, а также антигипоксическим и стиму-
лирующим действием: а. с. 858833 (СССР) // Бюллетень изобретений. - 1981. - № 32. - С. 38.
3. Бобков Ю.Г., Виноградов В.М., Катков В.Ф., Лосев С.С., Смирнов А.В. Фармакологическая коррекция утомления. - М., 1984. - 207 с.
4. Брехман ИИ Человек и биологически активные вещества. - Л.: Наука, 1980. - 110 с.
5. Брехман И.И., Добряков Ю.И., Кириллов О.И.. Горшков П.П., Юдин А.М., Блохин Б.Н., Савичев Т.Д. Фармакологические свойства рантарина. Сообщение
2. Экспериментальные исследования препарата, характеризующие его специфические свойства // Биологические ресурсы Восточной и Юго-Восточной Азии и их использование. - Владивосток, 1978. - С. 94-100.
6. Ковалев И.Е., Данилова Н.П., Андронати С.А. и др. Влияние эномеланина на гемолиз эритроцитов, вызываемый свободнорадикальными реакциями и другими факторами // Фармакология и токсикология. - 1986.
- №4. - С. 89-91.
7. Машковский М. Д. Лекарственные средства: в 2 т. - М.: Новая волна, 2002. - 1152 с.
8. Сергиенко В.И., Бондарева И.Б. Математическая статистика в клинических исследованиях. - М., 2000. - 263 с.
9. Симакова В.М., Исаева И.В., Елькина Г.И. Исследование минерального состава апилака лиофилизи-рованного // Фармация. - 1991. - № 6. - С. 35-38.
Бальхаев Илларион Митрофанович - кандидат медицинских наук, доцент кафедры фармакологии и традиционной медицины медицинского факультета Бурятского госуниверситета. 670002, г. Улан-Удэ, ул. Октябрьская 36а. Тел. (3012) 44-82-55. E-mail: ill. balkhaev@mail.ru
Шантанова Лариса Николаевна - доктор биологических наук, профессор, зав. лабораторией безопасности биологически активных веществ ИОЭБ СО РАН. 670047, г. Улан-Удэ, ул. Сахьянова, 6. Тел. (3012) 43-37-13.
И.О. Убашеев, И.М. Бальхаев, А.Н. Плеханов. Коррекция печеночной недостаточности у белых крыс при остром СС14-гепатите тибетским лекарственным средством «Манушитан»
Balkhaev Illarion Mitrofanovich - candidate of medical sciences, associate professor, department of pharmacology and traditional medicine, medical faculty, Buryat State University. 670002, Ulan-Ude, Oktyabrskaya str., 36a. Tel. (3012) 44-82-55. E-mail: ill.balkhaev@mail.ru
Shantanova Larisa Nikolaevna - doctor of biological sciences, professor, head of laboratory of safety of biological active substances, Institute of General and Experimental Biology, SB RAS; 670047, Ulan-Ude, Sakhyanova str., 6. Tel. (3012) 43-37-13.
УДК 615.322
И.О. Убашеев, И.М. Бальхаев, А.Н. Плеханов
КОРРЕКЦИЯ ПЕЧЕНОЧНОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТИ У БЕЛЫХ КРЫС ПРИ ОСТРОМ со4-гепатите тибетским лекарственным средством «манушитан»
В данной статье приведены результаты исследований фармакотерапевтической эффективности фитосредства тибетской медицины «манушитан» при экспериментальном СС14-гепатите. Установлено, что испытуемое средство, содержащее девясил высокий, софору желтоватую, имбирь лекарственный и бузину черную, оказывает гепатопротекторное действие при остром токсическом гепатите у белых крыс, ингибируя перекис-ное окисление липидов клеточных и субклеточных мембран, стимулируя регенераторные процессы в печени.
Ключевые слова: печень, острый гепатит, «Манушитан».
I.O. Ubasheev, I.M. Balkhaev, A.N. Plekhanov
CORRECTION OF HEPATIC FAILURE IN WHITE RATS AT ACUTE CCE-HEPATITIS BY TIBETAN REMEDY «MANUSHITAN»
4
This article presents the results of research n pharmacotherapeutical effectiveness of phytoremedy of Tibetan Medicine - «manushitan» at experimental CCl4-hepatitis. It has been revealed that the test remedy containing elfwort, Sophora yellowish, ginger and medicinal elder black, has a hepatoprotective effect on acute toxic hepatitis in white rats by inhibiting lipid peroxidation of cellular and subcellular membranes, stimulating regenerative processes in the liver.
Keywords: liver, acute hepatitis, «Manushitan».
До настоящего времени продолжаются дискуссии относительно понятия «печеночная недостаточность».
Мы остановимся только на двух группах этиологических факторов этого тяжелого патологического состояния организма.
1. Заболевания печени - гепатиты различного генеза, циррозы печени, рак, паразитарные поражения органа и др. В США и во всем мире наиболее частой причиной острой печеночной недостаточности являются вирусные гепатиты А, В, С,
Д, Е [16].
2. Интоксикации гепатотропными веществами (четыреххлористый углерод, бензол), лекарственными препаратами (парацетамол, антидепрессанты, нестероидные противовоспалительные средства, тетрациклин и др.) могут привести к сим-птомокомплексу недостаточности печени [8].
Цель настоящих исследований сводилась к оценке коррекции печеночной недостаточности у белых крыс при остром СС14-гепатите тибетского фитосредства «манушитан» (девясил высокий, софора желтоватая, имбирь лекарственный и бузина черная).
Материал и методы исследования
Отвар «манушитан» готовили из суховоздушного сырья по Государственной фармакопее РФ (1990) [3].
Острый токсический гепатит у белых крыс вызывали путем введения четыреххлористого углерода (СС14) в виде 50%-ного масляного раствора в объеме 0,4 мл/100 г массы животного, трехкратно через день, подкожно. Печень декапитированных под легким эфирным наркозом животных подвергали исследованию на 7-, 14-, 21-е сутки с начала эксперимента. Испытуемое лекарственное средство вводили в течение 14 дней внутрижелудочно в дозе 0,3 г/кг массы крысы. В качестве препарата сравнения животным вводили оротат калия в дозе 100 мг/кг. Животным контрольной группы вводили только раствор С^4.
Всего в опытах использовано 107 белых беспородных крыс с массой 175-190 г.
Для оценки функционального состояния печени при остром гепатите нами был применен ряд методик. В частности, для оценки фармакотерапевтической эффективности исследуемого лекарственного средства определяли степень активно-
