CC BY
67
2. Белецкая Э. Н. Индивидуальная биокоррекция экологозависимых состояний у критических групп населения / Э.Н. Белецкая, Н.М. Онул, В.И. Главацкая [и др.] // Гигиена и санитария. - 2014. - №2. - С. 34-37.
3. Глобальная стратегия ВОЗ по питанию, физической активности и здоровью: руководство для стран по мониторингу и оценке осуществления. - ВОЗ, - 2009. - 47 с.
4. Онул Н. М. Еколого-ппешчш аспекти проблеми репродуктивного здоров'я населення / Н. М. Онул // Ппешчна наука та практика: сучасш реалй: Матерiали XV з'!зду ппешспв Украши. - 2012. - С. 464-465.
5. Скальный А. В. Микроэлементозы человека (диагностика и лечение) / А.В. Скальный. - 2-е изд. - М.: Изд-во КМК, -2001. - 96 с.
6. Сердюк А. М. Тяжелые металлы внешней среды и их влияние на репродуктивную функцию женщин / А. М. Сердюк, Э. Н. Белицкая, И. М. Паранько [и др.] // - Днепропетровск: АРТ-ПРЕСС, - 2004. - 148 с.
7. Сальникова Е. В. Цинк - эссенциальный микроэлемент (обзор) / Е.В. Сальникова // Вестник ОГУ. - 2012. - №10 (146). - С.170-172.
8. Трахтенберг I. М. Взаeмодiя мжроелеменив: бюлопчний, медичний i сощальний аспекти / I. М. Трахтенберг, I. С. Чекман, В. О. Линник [та ш.] // Вюник нацюнально! академп наук Украши.- 2013. - №6. - С. 11-21.
9. European convention for the protection of vertebrate animals used for experimental and other scientific purposes. - Council of Europe, Strasburg, - 1986. - 53 p.
10. Prasad A.S. Zinc deficiency / A.S. Prasad // Br. Med. J. - 2003 - Vol. 326. - P. 409-410.
Г1СТОМОРФОЛОГ1ЧНИЙ СТАН ПЛАЦЕНТИ I ОСОБЛИВОСТ1 ПЛАЦЕНТОГЕНЕЗУ П1Д ВПЛИВОМ ХЛОРИДУ ЦИНКУ У ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНИХ ТВАРИН Бшецька Е.М., Онул Н.М., Шаторна В.Ф., Кононова 1.1., Демура О. В. У статп представлен результати вивчення морфофункцюнального стану плаценти тд впливом хлориду цинку в дозi 1,5 мг/кг при його пероральному введенш упродовж усього перюду ваптност у щурiв. Встановлено, що додаткове введення цинку у вищезазначенш дозi не лише не порушуе процеЫв формування фетоплацентарного комплексу i пстоструктури плаценти, але навт мае деяку стимулюючу дш, що забезпечуе розвиток плаценти в межах верхшх рiвнiв контрольних значень.
Ключовi слова: есенщальш мжроелементи, цинк, вплив, плацентогенез, пстоструктура.
Стаття надшшла 5.10.2014 р.
HISTOMORPHOLOGICAL STATUS OF THE PLACENTA AND FEATURES OF PLACENTAL DEVELOPMENT UNDER THE INFLUENCE OF ZINC
CHLORIDE IN EXPERIMENTAL ANIMALS Beletskaya E.N., Onul N.M., Shatornaya V.F., Kononova I.I., Demura E.V.
The article contains the results of study of the morphofunctional state of placenta and features of placental development under the influence of zinc chloride in a dose 1,5 mgs/of kg by means of daily intragastric tube from 1 to 19th day of pregnancy. It is revealed, that additional introduction of these doses of zinc not only does not violate the processes of fetoplacental complex forming and histostructure of placenta, but even possesses some stimulant action, that provides development of placenta within the limits of high bounds of control values.
Key words: essential microelements, zinc, influence, placental development, histostructure.
Рецензент Старченко I.I.
УДК 616.8:616.36-008.5-007.272]-091.8 -092.9
МЕХАНИЧЕСКАЯ ЖЕЛТУХА: ПАТОМОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА
ПЕЧЕНИ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ
Проведено экспериментальное исследование на 36 крысах линии Вистар, направленное на изучение гистоструктурных изменений печени при механической желтухе. С использованием стандартных морфологических, а также иммуногистохимических методик установлено, что с 14-х суток эксперимента на фоне выраженного внутри- и внеклеточного холестаза вследствие усиленного синтеза интерстициальных коллагенов I и III типов, а также коллагена IV типа сосудистых мембран отмечено начало, а к 30 суткам полное формирование билиарного цирроза печени.
Ключевые слова: механическая желтуха, моделирование, патоморфологические изменения, печень.
Робота е фрагментом НДР «Комплексна профшактика гшйно-септичнихускладнень у хворих з невiдкладними захворюваннями оргатв черевноI порожнини», № державноI реестрацн 0111и003580.
По сводным данным различных авторов в настоящее время отмечается рост заболеваний гепатопанкреатодуоденальной зоны, сопровождающихся нарушением физиологического оттока желчи. Частота развития механической желтухи (МЖ) при этих заболеваниях варьирует от 12,7% до 100% и зависит от характера основной патологии [3, 8].
Актуальность проблемы МЖ прежде всего определяет сохраняющийся стабильно высокий процент послеоперационных осложнений, достигающий 24-54%, а также высокая летальность, которая составляет от 7,2 до 60 % [1, 3, 5, 9]. До настоящего времени нуждаются в более
детальном изучении динамические патоморфолочические изменения печени, которые развиваются при подпеченочном холестазе [2, 6]. Получение таких данных позволит с новых позиций обосновать показания к выбору оптимальных методик комплексного лечения синдрома МЖ в зависимости от вызвавшей его патологии.
Целью работы было динамическое патоморфологическое изучение гистоструктуры печени при механической желтухе в эксперименте.
Материал и методы исследования. Экспериментальную работу по моделированию МЖ выполнено на 36 половозрелых крысах массой 160-220 г линии Вистар в условиях вивария Харьковской медицинской академии последипломного образования. Животные с соблюдением полового признака были разделены на две группы. Основную группу составили 30 животных и контрольную — 6 здоровых крыс.
Животным основной группы производили моделирование МЖ путем перевязки холедоха в нижней его трети капроновой лигатурой. Из эксперимента крысы выводились на 3, 7, 14, 21, 30-е сутки путем введения летальной дозы анестетика. На аутопсии производили забор кусочков печени для их патоморфологического исследования.
Все манипуляции на животных осуществляли в соответствии с научно-практическими рекомендациями по содержанию лабораторных животных и работы с ними [4], а также в соответствии с «Европейской конвенцией по защите позвоночных, используемых для экспериментальных и иных научных целей» (Страсбург, 1986).
Изучение микропрепаратов и их микрофотографирование проводили на микроскопе "Olympus BX-41". В обзорных препаратах, окрашенных гематоксилином и эозином изучали степень выраженности дистрофических, некробиотических, гемодинамических, воспалительных и атрофических изменений. Иммуногистохимические исследования проводили на парафиновых срезах, толщиной 5-6 мкм прямым методом Кунса по методике Brosman (1979). Коллагены I, III и IV типов определяли с помощью моноклональных антител (МКА) к этим коллагенам, клетки экспрессирующие рецепторы к CD34 определяли МКА к CD34 (Novocastra Laboratories Ltd.) Оптическую плотность иммунофлюоресценции (ОПИ) определяли по методу Губиной-Вакулик Г.И. и соавторов [7] с помощью микроскопа "Axioskor 40" и программного обеспечения Biostat.exe. Результаты исследования обработаны статистически с использованием стандартного пакета программ Microsoft Excel. Достоверность показателей оценивали по t - критерию Стьюдента, разницу считали достоверной при р<0,05.
Результаты исследования и их обсуждение. В течение первых 20-и суток послеоперационного периода по всем стандартно контролируемым параметрам (двигательная активность, поисковый рефлекс, отношение к пище и др.) у всех оперированных животных не обнаружено каких-либо отличий от животных контрольной группы. Признаки МЖ в виде желтушного окрашивания ушных раковин, хвоста, изменения окраски кала на ахоличный, мочи на темно-коричневый отмечены на 4-5-е сутки после операции. Начиная с 21-х суток, на фоне сохраняющейся общей активности у ряда животных отмечалось снижение аппетита, а к 30 суткам — возникало снижение двигательной активности и поискового рефлекса.
При патоморфологическом исследовании печени на 3-и сутки эксперимента ее гистоархитектоника сохранена, центральные вены и межбалочные капилляры расширены, умеренно полнокровны. Цитоплазма гепатоцитов эозинофильная, с отчетливой зернистостью. Встречаются единичные диплоидные клетки.
Как и в группе контроля, в стромальном компоненте долек иммуногистохимически выявляются интерстициальные коллагены I и III типов, которые имеют преимущественно линейный прерывистый характер. ОПИ коллагена I типа, несколько превышает интенсивность свечения коллагена III типа, а с контрольными показателями существенных изменений не выявлено (табл. 1 и 2). Так же как и в группе контроля, в базальных мембранах (БМ) сосудов выявляется умеренной интенсивности свечение коллагена IV типа. Эндотелиоциты экспрессируют рецепторы к СD34, что выявляется иммунофлюоресцентным методом в препаратах, обработанных МКА к СD34. ОПИ коллагена IV типа и эндотелиоцитов, экспрессирующих рецепторы к СD34 практически не отличается от контрольного показателя и представлена в таблицах 3 и 4.
На 7-е сутки эксперимента дольковая структура печени сохранена. Цитоплазма гепатоцитов с отчетливой зернистостью, очагово отмечается крупно- и среднекапельное ожирение гепатоцитов. Обнаруживается выраженный холестаз, при этом желчь накапливается как в мелких, так и более крупных желчных протоках. Отмечается пролиферация желчных протоков и их деформация. Центральные вены, межбалочные капилляры и сосуды портальных трактов
расширены, полнокровны. В фиброзных прослойках и портальных трактах, вокруг и внутри желчных протоков определяются лимфоплазмоцитарные инфильтраты. В стромальном компоненте выявляются интерстициальные коллагены I и III типов. Характер иммунофлюоресценции этих коллагенов линейный прерывистый. По сравнению с контролем и показателем 3-суток достоверно увеличивается ОПИ коллагена III типа (рис.1), тогда как содержание коллагена I типа выявляет лишь тенденцию к увеличению (табл. 1 и 2).
Таблица 1
Оптическая плотность иммунофлюоресценции коллагена I типа в составе стромального
компонента печени
Группа 3 сутки 7 сутки 14 сутки 21 сутки 30 сутки
Контрольная группа | 1,235±0,08 - - - - -
Основная группа 1,222±0,06 1,253±0,07 1,387±0,09* 1,789±0,05* 1,926±0,08*
Примечание: * - различия с контролем достоверны ( Р<0,05)
Таблица 2
Оптическая плотность иммунофлюоресценции коллагена III типа в составе стромального
компонента печени
Группа 3 сутки 7 сутки 14 сутки 21 сутки 30 сутки
Контрольная группа | 0,985±0,04 - - - - -
Основная группа 0,988±0,01 1,234±0,09* 1,348±0,07* 1,589±0,06* 1,734±0,09*
Примечание: * - различия с контролем достоверны ( Р<0,05)
Таблица 3
Оптическая плотность иммунофлюоресценции коллагена IV типа в составе сосудистых БМ
печени
Группа 3 сутки 7 сутки 14 сутки 21 сутки 30 сутки
Контрольная группа | 0,502±0,003 - - - - -
Основная группа 0,499±0,003 0,504±0,005 0,511±0,004* 0,514±0,002* 0,516±0,005*
Примечание: * - различия с контролем достоверны ( Р<0,05)
Таблица 4
Оптическая плотность иммунофлюоресценции эндотелиоцитов сосудов печени,
Группа 3 сутки 7 сутки 14 сутки 21 сутки 30 сутки
Контрольная группа 0,598± 0,002 - - - - -
Основная группа 0,589±0,001* 0,587±0,003* 0,576±0,004* 0,578±0,002* 0,577±0,004*
Примечание: * - различия с контролем достоверны ( Р<0,05)
На 14-е сутки эксперимента в печени помимо изменений описанных на 7-е сутки обнаруживается более выраженный холестаз (рис. 2), местами видны озера желчи и мелкие очаги некроза печеночной паренхимы. Отмечается пролиферация желчных протоков и их деформация: они удлинены, анастомозируют между собой. Центральные вены и межбалочные капилляры расширены, умеренно полнокровны.
Рис. 1. Обилие коллагена III типа в стромальном компоненте печени животного основной группы на 7 сутки эксперимента. Прямой метод Кунса с МКА к коллагену III типа, Х 900.
Рис. 2. Гистоструктура паренхимы печени животного основной группы на 14-е сутки эксперимента: желчные капилляры расширены и переполнены желчью. Окр. г.-э.. Х 200.
Рис.3. Свечение эндотелиоцитов в сосудах печени неравномерной антен-сивности у животного1-й подгруппы на 21-е сутки эксперимента. Прямой метод Кунса с МКА к СБ34. Х400.
В интерстиции долек выявляются оба интерстициальные коллагены - I и III типов, их свечение преимущественно имеет линейный прерывистый характер. ОПИ как коллагена I типа, так и коллагена III типа достоверно превышает контрольные показатели (табл. 1 и 2). Отмечается очаговое совпадение локализации этих коллагенов. В БМ сосудов выявляется умеренное, местами
яркое свечение коллагена IV типа. Эндотелиоциты экспрессируют рецепторы к СБ34, что выявляется в виде свечения неравномерной величины. При этом ОПИ коллагена IV типа достоверно превышает контроль, а ОПИ эндотелиоцитов, экспрессирующих рецепторы к СБ34, наоборот, достоверно ниже контрольного показателя (табл. 3 и 4).
На 21-е сутки в печеночной паренхиме помимо вышеописанных изменений отмечается дискомплексация трабекул и гепатоцитов их зональное крупно- и среднекапельное ожирение, а также белковая дистрофия. В фиброзных прослойках и портальных трактах, вокруг и внутри желчных протоков определяются лимфоплазмоцитарные инфильтраты (рис. 3).
В строме долек выявляются оба интерстициальные коллагены с преимущественно линейным, местами очаговым свечением. Иногда зоны свечения этих коллагенов совпадают. Обращает на себя внимание преобладание зрелого коллагена I типа над молодым интерстициальным III типа. По сравнению с контрольными показателями ОПИ обоих коллагенов достоверно выше (табл. 1 и 2). В БМ сосудов выявляется яркое, местами умеренное свечение коллагена IV типа. В препаратах, обработанных МКА к СБ34, выявляется умеренное, местами слабое неравномерное свечение эндотелиоцитов (рис. 3).
ОПИ коллагена IV типа достоверно повышена по сравнению с контролем, а ОПИ эндотелиоцитов, экспрессирую-щих рецепторы к СБ34 наоборот снижена (табл. 3 и 4).
На 30 сутки в печени выраженный холестаз, разрывы желчных протоков с образованием желчных «озер» и очагов некроза печеночной паренхимы, пролиферация желчных протоков.
Паренхима представлена мелкими узлами-регенератами, разделенными неравномерно выраженными внутридольковыми, анастомозирующими между собой, прослойками соединительной ткани (рис. 4). В соединительной ткани выявляются интерстициальные коллагены I и III типов в виде линейного свечения. Преобладает зрелый коллаген I типа (рис. 5) по сравнению с молодым коллагеном III типа, а по сравнению с контролем показатели ОПИ этих коллагенов достоверно выше (табл. 1 и 2). В БМ сосудов избыточное накопление коллагена IV типа. В препаратах, обработанных МКА к СБ34 отмечается чаще слабое неравномерное свечение эндотелиоцитов. Как результат - ОПИ коллагена IV типа достоверно повышена по сравнению с контролем, а ОПИ эндотелиоцитов, экспрессирующих рецепторы к СБ34, наоборот, достоверно снижена (табл. 3 и 4).
Рис. 4. Паренхима печени животного основной группы на 30-е сутки эксперимента. Окр. г.-э. Х 200.
Рис. 5. Строма печени животного основной группы на 30-е сутки эксперимента. Прямой метод Кунса с МКА к коллагену I типа. Х 900.
Таким образом, у животных с моделью МЖ с 14-х суток эксперимента на фоне выраженного внутри- и внеклеточного холестаза отмечено формирование билиарного цирроза печени за счет усиленного синтеза интерстициальных коллагенов I и III типов, причем последнего уже с 7-х суток эксперимента. С 14-х суток в печени значительно увеличивается содержание зрелого коллагена I типа на фоне активного синтеза молодого интерстициального коллагена III типа, в результате чего к 30-м суткам обнаруживается сформированный билиарный цирроз печени с проявлениями портальной гипертензии. В морфогенезе формирования цирроза определенную роль, играет так же усиленный синтез коллагена IV типа, представляющего собой коллаген БМ сосудов. Огрубение БМ вследствие избыточного накопления коллагена IV типа проявляется нарушением метаболизма и, как результат, адгезии эндотелиальной выстилки сосудов, что, несомненно, предопределяет формирование вышеуказанных патологических изменений печени.
Перспективы дальнейших исследований. Полученные результаты проведенного патоморфологического изучения гистоструктурных изменений печени позволяют в перспективе разработать комплексную, патогенетически обоснованную программу хирургического лечения больных с синдромом МЖ.
1. Болевич С. Б. Особенности течения свободнорадикальных процессов у больных с механической желтухой и методы их коррекции / С. Б. Болевич, В. А. Ступин, Т. В. Гахраманов [и др.] // Хирургия. - 2010. - № 7. - С. 65 - 70.
2. Гнатюк М. С. Морфолопчш змши печшки та ix кореляцiя при змодельованш обтурацiйнiй жовтяницi / М. С. Гнатюк, I. М. Клщ, М. М. Галей // Шпитал. мрурпя. - 2008. - № 4. - С. 78 - 82.
3. Елисеев С. М. Обоснование хирургической тактики при механической желтухе / С. М. Елисеев, Н. Г. Корнилов, С. П. Чикотеев [и др.] // Бюл. ВСНЦ СО РАМН. - 2010. - № 5(75). - С. 233 - 239.
4. Кожем'яюн Ю. М. Методичш рекомендацп по утриманню лабораторних тварин та робой з ними / Ю. М. Кожем'яюн, О. С. Хромов, М. А. Фшоненко [та ш.]. - К.: Авщена, - 2002. - 155 с.
5. Ничитайло М. Е. Миниинвазивная хирургия доброкачественной обструкции дистального отдела общего желчного протока / М. Е. Ничитайло, П. В. Огородник, А. Г. Дейниченко // Укр. журн. хiрургп. - 2013. - № 3. - С. 45 - 49.
6. Паршиков В. В. Ультраструктурные и иммунологические изменения печени при механической желтухе и гнойном холангите. Выбор хирургического лечения / В. В. Паршиков, С. Г. Измайлов, Е. И. Яковлева [и др.] // Анналы хирург. гепатологии. - 2009. - Т.14, № 3. - С. 48 - 55.
7. Пат. 46489 Укра'ша, G 01N 33/00. Споаб юльюсного визначення вмюту антигену в бюлопчних тканинах / Г. I. Губша-Вакулик, I. В. Сороюна, В. Д. Марковський [та ш.]. - № u200906730; заявл. 26.06.09; опубл. 25.12.09. Бюл. № 4.
8. Sai J. K. Early detection of extrahepatic bile-duct carcinomas in the nonicteric stage by using MRCP followed by EUS / J. K. Sai, M. Suyama, Y. Kubokawa [et al.] // Gastrointest. Endosc. - 2009. - Vol. 70. - P. 29 - 36.
9. Suda K. Risk factors of liver dysfunction after extended hepatic resection in biliary tract malignancies / K. Suda, М. Ohtsuka, S. Ambiru [et al. ]// Am. J. Surg. - 2009. - Vol. 197. - P. 752 - 758.
МЕХАН1ЧНА ЖОВТЯНИЦЯ: ПАТОМОРФОЛОПЧНА ХАРАКТЕРИСТИКА ПЕЧ1НКИ В ЕКСПЕРИМЕНТ1
Борисенко В. Б., Сорокша I. В., Горголь Н. I.
Проведено експериментальне дослщження на 36 щурах лшп Вютар, спрямоване на вивчення пстоструктурних змш печшки при мехашчнш жовтянищ. З використанням стандартних морфолопчних, а також iмуногiстохiмiчних методик встановлено, що з 14-1 доби експерименту на тлi вираженого внутршньо- i позаклпинного холестазу внаслщок посиленого синтезу штерстищальних колагешв I, III типу та колагену IV типу судинних мембран вiдмiчаeться початок, а до 30 доби повне формування бшарного цирозу печшки.
Ключовi слова: мехашчна жовтяниця, моделювання, патоморфолопчш змши, печшка.
Стаття надшшла 8.10.2014 р.
MECHANIKAL JAUNDICE: PATHOMORPHO-LOGICAL CHARACTERISTICS OF THE LIVER IN EXPERIMENT
Borisenko V. B., Sorokina I. V., Gorgol N. I.
Experimental study on 36 Wistar rats, aimed to study histostructure changes of liver in mechanical jaundice. Using standard morphological and immunohistochemical techniques established that 14-day experiment on the background of significant intra - and extracellular cholestasis due to increased synthesis of interstitial collagens I and III types, and type IV collagen vascular membranes marked the beginning, and by 30 day complete formation of biliary cirrhosis.
Key words: mechanical jaundice, modeling, pathomorphological changes, liver.
Pe^roeHT CTapneHKO I.I.
УДК 611.611-018:615.212.7]-08
ЗМ1НИ СТРУКТУРИ НИРКОВОГО Т1ЛЬЦЯ НА Р1ЗНИХ ТЕРМ1НАХ ХРОН1ЧНОГО
опювдного впливу
Метою проведеного дослщження було встановлення морфолопчних змш ниркового тшьця на рiзних термшах впродовж 14-ти тижневого впливу малих доз ото!ду. Матерiалом дослщження були статево зрш щури-самщ лшп "Вютар" в юлькост 56 тварин з початковою масою 160-170 г, вком 4,5-5,5 мюящв. Тваринам проводили ш'екцп налбуфшу дом'язово, щоденно, 1 раз на добу, в одному промiжку часу (10-11 година ранку) протягом 98 дiб у початковш дозi 0,212 мг/кг з поступовим И збшьшенням у межах допустимо! терапевтично! дози. Гютолопчш препарати готували за загальноприйнятою методикою. Ва тварини мютились в умовах вiварiю i робота проводилась зпдно "Правилам проведення роб^ з використанням експериментальних тварин". У ходi 14-титижневого експериментального дослщження встановлеш змши структури ниркового тшьця на рiзних термшах введення налбуфшу. В результат проведеного дослщження виявлено, що при тривалш дп ото!дного анальгетика налбуфшу нирки зазнають патолопчних змш. Патоморфолопчш змши ниркового тшьця вщбуваються протягом перших шести тижшв введення налбуфшу, а саме виявлено виражену судинну реакщю капшярного клубочка, ознаки штракапшярного гломерулiту та ознаки сегментарного гломерулосклерозу. Впродовж наступних термiнiв експерименту (8-й,10-й,12-й,14-й тиждень) встановлено бiльш виражеш змiни. Найбiльшого ураження зазнають нирюда тiльця субкапсулярно! зони.
Ключовi слова: ниркове тшьце, опiоi'дний анальгетик, штракапшярний пролiферативний гломерулiт, сегментарний гломерулосклероз.
Зважаючи на важлнв1сть медичного аспекту проблем наркоманн у сучасному сусп1льств1, вивчення морфолопчних змш оргашв та систем при хрошчнш дИ оп1о!д1в на сьогодш е актуальним напрямком морфолопчних дослщжень [3, 10]. Переб1г соматичних захворювань наркозалежних ос1б мае сво! особливост1 [2]. Проте, д1я наркотичних середник1в не обмежуеться впливом на структури нервово! системи. Тривале вживання наркотик1в призводить до структурних
