CC BY
117
Биохимия, биотехнология и диагностика
УДК 619:616.995.1-085
КУЛЬТИВИРОВАНИЕ НЕМАТОД Strongyloides papillosus И ИММУНОДИАГНОСТИКА ЛАРВАЛЬНОГО СТРОНГИЛОИДОЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
М.Д. НОВАК доктор биологических наук
Рязанский государственный агротехнологический университет, e-mail:
peace 100@mail. ru Э.Х. ДАУГАЛИЕВА доктор ветеринарных наук НВЦ ООО «Агроветзащита» О.А. МИШИНА аспирант
Рязанский государственный агротехнологический университет
Проведено культивирование личинок и имаго Strongyloides раргЮт в лабораторных условиях. Максимальное количество личинок получено на 57-58-е сутки культивирования. Установлена 94 и 95%-ная эффективность монезина и ивермека при стронгилои-дозе крупного рогатого скота. Показана перспективность применения РНГА для серологической диагностики стронгилоидоза с целью эпизоотологического мониторинга и учета эффективности препаратов.
Ключевые слова: культивирование, ЗЬопдуО'кЗеэ рарШоБиэ, крупный рогатый скот, монезин, РНГА.
Стронгилоидоз причиняет значительный экономический ущерб хозяйствам, молочным комплексам, основной деятельностью которых является получение молока и воспроизводство стада. При трансмаммарном или перку-танном заражении и последующей миграции личинок Strongyloides papillosus через легкие, другие органы и ткани наблюдается реактивация латентных вирусных и бактериальных инфекций, повышение вирулентности вирусов и условно патогенных бактерий, что проявляется энзоотиями инфекционного ринотрахеита, парагриппа, пастереллеза. Падеж среди телят 1-3 мес может отставлять 7-25 %; у переболевших животных снижена масса тела, нарушены рост и развитие; в большинстве случаев их не используют для формирования и обновления стада. Значительны затраты на проведение лечебно-профилактических мероприятий при смешанных формах стронгилоидоза и инфекционных болезней [1-3].
Для своевременной диагностики синдрома «larva migrans», вызванного S. papillosus, необходимо получить экскреторно-секреторные антигены личинок нематод и адаптировать их к известным иммунодиагностическим методам. В перспективе практическое значение имеет разработка вакцин против строн-гилоидоза, стронгилятозов пищеварительного тракта и органов дыхания жвачных животных на основе использования свободноживущих форм нематод подотряда Rhabditata.
Материалы и методы
В условиях лаборатории в течение пяти месяцев в осенний, зимний и весенний сезоны при комнатной температуре и обычном освещении проводили культивирование личинок и раздельнополых половозрелых особей рарИ^ш в среде на основе сенного отвара с содержанием 1-2 % глютамина. Для получения инвазионного материала использовали пробы фекалий от телят 2,5-5-месячного возраста из хозяйства, неблагополучного по стронгилоидозу.
Исследования фекалий проводили с помощью флотационного метода (в первые 5-6 ч после получения материала) и по Берману-Орлову (через 10-12 ч и более).
До и после дегельминтизации у телят брали кровь из вены ушной раковины на полоски фильтровальной бумаги (с обозначением номера животного, даты). Кровь исследовали по общепринятой методике с помощью реакции непрямой агглютинации (РНГА). Для приготовления эритроцитарного диаг-ностикума использовали экскреторно-секреторные антигены личинок и половозрелых свободноживущих 5. papillosus (ESAgStr). Очищенные фракции антигенов получали в соответствии с методикой, разработанной на основании результатов многочисленных экспериментальных исследований.
Результаты и обсуждение
Максимальное количество личинок 5. papillosus в питательной среде отмечено на 57-58-е сутки культивирования (168-175 экз. в одном препарате) (рис. 1).
Значительное уменьшение числа личинок и имаго 5. papillosus в культу-ральной жидкости установлено на 91-98-е сутки с начала культивирования, что может являться следствием генетической однородности и снижения устойчивости субпопуляции возбудителя на протяжении смены четырех поколений.
При искусственном восстановлении гетерогенности субпопуляции 5. papillosus по разработанной методике численность личинок в культуральной среде восстанавливается на 140-е сутки после начала культивирования, при этом первоначальный максимальный уровень не достигается (125-145 личинок в препарате) (рис. 2).
Дни культивирования
Рис. 1. Динамика числа личинок 5. papШosus при культивировании в среде с содержанием 1-2 % глютамина с ноября по февраль
I 160
Ё 140
Ч 120
и 100
« 80 т
=3 60
И 40
100
20
105 112 126 133 140 147 154
Дни культивирования
Рис. 2. Динамика числа личинок 5. papШosus при культивировании в среде с содержанием 1-2 % глютамина с февраля по апрель
Таким образом, индуцирование процессов генетической гетерогенности субпопуляции возбудителя обеспечивает высокую численность личинок стронгилоидесов в культуральной среде на 36-52-е сутки, т. е. через 2-3 генерации свободноживущих нематод.
Полученные результаты позволили установить возможность длительного культивирования нематод 5. papillosus в лабораторных условиях, что является важным для разработки диагностических препаратов и вакцин, необходимых ветеринарной практике.
В неблагополучном по стронгилоидозу хозяйстве Рязанской области при ларвоскопическом (по Берману-Орлову) исследовании телят 3-5-месячного возраста диагноз подтвержден во всех случаях (в 32 пробах из трех телятников обнаружено, в среднем, по 1-4 экз. личинок стронгилоидесов в пробе).
В апреле проведена дегельминтизация зараженных телят с использованием монезина (ивермектин + празиквантел) в таблетках перорально - 35 и «Ивермек» инъекционный подкожно - 102. Паразитоциды применяли однократно, в дозах, рекомендованных инструкцией. Через 7 сут после дегельминтизации проводили учет экстенсэффективность противопаразитарных препаратов. Личинки стронгилоидесов в группе телят, дегельминтизирован-ных монезином, обнаружены в двух пробах фекалий, а в группе животных, обработанных ивермеком, - в пяти. В первой и второй группах телят экстен-сэффективность монезина и ивермека оказалась равной соответственно 94,3 и
При серологическом исследовании телят, спонтанно инвазированных 5. papillosus, в РНГА с экскреторно-секреторными антигенами личинок строн-гилоидесов до и после дегельминтизации монезином и ивермеком получены следующие результаты: до дегельминтизации антитела к 5. papillosus обнаружены у 17,0-60,7 % телят. Через разные сроки после дегельминтизации монезином результаты серологического скрининга на стронгилоидоз отличались и в среднем по группе дегельминтизированных телят составили: на 12-е сутки - 1 : 40-1 : 160, на 23-и - 1 : 40-1:80, на 32-е - 1 : 20.
На 23 и 32-е сутки после дегельминтизации серонегативные результаты РНГА на стронгилоидоз установлены соответственно у 13 из 17 и у 15 из 17 телят.
95 %.
На основании проведенных исследований установлена перспективность применения РНГА и других серологических тестов с целью эпизоотологическо-го мониторинга и определения эффективности антигельминтных препаратов.
Результаты контроля эпизоотического процесса при стронгилоидозе крупного рогатого скота в течение продолжительного периода подтверждают снижение активности перкуторного механизма передачи личинок S. papillosus при их незначительном количестве во внешней среде и преобладание циркуляции возбудителя от матери к теленку через молозиво и молоко.
Для своевременного проведения лечебно-профилактических мероприятий при стронгилоидозе молодняка крупнорогатого скота следует осуществлять сероэпизоотологический мониторинг с помощью РНГА и разработанных экскреторно-секреторных антигенов. Вакцины на основе компонентов сво-бодноживущих личинок нематод отряда Rhabditida в перспективе можно применять при стронгилоидозе, стронгилятозах пищеварительного тракта и органов дыхания животных.
Рекомендуется чередовать дегельминтизации с использованием препаратов авермектинового ряда (монезин), бензимидазолкарбаматов (фебтал, аль-бен) и оксиклозанид содержащих (альбен форте) для предупреждения появления резистентных штаммов нематод. В весенний период, в конце лета и начале осени следует применять препараты авермектинового ряда, эффективные в равной степени против половозрелых нематод и личинок, мигрирующих в тканях животных. При дегельминтизации крупного рогатого скота в конце осени и зимой предпочтительно использовать бензимидазол-карбаматы и имидазотиазолы.
Литература
1. Новак М.Д. Смешанные инвазии крупного рогатого скота в Центральном районе Российской Федерации (эпизоотология, диагностика, лечение) // Рос. паразитол. журнал. - М., 2010. - № 3. - С. 27-31.
2. Новак М.Д., Енгашев С.В., Даугалиева Э.Х. Эффективность монезина при паразитарных болезнях крупного рогатого скота // Ветеринария. - М., 2010. - № 9. - С. 29-31.
3. Новак М.Д., Кононова Е.А. Альбен-форте при стронгилятозах и стронгилоидозе крупного рогатого скота // Ветеринария. - М., 2009. - № 8. - С. 911.
The cultivation of Strongyloides papillosus and immunodiagnostics of larval
strongyloidosis of cattle
M.D. Novak, E.H. Daugalieva, O.A. Mishina
Cultivation of larvae and imago of Strongyloides papillosus in vitro is carried out. The maximum quantity of larvae is received for the 57-58th days of cultivation. It is established 94 and 95 % efficiency of monezin and ivermek at strongyloidosis of cattle. Prospects of application of RIHA for serodiagnostics of strongyloidosis for the purpose of epizootologic monitoring and the accounting of efficiency of the drugs are shown.
Keywords: cultivation, Strongyloides papillosus, cattle, monezin, RIHA.
