CC BY
43
ian Real Time за сутки вводилось суммарно около 100 ед. (80-120 ед) инсулина короткого действия. Скорость введения инсулина через перфузор корректировалась ежечасно и составила от 1 до 8 ед/час. При определении гликемии 1 раз в час в период наблюдения уровень глюкозы крови достигал 13-18 ммоль/л у 100% пациентов. В общем анализе мочи определялась гликемия от 2,8 до 56 ммоль/л практически у всех больных. Кетоз (1,5 ммоль/л) наблюдали у 8 из 17 пациентов. Тенденция к снижению гликемии ниже 4 ммоль/л отмечалась у 6 из 17 пациентов, однако эпизоды гипогликемии не отмечены.
В раннем послеоперационном периоде после ТДПЭ для контроля гликемии возможно применение и системы Guardian Real Time, и
ежечасного определения глюкозы лабораторным методом. Однако контроль устройством Guardian Real Time имеет ряд существенных преимуществ: 1) система Guardian Real Time регистрирует в режиме реального времени уровень глюкозы, позволяет придерживаться жёсткого контроля гликемии (гликемии 6-8 ммоль/л) без риска развития гипо- и гипергликемии у пациентов в раннем послеоперационном периоде; 2) система Guardian Real Time позволяет безопасно для пациента вводить парентерально адекватную дозу инсулина; 3) система Guardian Real Time позволяет объективно оценивать уровень гликемии, предупреждать сигналом гипо- и гипергликемию, позволяет обоснованно усиливать внутривенное введение инсулина при нарастающей гипергликемии.
материалы для обсуждения по представленным тезисам разработка и апробация лабораторных методов исследования
В.А. Агафонов. Способ фокусировки объектива микроскопа на жидкостный слой нативного препарата. ФГБУ Институт хирургии им. А.В. Вишневского Минздрава России, Москва
В клинической цитологии часто возникает необходимость микроскопического исследования жидкости, заключенной между предметным и покровным стеклом нативного препарата. Это имеет прямое отношение к исследованию содержимого кист для обнаружения в них сколексов или крючьев эхинококка. Сложность заключается в том, что кистозная жидкость часто бывает прозрачной. Поэтому нельзя быть уверенным, что вы сфокусировали объектив микроскопа именно на жидкостный слой препарата. Отсюда возможна ошибка, приводящая к ложноотрица-тельному ответу. Для исправления этой ситуации необходимо подмешать в исследуемую жидкость материал, на который легко можно фокусировать объектив микроскопа. Таким удобным материалом являются эритроциты. Они мелкие, мономорфные, не дают бликов, привычны для глаза врача, не отвлекают внимания и их можно получить в большом количестве, а хранить в небольшом объёме. Для предотвращения лизиса эритроцитов при хранении их необходимо законсервировать. Предлагается следующий способ консервации. К эритроцитам, обработанным стабилизатором крови, например цитратом натрия, добавляют формалин в 0,1 М фосфатном буфере, рН 7,3. Полученную смесь встряхивают и центрифугируют при 1500 об/мин 10 мин, надо-садочную жидкость сливают. Затем эритроцитную массу встряхивают во второй порции забуференного формалина и оставляют на 30 мин. Фиксированные эритроциты таким же способом дважды отмывают буфером. Затем эритроциты дофиксируют глутаральдегидом. Бифункциональные молекулы глутаральде-гида «сшивают» молекулы гемоглобина, но не могут привести к агрегации эритроцитов после обработки формалином. Для этого к осажденным эритроцитам добавляют 3% раствор глутараль-дегида в 0,1 М фосфатном буфере, рН 7,3. Смесь встряхивают и центрифугируют. Надосадочную жидкость сливают и к осадку добавляют новую порцию раствора глутаральдегида. Смесь снова встряхивают и выдерживают 60 мин. Затем смесь дважды отмывают вышеуказанным буфером. В полученную эритроцит-ную массу добавляют несколько кристалликов тимола и хранят в холодильнике. Эритроциты забирают стеклянной палочкой и переносят в доставленную для исследования жидкость. Способ также полезен при выявлении микобактерий туберкулёза по Цилю-Нельсену в препаратах, приготовленных из бронхиального смыва. Эритроциты добавляют в смывную жидкость, в итоге на препаратах центрифугата они обозначают плоскость, в которой могут находиться микобактерии.
Е.Е. Ануфриева, В.В. Красицкая, М.А. Суховольская, Т. Н. Субботина, И.А. Ольховский. Определение мутации С677Т в гене метилентетрагидрофолатредуктазы методом ферментативного удлинения аллельспецифичного праймера с двойной биолюминесцентной детекцией (РЕD-Биолюм). Сибирский федеральный университет; Институт биофизики СО РАН; Красноярский филиал ФГБУ Гематологический научный центр Минздрава России; КНЦ СО РАН, Красноярск
Для выявления мутации С677Т в гене метилентетрагидро-фолатредуктазы (МТГФР) используют различные молекулярно-генетические методы анализа. В качестве альтернативного варианта предложена аналитическая технология, основанная на ферментативном удлинении аллельспецифичного праймера (primer extension reaction, PEXT-реакция) с последующей детекцией продуктов реакции с помощью биолюминесцентных меток на основе кальцийзависимых фотопротеинов (PED-Биолюм).
Цель настоящей работы - апробация и оценка аналитических и экономических характеристик разработанного одновременного метода PED-Биолюм в практике рутинного лабораторного тестирования.
Выделение ДНК из лейкоцитов цельной крови проводили с использованием комплекта реагентов «РИБО-преп» («Ам-плисенс»). Для тестирования выделенных образцов методом PED-Биолюм отобраны 29 образцов ДНК клинически здоровых доноров. В качестве теста сравнения использовался коммерческий набор «Пироскрин» («Амплисенс») с детекцией методом пиросеквенирования на приборе PyroMarkQ24 («Qaigen»), по результатам которого 12 из выбранных проб имели нормальный генотип (СС), 6 - гетерозиготный (СТ) и 11 - гомозиготы по му-тантному аллелю (ТТ).
При сравнении результатов тестирования выбранных образцов с использованием технологий «Пироскрин» и PED-Биолюм не выявлено ни одного случая расхождения. Показано, что предложенный подход представляет собой простой в исполнении, эффективный и относительно недорогой метод определения однонуклеотидного полиморфизма С677Т в гене МТГФР. Метод PED-Биолюм не отличается от коммерческого метода «Пироскрин» по способности выявления нормального и мутантного аллелей и не уступает по параметрам экономической эффективности использования.
А.В. Барон, Ю. Ботвич, А.П. Пузырь, И.А. Ольховский, В.С. Бондарь. Модифицированные наноалмазы детонационного синтеза как основа для новых средств иммунодиагностики. Институт биофизики СО РАН; Красноярский филиал ФГБУ Гематологический научный центр Минздрава России; КНЦ СО РАН, Красноярск
Ранее мы показали возможность конструирования систем для многократного измерения уровня глюкозы и холестерина в биологических образцах на основе комплекса ферментов и модифицированных наноалмазов (МНА) взрывного синтеза (Diam. Relat. Mater. 2007, V.16, P.2124-2128; ДАН 2011, Т.439, С.560-562; ДАН 2013, Т.448, С.722-725). В недавних экспериментах нами установлена способность частиц МНА к избирательному связыванию сывороточных белков гамма-фракции (Клиническая лабораторная диагностика, 2013 - в печати).
Цель исследования - изучение эффективности адсорбции частицами МНА иммуноглобулинов отдельных классов. Образцы сыворотки крови пациентов обрабатывали МНА (финальная концентрация наночастиц 5 г/л), после чего частицы с адсорбированными белками удаляли центрифугированием. Концентрацию иммуноглобулинов в сыворотке до и после обработки МНА
МАТЕРИАЛЫ ДЛЯ ОБСУЖДЕНИЯ ПО ПРЕДСТАВЛЕННЫМ ТЕЗИСАМ
определяли методом ИФА, используя наборы реагентов фирмы «ЗАО Вектор-Бест» (Новосибирск).
Показано, что в сыворотках пациентов без моноклональной гаммапатии МНА связывают практически нацело фракцию IgG (при ее исходной концентрации 13,4 г/л) и в меньшей степени адсорбируют фракции IgM (до 38%) и IgA (до 43%) при их исходных концентрациях 1,6 и 1,4 г/л соответственно. Эффективность адсорбции МНА моноклональных фракций IgG каппа и IgG ламбда в сыворотках пациентов с миеломой практически не отличалась и составляла в обоих случаях около 10% при исходных концентрациях этих фракций 12 и 5,5 г/л, соответственно. Получены данные, свидетельствующие в пользу связывания фракции IgG с частицами МНА за счет константной части тяжелых цепей молекулы без участия антигенспецифичного региона. Это открывает возможности иммобилизации МНА и антител с сохранением их антигенной специфичности для создания новых средств иммунодиагностики.
Работа поддержана Президиумом РАН (программа № 24, проект 57 (3.6.3)).
В.Г. Истратов, В.С.Демидова, А.А.Звягин, О.В.Мёдова, Н.И. Раченкова, С.А. Оруджева, И.А. Коряков. Основы разработки новых методов в клинической хирургии на основе газовой хроматографии и масс-спектрометрии. ФГБУ Институт хирургии им. А.В. Вишневского Минздрава России, Москва
Цель исследования - определить основные критерии разработки новых методов в клинической хирургии на основе газовой хроматографии и масс-спектрометрии.
Задачи исследования: 1) определить доступность методов ГХ-МС-анализа в клинической хирургии и соответствие новых методик клиническим требованиям; 2) разработать оптимальные режимы проведения хроматографического анализа; 3) определить параметры вероятной оценки разработанных методов на примере определения инфекционного фактора, степени интоксикации и органных метаболитов у больных в отделении интенсивной терапии отдела гнойной хирургии.
Исследовали периферическую кровь 27 больных, находящихся в отделении интенсивной терапии по 25 хроматографическим параметрам с определением инфекционного фактора, степени интоксикации и органных метаболитов. Хроматографические исследования проводились с использованием хромато-масс-спектрометрической системы Agilent-6890 с масс-селективным детектором MDS-5973.
Из 25 хроматографических параметров нами были выбраны наиболее информативные - определение инфекционного фактора с индикацией ЛЖК и токсических метаболитов, а также из группы метаболитов органных поражений - изомерные формы высших жирных кислот. Высокое содержание метаболитов анаэробов (ЛЖК: С3-С10 + фенилкарбоновые кислоты) - (суммарно от 17,12 ± 1,51 до 21,13 ± 1,82 ммоль/л) с границами достоверных интервалов и достоверностьюp < 0,005 соответствовало тяжелому и крайне тяжелому состоянию больных в 83,4% случаев. Сопоставимость хроматографического определения инфекционного фактора с результатами микробиологических исследований составила от 71,2 до 91,3%, с морфологическими - от 77,11 до 93,5%. Мы считаем, что индикаторами генерализации инфекции является наличие активаторов «quorum sensing» в периферической крови больных (более 0,002 ммоль/л), элементов полиорганной недостаточности: высокой концентрации изомерных форм высших жирных кислот как показатель токсического поражения миокарда в начальных стадиях генерализации системной воспалительной реакции (от 1,35 ± 0,19 до 1,49 ± 0,21 ммоль/л) с границами доверительных интервалов и достоверностью р < 0,005. Методика вероятностной оценки полученных нами результатов выявила, что диагностическая чувствительность составила от 81,3 до 95,1%, диагностическая предсказуемость положительная - от 61,8 до 93,2%, диагностическая предсказуемость отрицательная -от 68,2 до 95,1%.
Методы хроматографического анализа вполне доступны для приложения в хирургической клинике для оценки инфекционного фактора, степени интоксикации и органных метаболитов и достаточно быстры (30-40-60 мин), что позволяет с помощью этих методов предупредить развитие инфекционных осложнений и их генерализацию. Диагностическая чувствительность разработан-
ных методов ГХ-МС-анализа составила от 81,3 до 95,1%, диагностическая специфичность - от 69 до 90,6%, диагностическая предсказуемость положительная - от 61,8 до 93,2%, отрицательная - от 68,2 до 95,1%.
М.В. Лахтин, В.М. Лахтин, В.А. Алешкин, С.С. Афанасьев. Сборка эритропоэтин (ЭПО)-иммунный сандвич (ИС)— гликоконъюгатный сандвич (ГС): точечная корректирующая ГС-модуляция хемилюминесценции ИС-выявляемых главных форм рекомбинантного человеческого ЭПО (рчЭПО) по принципу «Мишень в мишени». ФБУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского Роспотребнадзора, Москва
чЭПО обладает способностью избирательно связывать гли-коконъюгаты (ГК). Нами показана важность использования ГК для дальнейшей стандартизации и выявления различий коммерческих препаратов рчЭПО по особенностям его системных форм, разделенных в пластине изоэлектрофокусированием в полиакриламидном геле (ИЭФ-ПААГ) и предварительно проявленных посредством ИС с участием моноклональных антител (мАТ) против чЭПО. Нами показано, что мАТ способны лишь частично замещать предварительно связанные с рчЭПО некоторые типы ГК. Цель - анализ сборок на твердофазных формах рчЭПО, вовлекающих ИС и ГС, для повышения эффективности диагностики системных форм рчЭПО в главной мАТ-зависимой области, улучшения идентификации и выявления новых сборочных субсистемных наборов форм чЭПО с максимальной устойчивой хемилюминесценцией (ХЛ) для использования in vitro и in vivo.
Использовали коммерческие рчЭПО, мАТ против чЭПО, биотинилированные ГК (ГК-б) (www.lectinity.com). Системы форм рчЭПО (включая мочевые) разделяли ИЭФ-ПААГ, элек-троблотировали на иммобиллон-Р и визуализовали посредством ИС (мАТ-[АТ против мышиных IgG]-б-стрептавидин[С]-пероксидаза[П] ) и затем - ГС (ГК-б-С-П). ХЛ инициировали субстратом П - BioWest (UVP, США) и регистрировали в BioChemi System (UVP, Calif.) в подобранном кинетическом режиме изображения, когда базовая сильная длительная ИС-индуцированная ХЛ могла дополнительно точечно (в полосах главной мАТ-выявляемой области рчЭПО) модулироваться корректирующей менее сильной и длительной ГС-индуцированной ХЛ. Стабильность ГС-индуцированной ХЛ исследовали в процессе хранения блотов при 5оС в присутствии антимикробного консерванта.
Получены диагностические картины сборочных систем рчЭПО с усиленной ХЛ изоформ (уширение полос главной мАТ-выявляемой области в виде асимметричных ГК-типзависимых субсистемных высокодискретных эллипсных наборов, стабильных в течение месяца).
Описанная биосенсорная каскадная ХЛ-технология «мишень в мишени» может быть применена в отношении любых других высокогликозилированных системных маркерных и диагностических белков. Результаты важны для конструирования направленных кофункционирующих сборок нанобиотехнологической и медицинской значимости.
М.В. Лахтин, В.М. Лахтин, В.А. Алешкин, С.С. Афанасьев. Распознавание рекомбинантных человеческих белковых гормонов гликоконъюгатами в новых диагностических областях со сниженной чувствительностью к моноклональ-ным антителам против гормона. ФБУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского Роспотребнадзора, Москва
В эндогенном и рекомбинантном человеческом эритропоэ-тине (эчЭПО, рчЭПО) различают две главные реагирующие с моноклональными антителами (мАТ) диагностические области изоформ ЭПО, разделенные изоэлектрофокусированием в пластине полиакриламидного геля (ИЭФ-ПААГ): эчЭПО и рчЭПО(р1 2,5-3,5, типы: Дэрби, ДЖЭП) и рчЭПО (pI 4-4,5, типы: Рекормон, Эритростим, Эпокрин).
Цель - расширить диагностический потенциал с использованием визуализации ЭПО в градиенте рН 2,0-6,0 посредством гликоконъюгатов (ГК).
Использовали коммерческие препараты рчЭПО, полимерные биотинилированные ГК (ГК-б) муцинового типа на основе ПАА-цепи с кластерным расположением боковых коротких ответвлений углеводных остатков, мАТ против чЭПО. Разделенные
ИЭФ-ПААГ формы ЭПО (в том числе мочевые эчЭПО и рчЭПО), электроблотировали на мембрану и визуализовали системой ГК-б—Стрептавидин (С)-пероксидазой (П). Хемилюминесценцию инициировали пероксидазным субстратом BioWest (UVP, США) и регистрировали в оптимизированных кинетических режимах живого изображения картин на блотах (паттернов) в BioChemi System (UVP, Calif.).
Показано ГК-типзависимое связывание с чЭПО не только в типичных мАТ-зависимых областях, но и в дополнительных новых диагностических областях (pI < 2,5, 3,5 < pI < 4, pI > 4,5). ГК-паттерны характеризовали индивидуальность препаратов рчЭПО. Распределения связывания ГК (галактозидных, N-ацетиллактозаминовых, фукозных, маннозных) не совпадали между собой и с распределением связывания мАТ (были способны лишь частично замещать некоторые типы связанных с чЭПО ГК), были асимметричными в интервале pI 2-6. В области pI > 4,5 (но не других областях) с особенно выраженным низким сродством к мАТ наблюдалось взаимодействие сиалоГК с рчЭПО, что указывало на агрегированность изоформ рчЭПО и маскирование участков связывания мАТ.
Паттерновая ГК-диагностика системных форм препаратов рчЭПО в биологических жидкостях является новым перспективным инструментом протеомного анализа белковых гормонов, других цитокинов, сильно гликозилированных белков, а также кофункционирования ГК, АТ и лектинов в типировании и мониторинге цитокинов, любых других белковых эффекторов.
О.В. Лебединская1, М.В. Киселевский2. Использование методов иммуцитохимии и иммуномагнитной сепарации для выявления цитокератинпозитивных клеток. 'ГБОУ ВПО Пермская государственная медицинская академия им. акад. Е.А. Вагнера, Пермь; 2ГБУН Российский онкологический научный центр им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва
Цель исследования - сравнительное изучение морфологии цитокератинпозитивных (ЦК+) клеток, обнаруженных методами иммуноцитохимии и положительной иммуномагнитной сепарации в костном мозге у пациентов с немелкоклеточным раком лёгких и раком пищевода. Пробы костного мозга для исследования были взяты у 25 пациентов (в возрасте от 40 до 65 лет) во время лечебного хирургического вмешательства. Иммуноцитохимическое выявление цитокератинположитель-ных клеток проводили с помощью реактивов фирмы «ДАКО» (DAKO LSAB® System, США) по методу производителя. Выделение ЦК+-клеток из МНК костного мозга осуществляли посредством положительной селекции клеток с использованием набора для магнитной сепарации опухолевых клеток (MACS Cytokeratin Microbeads Carcinoma Cell Enrichment Kit, Miltenvi Biotec, Германия) по рекомендациям фирмы-производителя. Установлено, что иммуноцитохимический анализ позволяет выявить цитокератинпозитивные клетки в мазках костного мозга онкологических больных. В то же время во всех образцах костного мозга с выявленными цитокератинположительными клетками идентифицируются и клеточные комплексы с мечеными магнитными шариками. При этом метод положительной иммуномагнитной сепарации имеет ряд преимуществ при использовании в целях интраоперационной диагностики. Однако и в том и в другом случае среди ЦК+-клеток костного мозга возможно наличие ложноположительных, сомнительных клеточных форм и гемопоэтических клеток, экспрессирующих на своей поверхности эпителиальные маркеры. В связи с этим для верификации микрометастазов в этих органах необходимо дополнительное цитологическое исследование с использованием стандартного окрашивания препаратов.
И.С. Мамедов, А.В. Севко, И.В. Золкина. Разработка методики количественного определения мебгидролина методом ГХ-МС. ФБУН МНИИ педиатрии и детской хирургии, Москва
Цель - разработка и валидация методики количественного определения мебгидролина в плазме крови методом газовой хроматографии-масс-спектрометрии. Мебгидролин - лекарственный препарат, относится к группе блокаторов гистамино-вых Н1-рецепторов. Оказывает противоаллергическое, противо-зудное, антиэкссудативное, а также слабое седативное действие. Метод газовой хромато-масс-спектрометрии был выбран для разработки данной методики, так как литературных данных об
определении данного препарата методами ВЭЖХ с разными видами детекции не было.
Для валидации методики использовались калибровочные стандарты, приготовленные путем добавки рабочего раствора, содержащего известное количество стандарта мебгидролина к 500 мкл бланковой плазмы. Процедура пробоподготовки биопроб осуществлялась путем осаждения ацетоном и ацетонитри-лом. Определение концентраций мебгидролина проводили на газовом хроматографе с масс-детектором Agilent7820A/5975.
Проведена валидация аналитической методики количественного определения мебгидролина в плазме крови человека методом газовой хроматографии с масс-детектированием. Чувствительность методики составила 5 нг/мл. Воспроизводимость, точность и достоверность достигаются во всем интервале калибровочной кривой 5-500 нг/мл. Степень извлечения из плазмы крови человека составила 59%.
Разработанная методика количественного определения меб-гидролина в плазме крови человека позволит быстро и достоверно определять концентрации мебгидролина в плазме крови здоровых добровольцев или пациентов с помощью современного и высокотехнологичного метода.
Л.Л. Михалева, С.Н. Диденко, М.Л. Золотавина, Е.Ю. Быковская. Сравнительный анализ методик определения концентрации цистатина С. ГБУЗ Детская краевая клиническая больница Минздрава Краснодарского края, ФГБОУ ВПО Кубанский государственный университет, Краснодар
В настоящее время перед клинико-диагностическими лабораториями стоит сложная задача - не только использовать в диагностическом процессе информативные методы определения активности биохимических показателей, но и учитывать экономическую составляющую процесса.
Цель - определить возможность использования в клинико-биохимической лаборатории наборов для определения сывороточного цистатина С. Задачи - определить концентрацию цистатина С наборами реагентов «Konelab T-Series Cystatin-C» (Финляндия) и «Dialab Cystatin С» (Австрия); выявить корреляционную зависимость между полученными показателями.
Исследования проводились методом иммунотурбидиметрии на автоматическом анализаторе «Konelab Prime 60». Материалом служила сыворотка крови 15 пациентов, из них у 8 пациентов клинически проявлялись признаки нарушения фильтрации почек. Полученные значения считались достоверными при p < 0,05. Для пациентов с нормальными уровнем цистатина С (n = 7) с использованием набора «Dialab Cystatin C» средние значения составили 0,64 ± 0,04 мг/л (референтный интервал 0,4-1,2), для набора «Konelab T-Series Cystatin-C» средние значения колебались в пределах 0,89 ± 0,04 мг/л (референтный интервал 0,55-1,15 мг/л). У пациентов с повышенным уровнем цистатина С (n = 8) были получены следующие значения: 2,28 ± 0,55 мг/л при использовании набора «Dialab Cystatin C» и 2,65 ± 0,62 мг/л - для «Konelab T-Series Cystatin-C». Выявлена высокая корреляция между уровнями цистатина С в сыворотках крови (r = 0,99). В результате проведенного исследования нами был сделан вывод о возможности применения реагентов вышеуказанных производителей для определения цистатина С методом иммуно-турбидиметрии.
Е.В. Олемпиева, О.Н. Халимова, Л.В. Макарова. Оценка использования новых лабораторных технологий в практическом здравоохранении. Медико-санитарная часть УФСБ России по Ростовской области, Ростов-на-Дону
Лабораторные исследования - комплекс химических, молекулярных и клеточных технологий, используемых для оценки состояния здоровья пациента. Сегодня широкое использование средств и методов лабораторной диагностики нашло применение не только в классическом диагностическом процессе, но и имеет большое значение для научной деятельности врачей смежных специальностей в качестве верификации заболевания, оценки клинической эффективности новых лечебных технологий.
Цель работы - оценка эффективности внедрения в практическую деятельность лечебных учреждений новых лабораторных технологий.
Материалом для исследования выбраны биохимические критерии диагностики эндотелиальной дисфункции. В качестве ис-
ЛАБОРАТОРНЫЕ ИССЛЕДОвАНИЯ в АКУШЕРОБЕ
пользуемых лабораторных технологий применялось определение активности супероксиддисмутазы (СОД) по Misra, каталазы по А. Королюку, содержание молекул средней массы (МСМ) по А.А. Николаеву, окисленномодифицированных липопротеинов по Г.И. Музя. В исследование было включено 150 пациентов с начальными проявлениями кардиоваскулярной патологии (артериальная гипертония I стадии).
Установлено, что рост концентрации МСМ более 4,5 г/л (чувствительность метода 86%, ожидаемая ценность 92,3%), окисленномодифицированных липопротеинов более 5 нмоль МДА/г белка (чувствительность 95,4%, ожидаемая ценность 93,3%), рост коэффициента СОД/каталаза более 6,4 усл.ед. (чувствительность 90%, ожидаемая ценность 85%) служат надежными биохимическими маркерами диагностики эндотелиальной дисфункции у пациентов с начальными проявлениями кардиоваскулярной патологии. Предложенные критерии внедрены в практическую деятельность лабораторной службы лечебно-профилактических учреждений Ростова-на-Дону и Ростовской области.
Г.К. Рубцов, Н.В. Безручко, М.Т. Генгин, В.Г. Васильков, Е.Ю.Борисова, К.Д. Анопин, А.Д. Васильева, Д.Г. Садовникова, Г.А. Козлова, А.Д. Кручинина, С.С. Гамзин. Методика анализа окислительной модификации белков в пуле веществ средней молекулярной массы. ФГБОУ ВПО Пензенский государственный университет, ГБОУ ДПО Пензенский институт усовершенствования врачей Минздрава РФ
Одними из ведущих тенденций современной клинической биохимии могут служить увеличение информативности применяемых тестов, снижение количества используемого биологического материала.
Цель работы - обосновать и апробировать методику анализа окислительной модификации белков в пуле веществ средней молекулярной массы. Нами разработан «Способ определения окислительной модификации белков в пуле веществ средней молекулярной массы в сыворотке крови, плазме, эритроцитах и в моче» (заявка на патент на изобретение Российской Федерации № 2012153044, приоритет от 07.12.2012). Данный способ предполагает реализацию методики одновременного определения уровня молекул средней массы (МСМ) и окислительной модификации белков (ОМБ) в одной пробе биологической среды, в качестве которой могут использоваться не только кровь и моча, но и другие объекты исследования.
Предложенная методика анализа ОМБ в пуле МСМ включает в себя получение фракции МСМ путем осаждения трихлор-уксусной кислотой белков и определение величин изучаемого параметра в супернатанте, а также определение уровня ОМБ в осадке денатурированных белков. Оптическую плотность МСМ регистрируют при 254 нм, а образовавшихся динитрофенилги-дразонов - при 356, 370, 430, 530 нм. Данная методика была апробирована нами в обследовании больных острым и хроническим холециститом. Было отмечено, что комплекс уровней ОМБ в пуле МСМ (одни из маркерных тестов эндогенной интоксикации), отражающих их распределение в сыворотке крови, эритроцитах и моче, может использоваться для ранней характеристики выраженности эндогенной интоксикации при остром и хроническом
холецистите. При остром холецистите, по отношению к хроническому, ОМБ в пуле МСМ в изученных биологических средах более выраженная. Применение предложенной методики в практике клинической биохимии позволит расширить представления о механизмах ОМБ у больных в критических состояниях, в частности, использовать его в экспресс-лабораториях отделений реанимации и интенсивной терапии, при малом объеме полученной биологической среды и времени проведения анализа.
Н.В. Суворова, Л.Б. Корякина, О.В. Хороших, Н.В. Киселева, С.Д. Ежикеева. Оценка диагностических возможностей метода «сухой химии» на анализаторе мочи Diruri Н-100. ГБУЗ Иркутская областная клиническая больница
Цель - оценить результаты физико-химических показателей и эритроцитурии в моче на анализаторе мочи Diruri Н-100 у пациентов многопрофильного стационара, сопоставить их с унифицированными количественными и качественными методами.
В исследовании участвовали 70 пациентов эндокринологического, нефрологического, урологического отделения и контрольная группа (и = 33) здоровых добровольцев, возраст 38 ± 12 лет. Показатели состава мочи: белок, глюкозу, реакцию мочи (рН), уробилиноген, относительную плотность, эритроциты, полученные с помощью тест-полосок Diruri Н13-Сг на анализаторе мочи Diruri Н-100, сравнивали с сульфосалициловым (ССК) методом на «Белуре-600» (негативным считали белок < 0,027 г/л), глюкозооксидазным методом на биохимическом анализаторе «Весктап Сои^ СХ», показателями рН-метра, уробилиноге-ном - качественно реактивом Эрлиха, относительную плотность мочи - ареометром АОН-1, эритроциты - микроскопией осадка. Исследования выполнены не позднее 1 ч после сбора мочи.
Сравнительный анализ методов показал сопоставимость результатов по уробилиногену негативным результатам белка (100%). При этом были установлены достоверные различия (р < 0,05) результатов белка, полученных на мочевом анализаторе в количестве 0,3, 1 и 3 г/л и методом ССК; «следы» соответствовали белку ССК - 0,02-0,088 г/л. Выявлена положительная корреляционная зависимость показателей рН (г = 0,78, р < 0,0001); глюкозы (г = 0,94, р < 0,002) в количестве от 2,8-31 ммоль/л. Тем не менее при определении глюкозы отмечалась низкая чувствительность тест-полосок в диагностически незначимом диапазоне от 0,1-0,4 ммоль/л, ложноотрицательные результаты глюкозы составили 5,7%. При сравнении относительной плотности мочи контрольной группы и группы пациентов отделений не было выявлено значимых различий (р > 0,05) с показателями мочевого анализатора. Однако при определении ареометром в тех же группах выявлены достоверные различия (р < 0,05). При определении эритроцитурии отрицательные результаты были сопоставимы с микроскопией эритроцитов в 64% случаев, однако имели место как ложноотрицательные результаты - 10,7%, так и ложноположительные - 3,8%.
Из 6 проанализированных показателей мочи методом «сухой химии» на анализаторе мочи Diruri Н-100 результаты сопоставимы с унифицированными методами по рН, уробилиногену, негативным результатам белка и могут применяться для качественной первичной экспресс-диагностики мочи.
ЛАБОРАТОРНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ В АКУШЕРСТВЕ
С.И. Билимова, Г.Н. Чистякова, И.И. Ремизова, М.Н. Тарасова М.Н., Д.В. Погорелко. Частота обнаружения Atopobium vaginae у женщин с отягощенным акушерско-гинекологическим анамнезом. ФГБУ НИИ ОММ Минздрава РФ, Екатеринбург
Цель работы - изучить частоту обнаружения Atopobium vaginae методом ПЦР в режиме реального времени у женщин с отягощенным акушерско-гинекологическим анамнезом. Материалом для исследования служил соскоб эпителиальных клеток заднебо-кового свода влагалища. Для обработки клинического материала использовали набор реагентов «Фемофлор 16» фирмы «ДНК-Технология» (Россия). Амплификацию с детекцией в режиме реального времени осуществляли на приборе IQ5 Multicolor RealTime PCR Detection System фирмы «Bio-Rad» (США). Проведено
обследование 157 женщин репродуктивного возраста (29,4 ± 0,5 года) с отягощенным акушерско-гинекологическим анамнезом. У всех обследуемых пациенток отсутствовали заболевания, вызванные облигатными патогенами: гонорея, сифилис, трихомониаз, хламидиоз, ВИЧ, гепатиты В и С. Анализ проведенных исследований показал, что из 157 обследованных женщин нормобиоценоз микрофлоры влагалища был определен у 94 пациенток (59,9%). При этом ДНК Atopobium vaginae в количестве 101-104 ГЭ/мл была выявлена в биоматериале, взятом от 13 женщин (13,8%) с нор-мобиоценозом. Анаэробный дисбаланс вагинальной микрофлоры был диагностирован у 63 женщин (40,1%) с идентификацией в 37 (58,7%) случаях ДНК Atopobium vaginae в количестве 102-105 ГЭ/ мл при умеренном и 106-107 ГЭ/мл при выраженном дисбиозе.
