CC BY
211
Лечение и профилактика
УДК 619:576.893.1
ЛЕЧЕНИЕ КРИПТОСПОРИДИОЗА РЕПТИЛИЙ
А.О. ШАРОВА аспирант И.Г. ГЛАМАЗДИН доктор ветеринарных наук
Московский государственный университет пищевых производств 109316, г. Москва, ул. Талалихина, 33, e-mail: Glamazdin@yandex.ru
Изучена эффективность гипериммунного коровьего молозива как специфического препарата при лечении криптоспоридиоза рептилий. Описано клиническое проявление криптоспоридиоза. Проведен клинический анализ крови рептилий. Дана характеристика биохимических изменений и актив-ности ферментативных систем в сыворотке крови, полученной от больных криптоспоридиозом рептилий.
Ключевые слова: криптоспоридиоз, терапия, гипериммунное молозиво, ооцисты, рептилии.
Протистофауна рептилий, содержащихся в неволе, многообразна и отличается от естественной. В крупных зоопарках коллекция рептилий может превышать 700 экз. Паразитарная ситуация в таких коллекциях обычно сложная и трудно прогнозируется. Большую проблему в группе инвазионных болезней представляет криптоспоридиоз.
Криптоспоридиоз - протозойная зоонозная болезнь, вызываемая кокци-диями семейства Cryptosporidiidae, рода Cryptosporidium [8], с острым, подо-стрым или хроническим течением, характеризующаяся нарушением деятельности желудка, тонкого кишечника и выделением спорулированных ооцист. Криптоспоридии выделены более чем у 170 видов животных. У рептилий болезнь описана свыше чем у 80 видов, включая 40 видов змей, 16 видов ящериц, 6 видов черепах и 1 вид крокодилов.
Криптоспоридиоз в крупных коллекциях рептилий в настоящее время является острой проблемой. Многие рептилии (около 20 %), поступающие в террариум Нью-Иорского зоопарка, позитивны к криптоспоридиозу по тесту ELISA и большинство из них - хронические больные [2]. По данным научной лаборатории Людвигсбурга (Германия) криптоспоридиоз обнаруживается у 15 % рептилий, исследованных с помощью антигенного теста [5]. В Московском зоопарке у змей ооцисты криптоспоридий выявляются в 9 % образцов, а у ящериц - в 11 % образцов фекалий [1].
Для криптоспоридиоза характерна фекально-оральная передача возбудителя с контаминированными кормами, водой и при контакте. В неволе важнейшие факторы передачи - загрязненные террариумы. Возможна и аэрогенная передача с высушенными экскрементами.
Развитие криптоспоридий протекает по схеме гомоксенного жизненного цикла. Все эндогенное развитие завершается в организме одного хозяина, а ооцисты выделяются во внешнюю среду при дефекации [4].
Основным методом диагностики криптоспоридиоза остается выявление ооцист в мазках фекалий, обработанных модифицированными кислотоустойчивыми окрасками (по Цилю-Нильсену, модификация PAS, ауроамино и т.
д.), хотя эти методы не слишком чувствительны и не видоспецифичны. Также разработаны несколько тестов на основе ELISA и прямой и непрямой окраски иммунофлуоресцентными антителами. В последнее время в США для определения видов криптоспоридий стали применять ПЦР [6].
В настоящее время криптоспоридиоз у рептилий лечат, в основном, па-ромомицином. Однако более успешно действует разработанная схема с комбинацией спирамицина, бисептола и метронидазола. Антибиотики влияют на секундарную микрофлору, купируя диарейный синдром и регургитацию. Кокцидиостатики, применяемые для терапии птиц, такие как галофуразона гидробромид или толтразурил (байкокс), имеют очень небольшую терапевтическую широту. Байкокс иногда назначают черепахам, у которых он не дает побочных эффектов, в случае обычных кокцидиозов, чаще с положительным результатом. Для змей же этот препарат высоко токсичен и вызывает у них острый гепатит или даже смерть [7].
Профилактика криптоспоридиоза достаточно затруднительна, особенно в зоопарках. В случае эпизоотической вспышки нужны строгие карантинные меры. Латентных носителей можно не лечить, если они изолированы. Позитивных навсегда оставляют в карантине, исключая из программ по разведению, или подвергают эвтаназии. Ооцисты способны выживать и сохранять инвазивность в воде при температуре 15 °С более 7 мес. В террариумах они сохраняют жизнеспособность не менее 5 мес. Они, также как ооцисты других кокцидий, весьма устойчивы к различным дезинфектантам, в том числе к активному хлору и йоду. Ооцисты чувствительны к высушиванию и температурам выше 65 °С. Губительными для инвазионного начала являются горячий пар, формалин и 5-10%-ный аммиак. Глутаровый альдегид считается одним из наиболее эффективных средств для обработки террариумов [3].
Материалы и методы
Исследования по изучению эффективности гипериммунного молозива проводили на базе террариума Московского зоопарка и в центре ветеринарной диагностики «Аргумент» МГУПП.
Материалом для исследований служили 36 бородатых агам, самых чувствительных к криптоспоридиозу ящериц. Животные были разделены по принципу аналогов на 3 подопытные группы по 10 голов в каждой. Для контроля использовали 2 группы животных по 3 головы в каждой: 1 - животные без клинических признаков, у которых при трехкратном копрологическом исследовании с недельным интервалом не было выявлено ооцист возбудителя, 2 - животные с клиническими признаками, у которых выделялись ооци-сты возбудителя и не проводилось лечение.
Для заражения использовали суспензию ооцист криптоспоридий, которые выделяли от больных рептилий и накапливали флотационными методами, применяемыми в паразитологии. Исходный материал, макси-мально богатый ооцистами, предпочитали получать непосредственно из прямой кишки спонтанно инвазированных животных. Из флотационных растворов использовали смесь Бреза, а также раствор сахарозы. Количество ооцист криптоспоридий в 1 мл раствора определяли в камере Горяева из расчета 1 капля = 0,02 мл. Заражение рептилий проводили орально, для этого использовали суспензию криптоспоридий с содержанием в 1 мл раствора по 200 тыс. ооцист.
Для лечения криптоспоридиоза использовали препараты байкокс и бак-трим, а также коровье молозиво (Functional Nutraceuticals Limited, Новая Зеландия), которое предлагают в качестве биологической добавки для людей и гипериммунное коровье молозиво, полученное нами от иммунизированных коров в стельный период.
Первой группе животных задавали байкокс из расчета 1мл/кг, орально, однократно в сочетании с антибиотиком бактримом из расчета 0,6 мл/кг, ежедневно в течение 5 дней. Вторая группа животных получала байкокс в той
же дозе и новозеландское молозиво в дозе 10 мл/кг, орально, четырехкратно с интервалом в один день. Третья группа получала байкокс в той же дозе и гипериммунное коровье молозиво в дозе 10 мл/кг, орально, четырехкратно с интервалом в один день.
Для получения гипериммунного коровьего молозива ооцисты криптоспоридий вместе с полным адъювантом Фрейнда вводили животным подкожно, двукратно с интервалом в две недели. Молозиво для дальнейших исследований от иммунизированных животных получали через две недели после второй инъекции. Отобранные образцы фасовали по пробиркам, замораживали и хранили в холодильнике при - 20 оС. Перед использованием размораживали при комнатной температуре.
Для оценки интенсивности выделения ооцист криптоспоридий всех агам исследовали копроскопическим методом с окраской образцов фекалий по Цилю-Нильсену. При это ооцисты окрашивались в темно-вишневый цвет и имели характерную морфологию: 4,7-5,2 мкм, гладкие, покрытые оболочкой, разного размера, округлые, овальные, с характерной «крышечкой» на верхнем конце. Также встречались спорулированные ооцисты.
Для гематологических и биохимических исследований кровь брали в объеме до 0,7 % массы тела из вентральной хвостовой вены. В качестве антикоагулянта добавляли 0,2 мл кальциевого гепарина. Исследования крови проводили на биохимическом анализаторе VetLab фирмы IDEXX (США) в соответствии с рекомендациями фирмы производителя.
В течение опыта проводили наблюдение за общим состоянием животных, состоянием линьки, видимых слизистых оболочек, деятельностью пищеварительного тракта и сердечно-сосудистой системы методами общего осмотра, пальпации и аускультации. Контроль за клиническим состоянием животных и выделением ооцист проводили ежедневно в течение двух месяцев.
Результаты и обсуждение
Выделение ооцист у инвазированых агам начиналось на 3-5-е сутки после заражения. Животные были угнетены, пропадал аппетит, появлялась диарея. После дачи препаратов у животных первой группы выделение ооцист прекращалось на 6-9-е сутки. В это время у подопытных животных появлялся аппетит, прекращалась диарея. Однако на 33-37-е сутки после окончания курса лечения отмечали возобновление выделения ооцист.
У животных второй группы выделение ооцист прекращалось на 8-10-е сутки после начала лечения. В большинстве случаев у животных появлялся аппетит, хотя у некоторых подопытных животных сохранялась диарея до 14 сут. Байкокс в сочетании с новозеландским молозивом было недостаточно эффективным, т. к. выделение ооцист возобновлялось на 38-40-е сутки после окончания терапии.
Выделение ооцист у животных третьей группы прекращалось на 5-8-е сутки после начала лечения, у всех животных появлялся аппетит и прекращалась диарея. Выделение ооцист не наблюдали в течение двух месяцев.
Результаты гематологических и биохимических исследований крови на 10-е сутки после начала лечения зараженных животных свидетельствуют о нарушениях деятельности почек и печени.
Количество лейкоцитов в крови животных 1 -й контрольной группы составило 12,5, 2-й контрольной группы на 10-е сутки инвазии - возрастало до 20,4. В крови экспериментально зараженных животных 1, 2 и 3-й групп, которых подвергали лечению, количество лейкоцитов оказалось повышен-ным: 1-14,9; 2-15,1 и 3-13 соответственно (табл.). Наиболее значимые изменения в биохимических показателях крови нами отмечены при исследовании мочевины, мочевой кислоты, АЛТ и АСТ.
Таким образом, криптоспоридиоз рептилий сопровождается дисфункцией печени, почек и нарушением обмена веществ.
Динамика биохимических показателей крови экспериментально зараженных Cryptosporidium spp. бородатых агам при различных терапевтических схемах
Показатель Контроль 1 Контроль 2 Группа 1 Группа 2 Группа 3
(n = 3) (n = 3) (n = 10) (n = 10) (n = 10)
Лейкоциты, 103/мкл 12,5±1,2 20,4±1,9 14,9±1,5 15,1±1,7 13,6±1,5
Гетерофилы, % 20±1,9 23±1,8 23±1,9 25±1,5 21±1,8
Лимфоциты, % 59±5,5 62±5,8 55±5,2 47±5,1 51±5,3
Моноциты, % 1±0,1 1±0,1 2±0,2 2±0,1 2±0,1
Базофилы, % 9±0,8 10±0,9 11±0,9 10±0,8 10±0,8
Азурофилы, % 4±0,3 6±0,5 6±0,5 6±0,4 5±0,4
Гематокрит, % 25±2,0 27±2,1 22±2,5 17±1,8 20±2,2
Глюкоза, ммоль/л 11,7±1,2 12±1,1 10,3±1,1 11,4±1,3 10,8±1,2
Мочевина, ммоль/л 0,7±0,1 1,5±0,1 1,7±0,2 2,0±0,1 1,3±0,1
Мочев.к-та, ммоль/л 210±14,5 387±19,5 298±20,2 306±15,3 238±20,2
Кальций, ммоль/л 2,95±0,2 7,8±0,6 6,8±0,5 5,3±0,4 4,2±0,4
Фосфор, ммоль/л 1,9±0,1 2,6±0,1 3,2±0,2 2,4±0,3 2,0±0,1
Холестерин, ммоль/л 13,4±1,2 16,2±1,5 14,7±1,3 15,3±1,1 14,2±1,6
АЛТ, ЕД/л 3,1±0,2 6,4±0,5 5,2±0,4 5,9±0,5 4,2±0,4
АСТ, ЕД/л 13±1,2 34,5±2,8 24±2,1 26±2,3 18±1,6
Натрий, ммоль/л 151±13,6 163±15,3 142±15,0 150±14,2 147±13,8
Калий, ммоль/л 3,6±0,2 5,8±0,4 5,3±0,5 5,1±0,4 4,2±0,3
Наиболее эффективной оказалась схема лечения с применением байкок-са (1 мл/кг, орально, однократно) и гипериммунного коровьего молозива (10 мл/кг, орально, четырехкратно с интервалом в один день).
Литература
1. Васильев Д.Б. Ветеринарная герпетология: ящерицы. - М.: Проэкт-Ф,
- 2005.- С. 265-268.
2. CranfieldM.R., Graczyk T., Wright K. et al. // Bull. ARAV. - 1999. - V. 9.
- P. 15-21.
3. Frye F.L. Biomedical and surgical aspects of captive reptile husbandry // Krieger Publishing Company. - 1991. - V. 1. - P. 308-312.
4. Frye F.L., Garman R., Graczyk T. et al. Atypical non-alimentary cryptos-poridiosis in three lizards // Proc. ARAV. - 1999. - V. 2. - P. 43.
5. Graczyk T. Diagnosis, therapy and genetic diversity of Cryptosporidium in captive reptiles // Proc.7-th Int. Symp. PMRA, - 2004. - P. 55-60.
6. Graczyk T.K., Owens R., Cranfield M.R. Diagnosis of subclinical cryptos-poridiosis in captive snakes based on stomach lavage and cloacal sampling // Vet. Parasitol. - 1996. - V. 6. - P. 143-151.
7. Graczyk T.K., Cranfield M.R.., Bostwick E.F. Successful hyperimmune bovine colostrum treatment of savanna monitors (Varanus exanthematicus) infected with Cryptosporidium sp. // J. Parasitol. - 2000. - V. 86. - P. 631-632.
8. Tyzzer E. An extracelluar coccidium, Cryptosporidium muris (gen. & sp. nov.), of the gastric glands of the common mouse // J. Med. Res. - 1910. - V. 18. -P. 487-509.
Treatment of cryptosporidiosis of reptiles A.O. Sharova, I.G. Glamazdin
Efficiency of hyperimmune cow colostrum at cryptosporidiosis of reptiles is investigated. Clinical display of cryptosporidiosis is described. The clinical analysis of blood of reptiles is studied. The characteristic of biochemical changes and activity of enzymatic systems in whey of the blood received from reptiles infected with cryptosporidiosis is given.
Keywords: cryptosporidiosis, therapy, hyperimmune colostrum, oocysts, reptiles. 120
