CC BY
5
МАТЕРИАЛЫ V НАЦИОНАЛЬНОГО КОНГРЕССА ПО РЕГЕНЕРАТИВНОЙ МЕДИЦИНЕ
137
В качестве архитектуры тканеинженерного каркаса выбран высокопористый губчатый матрикс на основе ацетата целлюлозы, полученный методом лиофилиза-ции. В качестве растворителя использован диоксан. Введение электропроводящей компоненты осуществлено повторной лиофилизацией полимерной основы после импрегнации филлера в водном растворе PEEDOT:PSS. Полученные полимерные материалы подвергнуты модификации в парах сшивателя.
Разработанные материалы охарактеризованы методами электронной микроскопии с контролем процесса деформации и БЭТ; исследованы физико-механические и электропроводящие характеристики. Установлено, что прочность и электропроводность материалов соответствует диапазону значений, требуемых для эффективной пролификации клеточных структур. Работа выполнена при поддержке Гранта РНФ № 21-13-00321.
Литература:
1. Shaabani A., Sedghi R. Polymer. 2021. V. 223. P. 123694.
масштабная экспансия функционально активной популяции nk-клеток для иммунотерапии онкологических заболеваний
М.И. Лукашина, П.Н. Вихрева, М.Д. Моллаев, А.В. Посвятенко, А.В. Кибардин, М.А. Масчан, С.С. Ларин
ФГБУ НМИЦ детской гематологии, онкологии и иммунологии им. Дмитрия Рогачева» Министерства здравоохранения Российской Федерации, Москва, Россия.
e-mail: mlukashina@mail.ru
Ключевые слова: NK-клетки, получение, культивирование, функциональная активность.
Иммунотерапия, наряду с хирургией, химио- и радиотерапией, подтвердила свою эффективность в лечении злокачественных опухолей. Иммунотерапия использует различные средства, прямого и опосредованного действия, для стимуляции иммунного ответа против патологических клеток. Одним из направлений иммунотерапии является адоптивный перенос иммунокомпетентных клеток в организм пациента. Для этой цели чаще всего используют Т- и NK- клетки. У NK-клеток имеется ряд преимуществ, важнейшим из которых является отсутствие необходимости предварительной стимуляции для элиминации клеток-мишеней. Иммунотерапия NK-клетками предполагает введение пациенту значительных количеств клеток. До недавнего времени это было ключевым ограничением. Сейчас для получения необходимого количества клеток используют два основных подхода: с использованием и без использования фидерных клеток.
Источниками для масштабного производства NK-клеток являются: периферическая кровь, пуповинная кровь, индуцированные плюрипотентные стволовые клетки и клеточные линии. Самый распространенный источник для культивирования NK-клеток — это периферическая кровь, которую использовали для дальнейшей работы. Выделение мононуклеарной фракции клеток проводили в градиенте плотности фиколла, а также применяли магнитную сепарацию. Полученную клеточную фракцию культивировали в присутствии фидерной линии K562-mIL15-mIL21 -4-1BBL в течении 3 недель. В результате культивирования были получены значительные
количества ЫКклеток: увеличение от исходного количества от 50000 до 100000 раз, содержание ЫКклеток в конечной популяции составляло от 80 до 98%.
Оценку функциональной активности полученных клеток проводили в прямом цитотоксическом тесте с флуоресцентной визуализацией против опухолевых клеточных линий: К562, меланомы, нейробластомы. В цитотоксическом тесте наблюдали 100% гибель мишеней через 48-72 часа кокультивирования. Кроме того, с помощью проточного цитометрического анализа проводили оценку маркера дегрануляции (00107а) против клеточной линии К562. При кокультивировании 1\1К-клеток и клеток К562, маркер дегрануляции увеличивался в среднем в 4 раза по сравнению с интактными клетками.
Для оценки возможности хранения полученных функциональных ЫК-клеток, их криоконсервировали. Функциональную активность, после размораживания, проверяли в тестах аналогичных свежеприготовленным клеткам. Все характеристики сохранялись.
Таким образом разработан и апробирован протокол экспансии и масштабнойнаработки ЫК-клеток, пригодных для клинического применения.
генная терапия наоснове микрорнк для gna01-энцефал0патии с доминантно-негативным вариантом c.607 g>a
Е.А. Лунев1' 2' 3, Н.В. Клементьева1, 2,
И.М. Савченко2, А.А. Карань2, М.А. Дженкова1' 2,
Т.В. Егорова1' 2, М.В. Бардина1' 2' 3
1 Лаборатория моделирования и терапии наследственных заболеваний, Институт биологии гена РАН, Москва, Россия
2 ООО «Марлин Биотех», Сочи, Россия
3 Центр высокоточного редактирования
и генетических технологий для биомедицины, Институт биологии гена РАН, Москва, Россия
e-mail: e.lunev.marlin@gmail.com
Ключевые слова: орфанные заболевания, GNAO1-энцефалопатия, генная терапия, доминантно-негативные мутации, микроРНК.
GNAO1-энцефалопатия — орфанное неврологическое заболевание, вызванное мутациями в гене GNAO1. GNAO1 кодирует альфа-субъединицу G-белка (Gao), важную для функционирования центральной нервной системы. Заболевание проявляется у детей младенческого возраста в виде эпилепсии и/или двигательной дисфункции с задержкой развития. Фенотипическая гетерогенность указывает на необходимость применения подходов персонализированной медицины. Один из наиболее частых и тяжело протекающих вариантов GNAO1 -энцефалопатии вызван мутацией GNAO1 c.607 G>A (G203R). Предположительно, мутация имеет доминантно-негативное проявление, хотя механизм нарушения функции белка Gao в нейронах мало изучен. В настоящей работе мы уточнили фенотипическое эффект мутантного белка Gao-G203R в клеточной культуре и разработали подход персонализированной генной терапии в отношении данного патогенного варианта. Для этого в первичную культуру нейронов мыши доставляли с помощью аденоассоциированных вирусов (ААВ) би-цистронные векторы, экспрессирующие Gao с мутацией или дикого типа и репортерный белок. Мы обнаружили, что Gao-G203R приводит к повышению общего уровня
Гены & Клетки XVII, №3, 2022
