CC BY
23
У пациентов четвертой группы имело место преимущественное снижение слухоречевой кратковременной памяти (тест Лурия) с нарушением запоминания словесных обозначений и цифр, а также зрительной памяти без значимых изменений на фоне лечения.
Особенностью нейропсихологических расстройств при ишемическом инсульте является не только формирование очага дисгемии, но и существование зон с компенсированным и субком-пенсированным кровоснабжением, нарушение связей между мозговыми центрами и формирование нового стереотипа межцентральных отношений. Функция памяти слагается из трех фрагментов: запечатления информации, хранения и воспроизведения. Тестирование для изучения мнестических функций включает изучение этапа воспроизведения информации. На качество запоминания влияют многие факторы: эмоциональная окраска восприятия, направленность внимания, уровень бодрствования, напряжение, мотивационное подкрепление [2, 5].
Нарушение запоминания материала с использованием цифр, словесных обозначений было более выраженным при ишемическом поражении височной и медиобазальных отделов лобной коры, подтвержденных с помощью ней-ровизуализации, и сочетались с угнетением когнитивных функций.
При обширных и множественных очагах страдали все виды памяти, что, по-видимому, обусловлено нарушением не только морфологического субстрата, но и межцентральных связей поврежденных и сохранных зон.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
1. У больных ишемическими инсультами снижены не только кратковременная слухорече-вая память, но и семантическая память (сумма категорийной и концептуальной информации).
2. При поражении лобной доли и средних отделов височной извилины в большей степени нарушено запоминание нового материала, конкретно-образная и абстрактно-образная виды памяти.
3. Расширение спектра пептидных соединений и рациональное использование электростимуляции способствуют восстановлению кратковременной памяти преимущественно при полу-шарной локализации инсульта.
ЛИТЕРАТУРА
1. Буклина С.Б. // Неврол. и психиатрия. - 1999. -№ 9. - С. 10-15.
2. Буклина С.Б. // Неврол. и психатрия. - 2002. -№ 9. - С. 32-36.
3. Ибодулаев З.Р. // Неврол. и психатрия. - 2002. -№ 9. - С. 52-53.
4. Карлов В.А. Неврология. - М.: Медицинское информационное агенство, 1999. - 620 с.
5. Лурия А.Р. Высшие корковые функции и их нарушение при локальных поражениях мозга. - М.: Наука, 1986. - 350 с.
6. Сидорова С.А., Завьялов А.В., Ласков В.Б. Способ лечения постинсультных парезов: патент № 2040282 РФ: МКИ : а 61 В 1/18/ Курский гос. мед. инт № 5038478/14; заявл. 18.02.92; опубл. 27.07.95, бюл. № 21. -2 с.
7. Хомская Е.Д. Нейропсихология. - М: Изд-во МГУ, 1987. - 288 с.
УДК 616.37-002
МАРКЕРЫ ЭНДОТОКСИКОЗА И СИСТЕМА АНТИОКСИДАНТНОЙ ЗАЩИТЫ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ПАНКРЕОНЕКРОЗЕ
С.В. Морозов, В.Т. Долгих, В.Л. Полуэктов
Омская государственная медицинская академия
MARKERS OF ENDOTOXICOSIS AND ANTIOXIDATIVE DEFENCE SYSTEM IN EXPERIMENTAL PANCREONECROSIS
S.V. Morozov, V.T. Dolgikh, V.L. Poluektov
Abstract. The objective of the research was to justify indications for application of antioxidants during experimental pancreonecrosis on the basis of estimation of intensity of lipid peroxidation processes and the condition of antioxidant system.
Erythrocytes, plasma, blood serum, tissues of pancreas and liver of dogs were used as substrates for the research. Ten healthy animals constituted the control group. The comparison (groups were ten animals with the experimental pancreonecrosis (12 hours for the 2nd group (5 dogs), 24 hours for the 3d group (5 dogs). During all periods of the research in blood, tissues of pancreas and liver intensification of processes of lipid peroxidation and rise of the content of toxins of average molecular weight against a background of suppression of the antioxidant system were observed. In the liver tissue of the 3rd group dogs there was an increase of the glutathione content to initial level. A leading role of this organ in antioxidants supply by means of their synthesis and in lipid peroxidation regulation has been proved.
Key words: endotoxicosis, experimental pancreonecrosis, antioxidative defence
В нашей стране заболеваемость острым панкреатитом составляет примерно 40-60 случаев на 100 тысяч населения [4]. Острый панкреатит сопровождается высокой летальностью,
которая достигает 100 % [7, 8, 15]. Во многом это обусловлено сложностью патогенеза, мало изученным звеном которого является состояние процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ)
ВЕСТНИК ВолГМУ
(17)
и антиоксидантной системы (АОС) органов естественной детоксикации организма. Известно, что повреждение ацинарных клеток под действием свободных радикалов, накапливаемых в ткани поджелудочной железы при деструкции ее паренхимы, приводит к ингибированию антиокси-дантных систем организма [13], в которых печени отводится ключевая роль. На основании изучения только продуктов ПОЛ в ткани поджелудочной железы [3] можно лишь косвенно судить о состоянии АОС, поскольку динамика показателей интенсивности свободнорадикальных реакций и содержание антиоксидантов в организме порой имеют противоположную направленность [12]. Резкая интенсификация свободнорадикальных реакций и накопление продуктов этих реакций в крови может не приводить к изменению содержания и активности основных компонентов АОС [12].
До настоящего времени механизмы поражения печени при остром панкреатите, функционально-метаболическое состояние которой отражается на динамике послеоперационного периода, изучены недостаточно [3]. В литературе встречаются лишь единичные данные о состоянии процессов ПОЛ в крови и ткани печени при остром панкреатите [3, 9].
ЦЕЛЬ РАБОТЫ
Обосновать показания к применению анти-оксидантов при экспериментальном панкреонек-розе на основании оценки интенсивности пере-кисного окисления липидов, состояния АОС.
МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ
Острые эксперименты проведены на 20 беспородных собаках обоего пола массой 8-16 кг. Панкреонекроз вызывали интрапаренхиматоз-ным введением аутожелчи [1]. Животные были разделены на 3 группы: I группа - контроль (10 здоровых животных). У 10 собак моделировали панкреонекроз. Животных выводили из эксперимента через 12 часов (5 собак - II группа) и 24 часа (5 собак - III группа). В плазме крови ранее использованными методами [6, 10] определяли содержание токсинов среднемолекуляр-ной массы (МСМ) и лактата. В эритроцитах ис-
1
следовали содержание восстановленного глута-тиона, малонового диальдегида (МДА) [6, 10]. Прижизненно проводили забор ткани поджелудочной железы и печени до 500 мг, где исследовали содержание восстановленного глутатиона, МДА, мочевой кислоты и активность глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы (Г-6-ФДГ) [6, 10].
Результаты исследований обрабатывали методом вариационной статистики с использованием ¿-критерия Стъюдента, коэффициента корреляции г. Содержание, питание, уход за животными и выведение их из эксперимента осуществляли в соответствии с требованиями "Правил проведения работ с использованием экспериментальных животных" (Приложение к приказу Министерства здравоохранения СССР от 12.08.1977 г. № 755).
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
В эритроцитах собак II группы (табл. 1) отмечается недостоверное повышение МДА по сравнению с исходным уровнем на 45,3 % (р > 0,05), что может отражать замедленную элиминацию из тканей в гемоциркуляцию. В III группе уровень МДА достоверно выше исходного на 42,6 % (р <0,05). Отмечается прогрессирующее увеличение уровня МСМ в плазме крови II и III групп на 193,9 (р < 0,001) и 282,4 % (р <0,001) по сравнению с исходным уровнем, соответственно. Поскольку компоненты фракции МСМ угнетают окислительно-восстановительные процессы в клетках, это свидетельствует о переходе состояния животных в критическое. Рост компонентов эндо-токсикоза в крови приводит к снижению содержания глутатиона в эритроцитах II и III групп, по сравнению с исходными данными на 11,7 (р < 0,01) и 11,7 % (р < 0,01) соответственно.
В ткани поджелудочной железы II и III групп (табл. 2) отмечается чрезмерная интенсификация ПОЛ, что проявляется прогрессирующим ростом содержания МДА по сравнению с исходным, на 13,2 (р < 0,01) и 32,82 % (р < 0,001) соответственно. Полученные результаты согласуются с данными литературы [3, 14]. Концентрация глутатиона в этом органе у собак II группы, несмотря на рост МДА, остается на цифрах равных исходным.
Таблица 1
Изменения биохимических показателей крови собак при панкреонекрозе (М±т)
Этапы исследования Изучаемый показатель
МДА, ммоль/л Глутатион, ммоль/л Лактат, ммоль/л МСМ, ед.
I 5,8±2,2 0,43±0,04 1,74±0,04 0,21±0,01
II 10,6±2,1* 0,38±0,02** 2,73±0,30* 0,42±0,01***
III 13,6±1,9* 0,38±0,01** 2,20±0,50* 0,61±0,05***ллл
- р < 0,05, ** р < 0,01, *** р < 0,001 по отношению к контролю, л - р < 0,05; лл - р < 0,01; '
- р < 0,001 между II и III группами.
2006
Таблица 2
Метаболические нарушения в органах у собак при панкреонекрозе (М±т)
Изучаемый показатель Этапы исследования Объект исследования
Поджелудочная железа Печень
МДА, ммоль/г I II III 2,58±0,08 2,97±0,08** 3,84±0,07***ллл 0,57±0,10 1,15±0,06*** 1,26±0,06***
Глутатион, ммоль/г I III 0,56±0,01 0,56±0,05 0,48±0,03* 0,85±0,02 0,68±0,05** 0,80±0,10
Г-6-ФДГ, ммоль/(ч г) I III 0,97±0,03 1,28±0,30 0,50±0,04***л 1,54±0,08 1,59±0,30 1,05±0,10**
Мочевая кислота, ммоль/г I II III 60±4 75±2,7*** 68±2,0*л 378±42 671±19*** 604±26***
Примечание. Здесь и в табл. 3: * - р <0,05; ** -р <0,01; *** - р < 0,001 по отношению к контролю. л - р < 0,05; лл - р < 0,01; ллл - р < 0,001 между II и III группами.
Возможно, расходование антиоксидантов происходит за счет эндогенных резервов и их перераспределения в пользу очага воспаления [9]. В поддержании высоких цифр глутатиона большое значение имеет активность фермента Г-6-ФДГ, способствующая его редукции из окисленной формы, уровень которой во II группе превышает исходный на 24,2 % (р < 0,05). Повышенный расход антиок-сидантов в очаге воспаления, а также снижение активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы в III группе животных на 48,5 % (р < 0,001) приводит к дефициту глутатиона, концентрация которого на 14,3 % (р < 0,05) ниже исходного уровня.
Из-за дефицита восстановленного глутатиона нарушается механизм переноса электронов в рамках тканевого дыхания, что приводит к уменьшению утилизации кислорода тканями и в значительной степени усугубляет метаболические расстройства в клетках [12].
Повышение уровня лактата в эритроцитах собак II группы на 36,3 % (р < 0,05) по отношению к исходному свидетельствует о гипоксии, вследствие чего снижается выработка АТФ, усиливается распад пуриновых мононуклеоти-дов, обусловливающий увеличение уровня мочевой кислоты на 30,3 % (р < 0,05), не только в эритроцитах, но и в ткани поджелудочной железы II и III групп животных на 20 % (р <0,001) и 11,8 % (р < 0,05) соответственно по сравнению с исходными цифрами.
С увеличением тяжести заболевания имеет место тенденция накопления МДА в периферической крови и ткани поджелудочной железы на фоне депрессии ферментов антиоксидантной защиты. Во II и III группах сохранялась прямая корреляция между интенсивностью свободнора-
дикального окисления в крови и ткани поджелудочной железы (r = 0,9922 и r = 0,9968 соответственно). Рост уровня МДА в крови можно расценить как неблагоприятный прогностический признак, свидетельствующий о прогрессировании деструктивных процессов в поджелудочной железе, что согласуется с результатами исследований некоторых авторов [3].
Поджелудочная железа является по существу первым органом-мишенью аутоферментной агрессии. Заболевание сразу приобретает генерализованный характер с поражением отдаленных органов и тканей, которые могут превалировать над изменениями в первичной зоне агрессии [5]. При остром панкреатите ферменты поджелудочной железы, продукты их взаимодействия с тканями и различными веществами, циркулирующими в крови, оказывают влияние на микроструктуру и функцию печени [2].
В печени собак II группы отмечается достоверное (р < 0,01) снижение концентрации глутатиона на 20 % по сравнению с контролем, что свидетельствует об угнетении синтеза этого три-пептида вследствие активации процессов ПОЛ, о чем свидетельствует повышение уровня МДА на 50,5 % (р < 0,001) по сравнению с контролем. МДА в печени прогрессирующе увеличивается и в III группе превышает исходный на 55,5 % (р < 0,001). Во II и III группах также сохранялась прямая корреляция между интенсивностью сво-боднорадикального окисления в крови и ткани печени (r = 0,9922 и r =0,992 соответственно). Эти данные согласуются с результатами экспериментальных и клинических исследований многих авторов [14]. При прогрессировании панкрео-некроза происходит торможение реутилизации гипоксантина в пуриновые мононуклеотиды вследствие дефицита фосфорибозилдифосфата, обусловленного снижением генерации рибозо-5-фосфата в пентозном цикле. Усиленное образование мочевой кислоты в ткани печени II и III групп превышает контроль на 43,7 % (р <0,001) и 37,5 % (р <0,001) соответственно, что сопряжено с повышенной генерацией ксантиноксида-зой супероксидных радикалов.
Повышение уровня глутатиона в III группе животных до исходных цифр можно объяснить компенсаторным выбросом антиоксидантов, синтезируемых в печени [2]. Не вызывает сомнения ведущая роль комплексной системы антиокси-дантной защиты печени в регуляции течения процессов липопероксидации.
Снижение активности Г-6-ФДГ в печени животных III группы на 31,9 % (р < 0,01) по сравнению с исходными цифрами можно объяснить воздействием на энзим токсических веществ, в частности, с накоплением в крови высоких концентраций МСМ и МДА. Доказано ингибирующее влияние МСМ на ферментативное окисление и не-
ВЕСТНИК ВолГМУ
специфическое мембранотропное действие, сопровождающееся повышением проницаемости клеточных и лизосомальных мембран, приводящее к изменению их физико-химических характеристик [11].
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
1. Экспериментальный панкреонекроз сопровождается окислительным стрессом, что приводит к угнетению ферментативного и неферментативного звеньев антиоксидантной защиты.
2. Печень рано подвергается воздействию окислительного стресса и обладает выраженными компенсаторными резервами как основной продуцент антиоксидантов.
3. С целью коррекции окислительного стресса патогенетически обосновано применение антиоксидантов гепатотропного действия.
ЛИТЕРАТУРА
1. Буянов В.М., Ступин И.В., Егиев В.Н. и др. // Клинич. хирургия. - 1989. - № 11. - С. 24-26.
2. Власов А.П., Герасименко А.В., Тарасова Т.В. и др. // Материалы IX конференции хирургов-гепатологов России и стран СНГ. - Спб., 2002. - С. 193-194.
3. Демин Д.Б., Тарасенко В.С., Волков Д.В. и др. // Вестн. хирургии. - 2003. - № 5. - С. 47-50.
ч
2006
Неотложная
4. Костюченко А.Л., Филин В.И. панкреатология. - СПб.: Деан, 2000. - 480 с.
5. Луцевич Э.В., Чепеленко Г.В. // Хирургия. -2001. - № 9. - С. 57-60.
6. Морозов С.В. Прогнозирование и профилактика послеоперационного панкреатита: автореф. дис. ... канд. мед. наук. - Омск, 1999. - 151 с.
7. Назыров Ф.Г., Ваккасов М.Х., Акилов Х.А. и др. // Анн. хир. гепатол. - 2001. - № 2. - С. 131-135.
8. Нестеренко Ю.А., Лаптев В.В., Михайлусов С.В. и др. // Рос. мед. журн. - 2002. - №1. - С. 34-39.
9. Прокопьева Н.В. Исследование системы метаболизма ксенобиотиков в печени при остром панкреатите: автореф. дис. ... канд. мед. наук. - Новосибирск, 2000. - 27 с.
10. Толкач А.Б., Долгих В.Т., Рейс Б.А. и др. // Анест. и реаним. - 2001. - № 2. - С. 51-55.
11. Тупикова З.Н. // Вопр. мед. химии. - 1983. - № 3. -С. 108-111.
12. Шанин Ю.Н., Шанин В.Ю., Зиновьев Е.В. Анти-оксидантная терапия в клинической практике. - СПб: ЭЛБИ-СПб, 2003. - 122 с.
13. Чудных С.М., Титова Г.П., Турчина Е.П., и др. // IX Всерос. съезд хирургов. - Волгоград, 2000. -С. 127-128.
14. Dabrowski A., Gabryelewkz A. // Scand. J. Gastroenterol. - 1994. - Vol. 29, № 10. - Р. 943-948.
15. Floid A., Pedersen L., Nielsen G.L., et al. // Scand. J. Gastroenterol. - 2002. - Vol. 12, № 37. - P. 1461-1465.
УДК 576.851.9:616.981.718
МОНОКЛОНАЛЬНЫЕ АНТИТЕЛА К АНТИГЕНАМ COXIELLA BURNETII: ПОЛУЧЕНИЕ, ХАРАКТЕРИСТИКА И ПЕРСПЕКТИВЫ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ В ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ЛИХОРАДКИ КУ
Е.В. Прохватилова, Н.П. Храпова, В.Н. Лебедев*, С.Н. Ионов*, В.А. Харченко*, И.А. Чуркин*, Н.Г. Плеханова, С.Н. Тихонов, Г.В. Шумакевич**, Н.А. Ерасова, Л.И. Белицкая
Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт, Вирусологический центр НИИМ МО России, г. Сергиев-Посад, Московская обл.* ФГУЗ Центр эпидемиологии и гигиены по Волгоградской обл.**
MONOCLONAL ANTIBODIES AGAINST ANTIGENS OF COXIELLA BURNETII: DEVELOPMENT, CHARACTERISTICS AND PERSPECTIVES OF APPLICATION IN LABORATORY DIAGNOSTICS OF QU FEVER
E.V. Prokhvatilova, N.P. Khrapova, V.N. Lebedev, S.N. Ionov, V.A. Kharchenko, I.A. Tchourkin, N.G. Plekhanova, S.N. Tikhonov, G.V. Shumakevich, N.A. Erasova, L.I. Belitskaya
Abstract. The collection of hybridomas (7 types) producing monoclonal antibodies (MA) by fusion of cells of mice myeloma of line P3-X63-Ag.653 and splenocytes of BAL/c mice, immunized with antigens of I-II phase of C.burnetii has been developed. MA are directed at different epitomes, located on the antigen complexes of Coxiella burnetii. The characteristics of MA (specifity, activity) have been studied using ELISA and FIA; perspectives of their application for the laboratory diagnostics of QU fever are discussed.
Key words: monoclonal antibodies, coxiella burnetii, laboratory diagnostics.
Неблагоприятная эпидемиологическая ситуация по коксиеллезу, сложившаяся за последнее десятилетие в России, характеризуется расширением очагов инфекции и подъемом заболеваемости людей лихорадкой Ку. Важнейшим на-
правлением повышения эффективности эпид-надзора за коксиеллезом остается разработка новых подходов к конструированию диагностических препаратов быстрого и достоверного обнаружения коксиелл Бернета в различных объектах
