27^fvia лабораторные животные ш ^ для научных исследований
https://doi.org/10.29296/2618723X-2018-04-07
Критерии оценки патологических изменений при моделировании эндометриоза у крыс
И.А. Куксгауз1, Е.В. Шекунова1, В.А.Кашкин1 2, А.А. Мужикян1, В.Г.Макаров1, М.Н. Макарова1
''Институт экспериментальной фармакологии 188663, Российская Федерация, Ленинградская область, Всеволожский р-н, г.п. Кузьмоловский,
ул. Заводская, д. 3, корп. 245;
2Институт фармакологии им. А.В. Вальдмана Санкт-Петербургского государственного
медицинского университета им. И.П. Павлова 197022, Российская Федерация, Санкт-Петербург, ул. Льва Толстого, д. 6-8
E-mail: kuksgauz.ia@doclinika.ru
Резюме. Целью работы являлась разработка подхода, позволяющего оценить болевое поведение на фоне развития экспериментального эндометриоза у крыс, а также разработка критериев гистологической оценки эндометриоидных гетеротопий при моделировании данной патологии. Моделирование эндометриоза осуществляли на предварительно наркотизированных половозрелых самках аутбредных крыс массой 200-250 г путем аутотрансплантации участка рога матки на переднюю стенку брюшной полости. На начало исследования возраст животных составил 10-11 нед, самки не были беременными или рожавшими. В ходе эксперимента оценивали болевую чувствительность путем регистрации давления, необходимого для индукции болевой реакции. Тестирование проводили с помощью электронного аналгезиметра. Реакция заключалась во вздрагивании, попытках избегания стимула, сокращении мышц брюшной стенки. Животные со сформированной патологией через 2, 4 и 8 нед после индукции в большей степени, чем ложнооперированные, реагировали на механическую стимуляцию брюшной стенки.
Эвтаназию 50% животных проводили через 4 нед после формирования патологии, 50% - через 8 нед. Выделяли имплант с прилегающей тканью, а также интактный рог матки для последующего гистологического исследования. При патоморфологическом исследовании оценивали объем (мм3) и степень развития эндометриомы. В месте имплантации выявлялись крупные образования округлой формы - кистозные структуры с развитой сосудистой сетью, превышающие по размерам исходные импланты. При гистологическом исследовании образцов наблюдались морфологические изменения, характерные для эндометриоза. Внутренняя поверхность кист была выстлана кубическим или призматическим эпителием, соответствовавшим таковому в интактном роге матки. Степень развития эндометриом оценивали полуколичественно в баллах по специально разработанной шкале (от 0 до 3). В результате проведенного исследования был разработан метод, позволяющий не только оценить степень развития эндометриоидных гетеротопий, но и оценить сопутствующий болевой синдром. Данная модель может быть использована для изучения терапевтической эффективности новых лекарственных препаратов.
Ключевые слова: эндометриоз, болевое поведение, крысы.
Для цитирования: Куксгауз И.А., Шекунова Е.В., Кашкин В.А., Мужикян А.А., Макаров В.Г., Макарова М.Н. Критерии оценки патологических изменений при моделировании эндометриоза у крыс. Лабораторные животные для научных исследований. 2018; 4. https://doi.org/10.29926/2618723X-2018-04-07
2018 laboratory animals for science №4
Assessment criteria of experimental endometrios in rats
I. Kuksgauz1, E. Shekunova1, V. Kashkin1 2, A. Muzhikyan1, M. Makarova1, V. Makarov1
1Institute of Experimental Pharmacology 188663, Russia Leningradskiy region, Kuzmolovskiy, Vsevolozhskiy district, 3 Zavodskaya st., b. 245; 2Valdman Institute of Pharmacology, Pavlov First St. Petersburg State Medical University 197022, Russia Saint Petersburg, Lev Tolstoy str. 6-8 E-mail: kuksgauz.ia@doclinika.ru
Summary. This study was aimed to develop an approach allowing pain behavior estimation of rats with experimental endometriosis. The histological score was design to assess the degree of changes observed in the endometrial tissues. Experimental endometriosis was carried out on anesthetized sexually mature intact females of outbred rats aged 10-11 weeks by autotransplantation of a segment of the horn of the uterus. Implant was placed between the peritoneum and muscle. The pain behavior was estimated 2, 4 and 8 weeks after surgery. Sensitivity to abdominal probing was assessed by pressing the lower abdomen against a rod attached to a gram force meter, and measuring the force producing withdrawal/escape behaviors. The pain response to the mechanical stimulation of the abdominal wall was significantly higher in the animals with endometriosis compared to the sham-operated rats. 50% of the animals was euthanatized 4 weeks after the pathology induction, 50% - after 8 weeks. A morphological study indicated the presence of endometriotic-like implants exceeding in size of implanted segments. The histological examination showed morphological changes indicating endometriosis development. The ectopic endometrium was characterized by the coexistence of both glands and stromal structures. Glandular epithelia were observed to have an appearance similar to that of the eutopic epithelial glands. The degree of pathological changes was estimated using specially design grading system (score range - 0-3). As a result the approach for both histological evaluation and pain behavior assessment in rats with experimental endometriosis was developed. This model can be used to study the pharmacological action of new medicines.
Key words: endometrios, pain behavior, rat.
For citation: Kuksgauz I., Shekunova E., Kashkin V., Muzhikyan A., Makarova M., Makarov V. Assessment criteria of experimental endometrios in rats. Laboratory Animals for Science. 2018; 4. https://doi.org/10.29296/2618723X-2018-04-07
Введение
Эндометриоз - это патологический процесс распространения эндометрия (внутреннего слоя стенки матки) за пределы его нормального расположения. По разным источникам частота встречаемости эндометриоза у женщин репродуктивного возраста составляет до 60%. Наиболее информативным и точным методом диагностики эндометриоза является лапароскопия с последующим гистологическим исследованием образцов на наличие макрофагов, содержащих гемосидерин, и на наличие эндометриального эпителия, желез или стромы [1].
Общепринятой методики лечения эндометриоза на сегодняшний день не существует. Используются медикаментозная терапия, оперативное лечение или комбинация двух этих подходов в зависимости от сопутствующих факторов, таких как стадия заболевания, возраст и т.д. Тот факт, что точная диагностика эндометриоза осуществляется инвазивными методами, сильно затрудняет про-
лабораторные животные wj 2018 ДЛЯ научных исследований №'4
ведение клинических исследований по оценке эффективности тех или иных методов медикаментозной терапии. Соответственно разработка экспериментальных моделей на животных необходима как с точки зрения изучения механизмов развития заболевания, так и в плане поиска и оценки эффективности новых лекарственных препаратов. Спонтанно эндометриоз развивается только у приматов, проведение исследований с использованием данного вида животных требует больших финансовых затрат. В связи с этим интенсивно развиваются методы, которые позволяют моделировать те или иные аспекты заболевания на мелких лабораторных животных [2]. В 1984 г. предложена модель эндометриоза с использованием грызунов, которая нашла широкое применение [3], поскольку процедура оперативного вмешательства относительно проста, а результаты хорошо воспроизводимы. Впоследствии были предложены различные модификации данного метода [4, 5]. В проведенном исследовании эндометриоз моделировали путем аутологичной трансплантации эндометриальной ткани в брюшную полость по методике, предложенной V.F. do Amaral и соавт. (2009), с модификациями [4].
В клинике развитие эндометриоза часто сопровождается болевым синдромом. Однако в условиях эксперимента оценка болевого синдрома у животных представляет собой сложную задачу. Ранее в эксперименте по моделированию хронического простатита у мышей E.S. Schwarz и соавт. (2015) с этой целью был использован подход, который состоял в регистрации уровня механического давления, при котором животные демонстрировали болевую реакцию [6]. Мы адаптировали данный подход к условиям нашего эксперимента. Оценку болевой чувствительности проводили через 2, 4 и 8 нед после индукции патологии с целью анализа развития болевого синдрома в динамике.
Целью исследования была разработка модели индукции патологии и оценка степени развития эндометриоидных гетеротопий, а также оценка болевого синдрома, вызванного их развитием у крыс. Данная модель может быть использована для изучения фармакологического действия новых препаратов.
Материал и методы
Эксперимент выполнен на самках аутбредных крыс массой 200-250 г (питомник АО «НПО «Дом Фармации», Россия). Животных содержали индивидуально на древесном подстиле в контролируемых условиях окружающей среды (20-26°C и относительной влажности воздуха 30-70%, NH3<10 мг/м3, Cü2<0,15 об.%). Световой режим составил 12 ч света и 12 ч темноты. Животным был обеспечен свободный доступ к очищенной воде и стандартному корму (комбикорм ЛБК-120 производства ЗАО «Тосненский комбикормовый завод»). Самки не были беременными или рожавшими. Использованы животные, свободные от Chlamidia spp., Mycoplasma spp., Salmonella spp., Yersinia pseudotuberculosis, Pasteurellaceae/Pasteurella spp., Streptococcus pneumoniae, Streptococci ß-haemolytic, Citrobacter rodentium, Clostridium piliforme, Corynebacterium kutscheri, Klebsiella spp, эндо- и эктопаразитов (клещей, гельминтов и простейших).
2018_laboratory animals for science_№4
Данная научно-исследовательская работа (НИР) рассмотрена на биоэтической комиссии (БЭК) АО «НПО «Дом Фармации»» и одобрена для проведения (№БЭК 3.61/17 от 06 октября 2017 г.), выполнена в соответствии с рекомендациями Директивы 2010/63/EU Европейского парламента и совета Европейского Союза от 22 сентября 2010 г. по охране животных и политикой Национальных институтов здоровья США «Принципы лабораторного ухода за животными». Были приняты все возможные меры для минимизации страданий животных, дизайн исследования предусматривал сокращение количества используемых животных в соответствии с принципами «трех R» (reduction, refinement and replacement).
Индукция патологии
Для наркотизации животных использовали смесь препаратов Золетил 100 и Ксилазин (20 мг/мл, 1:1, 50 мкл на 1 крысу массой 250 г внутримышечно). Операция проходила на подогреваемом столике для предотвращения гипотермии.
Эндометриоз индуцировали путем аутологичной трансплантации эндомет-риальной ткани в брюшную полость [2-5]. Для этого животных фиксировали в положении лежа на спине, подготавливали операционное поле и делали продольный разрез (~2,5 см) по средней линии живота для обеспечения доступа к органам брюшной полости (рис. 1), после чего извлекали левый рог матки (рис. 2) и осуществляли перевязку сосудов брыжейки и маточного рога дважды: в 2 см и на расстоянии 1 см от перехода рога в полость матки (рис. 3). Фрагмент рога иссекали и помещали в охлажденный физиологический раствор (4°С) на 2 мин, после чего его измельчали на более мелкие сегменты (4 х 4 мм). Полученный сегмент фиксировали двумя швами на передней брюшной стенке в области бифуркации сосудов так, чтобы эндометриальный слой был обращен в брюшную полость (рис. 4). Далее рану послойно ушивали, шов обрабатывали антисептиком. Для группы ложнооперированных животных выполняли следующие манипуляции: разрез брюшной стенки, экспозиция рога матки (в течение 2 мин), послойное ушивание раны, обработка шва антисептиком.
В послеоперационный период животным внутримышечно вводили Кетонал (раствор для внутривенного и внутримышечного введения 50 мг/мл) в дозе 5 мг/кг, 1 раз в день, 5 дней [7].
Дизайн исследования
Для эксперимента сформировали 2 группы по 12 животных в каждой. Болевую чувствительность (болевую реакцию на механическое воздействие) оценивали через 2, 4 и 8 нед после моделирования патологии. Эвтаназию 50% животных из групп осуществляли через 4 нед, оставшихся животных - через 8 нед с помощью СО2-камеры. Образцы импланта и прилегающих к нему тканей, а также интактный рог матки забирали для проведения патоморфологического анализа.
HfVia ЛАБОРАТОРНЫЕ ЖИВОТНЫЕ ^^
ДЛЯ НАУЧНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ №'4
Рис. 4. Фиксация фрагмента рога матки на передней брюшной стенке
Оценка чувствительности к механическому воздействию.
Механическое давление на брюшную стенку осуществлялось с помощью электронного аналгезиметра (Electronic von Frey anesthesiometer, IITC Inc., Life Science Instruments, Woodland Hills, Канада, США).
Для исключения болевой реакции, вызванной непосредственным контактом датчика давления аналгезиметра с поверхностью кожи, за 5 мин до начала измерения болевого порога поверхность кожи в области приложения датчика обрабатывали местным анестетиком (2% раствор лидокаина). Далее животных помещали в индивидуальные боксы с полом из металлической сетки (диаметр ячеек 1 см)
г-
на 5 мин для адаптации и угашения ориентировочно-исследовательских реакции. Наличие гиперчувствительности к механическому воздействию определяли путем регистрации давления, необходимого для индукции болевой реакции. Проводили 5 повторных измерений с интервалом в 5 с. При анализе данных рассчитывали
г-
среднее значение за 5 измерений.
Патоморфологические исследования
У эвтаназированных с помощью СО2-камеры животных после вскрытия брюшной полости была проведена морфометрическая оценка размера импланта. Для оценки размеров импланта проводили измерение длины, ширины, высоты и площади эндометриомы, а далее определяли объем образования по следующей формуле (1):
длина ширина высота
4П X-—-X-—-X-—-
2 2 2 (1)
3
Выделенные импланты с прилегающей тканью и интактный рог матки фиксировали в 10% растворе формалина для последующего гистологического исследования. Образцы указанных тканей подвергали стандартной обработке, изготавливали срезы толщиной 5-7 мкм, которые окрашивали гематоксилином и эозином и исследовали методом световой микроскопии при помощи светооптического микроскопа Axio Scope A1.
При гистологическом исследовании степень развития эндометриомы оценивали по специально разработанной шкале полуколичественно в баллах, от 0 до 3 (табл. 1). При гистологической оценке эндометриомы принимали во внимание особенности строения опухоли, описанное другими авторами [8-11].
На рис. 5 представлена шкала оценки степени выраженности развития эндо-метриом в баллах (согласно табл. 1).
ЛАБОРАТОРНЫЕ ЖИВОТНЫЕ 2018 для НАУЧНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ №4
Критерии оценки степени развития эндометриомы в баллах
Таблица 1
Критерии Баллы
Выраженность кисты 0 - отсутствие кисты 1 - незначительная киста 2 - киста умеренной степени выраженности 3 - крупная киста
Воспалительная инфильтрация 0 - отсутствие 1 - незначительная 2 - умеренная 3 - выраженная
Васкуляризация 0 - отсутствие 1 - незначительная 2 - умеренная 3 - выраженная
Наличие железистых структур 0 - отсутствие 1 - небольшое количество желез 2 - умеренное количество желез 3 - значительное количество желез
Тип эпителия 0 - отсутствие эпителия 1 - плохо сохранившийся эпителиальный слой; клетки небольшие, уплощенной формы 2 - умеренно сохранившийся эпителиальный слой; преобладают клетки кубической формы 3 - хорошо сохранившийся эпителиальный слой; клетки крупные, призматической формы [5]
Гиперплазия внутренней стенки эндометриомы 0 - отсутствие 1 - незначительная 2 - умеренная 3 - выраженная
Степень выраженности кисты, х25
Гиперплазия эндометр. ткани,х100
Васкуляризация, х100
Воспалительная инфильтрация,
х200
Наличие желез, х200
Состояние эпи телия, х400
0
1
Щ'Ш
ш
а .Ж
ЯУИ
ч
а а?
2
j
£ МДО
'* [уЗч4
• -. '
;«Л
3
JfI
V
\ >
г.:-.. - Л ; ; 'V
Wt-f.r
YV-
Л
Рис. 5. Гистологическая оценка эндометриом в баллах (0-3). Окр. гематоксилин-эозин. Ув. 100
Таблица 2
Оценка чувствительности к механическому воздействию; г
Вид операции Продолжительность после индукции патологии, недели
2 4 8
Ложная операция 36,0±6,40 42,5±3,87 34,6±3,51
Индукция патологии 19,5±2,52* 27,3±2,59* 24,0±0,86*
Примечание. * - статистически значимое отличие от группы ложнооперированных животных, t-тест, р<0,05; M±S.E.M., n=6.
Анализ данных
Полученные данные для последующей статистической обработки были собраны и проанализированы двумя независимыми наблюдателями. Для данных, полученных при оценке болевой чувствительности, а также для морфометриче-ских данных применена описательная статистика: данные проверены на соответствие закону нормального распределения с помощью критерия Шапиро-Уилка. Для оценки данных с признаками нормального распределения было использовано парное сравнение групп при помощи t-теста. Различия были определены при 0,05 уровне значимости. Статистический анализ выполнялся с помощью программного обеспечения Statistica 10.0. (StatSoft, США).
Результаты и обсуждение
Оценка чувствительности к механическому воздействию
• В табл. 2 представлены результаты, полученные при проведении оценки висцеральной болевой чувствительности.
• Проведение парного сравнения показало, что у животных с индукцией патологии реакция в ответ на механическое воздействие была статистически значимо выше: крысы реагировали на меньшее давление по сравнению с ложно-оперированными животными через 2, 4 и 8 нед после индукции патологии (р=0,0375; р=0,009; р=0,015, соответственно, t-тест, табл. 2).
Таким образом, в группе животных с индукцией патологии на всем протяжении эксперимента наблюдалась более выраженная болевая реакция по сравнению с ложнооперированными животными.
Данные патоморфологического исследования
С целью изучения степени формирования эндометриоидных гетеротопий у крыс патологоанатомическому и гистологическому исследованию были подвергнуты участок брюшины с имплантом (эндометриома) и интактный рог матки. Патологоанатомическое исследование включало макроскопическую оценку эндо-метриомы с морфометрией.
При макроскопическом исследовании самок крыс с индукций патологии у большинства животных отмечалось успешное разрастание гетеротопии и образование кист разного размера на месте имплантов. Размеры кист варьировали в пределах 2-4 х 2-6 х 2-10 мм, превышая исходные размеры имплантов. Четко визуализировалась густая сосудистая сеть. Через 4 нед после индукции патологии средний объем эндометриом составлял 9,6±1,89 мм3 (рис. 6, а), через 8 нед - 16,6±6,27 мм3 (рис. 6, б).
Гистологически эндометриомы в большинстве случаев характеризовались кис-тозным строением. Отмечалась разной степени выраженности мононуклеарная инфильтрация с преобладанием лимфоцитов, макрофагов и гистиоцитарных клеток. Стенка кист была образована соединительнотканными элементами с небольшим количеством слабо дифференцированных миофибробластоподобных клеток. В некоторых случаях выявлялась гиперплазия внутренней стенки эндо-метриомы. Содержимое кист было представлено неструктурированным слабо-базофильным компонентом с небольшим количеством мононуклеаров и десква-мированных эпителиальных клеток. В стенке кисты также выявлялись немногочисленные железистые структуры по типу трубчатых желез эндометрия. Внутренняя поверхность кист была выстлана кубическим или призматическим эпителием, соответствовавшим таковому в интактном роге матки.
В табл. 3 представлена балльная гистологическая оценка эндометриоидных ге-теротопий.
Таблица 3
Сумма баллов по группе животных с индукцией патологии по каждому признаку (п=6)
Недели после операции Оцениваемые показатели
Степень выраженности кисты Гиперплазия эндометр. ткани Васкуля-ризация Воспалительная инфильтрация Наличие желез Состояние эпителия Сумма баллов
4* 13 11 6 11 6 11 58
8* 17 14 9 13 10 15 78
Примечание. * - максимально возможная сумма баллов по каждому признаку; 18 - соответствует максимальной степени выраженности патологии.
Как видно из табл. 3, степень развития эндометриоидных гетеротопий увеличивалась с течением времени.
В качестве критериев эффективности индукции патологии в динамике проводили оценку болевой чувствительности при помощи механического воздействия на брюшную стенку через две, четыре и восемь недель после операции. По результатам проведенной оценки болевой чувствительности установлено, что в группе животных с индуцированной патологией, на всем протяжении эксперимента наблюдалось увеличение болевой реакции на прилагаемый стимул по сравнению с ложнооперированными животными.
В результате проведенного исследования разработана шкала гистологической оценки степени развития эндометриоидных гетеротопий у крыс. Пато-логоанатомическое и гистологическое исследование участка брюшины с им-плантом (эндометриома) и интактного рога матки осуществлялось через 4 и 8 нед после индукции патологии, и включало макроскопическую оценку эндометриомы с морфометрией, оценку гистологического строения эндометрия интактного рога матки и степени развития эндометриомы, которую оценивали полуколичественно в баллах, от 0 до 3.
Выбор критериев оценки обосновывался литературными данными о влиянии эстрогена на гиперплазию эндометрия, состояние эпителиальных клеток и пролиферацию желез. Эндометрий является органом-мишенью для половых гормонов из-за присутствия в нем специфических рецепторов. Любые изменения гормонального статуса могут привести к изменению роста и дифференцировки клеточных элементов эндометрия с последующим развитием гиперпластических процессов. На протяжении нормального полового цикла содержание эстрогена и прогестерона изменяется и претерпевает закономерные колебания. Поэтому изменение степени гиперплазии эндометрия с сопутствующим уменьшением или увеличением количества желез и высоты эпителия может указывать на развитие патологии и (или) специфическое влияние какого-либо исследуемого препарата в отношении эутопической и эктопической эндометриальной ткани.
2018
№4
При патологоанатомическом исследовании самок крыс с индукцией патологии отмечалось успешное разрастание эндометриодных гетеротопий и образование кист разного размера на месте имплантов.
При гистологической оценке эндометриомы также принималось во внимание характерное строение опухоли, описанное другими авторами [8-11]. Известно, что модель опухоли представляет собой кистозное образование, выстланное изнутри эпителием, строение которого характеризует степень развития эндометриомы [12]. Установлена также связь хронического воспаления с преобладанием мононукле-арных клеток с развитием эндометриоза. Так по данным С. ]о\1соеит и соавт. (2001) вовлечение большого количества макрофагов в воспалительный процесс может быть обусловлено экспрессией эндометриальными клетками хемотаксического фактора моноцитов (МСР-1), ответственного за группировку и активацию макрофагов [13]. Также в ряде исследований описано ингибирующее действие некоторых препаратов, в частности дексаметазона, в отношении МСР-1 рецепторов, что приводило к снижению размера эндометриом [9]. При резорбции эндометриального импланта в некоторых исследованиях отмечено снижение его кровоснабжения [10], в связи с чем степень васкуляризации эндометриомы также рассматривается как один из критериев оценки.
По результатам гистологического анализа эндометриомы в большинстве случаев характеризовались кистозным строением. Отмечалась разной степени выраженности мононуклеарная инфильтрация с преобладанием лимфоцитов, макрофагов и гистиоцитарных клеток, что указывает на развитие характерных признаков эндометриоза у крыс. Полученные данные коррелируют с результатами оценки болевого поведения.
Таким образом, в результате проведенного исследования разработан метод оценки болевого синдрома, вызванного развитием эндометриоза, предложена шкала гистологической оценки степени развития эндометриоидных гетеротопий. Установлено, что степень выраженности эндометриоидных гетеротопий увеличивается с течением времени. Разработанный протокол комплексной оценки позволит оценивать фармакологическую эффективность веществ, обладающих анти-эстрогенной активностью и имеющих терапевтический потенциал при эндомет-риозе.
Конфликт интересов
Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Conflict of interest
The authors declare no conflict of interest.
Заключение
2018
LABORATORY ANIMALS FOR SCIENCE
2018
№4
Литература
1. ACOG Committee on Practice Bulletins-Gynecology. ACOG practice bulletin. Medical management of endometriosis. Number 11, December 1999 (replaces Technical Bulletin Number 184, September 1993). Clinical management guidelines for obstetrician gynecologists. Int J. Gynaecol Obstet. 2000. Vol. 71: 183-96.
2. Tirado-Gonzalez I., Barrientos G., Tariverdian N., Arck P. C., Garcia M. G., Klapp B. F., Blois S. M. Endometriosis research: animal models for the study of a complex disease. J. Reprod Immunol. 2010. Vol. 86; 2: 141-7.
3. Jones R. C. The effect of a luteinizing hormone releasing hormone (LRH) agonist (Wy-40,972), levonorgestrel, danazol and ovariectomy on experimental endometriosis in the rat. Acta Endocrinol (Copenh). 1984. .Vol. 106; 2: 282-8.
4. do Amaral V. F., Dal Lago E. A., Kondo W., Souza L. C., Francisco J. C. Development of an experimental model of endometriosis in rats. Rev Col Bras Cir. 2009. Vol. 36; 3: 250-5.
5. Rezende C. A. d. L., Silva A. L. d., Santos J nior J. L. d., Gobbi H., Martins M. M. F. Experimental model for endometriosis. Comparative histological study between the ectopic and eutopic endometrium. Acta Cirurgica Brasileira. 1997. Vol. 12: 226-230.
6. Schwartz E. S., Xie A., La J. H., Gebhart G. F. Nociceptive and inflammatory mediator upregulation in a mouse model of chronic prostatitis. Pain. 2015. Vol. 156; 8: 1537-44.
7. Masutomi N., Shibutani M. Analgesia, anesthesia, and postoperative care in laboratory animals. Handbook of Experimental Neurology: Methods and Techniques in Animal Research. Fisher M., Tatlisumak T. Cambridge: Cambridge University Press, 2006: 40-66.
8. Rajkumar K., Schott P. W., Simpson C. W. The rat as an animal model for endometriosis to examine recurrence of ectopic endometrial tissue after regression Fertil Steril. 1990. Vol. 53; 5: 921-5.
9. Batista A. P. C., Concei££o A. P. M. d., Moraes E. d. F., Teixeira l. A. C. Histological Evaluation of the Induced Endometriosis in Rats, after Treatment with Dexamethasone Evaluaci"®n Histol"®gica de la Endometriosis Inducida en Ratas, Posterior al Tratamiento con Dexametasona. International Journal of Morphology. 2006.
10. Петросян М. А., Балашова Н. Н., Полянских Л. С., Егорова А. А., Киселев А. В., Ярмолинская М. И., Молотков А. С., Траль Т. Г., Толибова Г. Х. Внутрибрюшинное и подкожное моделирование эндометриоза у крыс. Журнал акушерства и женских болезней. 2016. Vol. LXV Спецвыпуск: 19-21.
11. Kudoh M., Susaki Y., Ideyama Y., Nanya T., Mori M., Shikama H. Inhibitory effects of a novel aromatase inhibitor, YM511, on growth of endometrial explants and insulin-like growth factor-I gene expression in rats with experimental endometriosis. J. Steroid Biochem Mol Biol. 1997. Vol. 63; 1-3: 75-80.
12. Nogueira Neto J., Lindoso M. J., Coelho L. F., Carvalho R. A., Rodrigues T. G., Araujo A. G., Girao M. J., Schor E. Changes in the volume and histology of endometriosis foci in rats treated with copaiba oil (Copaiferalangsdorffii). Acta Cir Bras. 2011. Vol. 26; Suppl 2: 20-4.
13. Jolicoeur C., Lemay A., Akoum A. Comparative effect of danazol and a GnRH agonist on monocyte chemotactic protein-1 expression by endometriotic cells. Am J. Reprod Immunol. 2001. Vol. 45; 2: 86-93.
2018
LABORATORY ANIMALS FOR SCIENCE
№4
