CC BY
35
and the Evenki in Krasnoyarsk were examined with the methods of psychological testing and cardiointervalography.
It is shown that in a population of Evenk population ethnic belonging (children of Evenk and children of arrived population - Caucasians (Europe race) is one of the factors that determines personality type and initial autonomic tone, which can be regarded as essential elements of the constitution.
Constitutional nature of the Evenk children corresponds to the peculiarities of the climatic conditions of the North and it is characterized by low sympathicotonic orientation of the vegetative regulation of heart rhythm in the combination with a high frequency of normal variant of vegetative reactivity, normal vegetative securing of the activity and emotional stability, which is the optimum condition of their vital activity. In the children of the arrived population of Evenk vegetative regulation voltage is detected on indicators cardiointerva-lography in the conjunction with personal anxiety on psychological testing data, indicating a narrowing of the range of adaptive capacity and the formation of autonomic dysfunction syndrome.
Key words: Siberia, children, adaptation, psychovegetative status.
УДК 616.223-002+616.248:616.24-008.8-076.5
КРИСТАЛЛОГРАФИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА БРОНХИАЛЬНОГО ЛАВАЖА У БОЛЬНЫХ С ХРОНИЧЕСКОЙ ОБСТРУКТИВНОЙ БОЛЕЗНЬЮ ЛЕГКИХ
С.С. ЦЕЛУЙКО, С.В. ЗИНОВЬЕВ, С.А. ДАНИЛЕНКО*
При световой микроскопии и растровой электронной микроскопии не фиксированных (нативных) препаратов БАЛ у больных с хронической обструктивной болезнью легких в полях зрения обнаруживаются клетки и кристаллы разнообразной формы: лист папоротника, древовидные, прямоугольные и т.д., которые появляются в результате кристаллизации бронхиального секрета. В составе кристаллов в мазках бронхоальвеолярного лаважа у больных с хронической обструктивной болезнью легких входит мочевина, мочевая кислота и её производных, а так же цистин, другие аминокислоты, которые являются продуктами распада белков и нуклеопротеидов.
Ключевые слова: хроническая обструктивная болезнь легких, бронхоальвеолярный лаваж, кристаллы
Способ кристаллографической оценки назального секрета, слюны и слезной жидкости в настоящее время нашел применение как классический подход к диагностике дистрофий, при этом ряд авторов отрицает его взаимосвязь с овариальным циклом [2,5,8,11]. В связи с этим обращает на себя внимание обнаруженный нами положительный симптом «листа папоротника» в цитологических препаратах назального секрета здоровых лиц, которые подвергнуты переохлаждению [4,10]. В данном исследовании, мы обнаружили положительный симптом «листа папоротника», который обусловлен присутствием в цитологических препаратах кристаллов мочевины, мочевой кислоты и её производных, а так же цистина, других аминокислот. По данным литературы известно, что у больных с патологией органов дыхания в случае острой пневмонии и хронической обструктивной болезнью легких (ХОБЛ) в цитологических препаратах бронхоальвеолярного ла-важа (БАЛ) обнаруживается выраженная кристаллизация бронхиального секрета в виде положительного симптома «листа папоротника» [6]. В то же время химический состав кристаллов формирующих «симптом листа папоротника» в цитологических препаратах бронхоальвеолярного лаважа (БАЛ) воздухоносных путей у пациентов с ХОБЛ не достаточно изучен.
Цель исследования — морфологическое изучение «симптома листа папоротника» в качестве цитохимического показателя БАЛ при обострении ХОБЛ.
Материалы и методы исследования. Наше исследование одобрено этическим комитетом ГОУ ВПО Амурской государственной медицинской академии Минздравсоцразвития РФ, г. Благовещенск. Все исследования были проведены с учетом требований Хельсинской декларации Всемирной ассоциации «Этические принципы проведения научных исследований с участием человека» с поправками 2000 г. и «Правилами клинической практики в Российской Федерации», утвержденными Приказом МЗ РФ от 19.06.2003, №266. Нами было обследовано 46 больных ХОБЛ среднего и тяжелого течения в стадии обострения 37 мужчин,
9 женщин. Соотношение лиц со среднетяжелым и тяжелым течением ХОБЛ составило 50%. Всем больным, помимо стандартных
* ГБОУ ВПО Амурская государственная медицинская академия Минздравсоцразвития РФ, 675000, Благовещенск, ул. Горького,95
клинико-лабораторных и инструментальных методов обследования, определения показателей функции внешнего дыхания до и после курса терапии выполнялась диагностическая фибробронхо-скопия с забором бронхоальвеолярного лаважа, который извлекался по оригинальным методикам Ткачевой С.И., и Паламарчук Г.Ф., [9]. По своим свойствам он идентичен так называемому бронхоальвеолярному смыву. Процедуры начинали с введения
10 мл теплого физиологического раствора в субсегментарный бронх средней доли правого легкого при эндоскопическом исследовании. Из промывной жидкости делали 2 мазка на предметном стекле и на подложке из алюминиевой фольги. После высыхания жидкости, сухой остаток изучался под световым микроскопом и сканирующим электронным микроскопом 8-3400 НйасЫ (Япония). Мазки клеток бронхоальвеолярного лаважа фиксировали в парах формалина по Гомори, окрашивали по методу Романовскому - Гимза, а так же 50% раствором азотнокислого серебра [1]. Дополнительно проводили электронно-микроскопическое исследование ультратонких срезов клеток бронхоальвеолярного лава-жа. Клеточные элементы фиксировали в глутаральдегиде, в тетраоксиде осмия, в качестве заливочной среды использовали арал-дит. Химическая идентификация кристаллов мочи в случае мочекаменной болезни проводится на основании оценки растворимости веществ в органических растворителях и минеральных кислотах [7]. Поэтому в целях химической идентификации химического состава кристаллов на мазки БАЛ наносили органические растворители и кислоты, после чего препараты тщательно промывали в дистиллированной воде и окрашивали цитологическими красителями.
Результаты и их обсуждение. При световой микроскопии и растровой электронной микроскопии не фиксированных (нативных) препаратов БАЛ в полях зрения обнаруживаются клетки и кристаллы разнообразной формы: лист папоротника, древовидные, прямоугольные и т.д., которые появляются в результате кристаллизации бронхиального секрета. У 70% обследованных пациентов с ХОБЛ в не фиксированных препаратах бронхоальвеолярного лаважа появляются кристаллы, которые обнаруживаются при маленьком увеличении микроскопа менее *50. Это обусловлено тем, что в препаратах обнаруживаются агломераты крупных кристаллов, с массивными стеблями, о чем мы сообщали ранее [6]. Результаты нашего исследования указывают на то, что фиксация в парах формалина цитологических препаратов бронхоальвеолярного лаважа позволяет дополнительно получать кристаллографические характеристики кристаллограммы, что позволяет диагностировать обменно-трофические нарушения в слизистой оболочке органов дыхания у пациентов с ХОБЛ. Отмечается отложение кристаллов на периферии цитоплазмы клеток. При этом в макрофагах отмечается вакуолизация периферических отделов цитоплазмы. Присутствие кристаллов кальция в цитоплазме клеток бронхоальвеолярного лаважа подтверждено при трансмиссионной электронной микроскопии ультратонких срезов бронхоальвеолярного лаважа. Нами установлено, что в митохондриях лимфоцитов обнаруживаются кристаллы кальция. Микроорганизмы в препаратах бронхоальвеолярного лаважа формируют крупные скопления - микробные «пробки». Микроорганизмы входят в состав, кристаллов формирующих «симптом листа папоротника» в препаратах бронхоальвеолярного лаважа. Мы обнаружили, что после обработки серной или соляной кислотами мазков бронхоальвеолярной жидкости пациентов с ХОБЛ, которая проводилась в целях окраски по Цилю-Нильсену, микроорганизмы слабо окрашиваются метиленовым синим, симптом «листа папоротника» при этом сохраняется. Ввиду этого мы обратили внимание на то, что в случае фиксации в метаноле цитологических препаратов БАЛ, которая продолжалась в течение пяти минут, отмечается умеренная растворимость кристаллов «симптома листа папоротника», что указывает на присутствие жирных кислот и нейтральных липидов. Таким образом, в случае фиксации в парах формалина мазков бронхоальвеолярного лава-жа, нами отмечается нерастворимость кристаллов в водном растворе красителя Романовского-Гимза, этаноле, серной кислоте, соляной кислоте, уксусной кислоте. По этому результаты наших исследований указывают на присутствие в составе кристаллов в препаратах бронхоальвеолярного лаважа мочевины, мочевой кислоты и её производных, а так же цистина, других аминокислот которые являются продуктами распада белков и нуклеопротеи-дов. Результаты нашего исследования подтверждают данные о химическом составе биокристаллов, которые мы получили ранее. При растровой электронной микроскопии мы попытались про-
анализировать биокристаллы, в случае цитологических препаратов смыва назального секрета человека и бронхоальвеолярной жидкости крыс, слюны человека полученного с помощью дистиллированной воды- гипотонический смыв [4,10]. Нами обнаружено, то, что аналитическая кристаллограмма гипотонических мазков назального секрета человека представлена структурной корреляций между: 1) кристаллами натрия хлорида, кальция; 2) кристаллами продуктов распада белков и нуклеопротеидов: мочевины, струвитов, цистин-цистеина и др. При растровой микроскопии нами отмечается, что кристаллы мочевой кислоты и мочевины встречаются в форме розеток, состоящих из нескольких агрегированных кристаллов, они встречаются как ромбические пластины с одним или несколькими парными выступами по бокам. Шестигранные кристаллы всегда обнаруживаются вместе с типичными кристаллами алмазной или ромбовидной формы. Цистиновые кристаллы бесцветные, характерной гексагональной формы с равными или неравными сторонами. Они могут появляться одиночно, но чаще в виде агрегатов с другими кристаллами. Из данных литературы известно, что активация протеолиза в органах дыхания является одной из основных причин развития ХОБЛ [13,14,15]. Поэтому, учитывая то, что по нашим данным мочевина, мочевая кислота, аминокислоты, жирные кислоты является основными факторами самоорганизации кристаллов «симптома листа папоротника», можно предположить, что кри-сталлограмма бронхоальвеолярного лаважа дополнительно отражает, механизмы регуляции протеолиза и антипротеаз, которые обнаруживаются при цитохимическом исследовании эпителиальных клеток и фагоцитов органов дыхания с помощью импрегнации азотнокислым серебром. Известно, что способностью к восстановлению и осаждению азотнокислого серебра обладает ядрышковый организатор хромосомы, пигменты и гистоны, аскорбиновая кислота, цистеин, глутатион [12]. Раннее мы опубликовали то, что у части пациентов, мы обнаружили, что в цитоплазме клеток бронхоальвеолярного лаважа отмечается неспецифическое гранулярное окрашивание азотнокислым серебром внутриклеточных цитоплазматических структур [3]. Фиксированные в парах формалина мазки БАЛ пациентов с ХОБЛ мы дополнительно фиксировали в ацетате спирта, после чего мы использовали тест импрегнации азотнокислым серебром ядрышкового организатора клетках органов дыхания. В таком случае, нами отмечается аргентофилия биокристаллов формирующих «симптома листа папоротника».
Выводы:
1. У 70% обследованных пациентов с ХОБЛ в не фиксированных препаратах бронхоальвеолярного лаважа появляются кристаллы, которые обнаруживаются при маленьком увеличении микроскопа менее *50.
2. В случае фиксации в парах формалина по Гомори мазков бронхоальвеолярного лаважа у пациентов с ХОБЛ нами отмечается устойчивость кристаллов к водному раствору красителя Романовского-Гимза, этанолу, соляной кислоте, уксусной кислоте, ацетате спирта.
3. В случае фиксации в метаноле цитологических препаратов БАЛ в течение пяти минут, отмечается умеренная растворимость кристаллов «симптома листа папоротника», что указывает на присутствие жирных кислот и нейтральных липидов.
Литература
1. Журнал "Фундаментальные исследования" / А.М. Авда-лян [и др.].- 2010.- № 5.- С. 12-20
2. Алексеева, О.П. «Педиатрия» журнал имени
Г.Н.Сперанского / О.П. Алексеева, А.В. Воробьев.- 2002.- №2.-С.23-26.
3. Зиновьев, С.В. Цитологическая характеристика парциального состава клеток бронхоальвеолярного лаважа / С.В. Зиновьев, В.С. Козлова //Вестник новых медицинских технологий.-Т. XVII.- № 2.- 2010.- С. 194-195.
4. Зиновьев, С.В. Бюллетень физиология и патологии дыхания / С.В. Зиновьев, А.П. Кондрахина, В.С. Козлова.- 2011.-Выпуск 40.- С. 42-43.
5. Камакин, Н.Ф. Клиническая лабораторная диагностика / Н.Ф. Камакин, А.К. Мартусевич, А.Н. Кошкин.- 2004.- № 9.-С.84-85.
6. ХЫХ Международной научной студенческой конференции. Студент и научно-технический прогресс.: Медицина / Ю.И. Катыхина [и др.].- Новосиб. гос. Ун-т. Новосибирск, 2011.-
С. 71-72
7. Миронова, И.И. Атлас осадков мочи / И.И. Миронова, Л.А. Романова.- Тверь: ООО Изд-во «Триада».- 2002.- 139.- 332 с.
8. Дальневосточный мед. Журнал / Е.Б. Тюльганова [и др.].- 2004.- № 4.- С.56-58.
9. Лечение и профилактика заболеваний органов дыхания /
B.Ф. Ушаков [и др.].- СПб.- Благовещенск, 1998.- 179 с.
10. Бюллетень физиология и патологии дыхания /
C.С. Целуйко [и др.].- 2011.- Выпуск 42.- С. 50-54.
11. Шатохина, С.Н. Рос. Оториноларингол / С.Н. Шатохи-на, В.Г. Зенгер.- 2004.- №5.- С.188-191.
12. Chinoy N. J. // Histochemistry and Cell Biology .-Volume 20, 1969.- Р.-105-107.
13. Mac Nee W. // Proc. Am. Thorac. Soc.- 2005.-2(1).- P. 50-60.
14. Lazrak Ahmed, et all. //Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol.- Copyright by the 2011 by the American Physiological Society.- 2011.- 35 p.
15. Rytila P., Plataki M., Bucchieri F. et all. // Eur. Respir. J.-2006.- V.28.- P. 1163-1169.
CHARACTERIZEDCHARACTERIZATIONOFBRONCHOALVEOLAR LAVAGEIN PATIENTSWITH CHRONIC OBSTRUCTIVEPULMONARY DISEASE
S. S. TSELUYKO, S.V. ZINOVEV, S. A. DANILENKO Amur State Medical Academy, Blagoveshchensk, Russia
Forlight microscopyand scanning electronmicroscopyis notfixed (native), preparationsBALin patients withchronic obstructivepulmo-nary diseasein the fieldsofcell andfoundcrystalsof various shapes: leaf of fern, tree-like, rectangular, etc., which are the resultof crystallization ofbronchial secretions.In the composition ofthe crystals insmears ofbronchoalveolar lavagein patientswith chronic obstructivepulmo-nary diseaseincludeurea, uricacid and itsderivatives, as well as cysti-neand otheramino acids, whichare decay products ofnucleoprotein.
Key word: chronic obstructivepulmonary disease, bronchoal-veolar lavage, crystals.
УДК 616.415-018:613.81.001.6
ГИСТОХИМИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ КОРЫ НАДПОЧЕЧНИКОВ КРЫС ПРИ ХРОНИЧЕСКОЙ АЛКОГОЛЬНОЙ ИНТОКСИКАЦИИ
А.Г. КВАРАЦХЕЛИЯ, С.Н. СЕМЕНОВ*
С помощью гистохимических методов определения содержания липидов в корковом слое надпочечников крыс при острой хронической алкогольной интоксикации.
Установлено, при острой алкогольной интоксикации делипидизация коры надпочечников чаще всего носит характер сплошного снижения содержания суданофильных липидов, холестерина. В протоплазме «темных» клеток коры обнаруживается скопление гранул фосфолипидов, количество которых находится в обратно пропорциональной зависимости от содержания в клетке холестерина. Ключевые слова: кора надпочечников, хроническая алкогольная интоксикация, этиловый спирт, гистохимические методы.
В процессе адаптации организма к изменениям как внутренней, так и внешней среды ведущую роль играет нейроэндокринная система. При этом значительная роль в адаптивной функции эндокринной системы принадлежит коре надпочечников, гормоны которой обеспечивают множество функций, из которой наиболее важная - развитие неспецифических адаптивных реакций. По данным литературы надпочечники являются основным эффекторным звеном гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой системы и по состоянию этого органа можно судить об адекватности реагирования адаптивной системы на стрессовые воздействия, одним из которых является алкогольная интоксикация [3,5]. В патогенезе алкоголизма важное место отводится эндокринным нарушениям. Ряд исследователей придерживается мнения о том, что такие нарушения могут предопределять развитие алкоголизма и особенности его течения. Однако морфологические эквиваленты этого явления изучены еще недостаточно [2,4,6].
Цель исследования - изучение гистохимических изменений коры надпочечников крыс при хронической принудительной алкогольной интоксикации, а также ее сочетании с введением а-
* ГБОУ ВПО Воронежская государственная медицинская академия им. Н.Н. Бурденко, 394036, г. Воронеж, ул. Студенческая, 10
