Механизм гибели опухолевых клеток в различных культурах, индуцированный катионными пептидами Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

58

МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»

(p <0,075) и снижения абсолютного числа NK-клеток (p <0,031). Также обнаружена прямая корреляция высокой силы между продукцией опухолевыми клетками прогрессирующих СМТ уровня VEGF-А, CCL2 и экспрессией на Treg CD304+ (r = 0,93, p = 0,001), VEGFR-2+ (r = 0,88, p = 0,007), CCR4+ (r = 0,81, р = 0,024), что косвенно свидетельствует об уклонении опухоли от иммунного контроля на этапе клинически регистрируемого прогрессирования заболевания.

Заключение. Определение экспрессии хемокиновых рецепторов на Treg методом проточной цитометрии у больных СМТ можно рассматривать как лабораторный тест для выявления лиц с высоким риском про-грессирования заболевания и для мониторинга эффективности лечения.

Е.А. Плотникова1, Н.Б. Морозова1, В. О. Страмова1, А.А. Панкратов1, П.В. Островерхов2, М.А. Грин2, Р.И. Якубовская1

разработка мицеллярной лекарственной формы фотосенсибилизатора бактериохлоринового ряда и изучение ее свойств

ФГБУ «НМИЦ радиологии» Минздрава России, Москва, Россия; 2МИТХТ, Москва, Россия

введение. Наиболее перспективными из разрабатываемых в настоящее время фотосенсибилизаторов (ФС) являются производные бактериохлоринов, обладающие интенсивным поглощением в дальнем красном и ближнем инфракрасном диапазонах (740—850 нм). Одним из главных недостатков данных ФС является их ограниченная растворимость в водных растворах, что актуализирует поиск систем солюбилизации красителей с целью получения лекарственных форм, предназначенных для внутривенного введения.

Цель исследования. Разработка лекарственной формы, изучение биораспределения, фотоиндуцированной противоопухолевой активности и потенциального токсического действия метилового эфира О-пропилоксим-#-пропокси-бактериопурпуринимида.

материалы и методы. Для солюбилизации метилового эфира О-пропилоксим-#-пропоксибактериопурпурини-мида в качестве сорастворителей использовали Kolliphor ELP, Эмуксол 268, Poloxamer 407, Pluronic 188 и оценивали растворимость, стабильность при хранении и облучении, размер полученных частиц. Изучение распределения ФС в органах и тканях, а также оценку эффективности фотодинамического действия красителя проводили на мышах F1 с подкожно привитой саркомой S37. Биораспределение метилового эфира О-пропилоксим-#-про-поксибактериопурпуринимида оценивали ex vivo методом локальной флуоресцентной спектроскопии по нормированной флуоресценции. Сеанс фотодинамической терапии (ФДТ) проводили на 6-7-й день роста опухоли S37, облучая ее светодиодным источником (X = 810 ± 21 нм, плотность энергии 150 Дж/см2) при варьировании дозы ФС (2,5; 5; 7,5 мг/кг) и интервала между введением и облучением (15 и 30 мин). Противоопухолевый эффект оценивали по объему опухоли, торможению роста опухоли

(ТРО) и критерию излеченности (КИ). Острую токсичность ФС изучали на мышах по общепринятой методике.

результаты. Сравнительный анализ показал, что субстанция в составе мицеллярной эмульсии на основе Kolliphor ELP имеет преимущество перед остальными: обладает интенсивной полосой поглощения при 800 ± 2 нм, характеризуется малым размером частиц и остается стабильной при хранении и облучении. ФС в составе мицел-лярной эмульсии быстро накапливается (в течение 15 мин) в опухолевой ткани саркомы S37, сохраняется на достаточно высоком уровне в течение 2 ч (6,8—7,3 усл. ед.), а затем выводится, и через 24 ч регистрируются только фоновые значения. Из кожи краситель полностью элиминирует в течение суток. Максимальная величина флуоресцентной контрастности между опухолью и кожей составила 2,4 ± 0,1 усл. ед. Метиловый эфир О-пропилоксим-#-пропок-сибактериопурпуринимида выводится из печени, почек, селезенки на 82—90 % в течение 24 ч, а остаточные количества в этих органах регистрируются до 6 сут. ФДТ с использованием мицеллярной формы ФС (доза 5 мг/кг, интервал между введением и облучением 15 мин) у мышей с саркомой S37 приводила к полной регрессии первичного опухолевого узла у 100 % животных при отсутствии рецидива опухоли в течение 90 сут после лечения. При изучении общетоксических свойств установлено, что краситель не оказывал токсического действия на животных при его использовании в дозах, превышающих расчетную терапевтическую дозу для человека в 62 раза.

Заключение. Таким образом, разработанная мицелляр-ная форма метилового эфира 0-пропилоксим-#-пропок-сибактериопурпуринимида на основе Kolliphor ELP является перспективной водорастворимой формой ФС, характеризуется стабильностью, высокой противоопухолевой эффективностью и низким токсическим потенциалом.

Д.А. Понкратова1, А.А. Лушникова1, А.А. Рудакова1, Л.Ф. Морозова1, О.С. Бурова1, С.М. Андреев2, М.А. Барышникова2

механизм гибели опухолевых клеток в различных культурах, индуцированный катионными пептидами

ФГБУ«НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва, Россия; ФГБУ«ГНЦИнститут иммунологии» ФМБА России, Москва, Россия

введение. Молекулярно-направленная терапия злокачественных опухолей препаратами с избирательной токсичностью — актуальная проблема онкологии. В качестве противоопухолевых агентов перспективны низкомолекулярные катионные пептиды (КП), возможными мишенями которых служат шаперонные белки С23 и В23, регулирующие ключевые клеточные процессы. Дифференциальная экспрессия С23/В23, особенно рецепторных молекул С23, в опухолевых и нормальных клетках создает предпосылки для избирательной цитотоксичности КП, а также для их клинического применения.

Цель исследования. Изучение гибели опухолевых клеток, индуцированной КП с разной структурой и зарядом молекул, на модельных клеточных линиях (КЛ).

Спецвыпуск / том 17 / 2018

РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ

МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ» 59

Материалы и методы. Использовали перевиваемые КЛ Результаты и Заключение. Обнаружено, что пентапеп-меланомы кожи — melIS, melH; глиобластомы — Glb-Sh, тид CIF и тетрапептиды TP-OMe и TP-ONH2 способны Glb-17; рака яичников — CrovCel; рака молочной железы специфически связываться с рецепторами соматостатина с множественной лекарственной устойчивостью — HBL- и ингибировать синтез цАМФ аденилатциклазой в клетках 100/Dox; гепатокарциномы — Huh7; гепатобластомы — нейробластомы человека линии IMR-32 в концентрации HepG2, рака поджелудочной железы — Panel, MiaPaCan2, 10 мкМ. Наибольшая специфичность связывания показа-AsPcl, CaPa2; и контроль — фибробласты линии H1036. на для CIF. Тетрапептиды не проявляли цитостатической Цитотоксичность 5 КП, обогащенных Arg/Lys, изучали активности в концентрациях до 50 мкМ, в отличие от CIF. в МТТ-тестах; механизмы цитотоксичности — с помощью Преинкубация клеток с пептидами в течение 24 ч не вли-проточной цитометрии, ОТ-ПЦР, ИГХ, вестерн-блоттин- яла на теломеразную активность. га с использованием коммерческих антител к С23/В23/р53; Работа выполнена при финансовой поддержке НИЦКИ флуоресцентно меченный Су5*-КП RgK4K2KAC-NH2 при- (внутренний грант, приказ № 1030 от 05.07.2017). меняли для микроскопического контроля процесса. Результаты. Показана высокая селективная цитоток- Т.Р. Приходченко1, Н.П. Акентьева1, Е.С. Немирова2, сичность изученных КП: выживаемость клеток в МТТ-те- А.Р. Гизатуллин1, Н.И. Шкондина1 стах после 2—3-суточной инкубации опухолевых КЛ с КП ИЗУЧЕНИЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ АКТИВНОСТИ составила, в зависимости от КЛ, 8-25 %, а в контроле РАСТИТЕЛЬНЫХ ЭКСТРАКТОВ не изменилась. Окрашивание инкубированных с КП кле- (KALANCHOE DAIGREMONTIANA, ALOEARBORESCENS) ток DAPI и Höchst выявило апоптоз, подтвержденный ме- НА КЛЕТКАХ МНОЖЕСТВЕННОЙ МИЕЛОМЫ тодом проточной цитофлуориметрии. ОТ-ПЦР, блоттинг ФГБУНИПХФ РАН, Черноголовка, Московская область, и ИГХ-анализ выявили гиперэкспрессию генов NCL/NPM Россия; и белков С23/В23 во всех опухолевых КЛ. Например, после 2МГОУ, Москва, Россия 3-суточной инкубации КЛ melIS с КП уровень С23 упал Введение. Множественная миелома (ММ) составляет наиболее резко, а р53 — вырос до 2,5 раза; до инкубации со- около 1 % всех злокачественных новообразований и чуть ответственные уровни были в ~ 8,5 раза выше и в ~ 2,8 раза более 10 % гемобластозов, поэтому поиск новых методов ниже контрольных. Возможный механизм избирательной ее лечения является весьма актуальным. Проявление по-токсичности КП во всех исследованных КЛ включает взаи- бочных эффектов при использовании химических препа-модействие (+)-кластеров молекул КП с (-)-доменами ре- ратов, оперативных методов, а также необходимость дли-цепторного С23, конкурентное связывание КП с избытком тельной (иногда годами) коррекции патологического С23/В23 после транспорта в клетки, с последующей акти- процесса — все это заставляет врачей обратить внимание вацией супрессора р53 и каспаз 3, 8, 9 и дальнейшим апо- на возможности традиционной медицины. Лекарственные птозом. растения могут быть эффективны в профилактике реци- Заключение. Показано, что изученные КП с разной дивов онкологических заболеваний, во многих случаях молекулярной структурой индуцируют гибель опухолевых только фитотерапия позволяет избежать осложнений, выз-клеток из различных модельных линий в результате акти- ванных применением химиопрепаратов. Растительные вации каспаз 3, 8 и 9 и апоптоза. Эти КП отобраны для средства обладают способностью выводить токсические дальнейшего исследования in vivo. вещества и продукты обмена благодаря диуретическому действию, повышению антитоксической функции печени, Г.А. Посьтанова1. В.Н. Осипов2, Ю.П. Семочкина1, стабилизации клеточных мембран. Поэтому поиск расти-О.В. Высоцкая1, Д.С. Хачатрян2 тельных экстрактов, обладающих противоопухолевой ак-ИССЛЕДОВАНИЕ БИОЛОГИЧЕСКОЙ тивностью, важен для онкомедицины. АКТИВНОСТИ НОВЫХ ЛИНЕЙНЫХ ПЕПТИДОВ - Цель исследования. Оценить противоопухолевую ак-АНАЛОГОВ СОМАТОСТАТИНА тивность экстрактов Kalanchoe daigremontiana, Aloe arbore-1НИЦ«Курчатовский институт», Москва, Россия; scens на клетках ММ (линия 8226). Изучить влияние рас-2НИЦ«Курчатовский институт» — ИРЕА, тительных экстрактов каланхоэ и алоэ на метаболизм Москва, Россия опухолевых клеток ММ. Цель исследования. Выявление новых пептидов — ли- Материалы и методы. Исследования выполнены на кле-нейных аналогов соматостатина, способных избирательно точной линии ММ 8226. Эта линия характеризуется выра-связываться с опухолевыми клетками, и изучение механиз- женной экспрессией мРНК IGF-1 и мРНК IGF-2 и всех ма их действия. их рецепторов. Определение жизнеспособности клеток Материалы и методы. Пептиды синтезировали с помо- проводили флуоресцентным методом, с помощью Alamar щью классических методов пептидной химии в жидкой reagent assay. Были исследованы следующие концентрации фазе. Связывание пептидов с клетками и анализ клеточно- растительных экстрактов: для каланхоэ — 0,45 мг белка, го цикла исследовали с помощью проточной цитофлуори- для алоэ — 0,16 мг. В качестве контроля использовали док-метрии. Уровень цАМФ в клетках определяли с помощью сорубицин (7 х 10—4 М). Аддитивный эффект экстрактов конкурентного иммуноферментного анализа. Определение каланхоэ и алоэ определяли в комбинации доксорубицина теломеразной активности в экстрактах из клеток проводи- с растительными экстрактами. Для определения митохон-ли с помощью метода TRAP. Цитостатическую активность дриального мембранного потенциала использовался флуо-пептидов исследовали с помощью МТТ-теста. риметрический метод с помощью красителя JC-1. Уровень

Спецвыпуск / том 17 / 2018 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ