Материалы II Всероссийской научной конференции с международным участием «Наноонкология», Тюмень, 26-28 сентября 2010 г Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»



ТЕЗИСЫ КОНФЕРЕНЦИЯ «НАНООНКОЛОГИЯ», ТЮМЕНЬ 3

Материалы IIВсероссийской научной конференции с международным участием «Наноонкология», Тюмень, 26-28сентября 2010г. ТЕЗИСЫ

A.Г. Акопджанов1, Э.В. Манвелов1, А.И. Сергеев2,

B.Ю. Науменко1, А.В. Семейкин1, Н.Л. Шимановский1 СВОЙСТВА НАНОЧАСТИЦ

СЛОЖНОГО ОКСИДА ЖЕЛЕЗА (МАГНЕТИТА), ПРИМЕНЯЕМОГО В ОНКОЛОГИИ Российский государственный медицинский университет, Москва

2НИИ химической физики РАН, Москва

Наночастицы магнетита Ре304 (Ре0хРе203), а также системы, в которых магнитные наночастицы распределены в немагнитной среде, представляют интерес для современной медицины и фармакологии при разработке методов лечения и диагностики различных заболеваний, в том числе онкологических. Данные методики основаны на использовании специфических свойств материалов в наноразмерном состоянии. Особый интерес представляют наночастицы, размер которых соизмерим с размером магнитного домена, так как в этом в случае они обладают суперпарамагнитными свойствами.

В задачи исследования входило получение наночастиц магнетита, которые образуют устойчивую коллоидную систему, удовлетворяющую требованиям биосовместимости, и имеющую фиксированное физиологическое значение рН.

Получение наночастиц магнетита осуществляли с помощью реакции Элмора. Для стабилизации наночастиц использовали лимонную кислоту, которая не обладает сильными поверхностно-активными свойствами, но приемлема с биологической точки зрения и цитрат натрия.

Цитотоксичность наночастиц оксида железа определяли на культуре клеток ЫеЬа (эпителиоидный рак шейки матки человека) при времени инкубации 24 ч с помощью МТТ-теста. Жизнеспособность клеток определялась по сравнению с контрольной пробой без добавления наночастиц. Определение времен спин-спиновой релаксации протонов проводили на ЯМР-релаксометре РС-120 фирмы «Брукер».

Показано, что цитотоксичность наночастиц снижается при увеличении их оболочки за счет цитрата натрия. Раствор полученных наночастиц (60 г/л) размером 8,2 нм уменьшал времена релаксации Т1 и Т2 растворов воды и сывороточного альбумина. При этом в случае Т1 эффект был статистически значимо выше по сравнению с препаратом сравнения Резовистом.

По результатам исследований сделан вывод, что полученные суперпарамагнитные наночастицы магнетита со средним диаметром 8,2 нм обладают низкой цитотоксичностью, позволяют изменять времена релаксации протонов и, тем самым, контрастировать опухолевые образования и одновременно проводить магнитную гипертермию.

НЮ. Анисимова, В А. Даванков,

М.И. Будник, М.В. Киселевский НАНОПОРИСТЫЕ СОРБЕНТЫ, ПЕРСПЕКТИВНЫЕ ДЛЯ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ПРИ ЭКСТРАКОРПОРАЛЬНОЙ ДЕТОКСИКАЦИИ ОНКОЛОГИЧЕСКИХ БОЛЬНЫХ С СЕПСИСОМ И СЕПТИЧЕСКИМ ШОКОМ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва

Задачи исследования. Тяжелый сепсис и септический шок являются главными причинами летальности

онкологических больных в отделениях интенсивной терапии. Липополисахарид (ЛПС) грамотрицательных бактерий играет ключевую роль в развитии синдрома системной воспалительной реакции (ССВР) и сепсиса, инициируя каскад гиперпродукции провоспалительных медиаторов. Для элиминации медиаторов воспаления у септических больных применяют различные методы экстракорпоральной детоксикации, наиболее перспективным из которых является гемосорбция. Целью настоящего исследования было определение сорбционных характеристик трех типов новых сорбентов серии Стиросорб, относящихся к классу нанопористых сверх-сшитых полистиролов и являющихся продуктом современных нанотехнологий.

Материалы и методы. Исследованы сорбенты Стиросорб 414, 514, 516. Структура гранул тестируемых сорбентов характеризуется наличием наноразмер-ных пор (3-30 нм) и громадной удельной поверхностью (порядка 1000 м2/г).

Для оценки способности сорбентов элиминировать медиаторы воспаления их инкубировали с растворами, содержащими цитокины и ЛПС. Концентрацию ЛПС определяли с помощью LAL-теста (Hycult biotech-nology, The Netherlands), а содержание цитокинов - методом ИФА (Bender MedSystems, USA).

Кроме того, оценивалась биосовместимость сорбентов - их влияние на структурные и функциональные изменения клеток крови после коинкубации с тестируемыми сорбентами in vitro.

Результаты и выводы. Все 3 исследованных сорбента обладают способностью эффективно (более чем на 50 %) снижать уровень ЛПС, ИЛ-1р, ИЛ-10, ФНОа, ФНОр в изотоническом растворе, но наиболее высокую активность проявил Стиросорб 516. Полученные данные указывают на отсутствие достоверных негативных последствий для клеток в результате длительного крови контакта с испытуемыми сорбентами. Так интенсивность гемолиза не превышала 22 %, а гибель лейкоцитов - 13 %.

Таким образом, исследованные сорбенты Стиросорб 414, 514, 516 характеризуются хорошими показателями биосовместимости и высокой сорбционной активностью относительно молекул, инициирующих и опосредующих развитие ССВР, а следовательно, могут рассматриваться в качестве перспективных гемосорбентов для экстракорпоральной детоксикации при лечении больных с сепсисом.

В.П. Баклаушев1,2 , Г .М. Юсубалиева1, О.И. Гурина1, Н.Ф. Гриненко1, И .В. Викторов1, В.П. Чехонин1,2 АДРЕСНАЯ ДОСТАВКА МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ К ЭКСТРАКЛЕТОЧНОМУ ФРАГМЕНТУ КОННЕКСИНА-43

В ОЧАГ ВНУТРИМОЗГОВОЙ ГЛИОМЫ

1ФГУ «Государственный научный центр социальной и судебной психиатрии им. В.П. Сербского» Росздрава, Москва 2Российский государственный медицинский университет им. НИ. Пирогова, Москва *e-mail: gaukhar@gau.khar. org

Коннексин-43 (Cx43) - структурный компонент щелевых контактов между астроцитами, участвующими в функциях гематоэнцефалического барьера (N. Prochnow, 2008).

Существуют данные о высокой способности к миграции Сх43-положительных клеток С6-глиомы и их устойчивости к оксидативному стрессу и другим повреждающим факторам, чем Сх-43 негативные (D.C. Bates, 2007). Последнее делает интересным исследование Сх43 в рамках концепции резистентных к хи-мио- и радиотерапии популяций клеток глиомы.

Целью работы было испытание полученных нами моноклональных антител к экстраклеточному фрагменту Сх43 (Mab Сх43) in vitro на культурах Сх43-положительных клеток и in vivo на животных с экспериментальной интракраниальной глиомой С6.

Материалы и методы. Моделирование глиобла-стомы выполняли методом стереотаксической имплантации клеток линии С6 (5х105 на крысу) в стриатум 20 самок крыс Вистар.

Очищенные из асцита Mab Сх43 и неспецифические IgGm конъюгировали с 125I (37 МБк на 200 мкг белка) с помощью Иодогена (Sigma). Флюоресцентное мечение Mab Сх43 и неспецифических IgG мыши проводили с помощью A^a Fluor 660 Protein Labelling kit (Invitro-gen). Детекцию флюоресценции на срезах проводили с помощью конфокальной микроскопии на приборе Leica TCS SP5 STED (Институт биологии развития им. Н.К. Кольцова РАН).

Результаты и выводы. В живой культуре низкодифференцированных глиом Mab Сх43 визуализировали Сх43-положительные клетки с флюоресценцией мембранных коннексонов.

В экспериментах in vivo Mab Сх43 в бедренную вену крысам с глиомой С6 в первом случае, вводили MAb Сх43-125! а во втором - MAb Сх43 с A^a Fluor 660. В обоих случаях детектировали MAb Сх43 в очаге глиомы спустя 48 ч после их введения. В случае радиоизотопной метки наблюдали накопление 0,27 % от введенной дозы в ткани полушария с глиомой, почти в 5 раз больше, чем неспецифических IgGm.

Накопление MAb Сх43 с A^a Fluor 660 наблюдается в дедифференцированных астроцитах перитумораль-ной зоны - астробластах. В результате проведенных исследований подтверждено, что полученные нами MAb Сх43 специфически захватываются живыми Сх-43-позитивными клетками глиомы и астробластами пери-туморальной зоны in vivo. Адресная доставка в периту-моральную область с помощью MAb Сх43 имеет очевидные перспективы.

Во-первых, при хирургической резекции опухоли правильно определить ее границы с учетом всех имеющихся участков перивазальной и периневральной инвазии.

Во-вторых, именно в перитуморальной области локализуются стволовые опухолевые клетки, поддерживающие пул активно мигрирующих радио- и химиорези-стентных клеток глиомы.

С помощью полученных нами антител можно пытаться доставить в клетки перитуморальной зоны как цитостатические препараты, так и терапевтические гены.

МА. Барышникова1, Л.И. Минаева2, Г .М. Сухин1,

А.В. Иванов1,М.М. Кабачник2, И.П. Белецкая3,

Г.В. Пономарев3

ОЦЕНКА ЦИТОТОКСИЧЕСКОГО ЭФФЕКТА НОВЫХ ПРОИЗВОДНЫХ ХЛОРИНА Е6 IN VITRO

1РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва 2МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва 3Институт биомедицинской химии им. Ореховича РАМН, Москва

Цель работы - изучить цитотоксическое действие трех новых производных хлорина е6 in vitro на клетках аденокарциномы яичника человека SKOV-3 с помощью МТТ-теста.

Материалы и методы. Препараты:

(Г) 15(2),17(3)-диметиловый эфир 13(1)-Л-(2-аминоэтил) амида хлорина е6 (шифр min 341, M=666.80);

(П) 15(2),17(3)-диметиловый эфир 13(1)-Л-{2-[Л-(Диэток-сифосфорил)амино]этил}амида хлорина е6 (шифр Min 284, М=802.90);

(III) (2),17(3) -диметиловый эфир 13(1)-Л-(2-{Л-[ (Диэток-сифосфорил)(изопропил)метил]амино}этил)амид хлорина е6 (шифр min285, М=859.0015).

Препараты растворяли в 96% этиловом спирте, а затем в физ.растворе. ФДТ-индуцированная фототоксичность определялась на клетках с помощью МТТ-теста, а выживаемость клеток рассчитывалась по формуле: Выживаемость (%) = ОПопьп/ОПкошрсшь. Клетки сажали в 96-луночные плоскодонные планшеты по 4х104 клеток в 180 мкл полной среды RPMI-1640 на лунку. После прикрепления клеток, в лунки добавляли по 20 мкл исследуемых препаратов в различных концентрациях. Планшету с клетками инкубировали в течение 40 мин, затем клетки отмывали от невключившегося препарата. После чего клетки облучали с помощью аппарата «АФС 660» (ООО «Полироник»), плотность энергии - 4,5 Дж/см2. Планшеты с облученными клетки помещали в инкубатор при 37 °С 5% СО2, и через 24 ч проводили МТТ-тест. В качестве контроля использовали клетки, которые не обрабатывали препаратами и не облучали.

Результаты и выводы. При обработке опухолевых клеток препаратом (I) в концентрациях 6,67 мкг/мл и 3,335 мкг/мл выживаемость клеток составляет 15 %, в концентрациях 0,667 мкг/мл, 0,3335 мкг/мл и 0,0667 мкг/мл - 17 %, 24 % и 81 % соответственно. При инкубации опухолевых клеток с препаратом (II) в концентрации 1,606 мкг/мл выживаемость клеток составляет 17 %, в концентрации 0,803 мкг/мл - 31 %, 0,16 мкг/мл - 99 %, 0,08 мкг/мл - 100 %. При инкубации опухолевых клеток с препаратом (III) в концентрации 8,59 мкг/мл выживаемость клеток составляет 16 %, в концентрациях 4,259 мкг/мл, 0,86 мкг/мл, 0,426 мкг/мл, 0,086 мкг/мл и 0,043 - 15 %, 41 %, 64 %, 68 % и 94 % соответственно. Таким образом, все три исследуемых препарата оказывали выраженный дозозависимый цитотоксический эффект.

ДА. Безруков, Е.Г. Дубовик, А.П. Каплун, В.И. Швец ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ГОМОГЕНИЗАТОРА ВЫСОКОГО ДАВЛЕНИЯ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ

СТЕРИЧЕСКИ СТАБИЛИЗИРОВАННЫХ ТЕРМОЧУВСТВИТЕЛЬНЫХ ЛИПОСОМ С ДОКСОРУБИЦИНОМ

Московская государственная академия тонкой химической технологии им. М.В. Ломоносова

Задачи исследования. В исследовательской практике для формирования дисперсий термочувствительных липосом часто используется метод экструзии через ядерные фильтры при нагревании выше температуры фазового перехода используемой смеси липидов.

Данный метод обеспечивает заданный размер ли-посомальных наночастиц и их высокую монодисперсность, однако объемы обрабатываемых образцов для лабораторных экструдеров, как правило, невысоки и для удовлетворения потребности в препарате при проведении доклинических и клинических испытаний требуется выбор оборудования с большей производительностью.

В данной работе исследуется формирование исходной дисперсии термочувствиетельных липосом с сульфатом аммония (предназначенной для последующей активной загрузки доксорубицином) при помощи гомогенизатора высокого давления.

Материалы и методы. Для получения липосом использовали DPPC, DSPC, PEG-2000-DSPE фирмы Lipoid (Германия), доксорубицина гидрохлорид ФСП 42-0240-2570-02 (Биолек, Украина); сульфат аммония (Химмед, Россия). Моноламелярные липосомы получали цикличной обработкой липидной дисперсии (DPPC:DSPC:DSPE-PEG-2000:Chol 9:1:0.02:0.23; 39.5 мг/мл по липидам в 250 мМ растворе сульфата аммония) на гомогенизаторе высокого давления EmulsiFlex-C5 (Avestin Inc., Canada) при 150 МПа. После 10, 20, 30 и 40 циклов обработки отбирали часть дисперсии и определяли средний размер и распределение липосо-мальных частиц с помощью анализатора Delsa Nano (Beckman Coulter, Germany). Далее для каждого образца проводили формирование градиента сульфата аммония разбавлением и загружали доксорубицин активным способом в течение 1 ч при 50 °С. Отделение липосом от низкомолекулярных веществ для спектрофотометрического определения степени включения активной субстанции во внутренний объем липосом проводили гель-фильтрацией на колонках NAP-5 Sephadex G-25 (GE Healthcare, Великобритания).

Результаты и выводы. Показано, что, в отличие от экструдера, термостатирование гомогенизатора не требуется. Одновременно приемлемыми размерами частиц и монодисперсностью обладает липосомальная дисперсия, обрабатываемая при давлении 150 МПа в течение 20 циклов, что соответствует производительности по первичной дисперсии 90 мл/ч. Средний размер липосом в указанном образце 60-80 нм, степень включения доксорубицина (0,4 мг/мл) 96 %, соотношение субстанция/липиды 0,2 (масс).

Т.В. Белова1, Е.С. Плеханова1, Д.В. Новиков1,

А.В. Калугин1, ЕЮ. Конторщикова2, В.В. Новиков1 ЗАВИСИМОСТЬ ЧАСТОТЫ ОБНАРУЖЕНИЯ

мРНК РАКОВО-ТЕСТИКУЛЯРНЫХ ГЕНОВ ОТ СТЕПЕНИ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ АДЕНОКАРЦИНОМЫ КИШЕЧНИКА

НИИ молекулярной биологии и региональной биологии ННГУ им НИ. Лобачевского, Нижний Новгород 2Нижегородская государственная медицинская академия, Нижний Новгород

Задачи исследования. Обнаружение экспрессии РТ генов с использованием биочипов является одним из направлений диагностики онкологических заболеваний. Ранее было показано, что мРНК РТ генов выявляются как в опухолевых очагах, так и в периферической крови больных колоректальным раком. Задачей данного исследования стало сравнение встречаемости мРНК РТ генов в опухолевых очагах и периферической крови со степенью дифференциации аденокарциномы кишечника.

Методы исследования. С использованием ОТ-ПЦР было проанализировано 56 образцов периферической крови и 49 образцов опухолевых очагов больных с клинически подтвержденным диагнозом колоректального рака.

Результаты и выводы. Образцы опухолевых очагов и периферической крови исследовали на присутствие мРНК РТ генов MAGE-A, XAGE, SSX, NY-ESO-I и MAGE-C. При сравнении частоты обнаружения исследуемых мРНК в опухолевых очагах аденокарциномы кишечника с различной степенью дифференциации, достоверных различий обнаружено не было. В то же время в периферической крови тех же больных обнаружена тенденция к изменению частоты обнаружения отдельных мРНК РТ генов в зависимости от степени дифференциации аденокарциномы кишечника. Показано, что при высокодифференцированной аденокарциноме мРНК

MAGE-C (43 %) и XAGE (43 %) была обнаружена в 2 раза чаще, чем при умереннодифференцированной (MAGE-C - 21 % и XAGE - 23 %) и низко дифференцированной аденокарциноме (MAGE-C - 25 % и XAGE -25 %). Для мРНК MAGE-A и SSX генов наблюдалась обратная зависимость. В периферической крови больных с высокодифференцированной умереннодиферрен-цированной аденокарциномой мРНК MAGE-A и SSX выявлялись в 30 % и 16 % соответственно. В образцах периферической крови больных с низкодифференцированной аденокарциномой мРНК MAGE-A и SSX выявлялись чаще в 50 и 75 % случаев. Матричная РНК NY-ESO-I выявлялась только в периферической крови больных с умереннодифференцированной аденокарциномой в 18 % случаев. Таким образом, была продемонстрирована зависимость частоты обнаружения мРНК РТ генов MAGE-A, XAGE, SSX, NY-ESO-I и MAGE-C в периферической крови больных колоректальным раком от степени дифференциации аденокарциномы.

Работа выполнена при поддержке ФЦП «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России».

В. Боят, Д.С. Баранов, ЕА. Оганесян,

ВЮ. Балабаньян, РН. Аляутдин ИЗУЧЕНИЕ

ЦИТОТОКСИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ НАНОСОМАЛЬНОГО ПАКЛИТАКСЕЛА НА КЛЕТОЧНОЙ ЛИНИИ JURKAT WT

ММА им. ИМ. Сеченова, Москва

Задачи исследования. Из группы ингибиторов функции микротубулинов паклитаксел применяется наиболее широко. Однако относительно высокая токсичность в сочетании с низкой биодоступностью лимитируют его применение при ряде онкологических заболеваний. Кроме этого, являясь субстратом Р-gp, паклитаксел подвергается активному эфлюксу из опухолевых клеток. Одним из способов повышения биодоступности и преодоления МЛУ является включение цитостатиков в наночастицы. Задачи нашего исследования: создание наносомальной ЛФ на основе сополимеров молочной и гликолевой кислот, изучение in vitro кинетики высвобождения и цитотоксической активности наносомального паклитаксела.

Материалы и методы. Для получения наносомаль-ной формы использовали метод замены растворителя. Содержание паклитаксела в лиофильно высушенных образцах определяли хроматографически. Выход пакли-таксела (в процентах) определяли как соотношение пак-литаксела, найденного в образце, к введенному в синтез. Был проведен тест высвобождения in vitro в среде, имитирующей внутриклеточную жидкость. Цитотоксиче-скую активность наночастиц с паклитакселом изучали на клеточной линии JURKAT WT, экспресирующей P-gp. Для оценки цитостатического действия препаратов использовали МТТ-тест, основанный на способности дегидрогеназ живых клеток превращать бледно-желтый МТТ в голубые кристаллы формазана.

Результаты и выводы. Процент включения паклитаксела составил 99,5 %, при этом размер наночастиц составил 300±100 нм. Для наносомальной лекарственной формы паклитаксела показано более плавное, контролируемое высвобождение по сравнению с обычным паклитакселом. Наносомальные частицы с паклитакселом оказывали цитотоксическую активность в низком диапазоне концентрации 10-6 М (жизнеспособность сохранили около 40 % клеток), в то время как обычный паклитаксел оказывал цитотокси-ческий эффект в диапазоне концентрации 10-5-10-4М (80% выживших клеток).

Таким образом, в ходе проведенного исследования показана возможность улучшения биодоступности и повышения цитотоксического эффекта в отношении клеток JURKAT WT, экспресирующих P-gp, посредством включения паклитаксела в наночастицы.

Н.А. Брусенцов1, ЮА. Пирогов2, Т.Н. Брусенцова3,

П.И. Никитин3, М.П. Никитин3, Т.И. Ксеневич3,

В А. Полянский4, И.С, Голубева , М.В. Гуляев2,

ДА. Тищенко2, А.В. Иванов1

ВЫЯВЛЕНИЕ СОСУДОВ, ПИТАЮЩИХ ОПУХОЛЬ

1РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва 2НЦмТсМГУ им. М.В. Ломоносова, Москва 3ИОФ им. А .М. Прохорова РАН, Москва 4НИИМ МГУ, Москва

Задача исследования. Внутривенное введение традиционных противоопухолевых препаратов (ТПП) лишь тормозит распространение злокачественных опухолей в организме больного. Чтобы помочь больному справиться с такими опухолями, успешно используются: направленная регионарная внутриартериальная доставка комбинаций ТПП с магнитоуправляемыми противоопухолевыми нанопрепаратами и регионарная гипертермия; хирургические методы и биотерапия с другими терапевтическими воздействиями. Основные усилия при этом направлены на оптимизацию способов раннего выявления сосудов, питающих опухоли.

Материалы и методы. Декстранферрит (ДФ) синтезировали из наночастиц Fe304 и декстрана. Золи ДФ в разных дозах были испытаны в качестве Т2 и Т2*-взвешенных негативных МРТ контрастных нанопрепаратов при визуализации: сосудов, питающих капсулу и опухоль, крови, направляющейся по сосудам к капсуле, текущей в капсуле и сосудах опухоли, таргетинга для подтверждения корректности доставки и распределения нанопрепаратов в опухоли при аденокарциноме молочной железы Са 755 самок мышей C57Bl/6j с опухолями объёмом от 40 до 420 мм3. В период от 3 ч до 30 ч до проведения МРТ сканирования внутривенно вводили от 0,02 мл до 0,2 мл 10% золя ДФ в полиглюкине. ДФ повышал контраст изображений органов и тканей, структур капсулы и сосудов, питающих опухоль.

Результаты. При внутривенном введении ДФ с дополнительной инъекцией магневиста и последующим Т2-, Т2*-взвешенным 3D сканированием получены усиленные МРТ-изображения, на основании которых определены расположение и функциональное состояние поверхностных и других сосудов, питающих капсулу и опухолевые ткани.

Выводы. Разработан способ выявления сосудов, питающих опухоль, в эксперименте.

Е.О. Букаева, Е.В. Степанова, АЮ. Барышников,

НА. Плотникова

ХАРАКТЕРИСТИКА АНГИОГЕНЕЗА В ОПУХОЛЯХ ШЕЙКИ МАТКИ, ИНДУЦИРОВАННЫХ БЕНЗ (А)ПИРЕНОМ, -ПЕРСПЕКТИВЫ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ В СКРИНИНГЕ

ПРОТИВООПУХОЛЕВЫХ ПРЕПАРАТОВ

ГОУВПО «Мордовский государственный университет им. Н.П. Огарева», Медицинский институт, кафедра патологии, Саранск РОНц им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва

Одним из наиболее важных достижений в лечении злокачественных новообразований в последние несколько лет является увеличение эффективности химиотерапии при ее использовании в комбинации с антиангиогенной терапией.

Такая комбинация может увеличивать продолжительность жизни больных колоректальным раком, раком легких, почек, и других не менее чем на 2-5 месяцев по сравнению с химиотерапией. Антиангиогенная терапия направлена на блокирование образования новых сосудов в опухоли и уничтожение уже существующих опухолевых сосудов. Ангиогенез - формирование новых микрососудов из уже существующих микрососудов. При блокировании данного процесса рост злокачественных опухолей в эксперименте прекращается и в опухоли наблюдается гибель опухолевых клеток из-за нехватки питательных веществ и кислорода. Одним из возможных механизмов, объясняющим повышение эффективности химиотерапии под действием антиангиогенных препаратов, является так называемая нормализация кровотока под действием антиангиогенной терапии.

Основной проблемой поиска эффективных антиан-гиогенных препаратов является тот факт, что используемые на сегодняшний день мышиные опухолевые модели in vivo не соответствуют клинической и морфологической модели опухолей человека. В нашем исследовании мы разработали опухолевую модель рака шейки матки, индуцированную бенз(а)пиреном и охарактеризовали их ангиогенную активность. Данная модель может быть использована для тестирования возможных ингибиторов опухолевого ангиогенеза.

Материалы и методы. Эксперимент был поставлен на 30 самках нелинейных белых мышей в возрасте 2 мес., весом 20-22 г. Моделирование цервиковагиналь-ного канцерогенеза, индуцированного бенз(а)пиреном, производили по стандартной методике. Длительность эксперимента составила 26 недель. У мышей из каждой группы, подвергшихся воздействию бенз(а)пирена, и у всех интактных мышей была забрана ткань опухоли шейки матки для гистологического и иммуногистохи-мического исследований.

Патогистологическое исследование проводилось светооптическим методом. В ходе иммуногистохимическо-го исследования была изучена экспрессия ангиогенных факторов в ткани индуцированных опухолей. Экспрессия VEGF и количество кровеносных сосудов, окрашенных антителами к CD31, изучалась с использованием коммерческих антител и проявочных тест-систем. Подсчитывали количество CD31+ микрососудов в опухоли в не менее 3 полях зрения при увеличении х20. Экспрессию VEGF определяли в интенсивности окрашивания опухолевых клеток, как 1+ при низкой интенсивности окрашивания, и как 2+ при средней интенсивности окрашивания. Неоплазии классифицировались согласно рекомендациям Международного агентства по исследованию рака (МАИР).

Полученные результаты обрабатывали статистически с использованием критериев t Стьюдента, точного метода Фишера х2 с помощью пакета прикладных программ «МедСтатистика».

Результаты. Под влиянием бенз(а)пирена у мышей контрольной группы развивались опухоли шейки матки с частотой 90 % (27 животных из 30). Среднее число опухолей на 1 мышь-опухоленосителя в группе контроля составляло 3,4±0,4. При патогистологическом исследовании ткани опухолей шейки матки через 4 мес. от начала эксперимента у 20 мышей была выявлена дисплазия легкой степени. Морфологическая картина была представлена пролиферацией клеток базальных слоев эпителия, проникающих в промежуточный и поверхностный слой.

Через 5 мес. у 9 мышей был выявлен «рак на месте», характеризовавшийся появлением атипичных полиморфных опухолевых клеток, занимающих полностью всю толщу эпителиального пласта, но не выходящих за пределы базальной мембраны.

Через 6 мес. у 7 экспериментальных животных обнаружен плоскоклеточный рак с признаками инфильтратив-ного роста тяжей анаплазированного эпителия в подлежащие ткани. При ИГХ анализе процессов нео ангиогене -за в индуцированных бенз(а)пиреном опухолях шейки матки у мышей наблюдалось более 15 CD31+ микрососудов в поле зрения, при этом в опухолевых клетках отмечалась ярко выраженная экспрессия VEGF(2+).

Выводы. Разработанная модель характеризуется усиленным ангиогенезом по сравнению с традиционно используемыми моделями перевиваемых опухолей и может быть использована для скрининга антиангио-генных веществ.

П.М. Бычковский1, А А. Кладиев2, СЮ. Щеголев3,

Т.Л. Юркштович1, Ф.Н. Капуцкий1, С.О. Соломевич1,

С.А. Беляев1, Ю.П. Истомин4, Е.Н. Александрова4,

С А. Красный4

КОЛЛОИДНЫЕ ЧАСТИЦЫ ЗОЛОТА

КАК СРЕДСТВО НАПРАВЛЕННОЙ ДОСТАВКИ

ПРОСПИДИНА

Учреждение БГУ «НИИфизико-химических проблем», Минск 2ООО «Биотехнологическая компания ТНК», Москва 3ИБиФРиМРАН, Саратов

4ГУ «РНПЦ ОМР им. Н.Н. Александрова», Минск

Введение. Для увеличения терапевтического эффекта противоопухолевых препаратов необходимо разработать методы их целенаправленной доставки в пораженный орган. Перспективным представляется доставка лекарственных веществ с помощью биологически совместимых наночастиц. Так, инкапсулирование в «наноконтейнер» позволяет создавать инъекционные препараты пролонгированного действия, характерная особенность которых - накопление нанокапсул в районе опухоли, защищенность лекарственных форм от деструкции во время их переноса к пораженному органу, а также возможность активного или пассивного накопления в органе-мишени и высвобождение переносимых препаратов контролируемо как по дозе, так и по времени.

Материалы и методы. Водные растворы коллоидного золота (КЗ) со средним диаметром частиц 25 нм готовили по методике, описанной С.А Маракуше-вым (1991). Изучена сорбция КЗ раствором гидрохлорида проспидина с концентрацией 0,1 г/мл. Исследование цитостатической активности проведено на мо-нослойной культуре опухолевых клеток Не1а (эпите-лиоидная карцинома шейки матки человека, клон М), полученной из коллекции клеточных культур РНПЦ ЭМ. Культуру клеток выращивали в питательной среде 199 с добавлением 10% сыворотки крови плодов коровы и 50 мкг/мл канамицина.

Результаты и выводы. Установлено, что максимальное количество иммобилизованного проспидина составляет около 1 мг на 100 мкл раствора коллоидного золота. Показано, что цитостатическая активность про-спидина, иммобилизованного на КЗ остается на том же уровне, что и для инъекционной формы проспидина, при значительном уменьшении количества цитостатика. Показано, что КЗ при больших концентрациях также способно проявлять цитостатическую активность.

СЮ. Васильченко, А.В. Рябова, В.Б. Лощенов ПРИМЕНЕНИЕ ОПТИЧЕСКОЙ СПЕКТРОСКОПИИ ДЛЯ НЕИНВАЗИВНОЙ ОЦЕНКИ КОНЦЕНТРАЦИИ НАНОЧАСТИЦ В БИОТКАНЯХ IN VIVO ИОФ им. А М. Прохорова РАН, Москва

Задачи исследования. Разработка методов неинвазивной оценки концентрации наночастиц в биоло-

гических тканях in vivo с целью создания научного задела по диагностике и лечению злокачественных новообразований и ряда других заболеваний.

Материалы и методы. Исследование проведено на модельных растворах с оптическими свойствами, аналогичными свойствам биотканей, и на экспериментальных животных (мыши с привитой карциномой Эрлиха). Для характеристики коллоидных растворов наночастиц, приготовленных для системного введения экспериментальным животным, использовали спектрометр динамического рассеяния света Photocor Complex (определение гидродинамического радиуса наночастиц), спектрофотометр Hitachi U-3400 с интегрирующей сферой и волоконнооптический спектрометр Lesa-01-Biospec с набором твердотельных лазеров для возбуждения флюоресценции (оптические свойства). Исследование биотканей экспериментальных животных, содержащих наночастицы, осуществлялось методами люминесценции спектроскопии и спектроскопии диффузного отражения с применением волоконно-оптического спектрометра. Для оценки концентрации наночастиц в биоткнях был разработан специальный алгоритм анализа получаемых спектральных данных.

Результаты и выводы. Показано, что оптикоспектральные методы могут эффективно использоваться для высокоточного неинвазивного количественного анализа накопления наночастиц в биотканях.

Работа выполнена при поддержке Министерства образования и науки Российской Федерации в рамках ФЦП «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» на 2009-2013 гг. (ГК № П544).

С.Э. Гельперина1, В.И. Швец2 ДОСТАВКА ЛЕКАРСТВЕННЫХ ВЕЩЕСТВ В МОЗГ С ПОМОЩЬЮ ПОЛИМЕРНЫХ НАНОЧАСТИЦ

1ООО «НПК «Наносистема», Москва Московская государственная академия тонкой химической технологии им. М.В. Ломоносова

Задачи исследования. Изучение возможности применения биодеградируемых полимерных наночастиц (НЧ), модифицированных поверхностно-активными веществами (ПАВ), для доставки в мозг доксорубицина (Докс); определение потенциала наносомальной формы доксорубицина для лечения экспериментальной глиобластомы.

Материалы и методы. Полибутилцианоакрилатные наночастицы, нагруженные доксорубицином (Докс-ПБЦА), получали методом полимеризации бутилциано-акрилата в водной среде. Противоопухолевую активность изучали на модели интракраниальной глиобласто-мы 101/8 у крыс Wistar. Параметры биораспределения и токсикологические характеристики Докс-ПБЦА изучали на крысах Wistar, используя стандартные методы. Сорбцию белков на поверхности НЧ изучали методом двухмерного электрофореза.

Результаты и выводы. Наносомальная форма док-сорубицина Докс-ПБЦА проявила противоопухолевый эффект в отношении глиобластомы при внутривенном введении. Увеличение продолжительности жизни составило 85 %; более того, Докс-ПБЦА обеспечивал длительную ремиссию (отсутствие опухоли, по крайней мере, в течение 6 мес.) у > 20 % животных. Как свидетельствуют результаты фармакокинетических исследований, противоопухолевый эффект Докс-ПБЦА в отношении интракраниальной опухоли обусловлен способностью наночастиц доставлять в мозг терапевтические концентрации доксорубицина. Данные иммуногистохи-мического исследования показали, что Докс-ПБЦА оказывает выраженный антиангиогенный эффект, ингибируя рост сосудов в опухоли.

Результаты токсикологического исследования показали, что кардио- и тестикулярная токсичность доксорубицина значительно ослабляется при связывании его с НЧ. Найденная корреляция между профилями сорбции белков плазмы на поверхности НЧ и фармакологическим эффектом наносомальных форм Докс предполагает, что доставка Докс в мозг происходит при участии аполипопротеина А-1, который НЧ адсорбируют при введении в кровь.

Полученные результаты значительно расширяют наши представления о сфере применения НЧ как средстве доставки лекарственных веществ в мозг, а также о практической ценности этой технологии. Можно полагать, что применение наносомальных препаратов откроет новые возможности для неинвазивной химиотерапии опухолей мозга.

К.С. Голохваст

НАНОЧАСТИЦЫ ПРИРОДНЫХ МИНЕРАЛОВ КАК ПОТЕНЦИАЛЬНЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ СРЕДСТВА

Дальневосточный ГТУ

Задачи исследования. Ранее было показано (РауеИе е1 а1., 2000-2002), что природные минералы (цеолититы) могут использоваться как перспективные противоопухолевые средства. Имеются также сообщения (Сидоренко и др., 2009), о том, что наночастицы металлов также подавляют рост опухолей.

Цель работы - исследовать возможность измельчения природных минералов до наноразмерной формы.

Материалы и методы. Природные минералы -цеолититы различных месторождений Дальнего Востока России предварительно измельчались в механической дробилке ВКМД-6 до миллиметровой фракции, а затем - в планетарной мельнице РШеИ РиНуег-18еКе 2 в течении 10 мин. Более длительная обработка может привести к конформационным сдвигам в кристаллической решетке. С помощью лазерного анализатора частиц РгНеИ Апа^еКе 22 ЫапоТее устанавливался размер частиц и их распределение по фракциям. Дополнительным методом исследования образцов являлась сканирующая электронная микроскопия с помощью ^ОЬ ^М-6490ЬУ.

Результаты и выводы. По результатам лазерного анализа размера частиц, разброс крупностей (частиц цеолита) невелик и составляет от 100 нм до 3 мкм, что в целом подтверждается и данными сканирующей электронной микроскопии. При этом частицы цеолита представлены достаточно окатанными обломками без острых углов.

Можно сделать предварительный вывод, что измельчение в планетарной мельниц в указанном режиме, может применяться как метод получения нанораз-мерных частиц цеолититов.

Л.В. Гончаренко1, Р.Б. Пугачева1,

НК. Клаан2, Э.И. Кукулина2 ТИПЫ ПОЛИМЕРОВ, ПРИМЕНЯЕМЫХ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ЛИПОСОМАЛЬНЫХ ФОРМ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫХ ПРЕПАРАТОВ (АНАЛИЗ ЛИТЕРАТУРНЫХ ДАННЫХ, 2000-2010 ГГ.) РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва 2ВИНИТИ РАН, Москва

Липосомы, наноразмерные фосфолипидные образования из одной или нескольких бислойных амфифиль-ных мембран, привлекли внимание медиков как потенциальные средства доставки лекарственных препаратов непосредственно в клетку еще с 60-х годов ХХ в. В настоящее время липосомальные лекформы успешно

применяются в терапии онкологических заболеваний, что позволяет повысить терапевтический эффект лекарственного средства (ЛС), снизить его токсичность (например, кардиотоксичность доксорубицина) по сравнению со свободной формой, уменьшить побочные эффекты, предохранить ЛС от преждевременной деградации в организме.

Для увеличения длительности циркуляции ЛВ в кровотоке были разработаны т.н. стерически стабилизированные липосомы, гидрофильная оболочка которых дополнительно покрыта биосовместимым полимером, что снижает опсонизацию. Важно, чтобы ЛС надежно удерживалось внутри липосом до поступления в ткань или орган-мишень.

Полиэтиленгликоль (ПЭГ) стал первым полимером, примененным с этой целью, и пегилированные липосо-мы широко используются в настоящее время в клинической практике (препараты с доксорубицином, цисплати-ном, паклитакселем и др.). Для получения стерически стабилизированных липосом, в частности, для модификации липосомальной оболочки используют также ам-фифильные производные ПЭГ, ПВП, акриламида.

Наряду с водорастворимыми полимерами и липо-сомами в водной среде в организм могут быть введены полимерные лекарственные формы субмикроско-пического размера (10-1000 нм): наносферы (сферические сплошные полимерные частицы, в массу которых введено лекарственное вещество) и нанокапсулы (сферические полимерные оболочки включающие лекарственное вещество). Подобные полимерные системы образуются при полимеризации акриламида, метилметакрилата, эфиров цианакриловой кислоты или с использованием готовых полимеров - альбумина, циклодекстринов, полиэфиров молочной и гликолевой кислот.

Небольшой размер этих частиц позволяет создать на их основе устойчивые водные системы. Оптимальные пути применения введения таких лекарственных форм - инъекционное (в том числе внутривенное, подкожное и внутримышечное) и пероральное.

Л.В. Гончаренко1, Р.Б. Пугачева1, С А. Лысенко1,

Е. Прохоров2, М.И. Кумсков2 ВОЗМОЖНОСТЬ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ТОКСИКОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫХ СОЕДИНЕНИЙ НА ОСНОВЕ ДАННЫХ, ПРЕДСТАВЛЕННЫХ В ОТКРЫТЫХ ЛИТЕРАТУРНЫХ ИСТОЧНИКАХ 1РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва 2ММФ МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва

По противоопухолевым веществам существует обширный материал, собранный и систематизированный в базы данных (БД) различных международных организаций: PubChem NCI (USA), Beilstein database, TOCRIS Bioscience, ChemBlink, DRUGBANK, PDB и т.п. дающий широкие возможности дальнейшего анализа для прогноза вида «структура-свойство» как для новых, так и ранее известных противоопухолевых соединений, в том числе в виде форм, обеспечивающих их направленную доставку (например, стерически стабилизированные липосомы, наносферы, нанокапсулы). Однако возможности использования этих БД ограничены доступными поисковыми сервисами одномерных запросов.

Одновременно неоднородность экспериментальных показателей, недетерминированность пространственных молекулярных структур, возможность неадекватного представления результатов, а также то, что процесс выборки данных для создания обучающих массивов остается достаточно трудоемким, все это влияет на адекватность анализа и прогнозирования свойств.

Одна из задач, позволяющих автоматизировать в дальнейшем процесс формирования обучающих массивов для программ прогноза структура-свойство, (таких как PASS и ряд других на основе QSAR-методов) состоит в поиске и выделении пространственных дескрипторов молекулярных структур для осуществления прогноза биологической активности и, в совокупности с ними, токсикологических свойств. Был рассмотрен метод нечетких дескрипторов для представления пространственных структур и прогнозирующая модель, отличающаяся количественной оценкой биологических свойств.

И.Н. Григорьева, Э.Ш. Соломко,

Е.В.Степанова, Т.К. Харатишвили ИНГИБИРОВАНИЕ ВАСКУЛОГЕННОЙ МИМИКРИИ -НОВЫЙ ПОДХОД К ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ АНТИАНГИОГЕННОЙ ТЕРАПИИ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ НАНОПРЕПАРАТОВ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва

Введение. В настоящее время показано, что ангиогенез является не единственным механизмом снабжения опухолевых клеток питательными веществами и кислородом. Васкулогенная мимикрия (ВМ) - это формирование de novo опухолевыми клетками каналов, участвующих в кровотоке и окруженных базальной мембраной, в отсутствии эндотелиальных клеток и фибробластов. Накапливаются данные, что процесс ВМ может быть задействован в формировании резистентности к традиционной антиангиогенной терапии. Перспективным является подход к тестированию нанопрепаратов, направленных на снижение кровотока в опухоли, когда анализируется их эффективность блокирования ангиогенеза и васкулогенной мимикрии.

Цель - разработать скрининговую экспериментальную опухолевую модель для тестирования способности нанопрепаратов ингибировать ВМ в экспериментах in vitro и in vivo.

Материалы и методы. Исследование проведено на 17 клеточных линий метастатической меланомы кожи человека. Тестирование клеточных линий на способность к васкулогенной мимикрии in vitro проводилось при инкубации клеток на Матригеле, фиб-ронектине и коллагене. Эксперименты in vivo проведены на иммунодефицитных мышах линии BalbC при введении подкожно 1-5x106 клеток метастатической меланомы кожи. Анализ ВМ на срезах опухолей проводился с использованием реактива Шиффа (PAS окрашивание) и иммуногистохимического анализа экспрессии CD31 на эндотелиальных клетках.

Результаты. Среди 17 клеточных линий метастатической меланомы кожи была отобрана клеточная линия mel Cher в качестве положительной модели ВМ. Клеточная линия метастатической меланомы кожи Mel Cher стабильно воспроизводит СПС in viro при инкубации на матриксе базальных мембран (Матригель) в краткосрочных тестах. СПС формируются в течение 8 ч после нанесения клеток и сохраняются до 24 ч. Образованные структуры имеют вид упорядоченной сети, где клетки образуют соединенные между собой трубочки, повторяя поведение эндотелиальных клеток. Инкубация клеток линии Mel Cher с противоопухолевыми веществами в разработанном краткосрочном тесте in vitro позволяет выявить вещества, блокирующие образование ВМ. В этом случае клетки, посаженные на Матригель, формируют либо короткие, незамкнутые трубочки, неограниченные контактами с другими трубочками, либо собираются в отдельные, не связанные

друг с другом кластеры клеток. Также клеточная линия меланомы кожи Mel Cher способна к формированию тубулярных структур в долгосрочных тестах (до 3 недель). Клетки инкубируются на матриксе базальных мембран (Матригель) или белках экстрацеллюлярного матрикса (коллаген, фибронектин) в высокой плотности в течение 3 недель. Формирование тубулярных структур начинается спустя три дня после посадки клеток и завершается к концу 3 недели.

Проведен анализ экспрессии некоторых белков на клетках линии Mel Cher иммуноцитохимическим методом. Показано, что данная линия экспрессирует маркеры эндотелиальных клеток, что позволяет использовать ее для изучения механизмов ВМ.

Показано, что при имплантации мышам 1-5 млн. клеток Mel Cher наблюдается формирование опухолей в течение 20 дней. При гистологическом исследовании срезов с парафиновых блоков удаленной опухоли показано, что в опухоли образуются PAS-положительные структуры (параллельные, параллельные с пересечением, арки и т.д.), характерные для опухолей человека. Окрашивание реактивом Шиффа (PAS окрашивание) позволяет выделить базальные мембраны в ткани опухоли, характерные для кровеносных сосудов и каналов, ограниченных опухолевыми клетками (ВМ). Дополнительное двойное окрашивание антителами против CD34+ показало, что PAS-положительные структуры не ограничиваются только CD34-положительными кровеносными сосудами, что также свидетельствует о наличии ВМ внутри имплантированных опухолях.

Выводы. Таким образом, разработана скрининговая модель для изучения веществ, блокирующих ВМ. Опухолевая модель запатентована.

А.М. Дёмин1, О.В. Корякова1, М.А. Уймин2,

А А. Мысик2, А .Е. Ермаков2, В.П. Краснов1

МОДИФИКАЦИЯ НАНОЧАСТИЦ FE3O4

ПРОИЗВОДНЫМИ

ПРОПИЛТРИАЛКОКСИ СИЛАНОВ

1 Институт органического синтеза им. И.Я. Постов-

ского УрО РАН, Екатеринбург

e-mail: demin@ios.uran.ru

2Институт физики металлов УрО РАН, Екатеринбург e-mail: yermakov@imp.uran.ru

Задачи исследования. Назработка методов химической модификации поверхности НЧ Fe3O4 функционализи-рованными производными пропилсилана (3-амино-, 3-гли-цидокси- и 3-меркаптопропилтриокси силаном), изучение влияния на процесс функционализации природы растворителей, а также разработка методов количественной оценки степени иммобилизации силана на поверхности НЧ.

Материалы и методы. НЧ Fe3O4 (20-40 нм) получены методом газофазного синтеза в ИФМ УрО РАН. Иммобилизация производных пропилсилана на МНЧ подтверждена данными ИК-спектроскопии при использовании инфракрасного Фурье-спектрометра «Nicolet 6700». Массовая доля Si определялась методом атомноэмиссионной спектроскопии на оптическом эмиссионном спектрометре (АЭС) «iCAP6300 Duo» с индуктивно связанной плазмой.

Результаты и выводы. В ходе работ разработаны методы поверхностной модификации НЧ Fe3O4 производными пропилсилана, получены образцы, содержащие на поверхности 0,6-0,9 ммоль силанового производного на 1 г НЧ. Реакция силанизации наиболее эффективно протекает в полярных растворителях (95 % С2Н5ОН или Н2О). Максимальная степень модификации поверхности наночастиц во всех случаях достигается при использовании 2,0-3,0 ммоль алкоксисила-на в расчёте на 1 г МНЧ.

Разработана методика измерений количества ами-нопропилсилана на поверхности НЧ Fe304 методом ИК спектроскопии, основанная на сопоставлении отношений S полос колебаний связей Fe-О (750-486 см') наноматериала и связей Si-О (1240-786 см-1) материала покрытия с результатами измерения массовой доли Si в исследуемом нанокомпозите методом АЭС.

Работа выполнена при финансовой поддержке УрО РАН (проект № 09П-3-2001 и № 09И-3-2004), а также в рамках Государственной программы поддержки ведущих научных школ (грант НШ 65261.2010.3), и грантом РФФИ Урал №10-03-96003-р_урал_а.

А.С. Дудниченко1, Ю.М. Краснопольский 2 ИССЛЕДОВАНИЕ

ЛИПОСОМАЛЬНЫХ ФОРМ ЦИТОСТАТИКОВ В ОНКОЛОГИИ

1Харьковская МАПО, Украина 2Кафедра технологии НТУ «ХПИ», Харьков

Использование таргетной терапии в лечении ЗО сегодня является стандартом, поэтому разработка и использование нанотехнологий, в частности, липосом, является перспективным. На клинической базе кафедры онкологии (областной онкологический центр) при проведении ХТ использованы липосомальный доксоруби-цин (Липодокс) и липосомальный цисплатин (Липоп-лат). При метастатическом раке желудка (IV стадия, 37 больных, 1996 г.) получено увеличение медианы выживаемости с 4,9 мес. до 6,1 мес. (р<0,05) по сравнению с химиотерапией стандартным доксорубицином и циспла-тином. При метастатическом колоректальном раке (24 больных) медиана выживаемости возросла соответственно с 5,9 мес. до 8,3 мес. Липодокс также использовали в качестве неоадъювантной (предоперационной) монохимиотерапии у 64 больных (2006 г.) местнораспространенным (неоперабельным) РМЖ. Операцию удалось выполнить в 41 % случаев в основной и в 38 % случаев в контрольной группе после ХТ стандартным доксоруби-цином. Сократился срок подготовки к операции (перевод неоперабельной опухоли в операбельную) с 84 дней в контрольной группе до 42 дней в основной группе. Уменьшилась токсичность ХТ в основной группе. При распространенном неоперабельном РЛ (средний возраст

65,5 лет) программу ХТ (цисплатин и этопозид, 6 курсов в течение 18 недель) удалось выполнить у 21 из 35 больных (60 %) при использовании липосомального циспла-тина, в контрольной группе без липосом - только в 40 % случаев (2009-2010 гг.): остальным больным ХТ остановлена ввиду токсичности (снижение клиренса креати-нина). Наш клинический опыт позволяет рекомендовать использование липосомальных цитостатиков как «тар-гентых», а также более доступных по сравнению с моноклональными антителами.

К.В. Ермакова1, З.С. Смирнова1, ИЮ. Кубасова1,

Л.М. Борисова , М.П. Киселева , Н.А. Оборотова1,

ГА. Меерович3, ЕА. Лукьянец2 СРАВНЕНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ ЛИПОСО-МАЛЬНОЙ ДИСПЕРСИИ ТИОСЕНСА И ЛИО-ФИЛИЗИРОВАННОЙ ЛИПОСОМАЛЬНОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ ФОРМЫ (ТИОСЕНСА-ЛИО) ПРИ ФОТОДИНАМИЧЕСКОЙ ТЕРАПИИ ГЛИ-ОБЛАСТОМЫ 101/8 КРЫС 1РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва 2ФГУП «ГНЦ»НИОПИК», Москва 3ЦЕНИ ИОФ им. А .М. Прохорова РАН, Москва

Лечение злокачественных опухолей головного мозга составляет одну из нерешенных задач в нейроонкологии.

На современном этапе наиболее эффективным является комбинированный подход. Фотодинамическая терапия (ФДТ) является эффективным дополнительным методом, применяемым при комбинированном лечении злокачественных глиом. Одним из важных направлений повышения эффективности фотодинами-ческой терапии является поиск фотосенсибилизаторов (ФС) с поглощением в спектральном диапазоне 700800 нм, в котором собственное поглощение биологических тканей минимально. Одним из таких ФС является новый отечественный фотосенсибилизатор Тиосенс.

Целью настоящего исследования является сравнение эффективности ФДТ с использованием липосо-мальной дисперсии Тиосенса и лиофилизированной липосомальной лекарственной формы (Тиосенса-ЛИО) на глиобластоме 101/8 крыс.

Материалы и методы. Глиобластому 101/8 перевивали интракраниально беспородным крысам по 1-2 млн. опухолевых клеток. Липосомальную дисперсию Тиосенса и Тиосенс-ЛИО вводили внутривенно в дозе

3 мг/кг через 6 дней после перевивки опухоли и за 24

4 до проведения лазерного облучения. Уровень накопления фотосенсибилизатора оценивали спектральнофлуоресцентным методом. Лазерное облучен2ие проводили при плотности мощности 100 мВт/см2 в течение 15 мин (90 Дж/см2). Критерием эффективности служило увеличение продолжительности жизни (УПЖ, %) опытных крыс по сравнению с контрольными животными.

Результаты. Установлено, что липосомальная дисперсия Тиосенса и Тосенс-ЛИО проникают через гематоэнцефалический барьер и селективно накапливаются в глиобластоме 101/8. Терапевтическая эффективность ФДТ с использованием липосомальной дисперсии Тиосенса при интерстициальном лазерном облучении через трепанационное отверстие составляет 22 % УПЖ, а Тиосенса-ЛИО - 18 %. При дополнительной декомпрессионной краниотомии (4x5 мм) и интерстициальном лазерном облучении УПЖ составляет 70 % и 80 % для липосомальной дисперсии Тио-сенса и Тиосенса-ЛИО соответственно.

Заключение. Лиофилизированная липосомальная лекарственная форма Тиосенса не уступает по эффективности липосомальной дисперсии Тиосенса.

КЮ. Жижин, ЕЮ. Матвеев, И.Г. Макаренко,

Я.З. Волошин, Н.Т. Кузнецов

НОВЫЕ МЕТОДЫ СОЗДАНИЯ БОРСОДЕРЖАЩИХ СОЕДИНЕНИЙ ДЛЯ АДРЕСНОЙ ДОСТАВКИ БОРА В КЛЕТКИ ОПУХОЛЕЙ

Институт общей и неорганической химии им.

Н.С. Курнакова РАН, Москва

Трис-диоксиматные комплексы с инкапсулированным в трехмерной полости клатрохелатного лиганда ионом металла являются удобной синтетической «платформой» для получения новых борсодержащих соединений для 10В-нейтронозахватной терапии. Молекулы клатрохелатов имеют четыре оси и восемь точек функционализации, для которой можно использовать широкий круг функционализирующих заместителей. Это позволяет получать трехмерные молекулярные структуры с заданным расположением фарма-кофорных заместителей, то есть использовать макро-бициклические остовы в качестве трехмерного кора для дизайна наноразмерных борсодержащих биологически активных соединений.

В докладе будут представлены предложенные нами основные подходы к созданию соединений на основе трис-диоксиматов для 10В-нейтронозахватной терапии рака.

Будут изложены методы химического конструирования гибридных структур, включающих клеточные комплексы металлов, функционализированные полиэдрическими кластерами бора. Разработанные нами подходы позволяют использовать в качестве борсодержащих соединений для направленной модификации клеточных комплексов металлов производные кластерных анионов бора с тиольными, аминными, нитрилиевыми группам. При этом удается синтезировать олигомерные клатрохелат-клозо-декабораты, содержащие в своем составе более 60 атомов бора.

Таким образом, нами разработан новый подход к синтезу препаратов для НЗТ рака, причем эффективность соединений обеспечивается двумя основными факторами: с одной стороны, значительным содержанием атомов бора, как в клеточном остове, так и в реберных клозо-боратных заместителях, а, с другой стороны, адресной доставкой соединений в мишени - опухолевые клетки организма.

С.Д. Захаров1, А.В. Иванов2, Nguyen Hung Son3

0 РОЛИ ВОДЫ

В МОДИФИКАЦИИ МЕМБРАННОЙ НАНОТОПОЛОГИИ ПРИ ЗЛОКАЧЕСТВЕННОМ ПЕРЕРОЖДЕНИИ КЛЕТОК

1 Физический институт им. П.Н. Лебедева РАН, Москва 2РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва 3Институт физики Национальной академии наук Вьетнама

Задачи исследования. Потенциал применения достижений физических наук в диагностике и терапии онкологических заболеваний велик.

Особенно перспективны разработки на базе так называемых холодных лазеров, обладающих выраженными биологическими эффектами в отсутствии заметного теплового нагрева. В основе действия холодных лазеров лежит светокислородный эффект (СКЭ). Механизм СКЭ на молекулярном уровне описывается в квантовомеханических терминах магнитно-спиновой конверсии растворенного кислорода.

В докладе будет продемонстрирована роль динамических изменений водной матрицы в поддержании нормальной наноархитектуры клеточных мембран и их злокачественной модификации.

Материалы и методы. Для исследований специально разработаны экспериментальные методы невозмущающей диагностики.

В качестве объектов воздействия использованы клеточные культуры карциносаркомы Льюиса с концентрацией около 107 см-3 в забуференном изотоническом растворе NaCl, pH =7,4. Изучение квантовомолекулярных механизмов производилось на модельных объектах (эритроциты человека, дрожжевые клетки, растворы альбуминов).

Результаты. Акты триплет-синглетной конверсии молекулярного кислорода, происходящие вследствие фотопоглощения, по-видимому, сопряжены с пара-орто конверсией ядерных спин-изомеров воды преимущественно во внеклеточной среде. Возмущения, в форме спиновых волн, распространяются по водородным связям водной среды и взаимодействуют с белковой периферией клеточных мембран, индуцируя конформаци-онные переходы.

Выводы. Водная матрица играет интегрирующую роль в поддержании стабильности клеточной наноархитектуры.

Работа частично поддержана грантом РФФИ № 10-02-90301-Вьет_а.

Е.В. Игнатьева, НА. Дмитричева,

И.В. Ярцева, Л.Г. Гатинская ОЦЕНКА ТОЧНОСТИ МЕТОДИКИ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОКТАСЕНСА В НАНОСТРУКТУРИРОВАННОЙ ЛИОФИЛИЗИРОВАННОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ ФОРМЕ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва

Октасенс - новый липофильный фотосенсибилизатор, предназначенный для фотодинамической терапии злокачественных опухолей. Для использования окта-сенса в качестве лекарственного средства в лаборатории разработки лекарственных форм РОНЦ была создана лиофилизированная наноструктурированная модель лекарственной формы (ЛНЛФ-лио).

Цель работы - оценка точности методики количе -ственного определения октасенса в предложенной модели лекарственной формы.

Материалы и методы. Образцы НЛЛФ-лио; УФ-спектроскопия.

Результаты и выводы. Количественное определение октасенса проводили спектрофотометрически, измеряя оптическую плотность растворов в наиболее интенсивном максимуме поглощения X max 728±2 нм. В качестве растворителя была использована смесь хлороформ-пиридин (1000:1). На первом этапе было проведено определение основного действующего вещества для одной серии ЛНЛФ из 6 флаконов порознь. Параллельно измеряли оптическую плотность раствора рабочего стандартного образца (РСО) октасенса. Относительная погрешности определения еотн при этом составила 0,86 %. Она включает в себя не только ошибку самого определения, но и ошибку, связанную с дозированием при наработке лекарственной формы.

Для нивелирования ошибки дозирования проведено 8 параллельных определений октасенса в усредненной пробе, полученной смешением содержимого 4 флаконов лекарственной формы. Относительная погрешность определения в объединенной пробе составила 0,28 %. Численное значение коэффициента нормированных отклонений (коэффициента Стьюдента), рассчитанное по результатам анализа обоих выборок составило t = 0,67 и

1,76 соответственно. Табличное значение коэффициента Стьюдента при 95%-ной доверительной вероятности и степени свободы f = 5 равно 2,57; f = 7 равно 2,26, т.е. 4ыч.< ибл. (95 %). Таким образом показано, что полученные результаты, являются правильными, предложенная методика количественного определения октасенса в лиофилизированной наноструктурированной лекарственной форме не отягощена систематическими ошибками и обладает достаточной точностью.

Работа поддержана Правительством г. Москвы

О А. Иноземцева, Г.С. Терентюк,

Б.Н. Хлебцов, Н.Г. Хлебцов НАНОКОМПОЗИТНЫЕ МИКРОКАПСУЛЫ, СОДЕРЖАЩИЕ ЗОЛОТЫЕ НАНОЧАСТИЦЫ В СОСТАВЕ ОБОЛОЧКИ,

ДЛЯ БИОМЕДИЦИНСКОГО ПРИМЕНЕНИЯ Саратовский государственный университет им Н.Г. Чернышевского, Саратов

В настоящее время большое число научных и технических исследований посвящено проблеме капсуля-ции различных веществ с использованием микро- и наноразмерных контейнеров. Следует отметить, что решение указанной проблемы тесно связано с решением задач контролируемой доставки и высвобождения капсулируемого материала.

Одним из подходов, позволяющих реализовать указанные задачи, является метод, основанный на последовательной адсорбции противоположно заряженных полиионных макромолекул на поверхность сферических микрочастиц. Результатом применения данного метода является формирование на поверхности микрочастицы полиэлектролитной оболочки, имеющей определенную толщину и состав, с управляемой проницаемостью, биосовместимостью и биодегради-руемостью. Проницаемость оболочки микроконтейнера, а также процесс высвобождения инкапсулированного материала зависят от толщины и состава оболочки и могут регулироваться путем изменения рН, ионной силы, температуры и других физико-химических параметров микроокружения. Подобные полиэлек-тролитные микрокапсулы могут быть использованы в качестве носителей биологических веществ для контролируемой доставки и высвобождения капсулиро-ванного материала для биомедицинских целей.

Однако для многих областей применения необходимо удаленно контролировать проницаемость оболочек микрокапсул. Существенный прогресс был достигнут в применении лазерного излучения для удаленного вскрытия микрокапсул. Оптическое излучение может быть использовано для терапевтических и диагностических целей благодаря избирательному взаимодействию с оболочками микроконтейнеров. В настоящее время в качестве компонентов оболочки микроконтейнера с целью придания ей чувствительности к лазерному излучению используют различные красители или металлические наночастицы на основе благородных металлов (Au, Ag). Было установлено, что золотые наночастицы, находящиеся в оболочке микрокапсулы, взаимодействуют с лазерным излучением. Это взаимодействие приводит к изменению проницаемости оболочки или к ее разрушению. Кроме того, было установлено, что чувствительность микрокапсул, содержащих в составе оболочки наночастицы золота, зависит от степени агрегации этих наночастиц и характера их распределения в оболочке. Авторами была показана возможность создания биосовмести-мых микрокапсул, чувствительных одновременно к лазерному излучению и магнитному полю.

Одним из недостатков использования лазерного излучения применительно к вскрытию микрокапсул, является локальность воздействия, что позволяет вскрывать только единичные капсулы. Для практического применения необходимо увеличивать площадь облучения, что приведет к уменьшению эффективности вскрытия микрокапсул. Повысить чувствительность микрокапсул к лазерному излучению возможно путем включения в оболочку нанообъектов, пик плаз-монного резонанса которых, наиболее близок к длине волны лазерного излучения. В качестве таких нанообъектов с возможностью настраивания плазмонного резонанса для формирования биосовместимых нано-композитных микрокапсул были использованы золотые наностержни и наноклетки.

З.Г. Кадагидзе

МИНОРНЫЕ СУБПОПУЛЯЦИИ Т-ЛИМФОЦИТОВ И ИХ ЗНАЧЕНИЕ ПРИ ВАКЦИНОТЕРАПИИ ОНКОЛОГИЧЕСКИХ БОЛЬНЫХ

РОНЦ им Н.Н. Блохина РАМН, Москва

В настоящее время разработаны различные методы иммунотерапии, направленные на повышение эффективности специфического противоопухолевого иммунного ответа, однако, в подавляющем большинстве случаев результаты иммунотерапевтических методов,

как правило, очень скромные. В последнее время в оценке противоопухолевого иммунитета большое внимание уделяется минорным популяциям Т-лимфоцитов, обладающим супрессорными функциями: регуляторным СБ4+СБ25+ (Трег), ЕКТ (естественные Т-киллеры) клеткам, миелоидным супрессорным клеткам и опухолеассоциированным макрофагам (М2). К настоящему времени наиболее изученными являются первые две популяции клеток. Установлено, что при злокачественных опухолях ЕКТ-клетки участвуют не только в защите от опухолевого роста, как предполагалось ранее, но и в подавлении противоопухолевого иммунного ответа. Это парадоксальное поведение связывают с существованием разных субпопуляций ЕКТ-клеток. Экспериментальные исследования показали, что ЕКТ-клетки I типа, как правило, стимулируют противоопухолевый иммунный ответ, а ЕКТ II типа проявляют супрессорную активность. В наших исследованиях при вакцинотерапии аутологичными дендритными клетками, нагруженными опухолевым лизатом, установлено: исходно высокое содержание ЕКТ является плохим прогностическим признаком эффективности лечения; увеличение этой популяции клеток в процессе терапии может указывать на прогрессирование основного заболевания.

Исследования последних лет показали, что популяция регуляторных Т-клеток - Трег (СБ4+СБ25ыРохр3+) играет решающую роль в обеспечении иммунологической аутотолерантности и негативном контроле как патологических, так и физиологических иммунных реакций. Повышение количества Трег коррелирует с прогрессированием заболевания и, как полагают, является одной из причин низкой эффективности иммунотерапии онкологических больных. В то же время количество Трег увеличивается у больных, получавших вакцино- или цитокинотерапию, что, по-видимому, играет важную роль в снижении эффективности этих методов лечения.

Очевидно, что эффективная иммунотерапия злокачественных новообразований должна сочетать методы, повышающие специфический противоопухолевый иммунный ответ, с одновременным подавлением активности супрессорного звена иммунитета.

А.П. Каплун, В.И. Швец ХАРАКТЕРИСТИКА ГЛАВНЫХ ТИПОВ НАНО- И МИКРОЧАСТИЦ МЕДИЦИНСКОГО НАЗНАЧЕНИЯ

МГА ТХЧТ им. М.В. Ломоносова

Партикулярные средства доставки лекарственных субстанций - особая лекарственная форма, которая позволяет существенным образом изменить фармакокинетику субстанции. Размер частиц в большинстве случаев имеет определяющее значение.

Наиболее широко известный эффект наночастиц -пассивное нацеливание в области с увеличенными порами в капиллярах (раковые опухоли и другие сайты воспаления). Нано- и микрочастицы эффективно поглощаются макрофагами, и поэтому они могут быть использованы как иммунологические адъюванты.

Это же свойство эксплуатируется и при конструировании лекарственных препаратов, направленных на уничтожение внутриклеточных патогенов. Причем и в этих случаях размер имеет значение.

Местное использование препаратов на основе наночастиц позволяет значительно снизить побочные эффекты за счет слабого проникновения в системный кровоток. Защита субстанции от преждевременной деградации - еще одно важное свойство партикулярных средств доставки.

Это относительно новое направление имеет все шансы в скором времени стать одним из главных направлений разработки лекарственных форм. Преодоление физиологических барьеров, таких как гематоэнце-фалический, эпителий кишечника - требует специальных свойств поверхности в первом случае, и стабильности к гидролазам - во втором. Другие немаловажные свойства партикулярных средств доставки: наночастицы понижают токсичность загруженных субстанций, депонирование и, следовательно, увеличение времени действия, солюбилизация плохо растворимых веществ, что приводит к увеличению биодоступности.

В настоящее время на фармацевтическом рынке присутствуют: около 15 липосомных препаратов, 3 мультивезикулярных препарата, около 20 жировых эмульсий, 5 наносуспензий, по одному: наноленты, нанодиски, мицеллы. На разных стадиях клинических исследований находятся еще столько же. С другой стороны исследуется не менее 20 типов нано- и микрочастиц, и все они имеют свои достоинства и недостатки, среди которых необходимо учитывать и экономические параметры. Таким образом, весьма актуальными становятся методы выявления наиболее удобного типа препаратов для данной конкретной субстанции, для данного способа введения. В докладе обсуждается один из способов решения данной проблемы.

Д.И. Князев, Д.В. Новиков, ЕЮ. Конторщикова,

А А. Бабаев, КА. Коровушкина, А Ю. Барышников,

В.В. Новиков ЭКСПРЕССИЯ

И ПОЛИМОРФИЗМ ГЕНА 1САМ-1 ПРИ ОНКОГИНЕКОЛОГИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ

НИИ молекулярной биологии и региональной экологии ННГУ им. Н.ИЛобачевского, Нижний Новгород Нижегородская государственная медицинская академия РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва

Задачи исследования. 1САМ-1 - мембранный гликопротеин, основная роль которого состоит в формировании адгезивных контактов, а также в осуществлении межклеточной сигнализации. Экспрессия 1САМ-1 на опухолевых клетках может вести как к усилению, так и к угнетению опухолевых процессов. Показана экспрессия 1САМ-1 клетками опухолей толстого кишечника, молочной железы, меланомы. Известен однонуклеотидный полиморфизм (БЫР ге5498), проявляющийся в вариации нуклеотидов аденин-гуанин и приводящий к аминокислотной замене лизин-глутамин в составе трансмембранного домена 1САМ-1. Ассоциация этого полиморфизма с онкозаболеваниями является предметом изучения. Задачей настоящего исследования явился анализ экспрессии гена 1САМ-1 и полиморфизма ге5498 в клетках опухолевых очагов больных миомой и аденокарциномой тела матки.

Материалы и методы. В исследование были включены 32 больных миомой и 16 больных аденокарциномой тела матки в возрасте от 30 до 79 лет. Детекцию мРНК мембранной и растворимой форм 1САМ-1 в образцах опухолей проводили методом ОТ-ПЦР. Геноти-пирование по БЫР ге5498 выполняли методами ПЦР и секвенирования фрагмента нуклеотидной последовательности гена 1САМ-1. Определение уровня растворимого 1САМ-1 в сыворотке крови выполняли имму-ноферментным методом с использованием моноклональных антител ИКО-184, специфичных к 1САМ-1, и поликлональных антител, специфичных к мембранным антигенам мононуклеарных клеток крови человека.

Результаты и выводы. При миоме матки мРНК мембранной формы 1САМ-1 обнаруживалась в 15,6 % случа-

ев, мРНК растворимой формы - в 6,3 % случаев. По сравнению с миомой частота встречаемости МРНК мембранной формы ICAM-1 при аденокарциноме была выше - 25 %, тогда как встречаемость мРНК растворимой формы была той же. Необходимо отметить, что мРНК растворимой формы ICAM-1 наблюдалась только в образцах с присутствующей мРНК мембранной формы.

Уровень растворимого ICAM-1 в сыворотке крови больных миомой и аденокарциномой тела матки в среднем составил 260±72 и 117±76 U/ml и превышал норму (72±10 U/ml) в 3,6 и в 1,6 раза, соответственно. При наличии мРНК мембранной формы ICAM-1 в опухолевых очагах больных миомой средний уровень sICAM-1 был в 5,7 раза выше (907±264 U/ml), чем у больных, отрицательных по данной форме мРНК в опухолевом очаге. При аденокарциноме наличие мРНК мембранной формы ICAM-1 было ассоциировано с пониженным сывороточным уровнем sICAM-1 (40±15 U/ml), а отсутствие - с повышенным в 2 раза уровнем (143±102 U/ml). То есть, при миоме матки повышенный сывороточный уровень молекул sICAM-

1 может быть обусловлен шеддингом с поверхности опухолевых клеток.

Распределение генотипов по SNP rs5498 при миоме матки было следующим: AA - 28,1 %; AG - 59,4 %; GG -

12.5 %. При аденокарциноме доля генотипа АА составила 25 %, генотипов AG и GG - 56 и 19 %. При сравнении с данными распределения генотипов у здоровых представителей европейской популяции (АА - 29 %, AG - 49 %, GG - 22 %) можно отметить тенденцию к снижению частоты генотипа GG при миоме, а также к снижению частоты генотипа АА при аденокарциноме тела матки.

Работа выполнена при поддержке ФЦП «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России»

ЕЮ. Колдаева, ЕЮ. Григорьева, Ю.В. Стукалов СРАВНИТЕЛЬНАЯ

ТОКСИКОЛОГИЯ НАНОКОНСТРУКЦИЙ НА ОСНОВЕ ДЕНДРИМЕРОВ ДЛЯ ТАРГЕТНОЙ РАДИОТЕРАПИИ В ОНКОЛОГИИ

РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва

Соединение, связывающее туморотропное вещество с терапевтическим агентом, например, радионуклидом, должно быть не токсично в дозах, используемых для противоопухолевой терапии. Основными параметрами токсикометрии являются: порог острого действия (Lim ac), максимально переносимая (МПД), средне смертельная (LD50) и абсолютно смертельная (LD100) дозы. Токсичность также характеризуют возникающие побочные эффекты и средняя продолжительность жизни (СПЖ) животных при введении вещества в различных дозах.

Материалы и методы. В эксперименте использовали мышей ВаШ/с. Соединения вводили интраперито-неально, однократно в 0,2 мл 10% ДМСО в физиологическом растворе в дозах: полигидроксиаминоен_06 (I)

62.5 мг/кг; 125 мг/кг; 187,5 мг/кг; 250 мг/кг; 375 мг/кг; 500 мг/кг; 750 мг/кг; 1000 мг/кг; полигидроксиамино-ен_07 (II) 62,5; 125; 187,5; 250; 375; 500; 750; 1000; 1250; 1500; гидроксилированный полигидроксиамино-ен (III) 100; 250; 400; 550; 700; 850; 1000; 1200. Указанные дендримеры отличаются химическим строением исходных дендронов. Наблюдение за животными осуществляли в течение одного месяца. У павших мышей макроскопически оценивали изменения внутренних органов. Определяли значения Lim ac, МПД, LD100 и по методу Кербера рассчитывали LD50. Рассчитывали зону LD50/ Lim ac и СПЖ при разных дозах.

Результаты и выводы. В результате проведенных исследований были определены следующие параметры токсикометрии исследуемых соединений: соединение I - МПД = 250 мг/кг, LD100 = 1000 мг/кг, LD50 = 500 мг/кг, LD50/Lim ac = 2,00, СПЖ при LD50 = 72±15,6 ч; соединение II - МПД = 375 мг/кг, LD100 = 1500 мг/кг, LD50 = 771 мг/кг, LD50/Lim ac =2,05, СПЖ при LD50 = 96±14,4 ч; соединение III - МПД = 550 мг/кг, LD100 = 1200 мг/кг, LD50 = 804 мг/кг, LD50/Lim ac = 1,46, СПЖ при LD50 = 72±14,5 ч.

Введение в сублетальных дозах не вызывало видимых нарушений в состоянии и поведении животных. Введение доз выше МПД вызывало в течение первых 30 мин наступление сопорозного состояния без признаков атаксии или местных парезов. При введении летальных доз смерть наступала в течение 0,5-1 ч - 144 ч, в зависимости от дозы. На вскрытии: сердце, почки, селезенка и легкие макроскопически без выраженной патологии, печень гиперемирована, желчный пузырь увеличен в объеме.

Тонкий кишечник содержал кровь. На основании вышеизложенного можно говорить о гепато-, энтеро- и нейротоксичности соединения в высоких дозах. У выживших животных отмечали транзиторную потерю 510 % массы тела в течение первых 5 дней после введения испытуемого вещества. Признаков хронической интоксикации не наблюдали.

Изученные дендримеры могут быть использованы в создании лекарственных средств для таргетной терапии опухолей, поскольку их концентрации, вводимые в организм, намного меньше порога острого токсического действия и максимально переносимой дозы, а побочных эффектов в данных дозах не наблюдается.

ЕА. Котова, НА. Оборотова, Е.В. Игнатьева ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ ЦИФЕЛИНА В РАЗЛИЧНЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМАХ

РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва

Цифелин - оригинальный отечественный препарат алкилирующего действия. Цифелин проявляет противоопухолевую активность при таких заболеваниях, как миеломная болезнь, саркома Юинга, семинома яичка, рак яичников.

Преимуществом данного препарата является отсутствие выраженного гемодепрессивного эффекта как у других цитостатиков. Учитывая этот факт, актуальной является разработка и совершенствование методик количественного определения цифелина в различных лекарственных формах.

Задачи исследования. Разработать методику количественного определения цифелина в изготовленных лекарственных формах. Определить диапазон концентраций, при которых наблюдается линейная зависимость оптической плотности от концентрации вещества.

Материалы и методы. Цифелин - производное хлорэтиламина, белый или белый с кремовым оттенком кристаллический порошок; практически нерастворим в воде и эфире, растворим в различных органических растворителях. Определение спектра поглощения проводили на спектрофотометре СФ-46.

Результаты и выводы. При разработке методики определения количественного содержания цифелина в готовой лекарственной форме особое внимание было уделено изучению поведения вспомогательных веществ в растворах для спектрофотометрического определения.

Изучили способность вспомогательных веществ поглощать излучение в области 200-400 нм и таким образом мешать определению основного действующего вещества. Исследования показали, что вспомо-

гательные ингредиенты в концентрациях, аналогичных составу лекарственной формы, не изменяют спектральных характеристик (положения и интенсивности максимумов) цифелина.

Для растворения цифелина и вспомогательных веществ при спектрофотометрическом определении в УФ-области выбран этиловый спирт 95%, в котором цифелин и все компоненты лекарственной формы хорошо растворяются.

При измерении спектров поглощения определены два максимума: 260 и 301нм с различной интенсивностью пиков на кривой. Исследуемые растворы подчиняются закону Бугера - Ламберта - Бера в диапазоне концентраций цифелина от 2 мг/мл до 40 мг/мл.

В.П. Краснов1, НА. Оборотова2, А А. Тумашов1,

З.С. Шпрах2, Г.Л. Левит1, К.В. Костин2,

А.Ю. Барышников2 АНАЛИЗ

ИЗОМЕРНОГО СОСТАВА ЛИЗОМУСТИНА В ЛИПОСОМАЛЬНОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ ФОРМЕ

Институт органического синтеза им. И.Я. Постов-ского Уральского отделения РАН, Екатеринбург 2РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва

Целью работы являлась разработка метода определения содержания изомеров: 9-(2-хлорэтил)-7-нитрозо-Ь-гомоцитруллина (1) и 9-(2-хлорэтил)-9-нитрозо-Ь-гомоцитруллина (2) в липосомальной лекарственной форме препарата лизомустин методом ВЭЖХ.

Материалы и методы. Липосомальная лекарственная форма лизомустина получена в лаборатории разработки лекарственных форм НИИ ЭДИТО РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН. Химически чистые образцы изомеров 1 и 2 синтезированы в ИОС УрО РАН.

Результаты и выводы. Показано, что метод определения изомерного состава лизомустина, используемый для анализа субстанции и лиофилизованной лекарственной формы препарата (ВЭЖХ в обращенно-фазовом варианте), не обеспечивает достаточной точности анализа, вследствие мешающего влияния компонентов липосом.

Определение изомерного состава в липосомальной лекарственной формы лизомустина возможно после пробоподготовки, заключающейся в растворении липосом в четыреххлористом углероде с последующей экстракцией дистиллированной водой.

Водный экстракт лизомустина анализировали методом ВЭЖХ. Условия анализа:

— колонка исИгшогЬ ЫР-18 250x4 мм, 5 мкм;

— температура колонки - комнатная;

— подвижная фаза - смесь спирта метилового и

0,01 М водного раствора калия фосфата одно-замещенного в соотношении 1:9;

инжектируемый объём пробы 10 мкл, скорость потока подвижной фазы 0,8 мл/мин, длина волны детектора 230 нм.

На хроматограмме лизомустин представлен двумя пиками, отношение площадей которых соответствует соотношению изомеров в препарате.

Время удерживания изомеров 1 и 2, 11,2 и 12,3 мин, соответственно. На модельных смесях, полученных с использованием изомеров 1 и 2, подтверждена корректность указанного подхода.

Метод позволяет количественно определить изомерный состав лизомустина в липосомальной лекарственной форме.

Работа выполнена при финансовой поддержке Уральского отделения РАН (проекты 09-П-3-2001 и 09-И-3-2004) и Государственной программы поддержки ведущих научных школ (НШ-65261.2010.3).

Ю.М. Краснопольский1, А.Е. Степанов2, В.И. Швец2 ТЕХНОЛОГИЧЕСКИЕ ПРИНЦИПЫ ПОЛУЧЕНИЯ ЛИПОСОМАЛЬНЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ В ОНКОЛОГИИ 1НТУ «Харьковский политехнический институт», 2МГАТХТим.М.В. Ломоносова

Задачи исследования. Эффективность лечения в значительной степени связана со снижением токсического действия противоопухолевых препаратов, а также защитной функцией ряда вспомогательных препаратов. Задачей исследования явилось создание липосомальных лекарственных препаратов (ЛЛП), использование которых позволит повысить эффективность противоопухолевой терапии.

Материалы и методы. При получении ЛЛП использованы природные фосфолипиды, лекарственные противоопухолевые субстанции и криопротекторы. Для получения и контроля ЛЛП разработаны и вали-дированы технологические и аналитические методы получения и контроля липосом (Лс), содержащих гидрофильные и гидрофобные вещества.

Результаты и выводы. Предложена технологическая схема получения ЛЛП, включающая основные стадии: получение липидной субстанции и раствора лекарственной субстанции; получение Лс и включение в них лекарственного средства; осветляющая и стерилизующая фильтрация; розлив, замораживание и лиофилизация препарата; контроль готового препарата. Проведено изучение влияния на образование Лс и включение в них лекарственной субстанции ряда факторов: температуры, давления, величины рН, заряда и размера Лс, жирнокислотного состава и продуктов перекисного окисления липидов, соотношения между липидным компонентом и содержанием криопротектора, соотношения липида и лекарственнаой субстанции и других параметров. Проведено изучение влияния температуры на растворение лиофилизированного продукта. Проведены исследования по изучению стабильности в процессе хранения разработанных лекарственных препаратов. Предложены методы контроля готового препарата, включающие физико-химические, фармакологические и микробиологические методики. Продолжаются работы по включению противоопухолевых препаратов в Лс.

Предложены ЛЛП, содержащие противоопухолевые лекарственные субстанции (Липодокс, Липоплат), а также ряд ЛЛП для вспомогательной терапии (Липин, Липофлавон). Препараты прошли необходимый объем доклинических и клинических исследований, зарегистрированы в Украине и внедрены в промышленное производство.

В.Н. Кулаков1, Н.Л. Шимановский2, Т.А. Бабушкина3, Т.П. Климова , А А. Липенгольц1, В.Ф. Хохлов1,

ЕЮ. Колдаева4, Е. Кадырова4 ЭКСПРЕСС ОЦЕНКА ПЕРСПЕКТИВНОСТИ

НАНОРАЗМЕРНЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ

ФМБФ им. А .И. Бурназяна ФМБА РФ, Москва 2РГМУ им. Н.И. Пирогова, Москва 3РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва 4Институт ЭС РАН, Москва

Наноразмерные системы доставки лекарственных препаратов (5-250 нм) обладают повышенной способностью преодолевать различные биологические барьеры, увеличивают время полувыведения и используются для адресной доставки лекарственного средства

(ЛС) в фармакологическую мишень. Наиболее интенсивно для адресной доставки ЛС, используются поли-меросомы, нанооболочки, дендримеры, полимерные мицеллы и конъюгаты полимер-лекарственное вещество. Создание наноразмерных ЛС диагностического и терапевтического назначения существенно расширит возможности диагностики и терапии онкологических заболеваний. Методы экспресс оценки перспективности наноразмерных ЛС ускоряют исследования в этом направлении.

Задачи исследования. Экспериментальное оценка перспективности наноразмерных ЛС.

Материалы и методы. Методы УФ-, ИК- и ЯМР-спектроскопии. Содержание гадолиния в биологических образцах оценивали методом рентгенофлуоресцентного и нейтроно-активационного анализа. Экспериментальные модели опухоли - мыши и крысы с перевивными опухолями. ЛС - на основе соединений бора и комплексов Gd и Б1.

Результаты и выводы. Предлагаемая схема оценки состоит из следующих этапов: 1) отбор ЛС по физико-химическим свойствам (растворимость, стабильность в водных средах при физиологических значениях рН); 2) отношение количества ЛС в водимой дозе/ЬБ50 не менее 5; 3); эффективность в исследованиях на клеточном уровне (для ЛС терапевтического назначения); 4) релаксивность Ш (ммоль-1*с-1, при В0 = 0,20 Т) на уровне гадопентеттата; 5) фармакокинетическая оценка - отношение концентраций опухоль/нормальная ткань не менее 3 в течении 30-60 м (терапевтические ЛС), время и путь элиминации ЛС из организма. Полученные результаты показывают удовлетворительное совпадение результатов экспресс оценки с данными углубленного изучения ЛС. Разработанный метод экспресс оценки перспективности наноразмерных ЛС может быть использован в исследованиях по разработке новых наноразмерных ЛС.

В.Н. Кулаков1, НЛ. Шимановский2, В.О. Панов3,

А.А. Липенгольц1, В.Ф. Хохлов1, ЕЮ. Григорьева3,

Э.А. Караханов4, А .Л. Максимов4

ПЕРСПЕКТИВЫ СОЗДАНИЯ

НАНОРАЗМЕРНЫХ

ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ

ДЛЯ БИНАРНОЙ ЛУЧВОЙ ТЕРАПИИ

ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ НОВООБРАЗОВАНИЙ

1ФМБ им. А.И. Бурназяна ФМБА РФ, Москва

2РГМУ им. Н.И. Пирогова, Москва

3РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва

4МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва

Бинарная лучевая терапия обеспечивает локальное, непосредственно в ткани опухоли, вторичное выделение энергии, обеспечивая минимальную лучевую нагрузку на нормальные ткани.

По этой причине разработка препаратов, содержащих необходимые элементы для вторичного энерговыделения, является актуальной. Следует подчеркнуть, что лекарственные средства, в состав которых входят парамагнитные металлы, например Gd+3, представляют собой контрастные средства для МР-диагностики. Поиск лекарственных средств обычно осуществляется по следующим направлениям: эмпирический поиск, получение связанных с низко- или высокомолекулярными биомолекулами соединений, приготовление сложных лекарственных форм (липо-сомы, дендримеры и подобные конъюгаты).

Задачи исследования. Экспериментальное подтверждение накопления лекарственных средств, синтезированных в соответствии с предложенным дизайном, в злокачественных новообразованиях.

Материалы и методы. Строение синтезированных веществ подтверждено данными УФ-, ИК- и ЯМР-спектроскопии. Содержание гадолиния в образцах по данным рентгенофлуоресцентного анализа находится в диапазоне 5-11 %. Экспериментальную модель - саркому С-45 получали введением в бедро суспензии 5х106 опухолевых клеток. Накопление образцов в опухоли регистрировали методом МРТ. Размер опухоли составлял 1 см , вводимая внутривенно или внутрибрюшинно доза в пересчете на Gd составляла от 6 до 15 мг на крысу массой 250-280 г.

Результаты и выводы. Результаты МРТ исследования крыс с введением в качестве контраста синтезированных образцов свидетельствуют о накоплении Gd в опухолевой ткани. Полученные результаты подтверждают перспективность использования разработанного дизайна в создании контрастных и специальных для бинарной ЛТ лекарственных средств.

В.Б. Лощенов

ПЕРСПЕКТИВЫ ПРИМЕНЕНИЯ НАНОЧАСТИЦ В МЕДИЦИНЕ

Институт ОФ им. А.М. Прохорова РАН, Москва

В настоящее время в мировой практике развивается несколько направлений по разработке наночастиц, обладающих высокими диагностическими характеристиками и/или терапевтическим эффектом.

Одной из самых важных областей их использования является онкология. Вместе с тем активно развиваются исследования в области применения наночастиц в трансплантологии, косметологии и лечении сердечнососудистых заболеваний.

В представленной работе анализируются основные характеристики наночастиц, которые могут быть использованы в биомедицине.

В докладе рассматриваются наночастицы:

- на основе красителей, которые в настоящее время в мономолекулярной форме используются как фотосенсибилизаторы. Оцениваются их достоинства и недостатки с точки зрения диагностической контрастности, возможной токсичности и терапевтической эффективности;

- на основе металлов (Au, Fe, Ni). Оцениваются особенности их применения для диагностики онкологических заболеваний и способы терапевтического воздействия (магнитное воздействие, воздействие лазерными импульсами);

- на основе полупроводниковых элементов и их соединений (Si, квантовые точки).

Будут рассмотрены особенности приготовления коллоидных субстанций для различных способов введения наночастиц в живой организм на примере экспериментальных животных (мыши с привитыми опухолями).

Работа выполнена при поддержке Министерства образования и науки Российской Федерации в рамках ФЦП «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» на 2009-2013гг. (ГК№ П544).

В М. Мушта, А.В. Вельц, А.В. Иванов,

М.В. Уткинаа, А А. Степанков

ЛАЗЕРНЫЙ корреляционный анализ СУБФРАКЦИОННОГО СОСТАВА НАНОРАЗМЕРНЫХ ЧАСТИЦ В БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЯХ -ЭФФЕКТИВНЫЙ МЕТОД РАННЕГО ВЫЯВЛЕНИЯ РИСКА РАЗВИТИЯ ОНКОЛОГИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН, Москва ДЦ «Кронштадт», Москва

Одной из эффективных и доступных медицинской технологий скрининга, зарекомендовавшей себя при массовых испытаниях состояния здоровья различных возрастных и профессиональных групп населения, подвергшихся техногенному воздействию, является многопараметрическое исследование субфракционного состава биологических жидкостей с помощью лазерной корреляционной спектроскопии. Специфичность и чувствительность этой медицинской технологии для выделения групп повышенного онкологического риска нам удалось повысить за счет использования модифицированного метода лазерного корреляционного анализа (ЛКА). Основным отличительным фактором является то, что биологические жидкости исследуются при температуре более 80 °С, за счет чего устраняются случайные, не свойственные организму ассоциации частиц, образовавшиеся в процессе забора, хранения и подготовки образца к исследованию. Это дает возможность количественно определять концентрацию несвойственных организму высокомолекулярных ассоциатов, выдерживающих температурные воздействия и, соответственно, определяющих степень риска онкозаболевания. Были разработаны методики исследования биологических жидкостей (слюны и сыворотки крови), которые позволяют определять степень онкологического риска онкозаболеваний в относительных единицах от «нормы».

Массовая доля нереферентных частиц в образце сыворотки крови здоровых доноров не превышает 40 нг/мл, в риске онкозаболевания - от 40 до 80 нг/мл, онкобольные - от 80 и выше.

Алгоритм последующей работы с выделенными группами риска состоит в следующем:

- пациентам, которые по результатам анализа вошли в группу «норма» рекомендуется проводить повторные анализы ЛКА раз в 6 месяцев;

- пациентам, оказавшимся в группе с положительной тенденцией уменьшения риска (по сравнению с базовым анализом), рекомендуется проводить профилактическую терапию и повторные анализы ЛКА 1 раз в 3 месяца;

- пациентам, у которых нет существенных положительных сдвигов (по отношению к базовому) требуется более детальное клиническое обследование.

Предлагаемая медицинская технология позволяет количественно определять нереферентные частицы в образцах биологических жидкостей, отслеживать динамику состояния водно-белковой среды организма при коррекции гомеостаза.

В.Н. Никифоров

МАГНИТНЫЕ НАНОЧАСТИЦЫ. МЕТРОЛОГИЧЕСКИЙ АСПЕКТ

МГУ имени М.В. Ломоносова, Москва

Задачи исследования. Для применения в магнитной сепарации, манитно-резонансной томографии, магнитной гипертермии и других приложениях разрабатываются методы метрологического контроля магнитных наночастиц. На сегодня это достаточно сложная задача, поскольку в диапазоне размеров 1-100 нанометров многие методы работают на пределе разрешения и полученные разными методами данные не всегда коррелируют. Задачей исследования является использование бесконтактных дальнодействующих неразрушающих магнитных методов нанодиагностики для наночастиц магнитных оксидов железа размерами 4-20 нм.

Материалы и методы. Использовались магнитные методы диагностики: SQUID, ЯМР и ЭПР. Исследовались наночастицы оксида железа, полученные разными методами.

Результаты. Разработаны методы магнитной нанодиагностики магнитных оксидов железа размерами 4-20 нм. Экспериментально получены распределения магнитных наночастиц по размерам и определены средние размеры.

Результаты измерений находятся в хорошем соответствии с рентгеновскими данными и результатами электронной просвечивающей микроскопии. В магнитной нанодиагностике существуют нерешенные проблемы. Не определен вклад поверхности в магнетизм наночастиц. Роль поверхностных таммовских состояний в магнетизме наночастиц оксида железа размерами менее 10 нм обсуждается.

Выводы. Дополнение известных методов наноди-агностиики новыми магнитными методиками показало свою эффективность.

Д.В. Новиков, АД. Перенков, ЕЮ. Конторщикова,

С.В. Новикова, КА. Коровушкина, АЮ. Барышников, ВВ. Новиков

АНАЛИЗ ЭКСПРЕССИИ ГЕНА 0038 В ОПУХОЛЕВЫХ ОЧАГАХ ОНКОГИНЕКОЛОГИЧЕСКИХ БОЛЬНЫХ

НИИ молекулярной биологии и региональной биологии ННГУ им Н.И. Лобачевского, Нижний Новгород Нижегородская государственная медицинская академия РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва

Введение. Одним из направлений онкодиагностики является исследование характера экспрессии генов с помощью биочипов и других нанобиотехнологиче-ских подходов.

Среди множества генов, способных менять свою экспрессию при онкозаболеваниях, изменения в экспрессии характерны и для генов, белковые продукты которых участвуют в передаче сигналов.

Одним из них является ген, кодирующий диффе-ренцировочную молекулу СБ38, известную как активационный антиген лимфоцитарных клеток, цАДФ-рибоза-метаболизирующий фермент и молекула адгезии. Задачей настоящей работы явился анализ встречаемости в опухолевых клетках больных раком тела матки и больных миомой альтернативных вариантов мРНК гена СБ38, в сравнении с содержанием продуктов трансляции и пострансляционной модификации, проявляющейся в образовании растворимых производных мембранной формы белка СБ38.

Материалы и методы. Матричную РНК СБ38 антигена выявляли ОТ-ПЦР с использованием специфических праймеров. Содержание суммарной и олигомерной фракции белка определяли разработанными ранее иммуноферментными методами.

Для определения СБ38-положительных мононук-леарных клеток использовали метод непрямой иммунофлуоресценции с применением моноклональных антител ИКО-20.

Результаты. Частота обнаружения полноразмерной мРНК СБ38 антигена в образцах клеток опухолевых очагов больных раком эндометрия и миомы матки составила 19 % и 27 % соответственно.

У больных раком тела матки и миомой матки, не имеющих мРНК СБ38 в клетках опухолевых очагов, обнаружена тенденция к увеличению в крови содержания суммарной и олигомерной фракций растворимых молекул СБ38.

У одного больного раком тела матки, а также у одного больного миомой матки в клетках опухолевых очагов обнаружена альтернативная форма мРНК СБ38 антигена, кодирующая молекулу, не содержащую внеклеточный регион. Данные больные имели низкий сывороточный уровень общей и олигомерной

фракции CD38 антигена. В крови больных раком тела матки и миомой обнаружено повышение относительного количества CD38-положительных мононуклеар-ных клеток в сравнении с нормой.

Работа выполнена при финансовой поддержке ФЦП «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России».

С.В. Новикова1, НА. Сахарнов1,

Д.В. Новиков1, А.В. Алясова2

ОТСУТСТВИЕ ПОЛИМОРФИЗМОВ

В ПРОМОТОРНЫХ

РЕГИОНАХ ГЕНОВ FAS

И IL-2RA КЛЕТОК ОПУХОЛЕВЫХ ОЧАГОВ

БОЛЬНЫХ РАКОМ ТОЛСТОГО КИШЕЧНИКА

1НГУ им. Н.И. Лобачевского

2НГМА

Задачи исследования. Развитие опухолевого процесса сопровождается нарушениями экспрессии генов Fas и IL-2RA в клетках опухолевых очагов.

Пониженный уровень экспрессии или мутации гена Fas являются механизмами ухода опухолевой клетки из-под иммунного надзора путем снижения чувствительности клеток к апоптозу.

Повышение уровня экспрессии гена IL-2RA в неопластической клетке является одним из молекулярных механизмов экспансии опухолевых клонов и ассоциировано с высоким уровнем злокачественности опухоли. Для промотора гена Fas обнаружены полиморфизмы, ассоциированные с Т-клеточной лейкемией и раком молочной железы.

Для промотора гена IL-2RA - с диабетом I типа. Вовлечение молекул Fas и IL-2RA в процессы опухолевого роста позволяет предположить наличие ассоциации однонуклеотидных замен в промоторных регионах генов с развитием неопластического процесса.

Целью работы явился анализ первичной структуры промоторых регионов генов Fas и IL-2RA в клетках опухолевых очагов больных раком толстого кишечника.

Материалы и методы. Материалом для исследования явились 24 образца клеток опухолевых очагов больных раком толстого кишечника.

Амплификацию ДНК промоторных участков генов Fas и IL-2RA проводили методом ПЦР с использованием сконструированных авторами праймеров, специфичных последовательностям промоторных регионов генов, с последующим электрофорезом в агарозном геле.

Фрагменты ДНК вырезали из геля и выделяли с использованием набора DNA Extraction Kit (Fermentas, Латвия) согласно рекомендациям производителя. Определение нуклеотидной последовательности промотор-ных участков Fas и IL-2RA проводили с помощью генетического анализатора ABI Prizm 3130 Genetic Analyzer («Applied Biosystems», США).

Результаты и выводы. Первичные последовательности хромосомных ДНК промоторных участков генов Fas и IL-2RA сравнивали между собой и с последовательностями хромосомных ДНК промоторных участков данных генов, полученными в международной базе данных EMBL Gene Bank.

В результате сравнения обнаружено, что во всех 24 образцах клеток опухолевых очагов больных раком толстого кишечника промоторные участки генов Fas и IL-2RA не содержали однонуклеотидных замен.

Работа выполнена при финансовой поддержке ФЦП «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России».

С.В. Новикова1, Д.В. Новиков1, Т.В. Белова1,

Е.С. Плеханова , Р.Г. Пегов2, А.В. Алясова АНАЛИЗ ЭКСПРЕССИИ ГЕНА АЛЬФА-ЦЕПИ РЕЦЕПТОРА ИНТЕРЛЕЙКИНА-2 В КЛЕТКАХ ОПУХОЛЕВЫХ ОЧАГОВ БОЛЬНЫХ РАКОМ ЛЕГКОГО 1НГУ им. НИ. Лобачевского 2НГМА

Задачи исследования. Функции альфа-цепи рецептора интерлейкина-2 (IL-2RA, CD25 антигена) в гемопо-этической системе хорошо известны. Однако роль CD25 АГ в канцерогенезе до сих пор не изучена. Известно, что IL-2RA экспрессируется на опухолевых клетках многих типов. При РЛ показана чрезмерная экспрессия CD25 антигена в опухолевых клетках, что связано с повышением активационного статуса, пролиферативной активности и устойчивостью к лекарствам.

Целью работы явилась оценка частоты встречаемости альтернативных форм матричной РНК CD25 антигена в клетках опухолевых очагов больных РЛ.

Материалы и методы. Исследовали 32 образца клеток опухолевых очагов больных раком легкого. Характер экспрессии гена a-цепи рецептора интерлейкина-2 определяли методом ОТ-ПЦР с использованием разработанных авторами праймеров, специфичных к местам соединения экзонов мРНК. Нуклеотидную последовательность кДНК определяли с помощью генетического анализатора ABI Prizm 3130 Genetic Analyzer («Applied Biosystems», США).

Результаты и выводы. В тестированных образцах были обнаружены полноразмерная и две альтернативные формы мРНК CD25 антигена. Анализ первичной структуры альтернативных форм мРНК CD25 показал делецию 4-го экзона (CD25Exo4Del) в одной форме и делецию 4-го и 5-го экзонов (CD25Exo4-5Del) в другой. Полноразмерная форма мРНК CD25 антигена в клетках опухолевых очагов больных раком легкого была обнаружена в 100 % случаев. Альтернативная форма CD25Exo4Del была выявлена в 53 % исследованных образцов (17 из 32). В 38 % случаев (12 из 32) была обнаружена альтернативная форма CD25Exo4-5Del. Из них 6 образцов (19 %) содержало обе альтернативные формы, и 6 образцов - форму CD25Exo4-5Del без CD25Exo4Del. Вариации пула мРНК гена CD25 в клетках опухолевых очагов больных раком легкого могут являться отражением механизмов регуляции опухолевого роста, в которые вовлечены полноразмерная форма мРНК альфа-цепи рецептора интерлейкина-2 и альтернативные формы мРНК, кодирующие неактивные белки.

Работа выполнена при финансовой поддержке ФЦП «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России».

Т.В. Осипова1, ЗА. Соколова1, Н.Б. Паклин2,

В.И. Карасева1, Т.П. Рябых1 ДИАГНОСТИКА

ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ С ПОМОЩЬЮ БИОЧИПА.

ОДНОВРЕМЕННОЕ КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ШЕСТИ ОПУХОЛЕВЫХ МАРКЕРОВ 1РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва 2МГУЭ, СиС (Рязанский филиал), Рязань

Серологические опухолевые маркеры: простатический специфический антиген общая и свободная формы (ПСАобщ и ПСАсв), альфа-фетопротеин (АФП), раковоэмбриональный антиген (РЭА), нейронспецифическая

енолаза (НСЕ) и хорионический гонадотропин (ХГЧ) играют существенную роль в диагностике и мониторинге злокачественных заболеваний. Ранее было показано, что разработанная на основе микрочипа диагностическая система, позволяющая одновременно количественно измерять две формы ПСА, имеет характеристики, сравнимые с традиционными иммуноферментными тест-системами (Т.В. Осипова с соавт., 2008 г.).

Задачи исследования. Испытание новой диагностической системы в формате микрочипа для одновременного количественного определения в сыворотке крови онкологических больных шести опухолевых маркеров: ПСАобщ, ПСАсв, АФП, РЭА, НСЕ и ХГЧ, а также сравнение диагностической эффективности новой многофакторной системы с традиционными системами.

Материалы и методы. В работе использовали диагностическую систему «ОМ Биочип», разработанную на основе гелевых микрочипов (ИМБ им. В. А. Энгельгард-та РАН) с применением флуоресцентного «сэндвич-варианта» иммуноанализа. В исследования было включено 170 образцов сыворотки крови пациентов. Из них -108 больных с различными формами рака (рак предстательной железы, колоректальный рак, гепатобластома, трофобластическая болезнь и др.) и 62 - больных неопухолевыми заболеваниями (доброкачественная гиперплазия предстательной железы, колит, цирроз, хронический панкреатит и др.) и здоровых доноров. Диагностическую эффективность новой тест-системы оценивали с помощью математических методов ROC-анализа и логистической регрессии. Эффективность системы определялась площадью под ROC-кривой (АиС).

Результаты. Установлена высокая корреляция между результатами, полученными в новой тест-системе на основе биочипа и в тест-системах CanAg и DRG Diagnostics. Коэффициенты корреляции составили: для АФП - 0,97 (p<0,01); для РЭА - 0,95 (p<0,01); для ПСАобщ - 0,94 (p<0,01); для ПСАсв - 0,91 (p<0,01); для ХГЧ - 0,91 (p<0,01); для НСЕ - 0,71 (p<0,01). Результаты логистической регрессии и ROC-анализа показали, что диагностическая эффективность многофакторной системы с учетом возраста больного значительно выше, чем в тест-системах, определяющих один маркер. Площади под ROC кривыми (AUCs) для каждого маркера в отдельности и для комбинации шести маркеров с учетом возраста: АФП AUC =0,601; РЭА AUC =0,541; ХГЧ AUC =0,516; ПСАобщ AUC =0,514; ПСАсв AUC =0,556; НСЕ AUC =0,553; возраст AUC =0,699; комбинация маркеров AUC =0,860 (P*<0.001). * - достоверность отличий значений AUC для каждого маркера в отдельности от комбинации маркеров.

Выводы. Диагностическая система в формате микрочипа для одновременного количественного определения нескольких опухолевых маркеров позволяет получать результаты, сопоставимые с данными измерений в традиционных диагностикумах фирм CanAg и DRG Diagnostics. Применение многофакторной тест-системы на основе микрочипа может существенно улучшить эффективность диагностики злокачественных новообразований.

В.Г. Певгов1, А Ю. Барышников2, А .В. Иванов1'2 АППАРАТУРА

ДЛЯ КОНТРОЛЯ РАЗМЕРОВ НАНОЧАСТИЦ

1ООО «Новые энергетические технологии», Москва 2РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва е-mail: pevgov@bk.ru; ivavi@yandex.ru

Эффективность накопления наночастиц в живых клетках зависит от физических параметров этих частиц. Было показано, что клетки более охотно накапливают наночастицы размерами от 25 до 50 нм.

По этой причине при создании и производстве наноматериалов одной из ключевых проблем является организация оперативного контроля концентрации и размеров наночастиц, их стандартизация. Наночастицы по условиям их получения и/или существования, как правило, не являются монодисперсными и количественная информация об их фракционном составе, т.е. о распределении наночастиц по размеру, требуется на всех стадиях технологического цикла производства продукции. Измерения необходимо производить надежно и оперативно (в масштабе времени, близком к реальному).

В настоящее время размеры наночастиц определяют в большинстве случаев с помощью электронных микроскопов и сканирующих зондовых микроскопов. Однако, при весьма высокой стоимости они сложны в применении и принципиально непригодны для исследования наночастиц, которые существуют только в жидкой фазе (инъекционных растворов, нанострукту-рированных лекарственных препаратов и биологических жидкостей). Ввиду этого использование таких приборов в производственном процессе является очень сложной задачей. Указанных недостатков лишены спектрометры квазиупругого рассеяния света. Они компактны, позволяют измерять распределение наночастиц по размерам непосредственно в жидкой среде, не требуют сложной подготовки проб и могут применяться в промышленном производстве.

В ООО «Новые энергетические технологии» ведутся исследования по разработке спектрометров квазиуп-ругого рассеяния света. В настоящее время создано несколько образцов для измерения размеров нанообъектов в диапазоне размеров 0,3-10000 нм. В докладе проводится сравнение методов измерения размеров наночастиц, рассматриваются достоинсива метода ква-зиупругого рассеяния света и пути улучшения характеристик лазерных корреляционных спектрометров.

А.В. Рябова, А.В. Попов, Ю.К. Воронько, В.Б. Лощенов ОПТИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА НАНОЧАСТИЦ БОРАТНЫХ ПОЛИКРИСТАЛЛОВ И СТЕКОЛ, ДОПИРОВАННЫХ ИОНАМИ ND3+

В АСПЕКТЕ НЕЙТРОНЗАХВАТНОЙ ТЕРАПИИ С ВОЗМОЖНОСТЬЮ ФЛУОРЕСЦЕНТНОЙ НАВИГАЦИИ ИОФ им. А М. Прохорова РАН, Москва

Настоящая работа посвящена изучению особенностей спектроскопических характеристик наночастиц на основе боратных поликристаллов и стекол, активированных ионами Nd3+, для нейтронзахватной терапии с возможностью флуоресцентной навигации.

Поликристаллические боратогерманаты

Gdi4(BO3)6(GeO4)2O8:Nd3+ (Nd3+: 0.5, 3.0, 7.0 ат%) получали при 1520K методом твердофазного синтеза. Лантан-боратные стекла получали путем смешивания В2О3, La3O3 и Nd2O3 агентов с чистотой 99,99 %, плавления, литья и дальнейшего отжига. Водные коллоиды наночастиц получали из приготовленных поликристаллов и стекол путем последовательного измельчения сначала в агатовой ступке, затем при ультразвуковом (мощность ультразвукового генератора 10 Вт) диспергировании в воде. Размер гидродинамического радиуса наночастиц оценивался с помощью спектрометра динамического рассеяния света Photocor Complex.

.Для регистрации спектров люминесценции ионов Nd + в частицах использовался волоконно-оптический спектрометр ЛЭСА-01-Биоспек (в том числе для регистрации люминесценции in vivd). Модификация ЛЭСА-01-Биоспек заключалась в дополнительном использовании непрерывного ИК лазера с длиной волны 810 нм, изготовлением и заменой оптических фильтров.

Нами проведено предварительное исследование фармакокинетики наночастиц поликристаллов Gdi4(BO3)6(GeO4)2O8: 7 ат% Nd3+ на лабораторных мышах с перевитыми опухолями карциномы Эрлиха в мышечную ткань задней лапы. Водный коллоид наночастиц (объем 0,2 мл, концентрация 2 мг/мл) вводили внутривенно. Доза введенного препарата в расчете на массу животного составила 16 мг/кг. С помощью флуоресцентной спектроскопии установлено распределение этих наночастиц по органам и тканям мыши спустя час после введения.

Распределение по органам существенно зависит от нескольких факторов: от размеров наночастиц, от поверхностного заряда наночастиц, от типа используемого полимерного покрытия наночастиц. Для развития этого направления представляется важным провести исследование по влиянию этих параметров на распределение наночастиц по тканям и органам в норме и при некоторых патологиях, в частности при злокачественных опухолях и атеросклеротических изменениях сосудов.

Т.П. Рябых1, ЗА. Соколова1, В.Н. Морозов2,

Н.Б. Паклин3, В.И. Грабко4, Т.В. Осипова1 НОВОЕ ПОКОЛЕНИЕ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ ТЕСТ-СИСТЕМ В ОНКОЛОГИИ

1НА ОСНОВЕ МИКРО- И НАНОЧИПОВ

1РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва

2ИТиЭБф, РАН, Москва 3МГУЭСИ (Рязанский филиал), Рязань

4ИЭМим. Н.Ф. Гамалеи РАМН, Москва

Задачи исследования. Создание и применение в онкологии многопараметрических диагностических систем на основе микро- и наночипов, позволяющих проводить одновременное определение нескольких опухолевых маркеров в минимальном объеме сыворотки крови человека. Оценка диагностических характеристик новых систем.

Материалы и методы. В работе использованы диагностические системы на основе следующих технологий: технологии биочипов на основе трехмерных гидрогелей (ИМБ РАН), технологии наночипов (Morozov et al., 2007) и технологии микрочипов на основе микросфер (Novogen, США). Концентрацию 10 опухолевых маркеров (АФП, РЭА, ПСАобщ, ПСАсв, ХГЧ, НСЕ, СА 19-9, СА 15-3, СА 125, пролактин) определяли при помощи сэндвич-иммуноанализа с флуоресцентной детекцией (микрочипы) и детекцией с помощью магнитных микросфер (наночипы). Сыворотка крови была получена от 170 пациентов:108 больных злокачественными новообразованиями различных локализаций (рак предстательной железы, кишечника, гепатобластома, трофобластическая болезнь и др.) и 62 больных другими заболеваниями (доброкачественная гиперплазия предстательной железы, колит, цирроз, хронический панкреатит и др.), а также здоровых доноров. Способность новой системы классифицировать пациентов на больных и не больных злокачественными заболеваниями оценивали с помощью ROC-анализа. Для оценки площади под ROC-кривой (AUC) и расчета линейной и логистической регрессии использовали статистический пакет MedCalc.

Результаты. Показано, что в сыворотке крови больных онкологическими заболеваниями может наблюдаться повышение не одного, а целого ряда опухолевых маркеров. Одновременное определение нескольких опухолевых маркеров с помощью микрочипов позволяет существенно улучшить диагностическую эффективность при классификации:

1. На больных злокачественными заболеваниями и больных неопухолевыми заболеваниями.

2. При выявлении определенного типа опухоли среди больных ЗНО.

Применение диагностической системы на основе наночипов позволяет существенно увеличить аналитическую чувствительность определения опухолевых маркеров (на примере ПСА).

Выводы. Новые мультиплексные диагностические системы на основе микро- и наночипов позволяют существенно увеличить эффективность диагностики злокачественных новообразований по сравнению с системами, позволяющими определять один опухолевый маркер, а также повысить чувствительность определения опухолевых маркеров.

Е.В. Санарова, Е.В. Игнатьева,

А .П. Полозкова, НА Оборотова ВЛИЯНИЕ ФИЛЬТРАЦИИ НА ВКЛЮЧЕНИЕ ГИДРОФОБНОГО ФОТОСЕНСИБИЛИЗАТОРА ТИОСЕНСА В ЛИПОСОМЫ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва

Задачи исследования. Данное исследование ставило перед собой задачу выяснить влияние этапа фильтрации на процент включения в липосомы гидрофобного фотосенсибилизатора Тиосенса, используемого для фотодинамической терапии опухолей.

Материалы и методы. Липосомы получали из фосфатидилхолина (лецитина яичного), холестерина, PEG-2000 PE в молярном соотношении 1:0,22:0,002. Весовое соотношение препарат/липиды составляло 0,0045/1. Для изготовления липосомальной лекарственной формы (ЛЛФ) Тиосенса создавали тонкую липидную пленку, путем упаривания хлороформного раствора липидов и препарата на роторном испарителе, а затем смывали полученную пленку определенным количеством дистиллированной воды. В работе были использованы дисперсии липосомального Тиосенса до и после экструзии, а также раствор стандартного образца субстанции препарата. Процесс фильтрации производили на экструдере под давлением через поликарбо-натные фильтры (Whatman) с размером пор 0,45 и 0,22 мкм. Размер везикул определяли на приборе Submicron Particle Sizer Nicomp 380. Эффективность включения определяли спектрофотометрически при длине волны 720±4 нм на спектрофотометре СФ-46 ЛОМО (Россия).

Результаты. Включение Тиосенса в липосомы до фильтрации составило 59,1 % (диаметр везикул 678±20 нм), после экструзии через фильтр с размером пор 0,45 мкм - 56,3 % (0 везикул 306±20), в результате стерильной фильтрации (размер пор фильтра 0,22 мкм) содержание препарата снизилось до 53,6 % (диаметр везикул 142±20 нм).

Выводы. На основании полученных данных можно сделать вывод о снижении процента включения Тио-сенса в липосомы в результате процесса фильтрации, при этом за счет экструзии через фильтр с размером пор 0,45 мкм теряется 2,7 %, а через 0,22 мкм - 5,5 %. Показатели потерь будут использованы для корректировки дозы препарата в ЛЛФ.

Н.А. Сахарнов1, Д.В. Новиков1, Р.Г. Пегов2,

Т.В. Белова1, Е.С. Плеханова1, А .В. Алясова2 АНАЛИЗ ЧАСТОТЫ ВСТРЕЧАЕМОСТИ МРНК FAS-АНТИГЕНА В ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТКАХ БОЛЬНЫХ РАКОМ ЛЕГКОГО НГУ им. Н.И. Лобачевского НГМА

Задачи исследования: Механизмы Fas-зависимого апоптоза клеток включены в процессы онкогенеза.

Система Fas-Fas-лиганд имеет множественные пути регуляции, в том числе с участием растворимых форм Fas-антигена. Растворимые формы образуются в результате альтернативного сплайсинга мРНК первичного транскрипта.

Целью настоящей работы явилась характеристика экспрессии гена APT-l(FAS) в опухолевых клетках при раке легкого.

Материалы и методы. Материалом для исследования явились 19 образцов клеток опухолевых очагов, полученных из Нижегородского областного онкологического диспансера при резекции опухолей у больных раком легкого. Матричную РНК Fas-антигена детектировали методом ОТ-ПЦР с использованием праймеров, специфичных к местам соединения экзо-нов пре-мРНК Fas антигена.

Результаты и выводы: В клетках опухолевых очагов больных раком легкого обнаружено 6 различных вариантов мРНК Fas антигена. Матричная РНК мембранной формы Fas-антигена детектировалась у 73,7 % (14 из 19) больных. У 4 больных не было выявлено ни одной мРНК альтернативных форм Fas-молекулы, и у 1 больного (на 3 стадии) при отсутствии мРНК мембранной формы Fas выявлялась одна из альтернативных растворимых форм (Fas del 3,4). Матричная РНК доминирующей растворимой формы молекулы Fas с деле-цией 6 экзона обнаруживалась у 10 из 19 больных (52,6 % случаев). Матричные РНК пяти минорных форм с делециями 3, 4, 5 и 6 экзонов в различных комбинациях встречались с частотой от 42,1 % до 57,9 %. Всего было выявлено 9 различных спектров альтернативных форм мРНК Fas, различающихся по числу и составу форм.

Работа выполнена при поддержке ФЦП «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» на 2009-2013 годы.

З.С. Смирнова1, Л.М. Борисова1, МП. Киселева1,

Е.В. Санарова1, ЕА. Лукьянец2, ГА. Меерович3 ПРОТИВООПУХОЛЕВОЕ ДЕЙСТВИЕ ФОТОДИНАМИЧЕСКОЙ ТЕРАПИИ С ТИОСЕНСОМ-ЛИО

НА ПЕРЕВИВАЕМЫХ ОПУХОЛЯХ МЫШЕЙ

1РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва 2ФГУП «ГНЦ» НИОПИК, Москва 3ИОФ им. АМ. Прохорова РАН, Москва

Введение. Тиосенс является новым отечественным фотосенсибилизатором с максимумом поглощения в области 723±2нм, в которой собственное поглощение биологических тканей минимально. Тиосенс-лио - сублимированная липосомальная лекарственная форма Тиосенса, разработанная в РОНЦ.

Цель исследования. Изучение противоопухолевой эффективности ФДТ с использованием Тиосенса-лио на перевиваемых опухолях мышей.

Материалы и методы. Исследования in vivo проведены на мышах-гибридах линий F1, BDF^ DBA2. Эффективность ФДТ с использованием Тиосенса-лио изучена на аденокарциноме Эрлиха (ELD), эпидермо-идной карциноме легкого Льюис (LLC) и лимфолей-козе Р-388, перевитых внутримышечно в правую голень за 4, 5 и 7 дней до проведения ФДТ, соответственно. Тиосенс-лио вводили в хвостовую вену в дозе 6 мг/кг за 5 ч до лазерного облучения с плотностью мощности 400 мВт/см2 в течение 20 мин. Критерием эффективности ФДТ служило торможение роста опухоли (ТРО, %) в опытной группе мышей по сравнению с контрольной.

Результаты. На аденокарциноме Эрлиха у мышей показана высокая противоопухолевая активность Тиосенс-лио, на 7 день от начала лечения ТРО составляет 56 %.

Далее противоопухолевый эффект сохраняется на высоком уровне: к 14 дню лечения ТРО достигает 76 %, а к 28 дню - 70 % (р<0,05). На лимфолейкозе Р-388 также установлена высокая противоопухолевая эффективность ФДТ с Тиосенсом-лио, ТРО составляет 71 % (р<0,05). На эпидермоидной карциноме легкого Льюис (LLC) по критерию ТРО не удалось показать эффективность ФДТ с Тиосенсом-лио. ТРО на 4 день лечения достигает максимального значения - 34 %,а затем снижается.

Выводы. В ходе проведенных экспериментов показана высокая эффективность ФДТ с Тиосенсом-лио на перевиваемых опухолях мышей: аденокарциноме Эрлиха (ELD) и лимфолейкозе Р-388.

Д.В. Соколова, Е.В. Тазина, М.А. Кортава,

Е.В. Игнатьева, А.П. Полозкова, ПК. Иванов,

НА. Оборотова, А.Ю. Барышников ОЦЕНКА ЦИТОТОКСИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ АНТИ-MUCl ИММУНОЛИПОСОМАЛЬНОЙ ФОРМЫ ДОКСОРУБИЦИНА РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва

В РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН разработана им-мунолипосомальная форма доксорубицина, направленная против MUC1 антигена-мишени с высокой степенью включения препарата и выраженной анти-генспецифичностью in vitro.

Цель исследования. Оценить цитотоксическую активность анти-MUCl иммунолипосомального доксору-бицина в сравнении с традиционной и липосомальной лекарственной формой (ЛФ), а также выявить возможное цитотоксическое действие пустых иммунолипосом и моноклональных антител (МКА), используемых в качестве вектора.

Материалы и методы. Оценку цитотоксического действия проводили при помощи МТТ-теста на клеточных линиях SKOV-3 (аденокарцинома яичников) и T47D (карцинома молочной железы). Исследовали 6 концентраций препарата: 20 мкг/мл, 10 мг/мл, 5 мг/мл, 2.5 мг/мл, 1.25 мг/мл, 0.625 мкг/мл. Исследуемые образцы инкубировали с клетками в течение 1 ч при 4 °С. После этого клетки отмывали и оставляли в СО2-инкубаторе при 37 °С и 5 % СО2 на 71 ч. За 6 ч до окончания инкубации в каждую лунку вносили раствор МТТ. По окончании инкубации клетки ресуспендировали в ДМСО и определяли оптическую плотность на спектрофотометре «Multiscan» при длине волны 530 нм.

Результаты. На клетках линии T47D достоверных различий при сравнении традиционной ЛФ доксору-бицина и иммунолипосомальной ЛФ в концентрациях 20 мкг/мл и 10 мкг/мл не выявлено. Так, при концентрации препарата 20 мкг/мл процент выживших клеток составляет 37,7 % и 35,8 % соответственно, а при концентрации 10 мкг/мл - 46,2 % и 45,7 %. LD50 для липосомальной формы доксорубицина на исследуемых концентрациях не достигается. В отношении клеток линии SKOV-3 при сравнении традиционной и иммунолипосомальной ЛФ также не выявлено достоверных различий. При концентрации доксорубицина 18 мкг/мл выживаемость клеток составила 49,9 % и 45,8 % соответственно. LD50 для липосомальной формы доксорубицина на исследуемых концентрациях также не достигается. При исследовании пустых им-мунолипосом и МКА, в соответствующих концентрациях, цитотоксическое действие не выявлено.

Выводы. Анти-MUd иммунолипосомальная форма доксорубицина проявляет больший цитотоксиче-ский эффект в отношении MUC1+ клеток, в сравнении с липосомальной ЛФ, соизмеримый с традиционной ЛФ препарата. Пустые иммунолипосомы, как и МКА, не обладают цитотоксическим действием.

Д.В. Соколова, Е.В. Тазина, МА. Кортава,

Е.В. Игнатьева, А .П. Полозкова, П.К. Иванов,

НА. Оборотова, АЮ. Барышников АНТИ-MUCl ИММУНОЛИПОСОМАЛЬНАЯ ФОРМА ДОКСОРУБИЦИНА:

ТЕХНОЛОГИЯ ПОЛУЧЕНИЯ И АНТИГЕНСПЕЦИФИЧНОСТЬ IN VITRO РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва

Повышение эффективности лекарственной терапии злокачественных новообразований продолжается по разным направлениям, одно из которых заключается в разработке рациональных лекарственных форм противоопухолевых препаратов.

Цель исследования. Получение анти-MUCl иммунолипосом, нагруженных доксорубицином, для адресной доставки к опухолевым клеткам-мишеням.

Материалы и методы. Иммунолипосомы получали методом обращения фаз из лецитина, холестерина, пеги-лированного 1,2- дистеароил-8П-глицеро-3-фосфоэтано-ламина (DSPE-PEG -2000), и pNp-PEG lipid в мольных соотношениях 7:4:0,15:0,05. Загрузку доксорубицина осуществляли против градиента сульфата аммония. Весовое соотношение препарат:липиды составило 0,16:1. В качестве вектора использовали моноклональные антитела (МКА) ICO-25, обладающие специфичностью к MUC1 АГ. Очистку иммунолипосомальной суспензии осуществляли методом гель-фильтрации с помощью хроматографической колонки, заполненной сефадексом G-50. Содержание препарата определяли спектрофотометрически. Калибровку иммунолипосом по размеру проводили с помощью ручного мини-экструдера. Размер везикул определяли на приборе Submicron Paryicle Sizer Nicomp-380 (США). Определение общего белка в препарате иммунолипосом проводили с бицинхониновой кислотой, а также рассчитывали количество молекул МКА, приходящееся на липосому. Оценку специфичности связывания иммунолипосом проводили на клеточных линиях SKOV-3 (аденокарцинома яичников) и T47D (карцинома молочной железы) с помощью непрямого иммунофлюоресцентного метода.

Результаты. Включение доксорубицина в иммунолипосомы составило 89-91 %; размер везикул - 140±5 нм; количество молекул МКА, приходящееся на одну липосому - 21 ±3. Специфичность связывания анти-MUC1 иммунолипосом с антигенположительными клетками-мишенями линии SKOV-3 составила 96±4 %, с клетками линии T47D - 88±6 %.

Выводы. Отработана технология получения анти-MUC1 иммунолипосомальной формы доксорубицина с высокой степенью включения препарата и выраженной антигенспецифичностью in vitro.

ЗА. Соколова, Т.В. Осипова, Т.П. Рябых,

В.И. Карасева, В.Б. Матвеев, А Ю. Барышников ИММУНОФЛУОРЕСЦЕНТНЫЙ АНАЛИЗ ОБЩЕЙ И СВОБОДНОЙ ФОРМ ПРОСТАТ-СПЕЦИФИЧЕСКОГО АНТИГЕНА В ФОРМАТЕ БИОЧИПА: ХАРАКТЕРИСТИКИ И ВОЗМОЖНОСТЬ КЛИНИЧЕСКОГО ПРИМЕНЕНИЯ

РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва

Простат-специфический антиген (ПСА) является общепризнанным опухолевым маркером и широко используется в клинической практике в целях ранней диагностики РПЖ. Одновременное измерение концентрации 2 форм ПСА - общей и свободной (ПСАобщ и ПСАсв) и определение %ПСАсв способствует значительному увеличению диагностической эффективности ПСА-теста в дифференциальной диагностике РПЖ и доброкачественной гиперплазии предстательной железы (ДГПЖ).

Задачи исследования. Испытание новой отечественной диагностической системы в формате биочипа для одновременного количественного измерения двух форм ПСА (ОМ-Биочип(ПСА)). Оценка и сравнение диагностической эффективности системы «ОМ-Биочип (ПСА)» с традиционными иммуноферментными системами Fujirebio Diagnostics, применив статистический метод ROC-анализ.

Материалы и методы. В работе использовали диагностическую систему ОМ-Биочип (ПСА), на основе гелевых микрочипов (ИМБ им. В.А. Энгельгардта). Уровень опухолевых маркеров определяли методом одностадийного иммунофлуоресцентного «сэндвич»-анализа. В исследование было включено 223 образцов сыворотки крови пациентов, из них - 28 здоровых доноров, 54 - с ДГПЖ, 54 - больных с разными формами урогенитального рака и 87 - с РПЖ. ROC - анализ проводили с использованием пакета статистической программы MedCalc.

Результаты. Тест-система «ОМ-Биочип (ПСА)» имела удовлетворительные аналитические характеристики: чувствительность 0,2 нг/мл, воспроизводимость измерений в образцах сыворотки крови КВ <10% , процент «открытия» 102 и 107 % для общей и свободной формы ПСА, соответственно. Полученные в тесте на линейность величины находились в пределах ±10 % от ожидаемых величин.

Регрессионый анализ показал высокую степень корреляции (ПСАобщ r=0,96; p<0,0001, ПСАсв r=0,94; p<0,0001) данных определения двух форм ПСА в тест-системе в формате биочипа и иммуноферментной системе Fujirebio Diagnostics. Результаты ROC-анализа показали, что одновременное определение двух форм ПСА и их соотношение имеет диагностическую эффективность, позволяющую достаточно надежно дифференцировать исследуемую группу больных РПЖ от группы здоровых доноров, больных ДГПЖ и иными злокачественными урогенитальными заболеваниями. Площади под ROC-кривыми для двух тест-систем в группах сравнения достоверно не различались (p<0,05) и диагностическая эффективность новой системы не уступала эффективности традиционных ИФА систем Fujirebio Diagnostics.

Выводы. На основании полученных данных показана применимость первой отечественной диагностической системы «ОМ-Биочип (ПСА)» в формате биочипа в своевременной диагностике РПЖ в группах высокого риска (мужчины старше 45 лет). Отечественная тест-система «ОМ-Биочип (ПСА)» является экономичной, эффективной альтернативой традиционным ИФА-системам.

А .Б. Соловьева1, П.И. Толстых2, Г.И. Караханов3,

Н.Н. Глаголев1, А.В. Иванов4 ФДТ ТРУДНОЗАЖИВАЮЩИХ ОЖОГОВЫХ РАН С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ В КАЧЕСТВЕ ФОТОСЕНСИБИЛИЗАТОРА ФОТОДИТАЗИНА, ИММОБИЛИЗОВАННОГО НА НАНОЧАСТИЦАХ ГИДРОКСИАПАТИТА 1ИХФ им. Н.Н. Семенова РАН, Москва 2ГНЦ Лазерной медицины МЗ и СР РФ, Москва 3Грозненский ожоговый центр 4РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва

Ранее было показано, что некоторые амфифильные полимеры повышают активность порфириновых фотосенсибилизаторов в сеансах ФДТ в отношении опухолевых клеток, поверхностных опухолей и огнестрельных ран у лабораторных животных. Цель данной работы -исследование эффективности использования композиций на основе комплексов диглюкаминовой соли хлори-

на е6 (фотодитазин, ФД) с амфифильными полимерами (АП), иммобилизованных на наночастицах гидроксиапа-тита (ГА) в (ФДТ) трудно заживающих ожогов и ран. Исследовано также влияние иммобилизации комплексов на ГА на эффективность фотогенерации синглетно-го('О2) кислорода в модельных условиях Обнаружено, что активность системы ФД-АП-ГА в фотогенерации 'О2 зависит от механизма связывания ФД наночастицами ГА, природы полимера и экстремально зависит от содержания ГА в системе Возрастание эффективности фотогенерации 'О2, возможно, связано со стабилизацией в результате иммобилизации на наночастицах ГА нано-размерных агрегатов ФД поскольку с ростом размеров агрегатов порфириновых фотосенсибилизаторов в растворе их активность в растворе уменьшается. При ФДТ осложненных ожогов с использованием иммобилизованных на ГА комплексов ФД-АП в области патологического очага происходило ускоренное очищение ран от раневого детрита и уменьшение микробной обсеменен-ности, наблюдалось ускорение перехода воспалительной фазы раневого процесса в репаративную и сокращение сроков заживления на 7-9 суток по сравнению с традиционным методом лечения.

Системы ФД-АП-ГА оказались эффективнее обычно используемых при ФДТ гнойных ран фотосенсибилизаторов - холосенса и фотодитазина (в форме геля), возможно, как за счет стабилизации мономерных форм ФД, иммобилизованных на нано-размерном ГА, так и в связи с уменьшением микробной обсемененности раневой поверхности и стимуляцией процессов репарации тканей в присутствии наночастиц ГА. Такие системы могут оказаться эффективными при лечении ряда онкологических заболеваний кожи, слизистых, мочевого пузыря и т.д.

Работа выполнена при поддержке РФФИ (грант 10-02-00381).

С А. Староверов12, О.А. Гасина3,

А.А. Кладиев , В А. Богатырев1

ВОЗДЕЙСТВИЕ КОМПЛЕКСА ПРОСПИДИН -

КОЛЛОИДНОЕ ЗОЛОТО

НА ОПУХОЛЕВЫЕ КЛЕТКИ

ИБФРМ РАН, Саратов

2СГАУ им. Н.И. Вавилова, Саратов

3СГУ им. Н.Г. Чернышевского, Саратов

4Биотехнологическая компания ТНК, Москва

Задачи исследования. Высокая токсичность противоопухолевых препаратов зачастую приводит к необратимым разрушениям тканей организма. Использование золотых наночастиц (ЗНЧ) как объектов, способствующих проникновению лекарственного вещества внутрь клеток, позволяет снизить негативный эффект препарата.

Целью данной работы является исследование возможности доставки комплекса, состоящего из противоопухолевого препарата и золотых наночастиц, в онкоклетки.

Материалы и методы. В качестве лекарственного препарата использовался проспидин - высокоэффективный противоопухолевый препарат, обладающий цитостатическим действием. В качестве биологических объектов - модельные клеточные линии человеческих (ЫеЬа) и свиных (БРЕУ-2) опухолевых клеток.

Для исследования локализации ЗНЧ, конъюгированных с проспидином в клетках применялся оригинальный метод использования смешанных меток в темнопольной и стандартной конфокальной микроскопии, основанный на усилении светимости ЗНЧ в результате их взаимодействия с флуорофором.

Изучение функциональной активности клеток, взаимодействующих с лекарственным комплексом, проводили при помощи колориметрического теста по определению дыхательной активности.

Результаты и выводы. При изучении цитостатиче-ского воздействия чистого проспидина в малой концентрации было отмечено угнетение дыхательной активности клеток на 10 %, но при воздействии проспидина в той же концентрации в комплексе с коллоидным золотом, дыхательная активность клеток подавлялась на 60 % за счет усиления проникновения данного комплекса внутрь клеток путем эндоцитоза, благодаря транспортной функции ЗНЧ. Предположительно, внутри клеток происходит диссоциация комплекса, и препарат проникает в ядра и связывается с ДНК. Благодаря этому возможно снижение терапевтических доз и уменьшение побочных эффектов препарата при использовании его в комплексе с коллоидным золотом. Следует отметить, что чистое коллоидное золото стимулирует дыхательную активность клеток.

Ю.В. Стукалов, А.С. Масько, Н.С. Калыгина,

ЕЮ. Колдаева, ЕЮ. Григорьева ДЕНДРИМЕРЫ

КАК ОСНОВА НАНОКОНСТРУКЦИЙ ДЛЯ ТАРГЕТНОЙ РАДИОТЕРАПИИ В ОНКОЛОГИИ

РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва

Основным недостатком существующей лучевой терапии является то, что при облучении опухоли воздействию подвергаются и здоровые ткани. Актуальность работ в области таргетной радиоиммунотерапии (клеточно-направленная доставка радионуклида с помощью специфических носителей к очагам опухолевого роста) несомненна. Подходящим инструментом для решения этой проблемы являются дендримеры. Денд-римеры (размер 5-10 нм) могут попадать в опухолевые клетки и впоследствии, после разрушения раковой клетки, безопасно отфильтровываться почками. Кроме того на поверхности дендримеров имеется множество функциональных групп, необходимых для созданий наноконструкций.

Цель работы - создание новых высокоэффективных радиофармацевтических препаратов для онкологической практики и способов их доставки в опухоль.

Для ее решения были использованы наноконструкции на основе дендримеров с опухолеспецифичными агентами и радионуклидами. В качестве опухолеспецифичных агентов использованы моноклональные антитела, а радионуклида - рений-188 в виде перрената натрия. В ходе работы планировалось решить следующие основные задачи: разработать схемы синтеза и осуществить синтез дендримеров нового класса; на их основе создать конструкции с моноклональными антителами и рением-188; оценить острую токсичность дендримеров и эффективность конструкций in vitro.

Результаты. В качестве ядра дендримеров использовали пентаэритрит. По реакции Вильямсона получали тетрааллиловый эфир, далее эпоксидированием мононадфталевой кислотой по Прилежаеву получали тетраэпоксид. Реакция тетраэпоксида с диэтанолами-ном продуцировала дендример с 8 гидроксильными группами, который превращали по реакции Вильямсона с аллилбромидом в дендример, содержащий 8 аллильных групп. Структура дендримера подтверждена ЯМР- и масс-спектрами. Для связывания перрената с конструкцией использовали сафранин. Частично эпоксидированный дендример конденсировали с сафранином и моноклональными антителами (анти-ICO-80 (CD5), ICO-25 (MUC1)).

Полученные наноконструкции протестировали in vitro. Через 0,5 ч культивирования клеток (Jurkat (Т-лимфобластная лимфома) или Raji (лимфома Беркитта)) с наноконструкциями количество погибших клеток составляло 57 %, через 1 ч - 98 % и далее не менялось и составляло 98-99 %.

Изучение острой токсичности дендримеров показало их безвредность для экспериментальных животных. Максимально переносимая доза дендримера составила 250 мг/кг массы тела, абсолютно смертельная

- 1000 мг/кг массы тела, а средне смертельная - 500 мг/кг массы тела.

Выводы. Экспериментально подтверждена высокая противоопухолевая эффективность наноконструкций, показана биологическая безопасность дендримеров.

С.С. Сухарев1, И.В. Решетов1, Е.Н. Славнова2 АТОМНО-СИЛОВАЯ МИКРОСКОПИЯ В ЗАДАЧАХ ИССЛЕДОВАНИЯ ТЕРАПЕВТИЧЕСКИХ НАНОКОНСТРУКЦИЙ

ФГОУ ИПК ФМБА России», Москва

2ФГУ «МНИОИ им. ПА. Герцена Росздрава, Москва

Задачи исследования. Представляемые опыты явились частью научно-исследовательской работы, посвященной изучению свойств разрабатываемой терапевтической наноконструкции (ТНК). В состав ее входят антитела к эпидермальному фактору второго типа (HER2/Neu), белковая комплексирующая часть и ионы -прообразы будущей эффекторной части. Была поставлена задача изучения сохранности функций ТНК после воздействия на них плазмы крови, физраствора и кровезаменителей. Такие опыты - необходимая часть характеризации устойчивости ТНК к воздействию внутренней среды организма.

Материалы и методы. Ожидаемая концентрация ионов - прообразов эффекторной части ТНК существенно меньше распознаваемой современными методами качественного элементного анализа. Поэтому было решено оценивать сохранность тропности ТНК к HER2-положительным клеткам РМЖ по степени ингибирования иммуноцитохимической реакции (ИЦХ) после инкубации с растворами, содержащим ТНК, а сохранность функции доставки эффекторной части - косвенно, сравнением шероховатости поверхности ядер клеток с шероховатостью ядер клеток, инкубированных с раствором ТНК, не претерпевших воздействия физиологических жидкостей или их заменителей. Использовался клеточный материал от пациенток, страдающих РМЖ с интенсивной продукцией HER2/Neu. Цитологические препараты после проведения обработки растворами, содержавшими ТНК, подвергали ИЦХ и получали сканы их поверхностей средствами атомно-силовой микроскопии.

Результаты и выводы. И в результате ИЦХ, и в результате обработки растворами ТНК по периферии клеток средствами АСМ визуализировались «бортики». Ингибирование ИЦХ выражалось в легко документируемом уменьшении высоты и ширины этих «бортиков» на отдельных участках вплоть до исчезновения.

Те клетки, на которых рецепторы HER2 должны были быть заняты ТНК, характеризуются высокими значениями шероховатостей поверхностей (от 64 до 83 нм) в отличие от тех, на которых не должно было быть ТНК (например, после обычной ИЦХ шероховатость поверхностей клеток составляет от 20 до 30 нм).

Таким образом, хотя АСМ не позволяет визуализировать ТНК или иммунокомплексы, метод дает возможность по косвенным признакам мониторировать свойства тропности ТНК к опухоль-ассоциированным антигенам и их способность к доставке эффекторных частей в опухолевый очаг.

Е.В. Тазина, Е.В. Игнатьева, НА. Оборотова ВАЛИДАЦИЯ МЕТОДИКИ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ ДОКСОРУБИЦИНА В ТЕРМОЛИПОСОМАХ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва

Введение. Установление соответствия качества лекарственных средств регламентируемым нормам предполагает применение различных аналитических методов. При этом окончательный вывод о качестве лекарства в значительной степени зависит от качества самого метода, который должен отвечать определенным требованиям. Процесс лабораторного изучения степени пригодности аналитических методов называется валидацией. Цель валидации - подтверждение обоснованности выбора метода для определения показателей качества фармацевтической продукции по каждому разделу нормативной документации. В РОНЦ разработана термочувствительная липосомальная лекарственная форма доксорубицина для использования в комбинации с локальной гипертермией (40-43 °C).

Целью данного исследования являлась валидация методики количественного определения содержания доксорубицина (Докс) в термолипосомальной лекарственной форме (Докс-ТЛ).

Материалы и методы. Содержание Докс в Докс-ТЛ определяли методом спектрофотометрии с использованием рабочего стандартного образца (РСО) Докс при длине волны 252 ± 2 нм. Валидацию методики количественного определения проводили по следующим параметрам: воспроизводимость, правильность, повторяемость (сходимость), специфичность (селективность) и линейность. Для оценки воспроизводимости использовали F-критерий (критерий Фишера), для подтверждения правильности - t-критерий Стьюдента, для оценки сходимости - фактор L(P, n), вычисленный по Пирсону. Для подтверждения специфичности методики готовили модельные смеси с разными концентрациями анализируемого вещества. Результаты оценивали по t-критерию Стьюдента. Для проведения градуировки методики измеряли оптическую плотность модельных смесей с разными концентрациями Докс.

Результаты. Спектрофотометрическая методика с использованием РСО Докс оказалась воспроизводимой, давала правильные результаты, не содержала систематической ошибки и позволяла достоверно определять действующее вещество в присутствии вспомогательных веществ. Результаты количественного анализа Докс в модельных смесях, а также в лекарственной форме описывались линейной зависимостью y = 0,00139 + 0,04324x с коэффициентом корреляции R = 0,99927.

Выводы. С помощью метода спектрофотометрии можно довольно точно оценивать содержание действующего вещества в лекарственной форме, при этом вспомогательные вещества практически не влияют на поглощение Докс и не мешают его определению.

А А. Темнов1, Н.Б. Лысков1, А.Н. Склифас2,

НИ. Кукушкин2, А.В. Терещенко3, Ю.А. Белый3 ИЗУЧЕНИЕ ВОЗМОЖНОСТИ ВВЕДЕНИЯ НАНОЧАСТИЦ ПЕРФТОРУГЛЕРОДНЫХ ЭМУЛЬСИЙ, СОДЕРЖАЩИХ ФОТОСЕНСИБИЛИЗАТОР,

1В СТВОЛОВЫЕ КЛЕТКИ КОСТНОГО МОЗГА

1НИИ Скорой помощи им. Н.В. Склифосовского, Москва

2Институт биофизики клетки РАН, Пущино

3Калужский филиал ФГУ «МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н. Федорова Росмедтехнологии»

Цель работы - изучить возможности сорбции фотосенсибилизатора радахлорин на наночастицах перфто-

руглеродной (ПФУ) эмульсий, включения наночастиц с радохлорином в стволовые клетки костного мозга мышей и транспортировки его в организме реципиента.

Материалы и методы. Радахлорин сорбировали на наночастицах ПФУ эмульсии, состоящей из смеси пер-фторуглеродов. В качестве доноров клеток использовали мышей линии С57Ь1аск10 GFP, цитоплазма которых содержит белок, флюоресцирующий под действием УФ-излучения. Клетки костного мозга выделяли из бедренной кости и культивировали в среде DMEM в течение 5 дней при 37 °С. После этого к клеткам добавляли наночастицы, содержащие радахлорин, и инкубировали в течение 30 минут при 37 °С. После 5-кратной отмывки раствором Хенкса клетки снимали трипсином и трансплантировали реципиенту в/в и в/брюшинно в дозе 20х106 клеток. Реципиентами являлись мыши линии С 57 black, не содержащие GFP. Через 3-7 дней после трансплантации животных забивали, извлекали костный мозг и готовили клеточную суспензию. Под микроскопом в УФ диапазоне проводили поиск клеток, содержащих зеленый белок, после обнаружения клетки облучали лазером (662 нм) мощностью 1 Дж в течение 1 мин. Затем в видимом свете проводили фотографирование облученной клетки в течение 3 мин с интервалом 15 сек.

Результаты. Установлено, что при инкубации наночастиц ПФУ эмульсий с радахлорином последний сорбируется на частицах ПФУ эмульсий и при инкубации их со стволовыми клетками проникает внутрь клеток и длительно (до 20 сут) находится в клетках, не меняя их морфологически и функционально. В экспериментах in vivo показано, что клетки, содержащие наночастицы с радахлорином, в течение 5-7 дней после трансплантации в организм реципиента сохраняют свою функциональную активность и при воздействии лазерного излучения образуют активные формы кислорода, что приводит к гибели клеток.

Заключение. Введение стволовых клеток, транспортирующих лекарственные препараты, представляется перспективным в различных отраслях медицины, в том числе в онкологии. Это позволит суммировать терапевтический эффект стволовых клеток с терапевтическим эффектом лекарственных препаратов.

Г.С. Терентюк1, А.В. Иванов2, НИ. Полянская2,

И.Л. Максимова1, А А. Скапцов1, БН. Хлебцов1,

Н.Г. Хлебцов1

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ЛАЗЕРНОГО ФОТОТЕРМОЛИЗА С ЗОЛОТЫМИ

ПЛАЗМОННО-РЕЗАНАНСНЫМИ

НАНОЧАСТИЦАМИ

1СГУ им Н.Г. Чернышевского, Саратов 2РОНЦ им Н.Н. Блохина РАМН, Москва

Представлены сравнительные данные по кинетике лазерного нагрева суспензий золотых нанооболочек на ядрах из двуокиси кремния, золотых наностержней и золотых наноклеток. При равной оптической плотности на длине волны плазмонного резонанса и лазерного нагрева (около 800 нм), все три типа частиц суспензий показали близкие фототермические параметры, однако эффективность нагрева в расчете на единицу массы золота убывала в ряду наноклетки, наностержни и нанооболочки. Для расчета спектров экстинкции и рассеяния использован метод связанных дипольных сфер с аналитическим усреднением сечений экстинкции и поглощения наночастиц по их хаотическим ориентациям. Наночастицы моделировались ансамблем взаимодействующих металлических наносфер с небольшим самопересечением и поляризуемостью, вычисляемой из первого коэффициента Ми.

Показано, что суспензии всех трех типов частиц имеют примерно одинаковую эффективность конверсии света в тепло. Однако это вовсе не означает одинаковой эффективности в расчете на одну частицу или в расчете на массу частиц в единице объема.

Опуская детали анализа и расчета, приведем данные для концентрации золота в указанных препаратах: нанооболочки - 150 мкг/мл, наностержни - 90 мкг/мл, наноклетки - 40 мкг/мл. Таким образом, в расчете на общую массу металла (и тем более золота) наивысшую фототермическую эффективность показывают наноклетки, затем наностержни (примерно в 2 раза ниже в расчете на золото) и нанооболочки (примерно в 5 раз ниже в расчете на золото).

Экспериментальные исследования по фототермолизу опухолей проводились на мышах линии Ва1Ь/с с перевитой внутримышечно опухолью Эрлиха. В хво-товую вену вводились растворы золотых наностержней и золотых нанокейджей. Опухоль облучалась полупроводниковым лазером в непрерывном режиме на длине волны 800 нм через сутки после введения. Плотность мощности составляла 5 Вт/см2, длительность лазерного облучения 5 мин. Температурная динамика как при введении наностержней, так и при введении нанокейджей качественно сходна, при введении разведенного раствора (в 8 раз) повышение температуры составляло 7 °С по сравнению с температурой облучаемых контрольных участков без введения наночастиц, а при введении концентрированного раствора золотых наночастиц среднее повышение температуры составляло 25 °С.

Можно сделать вывод, что внутривенное введение золотых наночастиц с высокой концентрацией и оптимальное пассивное накопление их в опухоли позволяет эффективно осуществлять локальный фототермолиз опухоли.

Г.С. Терентюк, Н.Г. Хлебцов,

И.Л. Максимова, В.В. Тучин

ОСНОВНЫЕ НАПРАВЛЕНИЯ ПРИМЕНЕНИЯ ЗОЛОТЫХ НАНОЧАСТИЦ В БИОЛОГИИ И МЕДИЦИНЕ

СГУ им Н.Г. Чернышевского, Саратов

Первые упоминания о применении коллоидного золота в лечебных целях встречаются в трактатах древнекитайских и индийских ученых У-ГУ веков до нашей эры. В средние века в Европе коллоидное золото рекомендовалось Парацельсом и врачом французского короля Людовика XIII Давидом де Плани-Кампи в качестве эликсира долголетия. Основоположником систематического научного изучения синтеза и физико-химических свойств коллоидного золота можно считать М. Фарадея (1857). В 20 веке были достигнуты определенные успехи в лечении ревматоидного артрита солями золота и в терапии онкозаболеваний при использовании растворов изотопа золота 198Аи.

Новая эра в использовании коллоидного золота в биологии и медицине открылась работой Г. Френса (1973), посвященной методам синтеза коллоидного золота с определенным заранее заданным размером частиц. С этого момента началось активнейшее использование биоспецифических маркеров - конъюгатов коллоидного золота в различных областях биологии.

Применение плазмонно-резонансных золотых наночастиц в биомедицине имеет два основных аспекта: био-специфическое «нацеливание» на определенные ткани или клетки и оптический плазмонный резонанс. Оптический плазмонный резонанс обусловлен когерентными колебаниями свободных электронов металла под действием электрической компоненты световой волны.

Эти колебания приводят к увеличению рассеяния и поглощения света на резонансных длинах волн, обусловленных мультипольностью тензора поляризуемости. При воздействии лазерным излучением с длиной волны, соответствующей пику поглощения наночастиц, можно достичь локального нагрева наночастиц и окружающих их клеток или локализованного выделения инкапсулированного лекарственного вещества.

Первый способ лежит в основе фототермической терапии, тогда как второй вариант тесно связан с адресной доставкой лекарств.

Для того, чтобы осуществить эффективную фото-термическую терапию злокачественных новообразований, необходимо согласовать три важных фактора: длину волны лазерного излучения, максимум поглощения излучения золотыми наноструктурами, которые используются как селективные поглотители, и спектральную прозрачность биоткани для лазерных импульсов. Как известно, «оптическое окно прозрачности» биоткани соответствует ближней ИК-области спектра и ограничено диапазоном 750-1100 нм.

На сегодняшний день основными направлениями исследований в области применения золотых наночастиц в биологии и медицине можно считать изучение различных аспектов токсичности и биораспределения золотых наночастиц, использование золотых наночастиц для контрастирования злокачественных новообразований в методе темнопольной микроскопии, низкокогерентной оптической томографии, спектроскопии диффузного светорассеяния.

Для успешного контрастирования изображений, получаемых указанными оптическими методами достаточно введения золотых наночастиц в относительно небольших концентрациях (порядка 109 частиц на мл), в то время как для контрастирования рентгеновских изображений концентрация должна быть на несколько порядков выше. Получены первые результаты по использованию золотых наночастиц в методиках двух- и трехфотонного возбуждения люминесценции.

В последние годы в ряде исследовательских центров активно развивается методика фототермолиза опухолей с использованием золотых наночастиц в качестве термофотосенсибилизаторов. Кроме того, получены результаты, свидетельствующие, что локальная гипертермия с наночастицами повышает чувствительность опухоли к последующим лучевой и ХТ.

С.Ф. Тимашев, Ю.С. Поляков,

А .Б. Соловьева, П.И. Мисуркин НАНОМЕТРОЛОГИЯ

ПОВЕРХНОСТИ БИОЛОГИЧЕСКИХ СИСТЕМ

НИИ им. Л.Я. Карпова, Москва ИХФ им. Н.Н. Семенова РАН, Москва

Представлены принципы параметризации структуры хаотических поверхностей при анализе массивов данных, получаемых методами атомно-силовой микроскопии (АСМ). Предлагаемый подход основан на использовании фликкер-шумовой спектроскопии (ФШС). Его основное отличие от существующих методов параметризации хаотических структур состоит во введении информационных параметров, характеризующих составляющие исследуемых профилей рельефа поверхности в разных диапазонах пространственных частот и реализации необходимых процедур для выделения таких параметров. Показано, что в качестве базовых характеристик, отражающих особенности структуры поверхности в нанометровом диапазоне, следует рассматривать меру «ступенчатости» нанорельефа и меру его « острийности» как характеристики наиболее высокочастотной составляющей нанорельефа.

Возможности развитой методологии продемонстрированы на примере параметризации АСМ массивов данных для двойных и тройных систем, формируемых на слюде из водных растворов хитозана и порфирино-вого фотосенсибилизатора - димегина.

Интерес к таким системам связан с исследованиями в водных растворах модельных для фотодинамической терапии процессов фотоиндуцируемого окисления органических субстратов. Определенные для таких систем параметры и характер изменения топографии поверхности при переходе от двойной к тройной системе указывают на проявление взаимодействий, приводящих к конформационным подстройкам всех компонентов тройной системы. Это отражается и в фиксируемо-мых визуально качественных изменениях АСМ изображений. Можно полагать, что такие конформационно проявляемые взаимодействия реализуются и в водных растворах тройных систем НМХ-П27-димегин. Именно с формированием таких комплексов в растворе естественно связывать обнаруженное ранее повышение скорости фотосенсибилизированного окисления триптофана при введении в реакционную систему НМХ и плюроника F127. Предложенный метод может быть использован для параметризации текстуры изображений, сделанных оптическими методами, например при анализе срезов биологических тканей для диагностирования состояния тканей.

В. А. Ханадеев1 , Б.Н. Хлебцов1, Л А. Дыкман1,

В А. Богатырев ' , ИЛ. Максимова , Г.С. Терентюк,

Н.Г. Хлебцов1,2

НАНОЧАСТИЦЫ

С НАСТРОЙКОЙ ПЛАЗМОННОГО РЕЗОНАНСА ДЛЯ БИОМЕДИЦИНСКИХ ПРИМЕНЕНИЙ

1ИБФРМ РАН, Саратов

2СГУ им. Н. Г. Чернышевского, Саратов

*e-mail: khanadeev@ibppm.sgu.ru

Представлены результаты по синтезу, оптическим свойствам и применениям трех типов композитных наночастиц: золотых нанооболочек (15-20 нм) на ядрах из двуокиси кремния (120-140 нм), золотых наностержней (толщина 10-15 нм, длина 30-90 нм) с серебряной нанооболочкой толщиной 1-4 нм и золото-серебряных наноструктур («nanoboxes», «наноклетки», размер 50-60 нм), синтезированных на шаблонах из серебряных кубиков с размером порядка 4050 нм. Получена контролируемая настройка плазмон-ных резонансов экстинкции и светорассеяния синтезированных наноструктур в диапазоне длин волн 400900 нм. Представлены сравнительные данные по кинетике лазерного нагрева золотых нанооболочек, золотых наностержней и золотосеребряных наноклеток в экспериментах in vitro. Разработан метод количественного биоимиджинга с использованием резонансного рассеяния от золотых нанооболочек.

О.В. Хугаева, Н.П. Яворская, И.С. Голубева,

М.А. Кортава, Д.В.Соколова, Е.В. Тазина,

Е.В. Игнатьева, А.П. Полозкова А.Ю. Барышников, НА. Оборотова, И .И. Краснюк СРАВНИТЕЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ АКТИВНОСТИ РАЗЛИЧНЫХ ФОРМ МИТОКСАНТРОНА РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва

Кардиотоксичность антрациклинов - один из основных факторов, ограничивающих применение антибиотиков антрациклинового ряда в клинике. Поскольку частота проявления кардиотоксического действия зависит от дозы и резко повышается при высоких кумуля-

тивных дозах, противоопухолевую активность миток-сантрона нельзя использовать полностью. В связи с этим включение препарата в липосомы позволяет не только использовать его в полном объеме, но и повысить дозу препарата. Последнее возможно в связи с измененной фармакокинетикой препарата, его меньшим накоплением в сердечной мышце.

Цель исследования. Изучить противоопухолевую активность различных лекарственных форм миток-сантрона.

Материалы и методы. Противоопухолевую активность трех лекарственных форм изучали in vivo на перевиваемых опухолях мышей: аденокарциноме молочной железы Са-755 и лимфолейкозе Р-388. В опытах использовали мышей-гибридов линии BDF1 самок массой 18-21 г. Сформированные группы животных содержались в условиях вивария РОНЦ на стандартном рационе брикетированных экструзированных кормов со свободным доступом к питьевой воде. Критериями эффективности служили: торможение роста опухоли (ТРО, %) и увеличение продолжительности жизни по сравнению с контрольными группами (УПЖ, %).

Результаты. При исследовании противоопухолевой эффективности трех различных форм митоксан-трона на мышах с опухолью аденокарциномы молочной железы Ca-755 установили, что эффективность липосомальной формы митоксантрона в дозе 0,52 мг/кг составляет от 93-100 % ТРО и превышает противоопухолевое действие субстанции митоксантрона в дозе 3,1 мг/кг (ТРО 78-89 %). Более высокая эффективность липосомальной формы митоксантрона в сравнении с субстанцией, подтверждена на экспериментальной модели лимфолейкозе Р-388. УПЖ в дозе

1,6 мг/кг составило 259 % и 194 % соответственно и в дозе 0,52 мг/кг - 140 % и 79 % соответственно.

Выводы. Удалось снизить дозу митоксантрона в 6 раз, не теряя специфической активности липосомальной формы, и повысить биодоступность препарата. Увеличение продолжительности жизни для липосомального митоксантрона с дозой 0,52 мг/кг составило 105 %.

НА. Цыганова1, М.В. Рыжова1, Р.М. Хайруллин1,

2 2 23

Б.Н. Хлебцов , Л.А. Дыкман , В А. Богатырев ' ,

Д.Е. Суетенков4, И.Л. Максимова3, Г.С. Терентюк3,

Н.Г. Хлебцов2,3

ИССЛЕДОВАНИЕ ПОТЕНЦИАЛЬНОЙ ТОКСИЧНОСТИ ЗОЛОТЫХ НАНОЧАСТИЦ ПРИ 1ПАРЕНТЕРАЛЬНОМ ВВЕДЕНИИ

Ульяновский государственный университет, Саратов

2ИБФРМ РАН, Саратов

3СГУ им. Н. Г. Чернышевского

4СГМУ им. Разумовского

e-mail: khanadeev@ibppm.sgu.ru

Широкое распространение наноматериалов в медицине требует конкретных знаний по накоплению и воздействию наночастиц (НЧ) на организм человека и животных. Имеющиеся сведения о токсичности золотых НЧ (ЗНЧ) противоречивы. Эксперимент проведен на белых крысах в стандартных условиях вивария. Животным, разделенным на 5 групп (по 6 крыс в каждой), внутривенно вводили растворы ЗНЧ под шифрами K-шеллы, KZ-50, NC (кейджи), NR (стержни) с концентрацией золота 50 мкг/мл (2 мл/кг). Группе контрольных животных вводили физраствор (2 мл/кг). Наблюдение за животными проводили в течение 2 недель. Летальных исходов не зафиксировано. На 15 сутки животных выводили из эксперимента. Методом атомно-абсорбционной спектроскопии установлено, что ЗНЧ в основном накапливаются в печени и селезенке животных.

Морфологические исследования показали, что внутривенное введение раствора К-шеллы вызывает разрывы стенок альвеол, очаговое утолщение межаль-веолярных перегородок. Капилляры расширены, заполнены эритроцитами. В печени наблюдается некроз отдельных гепатоцитов, отмечаются клетки с явлением кариопикноза и кариорексиса. В почках встречаются отдельные извитые канальцы с лизироваными ядрами, цитоплазма эпителиоцитов вакуолизирована. Для селезенки характерны расширенные сосуды фолликулов, красная пульпа полнокровна. У животных, получавших раствор KZ-50, наблюдается зернистость цитоплазмы гепатоцитов, отмечаются пенные клетки с фрагментированными ядрами. В почках наблюдаются очаги разрушения отдельных групп извитых канальцев, ядра клеток в этих участках пикнотичны или не определяются. После введения раствора NC отмечаются полнокровие сосудов, вакуолизация и кариолизис гепатоци-тов. В корковом слое почек встречаются группы извитых канальцев с гипохромно окрашенной цитоплазмой и коллабирование почечных клубочков. Введение раствора NR обусловливает полнокровие сосудов и цитолиз отдельных нейроцитов головного мозга крыс. В печени этих животных наблюдается дискомплексация печеночных балок, отдельные очаги кровоизлияний и лизис ядер гепатоцитов. В почечной ткани гипохром-ное окрашивание проксимальных извитых канальцев и коллабирование почечных клубочков.

А.С. Шатурова, ЕА. Дудко, ТА. Богуш АНАЛИЗ ЭКСПРЕССИИ ЭСТРОГЕНОВЫХ РЕЦЕПТОРОВ в В СОЛИДНЫХ ОПУХОЛЯХ МЕТОДОМ ПРОТОЧНОЙ НАНОЦИТОФЛУОРИМЕТРИИ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва

Задачи исследования. В настоящее время в клинической практике определение статуса эстрогеновых рецепторов опухоли проводится полуколичественно при иммуногистохимическом исследовании экспрессии эст-рогенового рецептора а (ЭРа). Однако прогностическая значимость эстрогенового рецептора второго типа - ЭРр (точнее, его полноразмерной изоформы ЭРРх) порождает необходимость дифференцированного и строго количественного определения уровня экспрессии этого маркера, чему посвящено данное исследование.

Материалы и методы. Методом наноцитофлуо-риметрии исследована экспрессия ЭРр1 в клетках культуры рака молочной железы MCF-7 и в клетках хирургических образцов рака молочной железы. Использовали антитела: первичные моноклональные к ЭРр1 (NCL-ERp, Novocastra), вторичные поликлональные (IgG, коньюгированный с FITC - F2772, Sigma), изотипическое антитело - IgG2a (ab18414, Abcam). Среднюю специфическую флуоресценцию клеток оценивали с помощью программы WinMDI, количество специфически окрашенных клеток определяли методом Колмогорова-Смирнова.

Результаты. 1. Для анализа и длительного хранения клеток оптимальной признана фиксация в 4% р-ре формальдегида. 2. Продемонстрирована четкая зависимость интенсивности флуоресцентного окрашивания и числа специфически окрашенных клеток от количества специфических антител и времени инкубации с ними. 3. Для выявления общего числа клеток, экспрессирующих ЭРр1 , показана необходимость инкубации клеток с первичными антителами в течении ночи с последующей 1,5-часовой инкубацией с вторичными антителами. 4. При исследовании экспрессии ЭРр1 в клетках РМЖ воспроизведены все закономерности, описанные в культуре клеток.

Выводы. Разработанный алгоритм имммунофлуо-ресцентного анализа, базирующийся на проточной на-ноцитофлуориметрии, позволяет количественно оценить число клеток, экспрессирующих ЭРßl, в исследуемой опухоли и уровень экспрессии рецепторов в каждой клетке. Метод хорошо воспроизводим, объективен и пригоден для рутинной клинической практики.

Поддержано Грантами РФФИ № 09-04-13560 и № 10-04-00551

М.В. Ширманова1, М.Л. Бугрова1, В.В. Елагин1,

А.А. Брилкина2, ЕА. Сергеева3, И.В. Балалаева2,

МА. Сироткина1, Е.В. Загайнова1 МИКРОСКОПИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ ЗОЛОТЫХ НАНОЧАСТИЦ С НОРМАЛЬНЫМИ И ОПУХОЛЕВЫМИ КЛЕТКАМИ В КУЛЬТУРЕ И ОРГАНИЗМЕ ЖИВОТНЫХ НГМА, Росздрава 2НГУ им. Н.И. Лобачевского 3ИПФ РАН, Нижний Новгород

Золотые наночастицы (ЗНЧ) рассматриваются как многообещающие агенты для разных приложений в биологии и медицине. Однако механизмы взаимодействия наночастиц с живыми клетками в культуре и в организме мало изучены.

В задачи исследования входило:

- изучение взаимодействия ЗНЧ с нормальными и опухолевыми клетками in vitro;

- исследование биораспределения ЗНЧ в организме животных;

- изучение проникновения ЗНЧ в кожу при поверхностном нанесении.

Объектами исследования служили: культуры нормальных (CHO) и опухолевых (SKOV3, SKBR3) клеток, аутбредные мыши CD1, линейные мыши СВА с опухолью рак шейки матки РШМ-5, кожа кроликов и свиней. Использованы ЗНЧ в форме стержней и бипирамид, а также нанооболочки SiO2/Au (ИХФ РАН).

Микроскопический анализ выполнен методами микроскопии в темном поле (Leica DM2500), лазерной сканирующей двухфотонной микроскопии (Carl Zeiss LSM 5l0 META), трансмиссионной электронной микроскопии (Morgagni 268D).

Результаты показали, что золотые наностержни размером 65-70 нм неспецифически путем эндоцитоза проникают в нормальные и опухолевые клетки in vitro. ЗНЧ, конъюгированные с мини-антителами 4D5, специфически связываются с рецепторами HER2/neu на поверхностной мембране HER2/neu - положительных клеток. ЗНЧ, введенные внутривенно мышам в дозе l08 частиц/животное, в наибольшем количестве обнаружены в крови и моче через 4 часа и селезенке и почках через 7 суток после инъекции.

Показано накопление ЗНЧ в опухоли мышей РШМ-5 через 6 ч после внутривенного введения, при этом наночастицы обнаружены как в цитоплазме, так и в ядрах опухолевых клеток.

Установлено проникновение ЗНЧ во все слои здоровой кожи кролика и свиньи через 4 часа после нанесения на поверхностность кожи в виде капли коллоидного раствора.

Таким образом, результаты свидетельствуют о перспективе применения ЗНЧ в онкологии ввиду их избирательного накопления в опухоли, быстрого выведения из организма и возможности направленной доставки к опухолевым клеткам.

Однако вопросы биобезопасности наночастиц для организма требуют тщательного изучения.

И Ж. Шубина1, И.О. Чикилева1,

Н.К. Ахматова2, М.В. Киселевский1 ЭКЗОСОМЫ,

СЕКРЕТИРУЕМЫЕ ОПУХОЛЕВЫМИ КЛЕТКАМИ И ИХ РОЛЬ В РЕАЛИЗАЦИИ ПРОТИВООПУХОЛЕВОГО ИММУНИТЕТА

гРОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва 2ГУ НИИ Вакцин и сывороток им. И .И. Мечникова РАМН, Москва

В последнее время расширяются исследования по изучению экзосом, представляющих собой нанораз-мерные мембранные везикулы, секретируемые различными типами гемопоэтических (ретикулоциты, тромбоциты, В- и Т-лимфоциты, тучные клетки, дендритные клетки) и негемопоэтических клеток (эпителиальные клетки, фибробласты).

В отличие от экзоцитоза секреторных пузырьков или гранул в ответ на соответствующее возбуждение, экзосомы секретируются во внеклеточную окружающую среду при слиянии специализированных внутриклеточных эндосом - микровизикулярных телец с плазматической мембраной клетки. Экзосомы сдержат м-РНК и микро-РНК, способны транспортировать РНК к соседним клеткам, при этом переданная РНК сохраняет биологическую активность и может обеспечить новые функции. Экзосомы, независимо от типа продуцирующих их клеток имеют ряд характерных особенностей, включающих структуру (пузырьки, ограниченные билипидным слоем), размер (50-100 нм), плотность (1,13-1,20 г/мл) и белковый состав (набор цитозольных или мембранных протеинов). Вместе с тем, экзосомы из различных клеточных источников существенно отличаются по белковому составу, который соответствуют типу секретирующих их клеток.

Экзосомы, сектретируемые опухолевыми клетками несут не только поверхностные антигены, но также мембранные и цитозольные белки трансформированных клеток, которые могут быть более специфичными, чем сывороточные антигены. В частности, было показано, что экзосомы, секретируемые клетками рака яичников, рака почки, меланомы и др. содержат высокие уровни мембранного белка клаудина, в то время как эти белки не детектируются в плазме онкологических больных. Кроме того, экзосомы опухолевых клеток содержат несколько белков, которые могут также рассматриваться как биомаркеры. При этом, экзосомы, секретируемые из различными новообразованиями, вероятно, имеют не одинаковый белковый состав

Стрессорные белки, экспрессированные на опухолевых экзосомах могут также оказывать влияние на врожденный и адаптивный противоопухолевый иммунный ответ. Так, БТШ, экспрессируемые на опухолевых экзосомах, являются не только ко-фактором эффективной презентации антигена, но и индуктором созревания ДК. Са81раг и др. убедительно показали, что БТШ (Ы8р70) на поверхности экзосом, высвобождаемых клетками линии колоректального рака непосредственно активируют НК, поддерживая их миграционную и цитостатическую функции. Секретируемые опухолевыми клетками экзосомы способны доставлять различные молекулы и модулировать иммунный ответ.

Экзосомы, изолированные от других типов рака могут проявить ингибирующие эффекты на взаимодействия лимфоцитов, их пролиферативные ответы и/или цитотоксичность. Другие ингибируюшце эффекты могут включить угнетение экспрессии ТОК, или Ра8Ь-лиганда. Такие различия в эффектах опухолевых экзо-сом связываются с особенностями фенотипа опухолевых клеток-продуцентов экзосом и разнообразием механизмов, участвующих в регуляции иммунного ответа.

Роль опухолевых экзосом в противоопухолевом иммунитете остается спорной, а сообщения в литературе относительно их активирующих или ингибирующих эффектов весьма противоречивыми.

Опухолевые клетки могут индуцировать пролиферацию Трег, которые оказывают угнетающие действие на эффекторные клетки иммунитета. Подобным эффектом обладают и экзосомы, экспрессирующие трансформирующий фактор роста р.

Опухолевые экзосомы влияют не только на эффек-торые клетки, но также изменяют функциональное состояние АПК. В частности, экзосомы выделяемые трансформированными клетками нарушают дифферен-цировку ДК из предшественников костного мозга или из моноцитов посредством индукции экспрессии ИЛ-6 клетками-предшественниками. Опухолевые экзосомы не только препятствуют дифференцировке ДК, но они также способствуют развитию фенотипа миелоидных супрессорных клеток, оказывающих отрицательное влияние на эффекторы иммунитета посредством секреции трансформирующего фактора р.

По мнению некоторых исследователей, существующая концепция активизирующего влияния опухолевых экзосом на врожденный иммунитет может вводить в заблуждение, по крайней мере, в случае распространенного опухолевого процесса. Весьма вероятно, что опухолевые экзосомы способствуют «ускользанию» опухоли от иммунологического надзора. Возможно, что на ранних этапах новообразования, опухолевые клетки и экзосомы, которые они продуцируют, еще не приобрели эффективные супрессивные молекулы и механизмы.

При таких условиях, экзосомы могут играть важную роль в переносе антигенов от опухоли к АПК. Однако на фоне прогрессирования заболевания экзосомы становятся способными угнетать различные звенья иммунитета. Идентификация фактора или факторов, определяющих иммуностимулирующее или иммуносу-прессивное действие экзосом, может позволить преодолеть способность опухоли ускользать от иммунного воздействия.

СЮ. Щеголев, НА. Остудин, В А. Богатырев,

А А. Широков, А М. Буров СОВРЕМЕННЫЙ

ЦИТО-ГИСТОХИМИЧЕСКИЙ ПОДХОД К ДИАГНОСТИКЕ И ИССЛЕДОВАНИЮ ОНКОЛОГИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ

ИБФРМ РАН, Саратов

Центр коллективного пользования «Симбиоз», Саратов

Задачи исследования. Освоение и развитие новых иммуногисто-цитохимических методик автоматизации процессов выявления, идентификации и количественного анализа опухолевых клеток.

Материалы и методы. Были исследованы диагностические возможности комбинированных платформ Areol SL-50 System и CytoVision Genetix, основанные на автоматической обработке цифрового изображения, которые позволяют анализировать препараты в проходящем свете и с применением методов флуоресценции. Отмечено, что обеспечиваемые при этом: количественный анализ биомаркеров в иммуногистохи-мических, иммунофлуоресцентных пробах, при флуоресцентной гибридизации in situ (FISH); выявление микрометастазов, плоидности и тканевой принадлежности клеток; изучение ангиогенеза, исследование лимфатических узлов; выявление циркулирующих опухолевых клеток, а также кариотипирование и анализ клеток в метафазе позволяют значительно расширить диагностическую и исследовательскую базу.

ТЕЗИСЫ КОНФЕРЕНЦИЯ «НАНООНКОЛОГИЯ», ТЮМЕНЬ 29

Совокупное применение таких методик, как определение in vitro HER2/neu (герцептина), рецепторов ER (эстрогена) и PR (прогестерона); количественный анализ амплификации гена HER2/neu в реакции флуоресцентной гибридизации in situ (FISH); выявления микрометастазов может служить реальной основой для мониторинга состояния онкологических пациентов в процессе лечения. Зарубежный опыт показал эффективность подобной онкодиагностики и был одобрен американским Управлением по контролю за продуктами и лекарственными препаратами (FDA).

Результаты и выводы. Указанное выше оборудование, программное обеспечение, соответствующие диагностические и исследовательские методики позволяют объективно и с высокой точностью оценить состояние и течение онкологического заболевания на различных стадиях его развития и лечения.

Комбинирование новых биомаркеров и современных автоматизированных методик, а также модернизация последних могут существенно повысить эффективность работ в области онкодиагностики.

Т.Л. Юркштович, Н.В. Голуб, В А. Алиновская,

Р.И. Костерова, Ю.П. Истомин, Е.Н. Александрова НАНОСОМАЛЬНЫЕ СИСТЕМЫ ДОСТАВКИ ПРОТИВООПУХОЛЕВОГО ПРЕПАРАТА -ИНТРОНА А

БГУ«НИИ физико-химических проблем», Минск РНПЦ ОМР им. Н.Н. Александрова, Минск

Введение. Известно, что включение цитостатиков в состав полимеров-носителей увеличивает их эффективность, пролонгирование действия и снижает проявление токсических эффектов.

Цель исследования. Оценка токсичности и противоопухолевой активности водорастворимых и гелеобразующих фосфатов декстрана (ФД) и крахмала (ФК), содержащих фосфорнокислые и карбаматные группы, а также противоопухолевой активности полимерсодержащих препаратов а-2Ь-интерферона (интрон А).

Материалы и методы. К тестированию были представлены ФД и ФК, полученные этерификацией орто-фосфорной кислотой в расплаве мочевины с содержанием фосфорнокислых групп в интервале 7,0-11,8 %. Определение острой токсичности гидрогелей ФД и ФК проведены на крысах (каждая серия по 4 крысы весом 200-250 г). Животным вводилось по 10 г 50% гидрогеля внутрибрюшинно. Опыты по оценке противоопухолевой активности проведены в условиях in vitro на монослойной культуре опухолевых клеток HeLa (эпителиоидная карцинома шейки матки человека, клон М). Оценку роста культуры опухолевых клеток (цитостатического эффекта) в опытных группах ФД и ФК, а также полимерсодержащей формы интрон А по отношению к контролю проводили на основании показателя эффективности противоопухолевого действия ИК50.

Результаты. Установлено, что фосфаты полисахаридов относятся к классу малотоксичных веществ и LD50 составляет около 5000 мг/кг. Показано, что цито-статическая активность ФД и ФК носит дозозависимый характер.

При фиксированной концентрации фосфорилиро-ваных полисахаридов способность ингибировать пролиферацию опухолевых клеток in vitro увеличивается по мере роста в их составе содержания фосфорнокислых групп и не зависит от агрегатного состояния (в виде растворов или в виде микросфер). Обнаружено, что цитостатический эффект полимерсодержащих лекарственных форм интрона А выше инъекционных форм исходного белка и его величина определяется как природой модифицированного полимера, так и массовым соотношением белок : модифицированный полисахарид.

Выводы. Модификация декстрана и крахмала смесью ортофосфорной кислоты и мочевины приводит к образованию малотоксичных соединений, обладающих противоопухолевым действием и эффективных для использования в качестве полимеров-носителей противоопухолевого препарата а-2Ь-интерферона.

ПРАВИЛА ОФОРМЛЕНИЯ СТАТЕЙ ДЛЯ ПУБЛИКАЦИИ В «РОССИЙСКОМ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКОМ ЖУРНАЛЕ»

Работа может быть статьей экспериментального или клинического характера, теоретической или концептуальной, обзором по материалам литературы, рецензией, сообщением дискуссионного, исторического или хроникального характера, рефератом зарубежных работ.

Статьи экспериментального или клинического характера имеют разделы: Резюме; Введение; Материалы и методы; Результаты и обсуждение; Выводы (Заключение); Литература.

Обзоры литературы, статьи теоретического и концептуального характера имеют разделы: Резюме; Введение; Разделы по отдельным обсуждаемым вопросам; Выводы; Литература.

Статья должна быть представлена в виде файла формата RTF на дискете или CD и распечатана в 2 экземплярах. На внешней стороне дискеты или коробке CD должны быть указаны фамилия первого автора, названия статьи и файлов.

В основном файле должен содержаться текст статьи, таблицы, подписи и надписи к рисункам, список литературы. Кроме того, на дискете или CD должны быть записаны рисунки (каждый в виде отдельного файла).

Штриховые и тоновые рисунки (фотографии, рентгенограммы и т.д.), то есть растровая графика, должны быть сохранены в виде файлов формата TIF или JPEG, графики и диаграммы (векторная графика) - в виде файлов формата EPS. Если автор не работает с современными программными пакетами для создания векторной графики, можно прислать график в виде файла Microsoft Excel 5.0/95 с обязательным приложением в виде таблицы, по которой данный график построен.

Обзорные статьи не должны превышать 17 страниц, оригинальные статьи - 12 страниц.

Весь текст должен быть набран шрифтом Times New Roman 12 через полуторный интервал. Текст должен быть выровнен по левому краю.

Все страницы должны быть пронумерованы. Номер страницы должен быть расположен внизу справа, начина со второй. Каждый абзац должен начинаться с красной строки, которая устанавливается меню «Абзац».

Не следует использовать для красной строки клавишу Tab.