CC BY
64
ков, машинистов компрессорной установки, слесарей-ремонтников, слесарей-электриков, ремонтников ИССО. Коллективный риск в 2,7 раза выше, чем в БТ -14,8 ожидаемых случаев злокачественных новообразо-
ЛИТЕРАТУРА
1. Жуковский М.В. Расчет радиационных рисков при облучении дочерними продуктами распада радона // АНРИ. -2001. - №1. - С.4-12.
2. Жуковский М.В., Павлюк А.В. Коэффициенты дозово-го перехода от экспозиции дочерними продуктами распада радона к эффективной дозе // АНРИ. - 2001. - №2. - С.52-61.
3. Жуковский М.В., Ярмошенко И.В. Радон: Измерение, дозы, оценка риска. - Екатеринбург: УрО РАН ИПЭ, 1997. -231 с.
4. Защита от радона-222 в жилых зданиях и на рабочих местах. Публикация 65 МКРЗ. - М.: Энергоатомиздат, 1995.
- 78 с.
5. Макаров О.А. Радон и здоровье населения. -Новосибирск: Наука, 2000. - 148 с.
6. МУ 2.6.1.2838-11 Радиационный контроль и санитарноэпидемиологическая оценка жилых, общественных и производственных зданий и сооружений после окончания их строительства, капитального ремонта, реконструкции по показателям радиационной безопасности методические указания. - М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2011. - 24 с.
7. Приказ Минздрава РФ, Госатомнадзора РФ и Госкомэкологии РФ от 21.06.1999 г. № 239/66/288 «Об утверждении методических указаний «Порядок ведения радиационно-гигиенических паспортов организаций и территорий» [Электронный ресурс] URL http // base.consultant. ru (дата обращения 14.02.2013).
8. Профилактика профессионального рака / Под ред. В.Б. Смулевича. - М.: Профиздат, 2004. - 224 с.
9. Р 2.2.2006-05 Руководство по гигиенической оценке фак-
ваний на 100 работающих с наибольшей вероятностью у тоннельных рабочих (4,7 случая), слесарей-электриков (1,5 случая), электромехаников (1,7 случая).
торов рабочей среды и трудового процесса. Критерии и классификация условий труда руководство - М.: Федеральный центр госсанэпиднадзора Минздрава России, 2005. - 142 с.
10. Рузер Л.С., Секстро Р.Г. Метод прямого измерения активности дочерних продуктов распада радона в легких горнорабочих // АНРИ. - 1998. - №3. - С.18-20.
11. СанПиН 2.6.1.2523-09 Нормы радиационной безопасности (НРБ-99/2009) санитарные правила и нормативы. -2-е изд., стереотип. - М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2009. - 100 с.
12. СанПиН 2.6.1.2800-10 Гигиенические требования по ограничению облучения населения за счет природных источников ионизирующего излучения санитарные правила и нормативы. - М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2011. - 24 с.
13. Серебряков П.В. Вопросы применения методики оценки канцерогенного риска // Актуальные проблемы и инновационные технологии в гигиене: материалы Всерос. науч.-практ. интернет-конф. (1-5 октября 2012г.) / Под ред. Г.Г. Онищенко, Н.В. Зайцевой. - Пермь: Книжный формат, 2012. - С.74-77.
14. Польский О.Г., Варшавский Ю.В., Вербов В.В. и др. Система обеспечения радиационной безопасности населения московского мегаполиса // Медицина труда и промышленная экология. - 2006. - №2. - С.4-11.
15. Терентьев М.В., Крисюк Э.М. Оценка радиационной обстановки на неурановых предприятиях по подземной разведке и добыче полезных ископаемых // Гигиена и санитария.
- 1991. - №6. - С.53-55.
16. IARC Monographs on the evaluations of the carcinogenic risk to humans. Man-male mineral fibers and radon // IARC, Lion. - 1988. - Vol. 43. - 300 p.
Информация об авторах: Лемешевская Елизавета Петровна - заведующий кафедрой, д.м.н., профессор; Куренкова Галина Владимировна - доцент кафедры, к.м.н., 664003, Иркутск, ул. Красного Восстания, 1, ИГМУ кафедра гигиены труда и гигиены питания, тел. (3952) 241294, e-mail: [email protected]
© НАРКЕВИЧ А.Н., КОРЕЦКАЯ Н.М., ВИНОГРАДОВ К.А., НАРКЕВИЧ А.А. - 2013 УДК 616.24-002.5-073.175
МАССОРОСТОВЫЕ ПРЕДИКТОРЫ ВЫЯВЛЕНИЯ ТУБЕРКУЛЕЗА ЛЕГКИХ
Артем Николаевич Наркевич, Наталия Михайловна Корецкая,
Константин Анатольевич Виноградов, Анна Александровна Наркевич (Красноярский государственный медицинский университет им. проф. В.Ф. Войно-Ясенецкого, ректор - д.м.н., проф. И.П. Артюхов, кафедра туберкулеза с курсом ПО, зав. - д.м.н., проф. Н.М. Корецкая)
Резюме. Проведено изучение массоростовых особенностей впервые выявленных больных туберкулезом легких и определение влияния данных показателей на индивидуальный риск выявления туберкулеза легких. Лица, входившие в исследование, были разделены на две группы: I группа - впервые выявленные больные туберкулезом легких (342 человека) и II группа - здоровые лица, проживающие на территории г. Красноярска и Красноярского края (386 человек). Показана высокая статистическая значимость различий между группами таких показателей как рост, масса тела, индекс массы тела и снижение веса в течение года. Проведена оценка влияния массоростовых показателей на индивидуальный риск выявления туберкулеза лёгких. Представлены возможные пути использования полученных данных.
Ключевые слова: массоростовые показатели, индекс массы тела, индивидуальный риск выявления туберкулеза легких, организация выявления туберкулеза легких.
WEIGHT AND HEIGHT PREDICTORS IN IDENTIFICATIONS OF PULMONARY TUBERCULOSIS
A.N. Narkevich, N.M. Koretskaya, K.A.Vinogradov, A.A. Narkevich (Krasnoyarsk State Medical University named after Prof. V.EVoino-Yasenetsky, Russia)
Summary. The study of the weight and height features and determination of the effect of these indicators on the individual risk of pulmonary tuberculosis detection has been carried out in patients with newly diagnosed pulmonary tuberculosis.
The persons under research were divided into two groups: I group - patients with newly diagnosed pulmonary tuberculosis (342 persons) and II group -healthy people living in Krasnoyarsk and the Krasnoyarsk territory (386 people). The high statistical significance of differences between groups of such indicators as height, weight, body mass index and weight loss within a year is shown. The evaluation of the influence of weight and height indicators on the individual risk of pulmonary
tuberculosis detection has been conducted. Possible ways to use the obtained data are presented.
Key words: weight and height indicators, body mass index, individual risk of pulmonary tuberculosis detection, organization of pulmonary tuberculosis detection.
На сегодняшний день эпидемическая ситуация по туберкулезу в Российской Федерации и большинстве ее регионов остается весьма напряженной, несмотря на некоторую стабилизацию, имеющую «мнимый» характер [2,9,10,11]. Одним из ведущих исследовательских направлений в сфере оказания противотуберкулезной помощи населению является организация своевременного выявления больных туберкулезом легких [4,6].
Наиболее эффективным методом своевременного выявления туберкулеза легких у взрослых является регулярное проверочное флюорографическое обследование [6,8]. Его регулярность для различных категорий населения определяется на основании постановления Правительства Российской Федерации №892 от 25.12.2001 г. «О реализации Федерального закона «О предупреждении распространения туберкулеза в Российской Федерации». Такой подход к проведению скрининговых мероприятий, направленных на своевременное выявление туберкулеза легких, в последние годы подвергается критике, и приводятся данные о целесообразности индивидуального или селективного подхода с выделением групп риска [4,7].
В этой связи необходима разработка научно-обоснованных
возрастно-половых, социально-
профессиональных и иных критериев риска выявления туберкулеза легких для определения кратности проверочных флюорографических осмотров в различных группах населения.
Одними из самых доступных, ввиду их обязательной фиксации в медицинской документации, для оценки риска выявления туберкулеза легких являются массоростовые показатели.
В этой связи мы считаем актуальным получение количественной оценки и клинической значимости данных показателей.
Целью исследования явилось изучение у впервые выявленных больных туберкулезом легких массоростовых особенностей, а также определение их влияния на индивидуальный риск выявления туберкулеза лёгких.
Материалы и методы
В изучаемую выборку вошли впервые выявленные больные туберкулезом легких, проходившие стационарный этап лечения в Красноярском краевом противотуберкулезном диспансере №1 и №2 (I группа - 342 пациента) и здоровые лица, проживающие на территории г. Красноярска и Красноярского края (II группа -386 человек).
Анализировались рост, масса тела пациентов, а также индекс массы тела и изменение массы в течение года, предшествующего проведению проверочного флюорографического обследования. Для интервальной оценки описательных статистик и количественной оценки их различий использовались 95% доверительные интервалы (ДИ 95%).
Для определения подчинения закону нормального распределения количественных показателей использовался критерий Шапиро-Уилка [13]. При уровне значимости (р) меньше 0,05 гипотеза о нормальности распределения отвергалась. Все количественные данные не подчинялись закону нормального распределения и представлены в виде медианы и 95% ДИ (Ме [Ъ;и], где Ъ - нижняя граница ДИ, и - верхняя граница ДИ). Для долей 95% ДИ рассчитывался по методу Вальда-Вольфовица [14].
Статистическая значимость различий количественных показателей определялась с помощью критерия Манна-Уитни [5]. Различия между качественными (номинальными) признаками оценивались с помощью критерия х2 (результаты представлены в виде: х2 - значение критерия, df - число степеней свободы, р - уровень значимости) [5]. Дополнительно для оценки влияния массоростовых факторов на индивидуальный риск выявления туберкулеза легких рассчитывался показатель относительного риска - КЯ (представлен в виде: КЯ и ДИ 95%) [3]. Нулевая гипотеза об отсутствии статистически значимых различий отвергалась при р<0,05.
Результаты и обсуждение
Медиана роста у всех исследуемых составила 168,0 [167;169] см, медиана массы - 65 [64;68] кг, медиана индекса массы тела - 22,8 [22,41;23,53] кг/м2. Среди всех исследуемых у 25,1±3,15% в течение предыдущего года произошло ощутимое ими снижение веса, а у 10,9±6,90% - его повышение. Медианы снижения и повышения веса были равны и составили 5 [4;5] кг.
Сравнительная характеристика массоростовых показателей I и II групп представлена в таблице 1. Статистические различия таких показателей как рост (170 [168;172] см против 167 [165;168] см), масса тела (60 [59;61] кг против 74 [72;76] кг), индекс массы тела (20,7 [20,43;20,96] кг/м2 против 26,5 [26,09;27,17] кг/м2) и снижение массы тела в течение предыдущего года (5 [5;6] кг против 3 [3;5] кг) между исследуемыми I и II групп были высоко значимыми (р<0,001). Повышение веса в течение предыдущего года между I и II группами (3 [2;6] кг против 5 [4;5] кг) статистических различий не имело. Несмотря на такие результаты, клиническая значимость различий роста была всего -4 [-5;-3] кг, что является незначительным для того, чтобы учитывать данный показатель в качестве предиктора туберкулеза легких в повседневной практике врача. Тем не менее, существенная статистическая разница роста впервые выявленных больных туберкулезом легких и здоровых лиц позволяет использовать данный показатель в высокоточных системах прогнозирования и помощи в принятии решений. Такими системами могут быть различного рода математические модели или компьютерные системы, основанные на регрессионных уравнениях или нейронных сетях [1,15].
В связи с тем, что количественная оценка различий снижения и повышения массы в течение предыдущего года показывает их низкую клиническую значимость, нами была проведена качественная оценка этих различий. Качественная характеристика различий изменения массы тела в течение предыдущего года представлена в таблице 2. Представленные различия были статистически значимы (х2=45,879, df=1, р<0,001) и показывают, что лица, у которых в течение предыдущего года про-
Таблица 1
Сравнительная характеристика массоростовых показателей I и II групп
Показатель I группа, Me1 [L;U] n=342 II группа, Me2 [L;U] n=386 Значимость, p Клиническая значимость, Me2-Me1 [L;U]
Рост, см 170 [168;172] 167 [165;168] <0,001 -4 [-5;-3]
Масса, кг 60 [59;61] 74 [72;76] <0,001 14 [12;16]
Индекс массы тела, кг/м2 20,7 [20,43;20,96] 26,5 [26,09;27,17] <0,001 5,9 [5,23;6,52]
Снижение массы в течение предыдущего года, кг 5 [5;6] 3 [3;5] <0,001 -1 [-2;-1]
Повышение массы в течение предыдущего года, кг 3 [2;6] 5 [4;5] 0,183 1 [0;2]
Таблица 2
Изменение веса в течение предыдущего года в I и II группах
Показатель I группа, абс., %±ДИ 95% n=342 II группа, абс., %±ДИ 95% n=386
Снижение массы в течение предыдущего года 3 1 3 1+ , 5 15 5 1+ , 4
Повышение массы в течение предыдущего года 21 6,1±2,54 58 15,0±3,56
изошло ощутимое ими снижение массы в I группе исследуемых встречались чаще в 2,8 раза. В тоже время, доля лиц, у которых в течение предыдущего года масса ощутимо повысилась во II группе была в 2,4 раза больше, чем в I группе. Таким образом, снижение массы тела в течение предыдущего года повышает риск выявления туберкулеза лёгких более чем в 1,5 раза (КЯ=1,85 ДИ 95% [1,61;2,12]), а повышение массы в течение предыдущего года снижает его почти в 2 раза (КЯ=0,53 ДИ 95% [0,37;0,78]).
Статистически значимые различия также были обнаружены в индексе массы тела между исследуемыми I и II групп (х2=231,527, df=2, р<0,001). Все исследуе-
Таблица 3 Индекс массы тела у исследуемых I и II групп
Индекс массы тела I группа, абс., %±ДИ 95% n=342 II группа, абс., %±ДИ 95% n=386
Ниже нормы 67 19,6±4,20 4 1,0±0,99
Норма 241 70,5±4,83 144 37,3±4,82
Выше нормы 34 9,9±3,17 238 61,7±4,85
мые пациенты I и здоровые лица II групп по индексу массы тела были разделены согласно классификации Всемирной организации здравоохранения [12* на три группы: ниже нормы, где индекс массы тела был меньше 18,49 кг/м2, норма, где индекс массы тела был от 18,50 до 24,99 кг/м2 и выше нормы, индекс массы тела в данной группе составлял более 25,0 кг/м2 (табл. 3).
Представленные данные свидетельствуют о том, что среди исследуемых I группы основную долю (70,5±4,83%) составили лица с индексом массы тела от 18,50 до 24,99 кг/м2. Однако, среди исследуемых, входящих во П-ю группу, наибольшим был удельный вес лиц с индексом массы тела более 25,0 кг/м2 (61,7±4,85%).
У лиц с индексом массы тела ниже нормы повышается риск выявления туберкулеза легких более чем в 2 раза (№=2,25 ДИ 95% [2,03;2,51]) по сравнению с лицами, имеющими иной индекс массы тела, а с индексом массы тела в пределах нормы - более чем в 1,5 раза (БЛ=2,13 ДИ 95% [1,77;2,55]). У лиц, имеющих индекс массы тела выше нормы, относительный риск выявления туберкулеза легких ниже более чем в 5 раз (№=0,19 ДИ 95% [0,13;0,26]).
Таким образом, рост у больных туберкулёзом был выше, чем у здоровых лиц, но клиническая ценность различий не значительна, что не позволяет использовать данный показатель во врачебной практике для определения риска выявления туберкулеза лёгких обособленно от других показателей и принятия решения о кратности проведения проверочного флюорографического обследования. Вес и индекс массы тела у здоровых лиц значительно выше, чем у больных туберкулёзом. В этой связи, наиболее подходящим показателем, охватывающим одновременно рост и вес пациентов, который дает основания изменить сроки проверочного флюорографического обследования для отдельных лиц, является индекс массы тела. Кроме того, достаточно информативными являются показатели изменения массы в течение предыдущего года. Показанные в данной статье количественные и качественные характеристики больных туберкулезом и здоровых лиц, а также их различия позволяют повысить уверенность в устанавливаемом диагнозе при поступлении в приемное отделение, а также устанавливать кратность проверочного флюорографического обследования отдельных лиц врачами общей лечебной сети. Такая оценка может проводиться как самостоятельно врачом, так и с использованием различных компьютерных систем и математических моделей, разработка которых является довольно актуальной в настоящее время.
ЛИТЕРАТУРА
1. Авилов К.К., Романюха А.А. Математическое моделирование процессов распространения туберкулеза и выявления больных // Автоматика и телемеханика. - 2007. - №9. - С.145-160.
2. Астафьев В.А., Савилов Е.Д., Зоркальцева Е.Ю. и др. Оценка эпидемиологической ситуации по туберкулезу в Иркутской области // Сибирский медицинский журнал (Иркутск). - 2011. - №6. - С.199-202.
3. Бабич П.Н., Чубенко А.В., Лапач С.Н. Применение современных статистических методов в практике клинических исследований. Сообщение третье. Отношение шансов: понятие, вычисление и интерпретация // Український медичний часопис. - 2006. - №2. - С113-119.
4. Баласанянц Г.С., Федоров С.В. Эпидемиологическое значение основных путей выявления туберкулеза в общей лечебной сети // Российский семейный врач. - 2008. - Т. 12. №2. - С.36-40.
5. Гланц С. Медико-биологическая статистика. - Пер. с англ. - М., Практика, 1998. - 459 с.
6. Иванова О.Г., Млордык А.В., Пузырева Л.В. и др. Эффективность мероприятий по выявлению туберкулеза органов дыхания в Омской области // Кубанский научный медицинский вестник. - 2011. - №4. - С.102-104.
7. Кучеров А.Л., Ильичева Е.Ю. Новые подходы к активному выявлению больных туберкулезом // Русский медицинский журнал. - 2000. - Т. 8. №12. - С.492-494.
8. Мишин В.Ю. Выявление и диагностика туберкулеза органов дыхания у взрослых в учреждениях общей лечебной
сети // Справочник поликлинического врача. - 2008. - №4.
- С.4-8.
9. Подгаева В.А., Голубев Д.Н., Черняев И.А., Шулев П.Л. Влияние социально-экономических факторов на смертность населения от туберкулеза на Урале // Сибирский медицинский журнал (Иркутск). - 2011. - №2. - С.151-158.
10. Татаринцева М.П., Иванова О.Г., Руднева С.Н. и др. Эпидемиологическая ситуация по туберкулезу в Омской области в 1997-2010 гг. // Сибирское медицинское обозрение.
- 2011. - №6. - С.36-40.
11. Филиппова Т.П., Васильева Л.С., Кочкин А.В. и др. Современные тенденции эпидемиологической ситуации по туберкулезу в России // Сибирский медицинский журнал (Иркутск). - 2009. - №7. - С.13-16.
12. BMI classification // World Health Organization. URL: http://apps.who.int/bmi/ index.jsp?introPage=intro_3.html (дата обращения: 15.04.2013).
13. Shapiro S.S., Wilk M.B. An analysis of variance test to normality (complete samples) // Biometrika. - 1965. - Vol.52. -№3-4. P.591-611.
14. Wald A., Wolfovitz J. Confidence limits for continuous distribution functions // Annals of mathematical statistics. -1939. - №10. - P.105-118.
15. Zhang Y., Fong S., Fiaidhi J., Mohammed S. Real-time clinical decision support system with data strem mining // Journal of biomedicine and biotechnology. - 2012. - Vol.2012. URL: http://www.hindawi.com/jourmals/bmri/2012/580186/ (дата обращения: 15.04.2013).
Информация об авторах: Наркевич Артем Николаевич - очный аспирант кафедры медицинской кибернетики, тел. (391) 220 03 89, е-mail: [email protected]; Корецкая Наталия Михайловна - заведующий кафедрой туберкулеза с курсом ПО, доктор медицинских наук, профессор, тел. (391) 261 76 82, e-mail: [email protected];
Виноградов Константин Анатольевич - заведующий кафедрой медицинской кибернетики, доктор медицинских наук, профессор, тел. (391) 220 03 89, e-mail: [email protected]; Наркевич Анна Александровна - ассистент кафедры туберкулеза с курсом ПО, тел. (391) 261 76 82, e-mail: [email protected].
© МЫЦИК А.В., АКУЛИНИН В.А., СТЕПАНОВ С.С., ЛАРИОНОВ П.М. - 2013 УДК: 616.813.1-018-091.81
ВОЗМОЖНОСТИ МОРФОМЕТРИЧЕСКОЙ ХАРАКТЕРИСТИКИ СИНАПСОВ НЕОКОРТЕКСА ЧЕЛОВЕКА ПРИ ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКОЙ ВЕРИФИКАЦИИ
Алексей Владимирович Мыцик1, Виктор Александрович Акулинин1,
Сергей Степанович Степанов1, Петр Михайлович Ларионов2 ('Омская государственная медицинская академия, ректор - д.м.н., проф. А.И. Новиков, кафедра гистологии, цитологии и эмбриологии, зав. - д.м.н., проф. В.А. Акулинин; ^Новосибирский научно-исследовательский институт травматологии и ортопедии, директор - д.м.н., проф. М.А. Садовой, лаборатория молекулярногенетических и морфологических методов исследований, зав. - д.м.н., проф. П.М. Ларионов)
Резюме. Изучены возможности оценки структурно-функционального состояния синапсов неокортекса человека (n=5) с помощью комплексного использования иммунофлуоресцентной верификации синаптофизина и мор-фометрии. Установлено, что при использовании иммуногистохимических методов выявления синапсов и флуоресцентной микроскопии удается достаточно точно охарактеризовать только общую площадь маркированных частиц в единице поля зрения. Реальную численную плотность синапсов (в силу ограничения разрешающей способности флуоресцентного микроскопа) можно определить только при ультраструктурном исследовании. Обсуждаются проблемы получения объективной информации о структурно-функциональном состоянии синапсов неокортекса при использовании иммунофлуоресцентных методов и автоматизированного компьютерного анализа изображений с помощью программы ImageJ 1.46.
Ключевые слова: человек, неокортекс, синапсы, синаптофизин, иммунофлуоресценция, морфометрия, автоматизированный компьютерный анализ.
CAPABILITIES OF MORPHOMETRYС CHARACTERISTIC OF THE HUMAN NEOCORTEX SYNAPSES IN IMMUNOHISTOCHEMICAL VERIFICATION
A.V. Mytsik1, V.A. Akulinin1, S.S. Stepanov1, P.M. Larionov2
('Omsk State Medical Academy, Russia; ^Novosibirsk Research Institute of Traumatology and Orthopaedics, Russia)
Summary. Possibilities of an estimation of a structural-functional condition of human neocortex synapses (n=5) by means of complex use of immunofluorescent verifications of the synaptophysin and morphometry have been studied. It has been established, that in the use of immunohistochemical methods of revealing synapses and fluorescent microscopy it is possible to characterise precisely only a total area of the marked particles in the unit of a field of vision. The real numerical synaptic density (owing to restriction of resolution of a fluorescent microscope) can be defined only in ultrastructural research. There have been discussed the problems of obtaining the objective information of a synapses structural-functional condition in the use of immunofluorescent methods and the automated computer analysis of images by means of program ImageJ 1.46.
Key words: human, neocortex, synapses, synaptophysin, immunofluorescence, morphometry, automated computer analysis. ___________________________________________________________________________________________________
Необходимость исследования структурнофункционального состояния межнейронных синапсов неокортекса человека обусловлена стремлением выявления закономерностей реорганизации межнейронных отношений и поиском средств регуляции деструктивных и компенсаторно-восстановительных процессов, лежащих в ее основе [5,8].
При иммуногистохимических исследованиях синапсов наиболее стабильные результаты получены при использовании первичных антител к синаптофизину, который является интегральным мембранным белком синаптических пузырьков. Поэтому иммуногистохи-мическое выявление синаптофизина с помощью специфических моно- и поликлональных антител широко используется для изучения синапсов в нервной системе [3,4,6,9-13].
Цель работы: исследование структурно-
функционального состояния межнейронных синапсов неокортекса человека.
Материалы и методы
Работа выполнена на базе Омской государственной медицинской академии и Department of Anatomy and Cell Biology (Goteborg University, Medicinaregatan 3-5, Goteborg S-41390, Sweden). Материал для гистологического исследования забирался в Омском областном бюро судебно-медицинской экспертизы. Данное иссле-
дование одобрено этическим комитетом Омской государственной медицинской академии.
Для исследования использовался аутопсийный материал (5-10 ч после смерти) из поля 10 (по Бродману) лобной коры большого мозга (ЛКБМ) погибших в результате несчастных случаев (n=5).
Мозг фиксировали в 4% растворе параформа на 0,1М фосфатном буфере (pH 7,2-7,4) при температуре +4оС (в течение 1 сут.) и заключали в парафин. Изготавливали серийные фронтальные срезы толщиной 10 мкм через все слои коры большого мозга, помещали их на предметные стекла. Для иммунофлуоресцентного исследования использовали первичные кроличьи поликлональные антитела (ImG) к синаптофизину, synaptophysin, p-38, (Rabbit Anti-Human Synaptophysin Polyclonal Antibody; Spring Bioscience, Pleasanton, USA, № Е2174), разведение 1:300. Для визуализации иммунной реакции были использованы козлиные поликлональные вторичные антитела к иммуноглобулину кролика (Goat polyclonal Secondary Antibody to Rabbit IgG - H&L (TR) № ab6719; Abcam, Cambridge, England), разведение 1:200. Антитела ассоциированы с флюоресцентным красителем Texas Red' Sulfonyl Chloride (молекулярная масса 625 дальтон). Данное вещество имеет длину волны поглощения 596 нм и длину волны испускания 620 нм, свечение выглядит красным. Вторичные антитела были экспонированы 20 мин на качающейся поверхности при комнатной температуре, затем слайды были промыты 0,05% фос-
