CC BY
72
УДК 616-002.365:612.017.1
ЛИМФОЦИТАРНО-ТРОМБОЦИТАРНАЯ АДГЕЗИЯ И СОДЕРЖАНИЕ ПРОВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЦИТОКИНОВ У БОЛЬНЫХ РОЖЕЙ
А.Н. Емельянова, Ю.А. Витковский
ГБОУ ВПО "Читинская государственная медицинская академия" Минздравсоцразвития России
E-mail: alvina1963@yandex.ru
LYMPHOCYTE-PLATELET ADHESION AND PRO- INFLAMMATORY CYTOKINES CONTENTS IN PATIENTS WITH ERYSIPELAS
A.N. Emelyanova, Yu.A. Vitkovsky
Chita State Medical Academy
Цель: изучить у больных рожей состояние лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии (ЛТА) и содержание провос-палительных цитокинов. Под наблюдением находилось 50 пациентов с рожей. Установлено уменьшение показателя и степени лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии на фоне высокого содержания ИЛ-1а, ИЛ-1 в, ИЛ-8, ФНОа. Показатель и степень лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии являются более выразительными маркерами им-мунокомпетентных клеток при роже по сравнению с изменением числа лимфоцитов. Более тяжелое течение заболевания сопровождается большими сдвигами параметров ЛТА.
Ключевые слова: рожа, лимфоцитарно-тромбоцитарная адгезия (ЛТА), провоспалительные цитокины.
Aim: to study lymphocyte-platelet adhesion and pro-inflammatory cytokines contents in patient with erysipelas. There were 50 patients with erysipelas under observation. It was established that the index and degree of lymphocyte-platelet adhesion decreased in the condition of high levels of pro-inflammatory cytokines, IL-1a, IL-Щ IL8, TNFa. The index and degree of lymphocyte-platelet adhesion are the most extent signs of the function of immunocompetent cells during erysipelas in comparison with the number of lymphocytes. Severe current of erysipelas is accompanied with more extent changes in parameters of lymphocyte-platelet adhesion.
Key words: erysipelas, lymphocyte-platelet adhesion, pro-inflammatory cytokines.
Введение
В настоящее время широко изучаются межклеточные взаимодействия, в основе которых лежат механизмы сигнализации, опосредуемые цитокинами. Известно, что непосредственная адгезия играет существенную роль во взаимодействии между тромбоцитами и нейтрофилами. Установлено, что адгезивные взаимодействия между тромбоцитами и лейкоцитами являются важными звеньями механизмов, обеспечивающих миграцию лейкоцитов в зону повреждения, а, следовательно, воспаления и развития там иммунных и репаративных реакций [2-6].
Тромбоциты способны вступать в контакт с гранулоцитами в процессе остановки кровотечения и развития воспалительной реакции. Установлена взаимосвязь между гемостатическими и воспалительными реакциями при повреждении тканей. При этом ключевым звеном выступает взаимодействие полиморфноядерных лейкоцитов, тромбоцитов и эндотелиальных клеток. Эту кооперацию с участием ряда интегринов регулируют хемокины, ци-токины, факторы роста, производные радикалов кислорода, вызывающие усиленную коагуляцию и репарацию тканей в месте их повреждения [4, 5, 11,12].
Известно также, что в патогенезе рожи ведущими звеньями являются иммунные механизмы. Ранее установлено, что у таких больных развиваются признаки вторичного иммунодефицита [1, 7, 8]. Учитывая, что способность лимфоцитов вступать в контакт с тромбоцитами отража-
ет состояние иммунитета, эта функция взаимодействия клеток и их сигналов при роже мало изучена.
Цель работы: исследование лимфоцитарно-тромбо-цитарной адгезии (ЛТА), продукции провоспалительных цитокинов у больных рожей.
Материал и методы
Под наблюдением находилось 20 больных (10 женщин и 10 мужчин) с эритематозно-буллезной формой рожи средней степени тяжести и 30 больных (12 мужчин и 18 женщин) с эритематозной формой рожи средней степени тяжести в возрасте 45—55 лет (средний возраст
- 46,7 лет). У всех больных диагностировано первичное заболевание с локализацией воспалительного процесса на нижних конечностях. Больные госпитализировались в течение 1-3 суток с начала клинических проявлений болезни. Контрольная группа представлена 55 здоровыми лицами обоего пола в возрасте 45-55 лет (средний возраст - 47,2 лет).
Все лабораторные исследования выполнялись на 3-и сутки с момента проявления симптомов заболевания до получения лекарственной терапии. Оценку лимфоцитар-но-тромбоцитарной адгезии проводили по методу, предложенному Ю.А. Витковским и соавт. (1999) [2]. Подсчитывали число лимфоцитарно-тромбоцитарных коагре-гатов на 100 клеток - показатель ЛТА, который характе-
Сибирский медицинский журнал, 2012, Том 27, № 1
Таблица 1
Лимфоцитарно-тромбоцитарная адгезия у больных рожей (M±m)
Наблюдаемые группы Лимфоциты, абс. х109/л ЛТА, отн.,% ЛТА, абс. х109/л Степень адгезии
Здоровые (п=55) Больные с эритематозно-буллезной формой рожи (п=20) Больные с эритематозной формой рожи (п=30) 2,04+0,4 1,95+0,4, p>0,05 1,89+0,4, p>0,05 14,0+1,0 2,0+0,3, p<0,001 3,0+0,3, p<0,001 0,69+0,02 0,10+0,02, p<0,001 0,16+0,03, p<0,001 3,2+0,1 1,2+0,05, p<0,001 1,3+0,06, p<0,001
Примечание: р - уровень статистической значимости различий по сравнению со здоровыми.
Таблица 2
Содержание цитокинов у больных рожей, пкг/мл W±m)
Цитокины Здоровые, n=55 Эритематозно-буллезная форма, n=20 Эритематозная форма, n=30
ИЛ-1а 19,3+4,1 163,8+10,2, р<0,001 153,6+12,3, р<0,001
ИЛ-1Р 32,6+9,4 221,0+18,2, р<0,001 186,9+14,2 , р<0,001
ИЛ-8 25,9+4,2 321,6+21,6, р<0,001 283,5+16,8, р<0,001
ФНОа 12,3+2,1 282,3+19,7, р<0,001 231,5+16,5, р<0,001
Примечание: р - уровень статистической значимости различий по сравнению со здоровыми.
ризует количество активированных лимфоцитов, и среднее число кровяных пластинок, адгезированных на поверхности одного лимфоцита (степень адгезии), что косвенно отражает экспрессию рецепторов на поверхности лимфоцитов и тромбоцитов.
Определение уровня цитокинов в сыворотке крови пациентов (IL-1 a, IL-1 в, IL8, TNF а) проводилось с использованием наборов реактивов ЗАО “Вектор-Бест” (Новосибирск). Метод основан на твердофазном “сэндвич”-ва-рианте иммуноферментного анализа. Специфическими реагентами набора являются моноклональные антитела, сорбированные на поверхности лунок разборного поли-стирольного планшета, коньюгат поликлональных антител с биотином и колибровочные образцы.
В работе с обследуемыми лицами соблюдались этические принципы, предъявляемые Хельсинкской Декларацией Всемирной Медицинской Ассоциации (World Médical Association Déclaration of Helsinki, 1964, 2000-поправки) и Правилами клинической практики в Российской Федерации, утвержденными Приказом Минздрава РФ от 19.06.2003 г., № 266.
Для обработки результатов исследования использовали методы вариационной статистики с вычислением среднего и среднеквадратичного отклонения (M±m) и статистической значимости различий по критериям Стьюдента, Вилкоксона. Различия считались статистически значимыми при значениях р<0,05. Обработка параметров выполнена программой “Microsoft Exel”.
Результаты и обсуждение
У пациентов с рожей мы не обнаружили существенных изменений в содержании абсолютного числа лимфоцитов в начале заболевания по сравнению со здоровыми (табл. 1). Однако показатель лимфоцитарно-тром-боцитарной адгезии уже в эти сроки резко снижался. Так, у больных с эритематозно-буллезной формой он уменьшался до 2,0±0,3%, при эритематозной форме - до 3,0±0,3%, тогда как у здоровых составлял 14,01,0% (p<0,001). Соответственно изменялось и абсолютное чис-
ло лимфоцитов, присоединивших к себе кровяные пластинки: у больных - (0,10±0,02)х109/л и (0,1б±0,03)х109/ л против (0,б9±0,02)х109/л у здоровых (р<0,001). Одновременно с этим уменьшалось среднее число тромбоцитов, адгезированных на поверхности лимфоцита (степень адгезии): при эритематозно-буллезной форме - до 1,2±0,5 и при эритематозной форме заболевания - до 1,3+0,06 против 3,2±0,1 в контроле (р<0,001). Учитывая известный факт, что основными регуляторами лимфоци-тарно-тромбоцитарной адгезии являются медиаторы иммунного ответа, мы исследовали у больных рожей концентрацию провоспалительных цитокинов. Нами установлено резкое повышение концентрации провоспали-тельных цитокинов при обеих формах заболевания.
Так, у пациентов с эритематозно-буллезной формой концентрация провоспалительных цитокинов значительно повышалась: для ИЛ-1а - до 163,8+10,2 пкг/мл, для ИЛ-1 в - до 221,0+18,2 пкг/мл, тогда как у здоровых этот показатель составлял 19,3±4,1 пкг/мл и 32,6+9,4 пкг/мл соответственно (р<0,001), таблица 2.
Одновременно выявлено увеличение уровня ФНО-а до 321,6+21,6 пкг/мл против 12,3±2,1 пкг/мл в контроле (р<0,001). Нарастало и содержание хемокина ИЛ-8 с 25,9+4,2 пкг/мл до 282,3+19,7 пкг/мл (р<0,001). При эри-тематозной форме также выявлялись высокие значения концентрации провоспалительных цитокинов (табл. 2).
Как можно объяснить полученные результаты? Ранее Ю.А. Витковским и соавт. установлено, что феномен лим-фоцитарно-тромбоцитарной адгезии представляет собой одну из физиологических функций, присущую различным субпопуляциям лимфоцитов и реализуемую посредством адгезивных молекул [2]. Показано, что Т-хелперы (CD4+) способны к спонтанному розеткообразованию с интактными тромбоцитами, а ИЛ-2 и ИЛ-1в повышают эту способность у хелперно-индуцирующих клеток с ин-тактными тромбоцитами и индуцируют ее у натуральных киллеров (CDl6+). Лимфоцитарно-тромбоцитарная адгезия регулируется цитокинами и индукторами агрегации тромбоцитов. Повышают эту функцию ИЛ-1 в, ИЛ-2, коллаген, адреналин и аденозиндифосфат (АДФ). Ингиби-
торами лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии являются ИЛ-4, ИЛ-10 и ИФНу [2, 3, 6, 9, 10]. Патогенетическое значение лимфоцитарно-тромбоцитарного взаимодействия нам представляется следующим. При повреждении тканей и сосудистой стенки нарушается целостность эндотелия, тем самым затрудняется экспрессия большинства молекул адгезии, в результате чего в зоне воспаления страдает кооперация и миграция клеток. В связи с этим значительно расширяются функции тромбоцитов. В частности благодаря ЛТА лимфоциты, контактирующие с кровяными пластинками, адгезированными к субэндотелию, могут вступать во взаимодействие с коллагеновыми волокнами. Более того, кровяные пластинки, адгези-рованные на коллагене, снижают реакцию лимфоцитов на эти волокна как на антиген и тем самым проявляют супрессивные свойства. Одновременно тромбоциты отчасти компенсируют недостающую антигенпрезентиру-ющую функцию, утерянную в связи с повреждением эндотелия. При этом контакт лимфоцитов с кровяными пластинками усиливается за счет высвобождающегося из тромбоцитов ИЛ-1, стимулирующего функцию Th1. Под воздействием ИЛ-1 индуцируется секреция ИЛ-2, стимулирующего Th2 и NK-клетки. Как известно, ИЛ-2 является специфическим индуктором экспрессии ICAM-1, рецептор к которой располагается на мембране лимфоцита [2]. Активированные лимфоциты усиленно адгезируют тромбоциты и благодаря ретракции последних продвигаются далее через поврежденную стенку сосудов вглубь поврежденного участка, где развивается иммунный ответ [11, 12].
При роже заметно резкое снижение лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии. Уменьшение показателя и степени ЛТА при роже является ранним признаком развития вторичной иммунологической недостаточности, когда число клеток еще остается в пределах нормальных значений и концентрация провоспалительных цитоки-нов, способных их стимулировать, достигает высокого уровня.
Выводы
1. При роже снижается способность лимфоцитов адге-зировать на своей поверхности тромбоциты. Показатель и степень лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии являются более выразительными маркерами функции иммунокомпетентных клеток при данном заболевании по сравнению с изменением числа лимфоцитов. Более тяжелое течение рожи (эритематозно-
буллезная форма) сопровождается большими сдвигами параметров ЛТА.
2. У больных рожей существенно повышается продукция провоспалительных цитокинов - ИЛ-1а, ИЛ-1в, ФНОа и хемокина ИЛ-8.
Литература
1. Валишин Д.А., Абдулов Р.Х., Мухаметов РЯ. Некоторые патогенетические аспекты рожи // Инфекционные болезни. -2007. - Т. 5, № 2. - С. 29-31.
2. Витковский Ю.А., Кузник Б.И., Солпов А.В. Феномен лимфо-цитарно-тромбоцитарного розеткообразования // Иммунология. - 1999. - № 4. - С. 35-37.
3. Витковский Ю.А., Солпов А.В., Кузник Б.И. Влияние цитокинов на лимфоцитарно-тромбоцитарную адгезию // Медицинская иммунология. - 2002. - Т. 4, № 2. - С. 135-136.
4. Витковский Ю.А., Кузник Б.И., Солпов А.В. Взаимодействие лейкоцитов и тромбоцитов с эндотелием и ДВС-синдром // Тромбоз, гемостаз и реология. - 2006. - № 1. - С. 15-28.
5. Витковский Ю.А., Кузник Б.И., Солпов А.В. Патогенетическое значение лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии // Медицинская иммунология. - 2006. - № 8. - С. 745-753.
6. Витковский Ю.А., Солпов А.В., Шенкман Б.З. и др. Влияние интерлейкинов 1р, 2, 10 и 16 на взаимодействие лимфоци-тарно-тромбоцитарных агрегатов с экстрацеллюлярным матриксом // Иммунология. - 2006. - № 3. - С. 141-143.
7. Гейниц А.В, Дербенёв В.А и др. Комплексное исследование рожи с использованием физических и физико-химических методов. - М. : Научный мир, 2005. - 126 с.
8. Емельянова А.Н. Влияние биорегулирующей терапии на состояние иммунитета и гемостаза при рожистом воспалении : автореф. дис. ... канд. мед. наук. - Чита, 2000. - 49 с.
9. Солпов А.В. Влияние цитокинов на лимфоцитарно-тром-боцитарную адгезию // Тромбоз, гемостаз, реология. - 2002.
- № 1. - С. 34-36.
10. Солпов А.В. Влияние про- и противовоспалительных цито-кинов на лимфоцитарно-тромбоцитарную адгезию // Забайкальский медицинский вестник. - 2002. - № 1. - С. 1417.
11. Shenkman B., Brill G., Solpov A. et al. CD4+ lymphocytes require platelet for adhesion to immobilized fibronectin in flow: Role of Pj (CD29)-, P2 (CD18) related integrins and non-integrin receptors // Cellular Immunology. - 2006. - Vol. 242 (1). -P. 52-59.
12. Solpov A., Shenkman B., Vitkovsky Yu. et al. Platelets enhance CD4+ lymphocyte adhesion to extracellular matrix under flow conditions: Role of platelet aggregation, integrins, and non-integrin receptors // Thrombosis and Haemostasis. - 2006. -Vol. 95. - P 815-821.
Поступила 01.11.2011
