CC BY
44
Лимфоидная ниша при хроническом лимфолейкозе
351
Н. Ю. Семенова, С. С. Бессмельцев, В. И. Ругаль
4
Лимфоидная ниша при хроническом лимфолейкозе
ФГБУ «Российский научно-исследовательский институт гематологии и трансфузиологии Федерального медико-биологического агентства»
Введение. Состояние гемопоэтической ниши и стромальные структуры костного мозга при лимфопролиферативных заболеваниях пристально изучаются, и на сегодняшний день значение дефектов ниши в расстройствах гемолимфопоэза является доказанным фактом. В то же время лимфоидная строма в целом и роль дефектов стромальных структур лимфатических узлов в развитии и поддержании лимфопролиферативных процессов, в частности, остается малоизученной. На сегодня практически отсутствуют данные о морфофункциональном статусе нишеформирующих стромальных структур лимфоидного микроокружения при малигнизации лимфоидных предшественников у больных хроническим лимфолейкозом (ХЛЛ).
Цель исследования - установление морфофункциональных особенностей стромальных элементов лимфоидного микроокружения, участвующих в формировании ниши лимфоидных клеток-предшественниц при ХЛЛ.
Материалом для исследования послужили полученные до начала терапии биопсии лимфатических узлов 61 больного ХЛЛ (33 мужчины и 28 женщин) в возрасте 49-73 лет. Группу сравнения составили биоптаты лимфатических узлов 20 лиц в возрасте 48-68 лет с неопухолевой реактивной неспецифической лимфа-денопатией. Изготовлялись парафиновые блоки по общепринятой стандартной методике, полутонкие срезы толщиной не более 4 мкм окрашивались гистологическими, гистохимическими и иммуногистохимическими (ИГХ) методами. Панель первичных антител для ИГХ: CD23, CD21, CD35, FDC CNA.42, фасцин, ламинин, десмин, коллаген III, IV типов, CD34 Class II, CD31, vWF, Zap70 (Dako, Abcam, Spring Bioscience), полимерная система визуализа-
352
Вопросы онкогематологии
ции Dako. Морфометрические исследования проводились с использованием программного обеспечения анализа изображений «ВидеоТесТ-Морфология 5.2».
При морфологическом исследовании биоптатов лимфоузлов больных ХЛЛ во всех случаях отмечались нарушение гистоархитектоники компонентов лимфоидной ткани. Диффузная инфильтрация лимфоцитами наблюдалась во всех случаях, в 18 случаях в лимфоидной ткани определялся так называемый псевдофолликулярный тип роста - участки, которые представляли собой обычные зоны опухолевых разрастаний, окрашивающиеся в более светлые тона на более интенсивно окрашенном фоне.
Импрегнация серебром гистологических препаратов лимфатических узлов показала деструктивные изменения ретикулиновой сети лимфоидной ткани, причем в двух противоположных направлениях - дезорганизация ретикулиновых волокон с уменьшением их количества относительно площади лимфоидной ткани наблюдалась в 47 случаях (77%), второй тип - образование более грубой сети с очагами ретикулинового склероза в 14 случаях (23%).
При анализе гистологических препаратов, окрашенных рутинными методами гематоксилин-эозином и азур-11-эозином, небольшое количество фолликулярных дендритных клеток (ФДК) определялось в единичных случаях (n=3) в псевдофолликулах. ИГХ определение ФДК с панелью антител выявило интересные факты. Стоит отметить, что маркеры CD21 и CD23 при данном варианте лимфопролиферативного заболевания присутствуют на опухолевых клетках и являются диагностически значимыми при постановке диагноза ХЛЛ. Так, при ХЛЛ CD23 экспрессируется во всех случаях более чем на 50% клеток (таблица). CD21 во многих случаях экспрессировался умеренно -в 32 случаях (53%) позитивны менее 25% клеток, в оставшихся наблюдениях (n=29) экспрессия наблюдалась в 30-35% опухолевых клеток. Умеренная экспрессия CD35 обнаружена в 23 случаях (38%). Маркеры CNA.42 и фасцин показали незначительное количество разрозненно лежащих клеток, без образования сетчатой структуры, при этом следует отметить, что фасцин также маркирует и интердигитальные ДК. Представленные результаты свидетельствуют о дезорганизации сети ФДК при ХЛЛ (таблица). Вероятно, происходит также и изменение их фенотипа под влиянием опухолевой прогрессии, так как маркеры ФДК, которые не экспрессируются одновременно опухолевыми клетками, практически отсутствуют.
Лимфоидная ниша при хроническом лимфолейкозе
353
Таблица - Экспрессия маркеров нишеобразующих структур лимфатических узлов (M±m)___________________________
Нишеобразующие структуры лимфатического узла, площадь, % Группа сравнения (лимфадениты) n=20 Больные ХЛЛ n=61
CD34 cl. II 6,5±0,5 12,8±0,3*
CD31 10±0,8 18,3±0,7*
vWF 8±0,2 15±0,3*
CD23 23±3,1 79,8±4,2*
CD21 19,3±1,2 24,7±2,2 (n=42)
CNA.42 17,5±1,6 7,3±1,8*
Фасцин 35,7±2,4 19,3±1,6*
CD35 28,3±2,3 11,1±3,6*
Zap70 18,2±2,1 (Т-клетки) 72,4±8,2 (35 случаев) * 24,3±2,7 (26 случаев)
Коллаген IV 5,1±0,3 9,5±2,1*
Коллаген III 3,1±0,5 2,7±0,8
Ламинин 3,2±0,4 1,5±0,3*
Десмин 1,2±0,2 0,8±0,2
Примечание: * - р < 0,05, отличия достоверны в сравнении с контролем.
Экспрессия прогностического маркера Zap70 (более 50%) определялась в 35 случаях (57%), в 10 случаях экспрессия отсутствовала (16%), в остальных наблюдениях отмечалась умеренная экспрессия (n=16, 26%).
При рутинных окрасках было отмечено увеличение количества сосудов, при этом венулы с высоким эндотелием определялись значительно реже, чем в контрольной группе. ИГХ определение сосудов проводилось с использованием моноклональных антител Dako CD34 cl. II, CD 31, vWF, anti-laminin, anti-collagen IV типа. Исследования показали, что на фоне инфильтрации лимфоузлов зрелыми лимфоцитами обнаруживалось увеличение
354
Вопросы онкогематологии
количества мелких сосудов, а также сосудов с выбухающими в просвет эндотелиоцитами с крупными ядрами, хорошо очерченными ядрышками и фибробластоподобными клетками по периферии сосудов. Структура эндотелиоцитов указанных сосудов была характерна для клеток с высокой функциональной активностью. Морфометрические измерения с показали, что площадь сосудов микроциркуляторного русла увеличивается в два раза при ХЛЛ по сравнению с контрольной группой. ИГХ с антителами к ламинину и коллагену IV типа выявила прерывистую или отсутствующую базальную мембрану у большинства сосудов (таблица 1).
Экстрацеллюлярный матрикс лимфатических узлов также претерпевает изменения. Так отмечается незначительное сокращение десмина, коллагена III типа в трабекулах и в паренхиме лимфатического узла. Достоверно показано сокращение ламинина, количество коллагена IV типа увеличивается параллельно с ростом плотности микрососудов, однако многие сосуды имеют прерывистую или отсутствующую базальную мембрану (таблица 1).
Заключение. Представленные нами данные свидетельствуют о значительных морфофункциональных изменениях ключевых нишеобразующих стромальных структур при ХЛЛ -ФДК, сосудов микроциркуляции и экстрацеллюлярного матрикса. Нарушение состояния ниши может приводить к извращению сигнальных путей регуляции пролиферации и дифференцировки лимфоидных предшественников. При этом не представляется возможным исключить при ХЛЛ ведущую роль дефектов ниши не только в создании условий для прогрессии лейкозного процесса, но и в появлении лейкозного клона.
