CC BY
58
№ 2 - 2014 г.
14.00.00 медицинские и фармацевтические науки УДК 611.428:616.8-022.7]-085
ЛИМФОИДНЫЕ ФОЛЛИКУЛЫ ГЛУБОКИХ ШЕЙНЫХ ЛИМФАТИЧЕСКИХ УЗЛОВ КРЫСЫ ПРИ КОРРЕКЦИИ СТАФИЛОКОККОВОЙ НЕЙРОИНФЕКЦИИ
Н. А. Шурина, А. Н. Машак, П. А. Елясин, О. В. Васильева
ГБОУ ВПО «Новосибирский государственный медицинский университет» Минздрава
России (г. Новосибирск)
В эксперименте на крысах изучен клеточный состав лимфоидных фолликулов глубоких шейных лимфатических узлов крыс при стафилококковом инфицировании головного мозга в условиях применения клафорана с использованием лимфостимуляции. Выявлено: 1) стафилококковая нейроинфекция угнетает лимфоцитопоэтическую функцию лимфоузла; 2) клафоран с применением лимфостимуляции оказывает протективное действие на лимфоидную ткань, способствует обострению воспалительного процесса, активирует лимфопоэтическую функцию глубоких шейных лимфатических узлов.
Ключевые слова: лимфатический узел, лимфостимуляция, стафилококк.
Шурина Наталья Альбертовна — кандидат медицинских наук, старший преподаватель кафедры анатомии человека ГБОУ ВПО «Новосибирский государственный медицинский университет», рабочий телефон: 8 (383) 225-15-24, e-mail: ljwtyn.olga@yandex.ru
Машак Александр Николаевич — доктор медицинских наук, профессор, заведующий кафедрой анатомии человека ГБОУ ВПО «Новосибирский государственный медицинский университет», рабочий телефон: 8 (383) 225-15-24, e-mail: ljwtyn.olga@yandex.ru
Елясин Павел Александрович — кандидат медицинских наук, доцент кафедры анатомии человека ГБОУ ВПО «Новосибирский государственный медицинский университет», рабочий телефон: 8 (383) 225-15-24, e-mail: pharmngmu@yandex.ru
Васильева Ольга Владиславовна — кандидат медицинских наук, доцент кафедры анатомии человека ГБОУ ВПО «Новосибирский государственный медицинский университет», рабочий телефон: 8 (383) 225-15-24, e-mail: ljwtyn.olga@yandex.ru
Бактериальная нейроинфекция характеризуется генерализацией воспалительного процесса и задержкой жидкости в головном мозге. Поэтому при лечении этой патологии обязательным является своевременное назначение эффективной антибактериальной и противоотечной терапии [5, 6]. Из литературных источников [1, 2, 8] известно, что выведению избыточной жидкости и токсических веществ из головного мозга способствует непрямая стимуляция лимфодренажного механизма головного мозга. Согласно концепции Ю. И. Бородина о лимфатическом регионе, головной мозг, как и любой орган человеческого организма, имеет регионарные лимфатические узлы, которые реагируют на любые изменения в дренируемых ими тканях. Одними из важных структур, участвующих в формировании иммунного ответа, являются лимфоидные узелки лимфатических узлов [3, 7].
В доступной нам литературе отсутствуют сведения об исследовании клеточного состава глубоких шейных лимфатических узлов регионарных для головного мозга при стафилококковом инфицировании головного мозга.
Целью данной работы было изучить клеточный состав лимфоидных фолликулов глубоких шейных лимфатических узлов крыс при стафилококковом инфицировании головного мозга в условиях применения клафорана с использованием лимфостимуляции.
Материалы и методы. В эксперименте использовали 70 трехмесячных белых крыс-самок породы Wistar весом 160-170 г. Модель стафилококковой нейроинфекции (СНИ) создавали путем введения 2 тыс. микробных единиц (0,2 мл) суточной культуры золотистого стафилококка в головной мозг через прокол между задней дугой атланта и затылочной костью. Животных разделили на 3 группы: 1-я группа — контрольная (10 крыс), 2-я группа — инфицированная (30), 3-я группа — инфицированная (30 крыс), в которой применялся клафоран и лимфостимуляция. Клафоран вводили внутримышечно 3 раза в день из расчета суточной дозировки 100 мг/кг, начиная через час после заражения. Лимфостимуляцию проводили под эфирным наркозом по методике, разработанной Я. М. Песиным [8], через 4 и 28 часов после заражения (1 раз в сутки). В состав лимфостимулирующей смеси входили растворы гидрокортизона, лидазы и 0,25 % новокаина, которые рассчитывались на килограмм веса животного. Для предотвращения обезвоживания головного мозга одновременно с лимфостимуляцией в брюшную полость вводили 2 мл физиологического раствора. Животных выводили из эксперимента под эфирным наркозом путем декапитации через 24 и 48 часов после инфицирования. Объектом гистологического исследования служили глубокие шейные лимфатические узлы (ГШЛУ). Обработка материала проводилась по общепринятым морфологическим методикам [4]. Морфометрия гистологических срезов и подсчет клеточных структур проводились с использованием световой микроскопии. Рассчитывалась площадь первичных лимфоидных фолликулов (ПЛФ), вторичных лимфоидных фолликулов (ВЛФ), центров размножения (ЦР) и мантийной зоны (МЗ).
Результаты исследований и обсуждение. У инфицированных животных без коррекции к концу суток наблюдались существенные изменения в лимфатических узлах. Резко сократились количество и общая площадь ПЛФ — в 2,6 и в 2,8 раза соответственно. Количество и общая площадь ВЛФ также уменьшились почти одинаково — в 2 и 1,8 раза. При этом уменьшились площади ЦР и МЗ в 2,9 и 1,7 раза (табл. 1). Стрессорная реакция ГШЛУ при СНИ сопровождалась появлением в ЦР нейтрофильных лейкоцитов, резким увеличением их количества в ПЛФ (в 8,3 раза), а также ростом числа макрофагов в МЗ в 3,6 раза и ретикулярных клеток в 7,7 раза (табл. 2-4). В то же время выявлено сокращение количества малых лимфоцитов в ПЛФ в 12 раз, в МЗ в 6 раз и в ЦР в 4,2 раза
(табл. 2-4). Количество средних лимфоцитов было меньше нормы в ПЛФ в 3 раза, в МЗ — в 2,5 раза, в ЦР — в 3,3 раза. Вместе с тем, в ЦР значительно уменьшилось количество бластных клеток (в 15 раза), и не были выявлены клетки в состоянии митоза, что явно указывают на снижение основной функции лимфатических узлов, которая связана с воспроизводством лимфоидной ткани и участием в формировании специфического иммунитета (табл. 3).
В условиях коррекции СНИ к концу суток, в отличие от предыдущей группы, увеличилось количество и общая площадь ПЛФ в 1,2 и в 1,45 раза. В ПЛФ наблюдались более выраженные признаки воспалительного процесса, на что указывает увеличение количества макрофагов в 6,3 раза, нейтрофильных лейкоцитов — в 80,3 раза, ретикулярных клеток — в 2,5 раза и погибших клеток — в 15 раз. Вместе с тем, в отличие от 2-й группы, наблюдалось увеличение количества средних лимфоцитов в 2,2 раза, а число малых лимфоцитов соответствовало контролю (табл. 2).
Таблица 1
Количество и площадь фолликулов ГШЛУ животных при СНИ в эксперименте
Структурные компоненты ГШЛУ 1-я группа контроль 2-я группа (24 часа) 3-я группа (24 часа) 3-я группа (48 часов)
Площадь ПФ 0,36 ± 0,006 0,13 ± 0,007* 0,52 ± 0,01* 0,26 ± 0,01*»
Площадь ВФ 0,71 ± 0,02 0,36 ± 0,04* 0,62 ± 0,01* 0,45 ± 0,01*»
Площадь ЦР 0,23 ± 0,009 0,08 ± 0,01* 0,13 ± 0,01* 0,15 ± 0,006*»
Площадь МЗ 0,48 ± 0,009 0,28 ± 0,03* 0,49 ± 0,01 0,3 ± 0,008*»
Количество ПФ 15,1 ± 0,3 5 ± 0,4* 18 ± 0,8* 10,7 ± 0,6*
Количество ВФ 14,5 ± 0,6 7 ± 1,0* 8,4 ± 0,4* 6,6 ± 0,6*
Примечание: * — достоверность к 1-й группе (контрольной), • — достоверность ко 2-й группе
Таблица 2
Клеточный состав ПЛФ ГШЛУ животных при СНИ в эксперименте
Клетки 1-я группа контроль 2-я группа 24 часа 3-я группа 24 часа 3-я группа 48 часов
Малые лимфоциты 2184 ± 27,1 180 ± 6,6* 2040,6 ± 84 890,4 ± 15,7*»
Средние лимфоциты 329 ± 15,5 110 ± 5,8* 737 ± 50* 348,2 ± 13,8»
Ретикулярные клетки 59,6 ± 9,4 50,2 ± 6,7 152 ± 19,8* 96,8 ± 10
Макрофаги 63,3 ± 11,9 71,3 ± 4,6 398,3 ± 46* 101,3 ± 9,8»
Нейтрофилы 1,2 ± 2,3 10,3 ± 2,1* 99,5 ± 13* 50,2 ± 6,5*»
Погибшие клетки 23,6 ± 5,3 267,2 ± 5,7* 353 ± 34* 171,2 ± 9,9*»
Примечание: * — достоверность к 1-й группе (контрольной), • — достоверность ко 2-й группе
¿ООО 1500 1000 500 о
МЛц СрЛц МЛц СрЛц МЛц
■ I.
1г|) !г|1 Игр 24чргр- 24ч 3-[р 24ч. Згр24ч Зг]).-181| Згр.4$ч
СрЛц
:ооо
1500
юоо
4 оо
М.'1ц СрЛ(
Рис. 1. Количество малых и средних лимфоцитов (МЛц и СрЛц) в первичных фолликулах
ГШЛУ
Количество ВЛФ уменьшилось в 1,7 раза, но при этом их площадь сократилась в меньшей степени — в 1,2 раза. Так же как и в ПЛФ наблюдалась более выраженная воспалительная реакция, чем без коррекции: в ЦР количество нейтрофилов и макрофагов было больше, в 14,3 и в 1,9 раза (табл. 2, 3; рис. 2); в МЗ количество макрофагов и нейтрофилов превосходило в 11,3 и 18,7 раза.
Таблица 3
Клеточный состав МЗ ГШЛУ животных при СНИ в эксперименте
Клетки 1-я группа контроль 2-я группа 24 часа 3-я группа 24 часа 3-я группа 48 часов
Малые лимфоциты 2375 ± 44,9 388 ±15* 2052,8 ± 25*» 899,7 ± 26*»
Средние лимфоциты 1058 ± 36,7 425 ±14,3* 265,2 ± 21,5*» 410,6 ± 16,4*»
Ретикулярные клетки 11,6 ± 6,4 88,8 ± 12,8* 82,8 ± 21,8* 157 ± 13,7*»
Макрофаги 62,9 ± 12,6 227 ± 11,5* 302,5 ± 25,4* 23,8 ± 8,5»
Нейтрофилы 6,6 ± 4,9 9,7 ± 3,7 180,8 ± 21,6*» 45,5 ± 9*»
Погибшие клетки 81,1 ± 19,4 372 ± 16,9* 277,1 ± 22*» 321,8 ± 17,1*
Примечание: * — достоверность к 1-й группе (контрольной), • — достоверность ко 2-й группе
Рис. 2. Количество малых и средних лимфоцитов (МЛц и СрЛц) в мантийной зоне ГШЛУ
В ВЛФ лучше сохранилась лимфоидная ткань: количество малых лимфоцитов в МЗ было меньше нормы всего в 1,2 раза, в то время как без коррекции — в 6 раз меньше нормы. В ЦР больше бластных клеток, малых и средних лимфоцитов, количество митозов соответствовало контролю (табл. 3, 4; рис. 2).
К концу вторых суток в условиях коррекции СНИ уменьшились количество и общая площадь ПЛФ в 1,4 раза, количество и общая площадь ВЛФ в 2,2 и 1,6 раза соответственно. При этом в ПЛФ и ВЛФ сократилось количество малых и средних лимфоцитов (табл. 1-3).
Вместе с тем, количество бластных клеток увеличилось по сравнению с суточными показателями в 1,7 раза, а число клеток в стадии митоза и вовсе превосходило контроль в 2,7 раза (табл. 2). Полученные данные можно трактовать как возрастание лимфопоэтической активности и миграцию лимфоцитов в другие структуры лимфатических узлов.
Таблица 4
Клеточный состав центров размножения ГШЛУ животных при СНИ
в эксперименте
Клетки 1-я группа 2-я группа 24 часа 3-я группа 24 часа 3-я группа 48 часов
Малые лимфоциты 84,7 ± 9,6 20,2 ± 3,5* 59,6 ± 5,4» 46,5 ± 7,3*»
Средние лимфоциты 222 ± 17,3 66,1 ± 4,1* 137 ± 7,4*» 129,8 ± 6,4*»
Властные клетки 300,6 ± 11,9 19,6 ± 4,1* 87,4 ± 6,6*» 150 ± 7,7*»
Митозы 4,7 ± 2,4 — 9 ± 1,7* 12,9 ± 1,6*
Ретикулярные клетки 39,7 ± 6 54,9 ± 5,2 107,1 ± 11*» 135,6 ± 14,1*
Макрофаги 60,3 ± 9,7 29,2 ± 3,1* 55,1 ± 5,5» 98,3 ± 5,6*»
Нейтрофилы — 2,8 ± 1,5 39,4 ± 6*» 74 ± 8,4*»
Погибшие клетки 27 ± 6,9 83,3 ± 5,3* 24 ± 5,9» 77,1 ± 8,9*»
Примечание: * — достоверность к 1-й группе (контрольной), • — достоверность ко 2-й группе
Выводы. На основании полученных результатов можно заключить:
1. При СНИ без коррекции угнетается лимфоцитопоэтическая функция лимфоидных узелков.
2. Клафоран с применением лимфостимуляции оказывает протективное действие
на лимфоидную ткань, способствует обострению воспалительного процесса, активирует лимфопоэтическую функцию ГШЛУ.
Список литературы
1. Бородин Ю. И. Терапевтические эффекты непрямой лимфостимуляции цереброспинальных лимфоструктур в лечении отека мозга / Ю. И. Бородин, Я. М. Песин, В. Х. Габитов // Бюл. СО РАМН. — 1999. — № 2. — С. 15-18.
2. Бородин Ю. И. Мозг и жидкие среды организма / Ю. И. Бородин, Я. М. Песин. — Новосибирск-Бишкек, 2005. — 184 с.
3. Лимфоузел как маркер экологического воздействия / Ю. И. Бородин, А. Н. Машак, И. А, Голубева, П. А. Елясин // Тез. докл. II съезда лимфологов России. — СПб., 2005. — С.
39-41.
4. Волкова О. В. Основы гистологии и гистологической техники / О. В. Волкова, Ю. К. Елецкий. — М. : Медицина, 1982. — 346 с.
5. Обзор практических рекомендаций по ведению пациентов с бактериальным менингитом Американского общества инфекционных болезней / И. А. Карпов, А. С. Иванов, И. В. Юркевич [и др.] // Клин. микробиология и антимикроб. химиотерапия. — М., 2002. — Т. 8, № 3. — С. 229-236.
6. Этиология и лабораторная диагностика гнойных бактериальных менингитов / И. С. Королева, Г. В. Белошицкий, И. Н. Лыткина [и др.] // Эпидемиология и инфекц. болезни. — М. : Медицина, 2005. — № 3. — С. 5-9.
7. Песин Я. М. Пути оттока цереброспинальной жидкости в лимфатическое русло организма и методы лимфотропной терапии при заболеваниях центральной нервной системы : автореф. дис. ... д-ра мед. наук / Я. М. Песин. — Бишкек, 2001. — 24 с.
8. Цыплаков Д. Э. Гиперпластическая фолликулярная реакция регионарных лимфатических узлов при раке (иммуногистохимия, ультраструктура, прогностическое значение) / Д. Э. Цыплаков, С. В. Петров // Арх. патологии. — 1997. — № 4. — С. 55-61.
LYMPHOID FOLLICLES OF DEEP CERVICAL LYMPH NODES OF RAT AT CORRECTION OF STAPHYLOCOCCAL
NEUROINFECTION
N. A. Shurina, A. N. Mashak, P. A. Elyasin, O. V. Vasilyeva
SBEIHPE «Novosibirsk State Medical University of Ministry of Health» (Novosibirsk c.)
At experiment on rats the cellular structure of lymphoid follicles of deep cervical lymph nodes of rats is studied at cerebral staphylococcal infection in the conditions ofklaforan application with lymphostimulation usage. Revealed issues: 1) staphylococcal neuroinfection oppresses lymphocytopoetic function of lymph node; 2) klaforan with application of lymphostimulation has protective effect on lymphoid fabric, promotes aggravation of inflammatory process, activates lymphocytopoetic function of deep cervical lymph nodes.
Keywords: lymph node, lymphostimulation, staphylococcus.
About authors:
Shurina Natalya Albertovna — candidate of medical science, senior teacher of human anatomy chair at SBEI HPE «Novosibirsk State Medical University of Ministry of Health», office phone: 8 (383) 225-15-24, e-mail: ljwtyn.olga@yandex.ru
Mashak Alexander Nikolaevich — doctor of medical science, professor, head of human anatomy chair at SBEI HPE «Novosibirsk State Medical University of Ministry of Health», office phone: 8(383) 225-15-24, e-mail: ljwtyn.olga@yandex.ru
Elyasin Pavel Aleksandrovich — candidate of medical science, assistant professor of human anatomy chair at SBEI HPE «Novosibirsk State Medical University of Ministry of Health», contact phone: 8 (383) 215-15-24, e-mail: pharmngmu@yandex.ru
Vasilyeva Olga Vladislavovna — candidate of medical science, assistant professor of human anatomy chair at SBEI HPE «Novosibirsk State Medical University of Ministry of Health», office phone: 225-15-24, e-mail: zalavinasv@mail.ru
List of the Literature:
1. Borodin Y. I. Therapeutic effects of indirect lymphostimulation on the cerebrospinal lymphostructures in treatment of cerebral hypostasis / Y. I. Borodin, Y. M. Pesin, V. H. Gabitov // Bulletin of SB RAMS. — 1999. — № 2. — P. 15-18.
2. Borodin Y. I. Brain and liquid environments of organism / Y. I. Borodin, Y. M. Pesin. — Novosibirsk-Bishkek, 2005. — 184 P.
3. Lymph node as marker of ecological influence / Y. I. Borodin, A. N. Mashak, I. A, Golubeva, P. A. Elyasin // Theses. Of II congress lymphologies of Russia. — SPb. 2005. — P. 39-41.
4. Volkova O. V. Fundamentals of histology and histologic equipment / O. V. Volkova, Y. K. Eletsky. — M.: Medicine, 1982. — 346 P.
5. The review of practical recommendations on maintaining patients with bacterial meningitis of the American society of infectious diseases / I. A. Karpov, A. S. Ivanov, I. V. Yurkevich [etc.] // Clin. microbiology and anti-microbe. chemotherapy. — M, 2002. — V. 8, № 3. — P. 229-236.
6. Etiology and laboratory diagnostics of purulent bacterial meningitis / I. S. Koroleva,
G. V. Beloshitsky, I. N. Lytkina [etc.] // Epidemiology and infect. diseases. — M.: Medicine, 2005. — № 3. — P. 5-9.
7. Pesin Y. M. Way of outflow of cerebrospinal liquid to the lymphatic course of organism and methods of lymphotropic therapy at diseases of central nervous system: theses. ... Dr.
of medical science / Y. M. Pesin. — Bishkek, 2001. — 24 P.
8. Tsyplakov D. E. Hyper plastic follicular reaction the regionarnykh of lymph nodes ata cancer (immunohistochemistry, ultrastructure, predictive value) / D.E. Tsyplakov, S. V. Petrov // Arch. pathologies. — 1997. — № 4. — P. 55-61.
