Маркери апоптоза у новонароджених дітей з гіпоксичним ураженням ЦНС легкого ступеня Текст научной статьи по специальности «Клиническая медицина»

© Постернак Д. Г. УДК: 612.086:616-009.1

МАРКЕРИ АПОПТОЗА У НОВОНАРОДЖЕНИХ Д1ТЕЙ З Г1ПОКСИЧНИМ УРАЖЕННЯМ ЦНС ЛЕГКОГО СТУПЕНЯ*

Постернак Д.Г.

ДЗ «Луганський державний медичний университет» МОЗ УкраТни, м. Рубiжне, Луганська область.

Перинатальное гипоксическое поражение ЦНС у новорожденных является ведущей причиной высокой смертности и инвалидности в детском возрасте. Однако существуют трудности в диагностике, терапии и прогнозировании исходов гипоксических повреждений головного мозга у новорожденных детей. Нами изучены маркеры апоптоза в крови (уровень циркулирующей фрагментированной ДНК и ДНК-фрагментации в лимфоцитах) у 36 доношенных новорожденных пациентов с перинатальным гипоксическим поражением ЦНС легкой степени, гестационный возраст которых составил от 36 до 41 недели. В контрольную группу вошли 20 здоровых доношенных детей. Степень тяжести гипоксического поражения центральной нервной системы мы определяли, используя анамнез заболевания, шкалу Апгар, клинические критерии, изменение неврологического статуса по Шабалову Н.П., нейросо-нографию. Этапы исследования новорожденных - первые, третьи и седьмые сутки. У пациентов с гипоксическим поражением центральной нервной системы легкой степени отмечалась однонаправленная динамика изменений всех изучаемых маркеров апоптоза. Так максимальный рост циркулирующей фрагментированной ДНК на 8,6% и увеличение уровня ДНК-фрагментации в лимфоцитах в 1,6 раз отмечались на 3-й день исследования. На последнем этапе наблюдалась тенденция к снижению показателей и возвращению к первоначальным цифрам. Это сопровождалось улучшением неврологического статуса новорожденных. Таким образом, динамика изменения маркеров апоптоза таких, как уровень циркулирующей ДНК и ДНК-фрагментации в лимфоцитах у здоровых новорожденных, свидетельствует об адаптации организма пациента к послеродовому стрессу к 7-м суткам. А однонаправленные изменения уровней изучаемых показателей у новорожденных с гипоксическим поражением ЦНС легкой степени отражает тяжесть поражения головного мозга, а так же указывает на адекватность выбранных методов детекции апоптоза.

Ключевые слова: гипоксия, новорожденные дети, фрагментированная ДНК, ДНК-фрагментации в лимфоцитах, поражение ЦНС.

В останн десятилггтя перинатальне ппоксичне ураження ЦНС у новонароджених е провщною причиною високоТ смертност1 та швалщносл в дитячому вЩ1 [2, 8]. Однак юнують труднощ1 в д1агностиц1, терапи та прогнозуванн наслщгав ппоксичних пошкоджень головного мозку у новонароджених д1тей [1, 6].

Великий практичний штерес представляе вивчен-ня таких маркер1в апоптозу, як величина циркулюючоТ фрагментованоТ ДНК [3, 7] I р1вень ДНК-фрагментацп в л1мфоцитах кров1 новонароджених д1тей [4, 5].

Матерiали та методи дослщження

Нами дослщжено маркери апоптоза в кров1 (р1вень циркулюючоТ фрагментованоТ ДНК та ДНК-фрагментацп в л1мфоцитах) у 36 доношених новонароджених д1тей 1з перинатальним ппоксичним ура-женням ЦНС легкого ступеня. Гестацшний в1к пац1ен-т1в склав вщ 36 до 41 тижня. В контрольну групу ввй шли 20 здорових доношених д1тей.

Стутнь тяжкост1 ппоксичного ураження центрально!' нервовоТ системи ми визначали, використовуючи анамнез захворювання, шкалу Апгар, клУчш критери, класифкацю невролопчного статусу за Шабаловим Н. П. [2], а також Ыструментальш методи д1агностики (нейросонографю).

Етапи дослщження новонароджених - перша, тре-тя та сьома доба.

Для визначення циркулюючоТ фрагментованоТ ДНК та ДНК-фрагментацп в л1мфоцитах ми використову-

вали метод, заснований на кольоровм реакцп з ди-фен1лам1новим реагентом в модифкацп проф. I. А. КомаревцевоТ та ствавт. (видтення проводиться од-разу в л1зис-буфер1 рН = 8).

Результати та IX обговорення

У здорових новонароджених контрольноТ групи рь вень циркулюючоТ фрагментованоТ ДНК в кров1 (табл.1) знижувався на 7-у добу неонатального перь оду.

Таб 1.

Р1вень циркулюючоТ фрагментованоТ ДНК у кров! новонароджених з перинатальним ппоксичним ураженням

ЦНС легкого ступеня.

Прим/'тка: - р < 0,05 - пор1вняно з контрольною групою;

' - р < 0,05 - пор1вняно з попередн1м этапом

У д1тей з ппоксичним ураженням ЦНС легкого ступеня на 3-ю добу рееструвалося максимальне зрос-тання циркулюючоТ фрагментованоТ ДНК, яке пере-вищувало вих1дн1 дан1 на 8,6%. На останньому етат

Групи спостереження 1-а доба 3-я доба 7-а доба

Контрольна група 16,4 ± 3,1 % 14,4 ± 2,8 % 13,8 ± 3,2 %

Група з ГУ ЦНС легкого ступеня 29,6 ± 3,9 %* 38,2 ± 4,2 %* 30,4 ± 3,3 %*

* Цитування при атестац/i' кадрв: Постернак Д.Г. Маркери апоптоза у новонароджених дтей з гпоксичним ураженням ЦНС легкого ступеня //Проблеми екологп i медицини. - 2015. - Т. 19, № 5-6. - С. 17-18.

дослщження спостер^алася тенден^я до зниження i повернення до початкових цифр.

Динамка рiвня ДНК-фрагментацií в лiмфоцитах (табл.2) у здорових новонароджених контрольно'!' гру-пи була аналогiчною з рiвнем циркулюючо''' фрагмен-товано' ДНК в кровк Дослiджуваний маркер також знижувався на 7-у добу спостереження.

Таб. 2.

Ревень ДНК-фрагментацИ' в л/мфоцитах кровi новонароджених з перинатальним гпоксичним ураженням

ЦНС легкого ступеня.

Прим/'тка: - р < 0,05 - пор1вняно з контрольною групою;

** - р < 0,05 - пор1вняно з попередн1м етапом

У па^етчв з ппоксичним ураженням центрально! нервовоТ системи легкого ступеня вщзначалася одно-направлена динамка змЫ уах дослщжуваних марке-рiв. Так на 3-ю добу рiвень ДНК-фрагментаци в лiм-фоцитах зростав в 1,6 раз, а до 7-т доби знижувався.

У новонароджених з перинатальним ппоксичним ураженням ЦНС легкого ступеня на 3 добу реестру-валося збтьшення явищ апоптоза. Це зб^алося з по-пршенням неврологiчного статусу, що проявлялося транзиторним синдромом збудження ^або пригшчен-ня ЦНС. Синдром збудження характеризувався рухо-вим занепокоенням, тремором, вздрагуваннями, не-мотивованим криком, помiрною тахiкардiею i тахiпное при пробудженнi. До симтг^в пригнiчення ми вщно-сили м'язову ппотоыю або дистонiю, гiпокiнезiю, шви-дке виснаження вроджених рефлексiв i зниження церебрально! активностi. Нейросонографiчнi змiни були вiдсутнi. Також вщзначалося зростання всiх дослщжу-ваних маркерiв апоптоза.

На останньому етапi дослщження ми спостер^али позитивну динамiку, яка проявлялася у зменшенн ш-тенсивност апоптоза. Це вiдповiдало зменшенню рiв-ня дослiджуваних показникiв з тенден^ею до повернення до початкових цифр. Так на 7-му добу спостереження рiвень циркулюючоТ фрагментованоТ ДНК, порiвняно з 3-м днем, був нижче на 7,8% (табл.1), а

ктькють ДНК-фрагментацп в лiмфоцитах зменшува-лася в 1,6 разiв (табл.2).

Критерiями неврологiчного полiпшення у д^ей бу-ло: вiдновлення адекватного рiвня свiдомостi, полiпшення рефлекторних функцй вiдновлення емоцiйноí сфери (реакцií на зовншш подразники, появу спонтанно!' рухово!' активностi, активне смок-тання, прояв голодного занепокоення).

Висновки

Динамiка змЫ маркерiв апоптоза таких, як рiвень циркулюючо''' ДНК та ДНК-фрагментацií в лiмфоцитах у здорових новонароджених контрольно!' групи, свщ-чить про адаптацю органiзму пацiента до пюляполо-гового стресу на 7-у добу.

Односпрямован змши рiвнiв дослiджуваних показ-ниюв у новонароджених з гiпоксичним ураженням ЦНС легкого ступеня в ранньому неонатальному пе-р^ вiдображае тяжкють ураження головного мозку, а також вказуе на адекватнють обраних методiв детекцií апоптозу.

Лiтература:

1. Неонатология: национальное руководство. Н.Н. Володин, ред. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2013: 896 с.

2. Пальчик А.Б., Шабалов Н.П. Гипоксически-ишемическая энцефалопатия новорожденных. 4-е изд., испр. и доп. - М.: МЕДпресс-информ, 2013. - 288 с.

3. Тамкович С.Н., Власов В.В., Лактионов П.П. Циркулирующие ДНК крови и их использование в медицинской диагностике. Молекулярная биология 2008; 42: 1: 1223.

4. loannou YA, Chen FW. Quantitation of DNA fragmentation in apoptosis. Nucleic Acids Res 1996; 24:992-3.

5. Manoj A, Ramachandra RK, Vishnu BB, Venkatesh C, Bobby Z. DNA damage in perinatal asphyxia using micro-nucleus assay. Curr Pediatr Res 2011;15(1):5-9.

6. Polat M., Sim§ek A., Tansug N. et al. Prediction of neuro-developmental outcome in term neonates with hypoxic-ischemic encephalopathy // Eur. J. Paediatr. Neurol. -2013. - Vol. 17, №3. - Р. 288-293.

7. Rainer TH, Wong LKS, Lam W, Yuen E, Lam NYL, Me-trewel C, et al. Prognostic use of circulating plasma nucleic acid concentrations in patients with acute stroke. Clin Chem 2003; 49:562-9.

8. Soliman А.М., Al-Gendy R.A., Abdel-Moety H. Hypox-icischemig encephalopathy in term neonates: early bio chemical indicators // Australian J. Basic and Applied Sci. - 2011. - № 5. - Р.82-87.

Групи спостереження 1-а доба 3-я доба 7-а доба

Контрольна гру-па 10,8 ± 1,6 % 7,4 ± 1,8 % 4,6 ± 1,7 %

Група з ГУ ЦНС легкого степеня 19,5 ± 2,9 %* 32,2 ± 2,4 %*** 20,4 ± 2,1 %***